專利名稱：一種快速檢測固體食品中細(xì)菌總數(shù)的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種快速檢測方法，確切的說是一種快速檢測固體食品中細(xì)菌總數(shù)的方法。
背景技術(shù)：
食品是人類生命活動(dòng)賴以生存的物質(zhì)基礎(chǔ)，是人類生命的能源。由于食品中含有豐富的營養(yǎng)，細(xì)菌在食品環(huán)境中易于生長，使食品發(fā)生了改變。雖然正常植物和動(dòng)物內(nèi)部組織是無菌的，但由于獲取和操作處理等過程中的污染，食品表面上常會(huì)被污染并滋生多種細(xì)菌。食品微生物污染包括細(xì)菌性污染、病毒和真菌及其毒素的污染。食品中的細(xì)菌存在狀態(tài)是評(píng)價(jià)食品質(zhì)量及安全性的一項(xiàng)重要指標(biāo)。細(xì)菌污染程度直接影響著食品安全，對(duì)人體健康和人身安全的危害(危脅)主要表現(xiàn)在兩個(gè)方面。一是致病菌的食品污染-細(xì)菌性食物中毒，二是非致病菌的食品污染-食品的腐敗變質(zhì)。據(jù)估計(jì)，在全世界每年數(shù)以億計(jì)的食源性疾病患者中，70%是由于食用了各種微生物污染的食品和飲水造成的。細(xì)菌總數(shù)是指在被檢樣品單位重量(g)，容積(mL)，或表面積(cm2)內(nèi)，所含能于某種固體培養(yǎng)基上，在一定條件下培養(yǎng)后所生成的細(xì)菌菌落的總數(shù)。細(xì)菌總數(shù)主要作為判定食品被細(xì)菌污染程度的標(biāo)志，具有重要的衛(wèi)生學(xué)意義。細(xì)菌總數(shù)的檢測國內(nèi)外普遍采用需氧平板計(jì)數(shù)法(Aerobicplatecount，APC)適用于嗜中溫的需氧和兼性厭氧的活菌菌落總數(shù)。傳統(tǒng)檢測食品中細(xì)菌總數(shù)的方法是采用 《食品衛(wèi)生微生物檢驗(yàn)》的國家標(biāo)準(zhǔn)，既平板菌落計(jì)數(shù)法。該是將待測樣品經(jīng)適當(dāng)稀釋之后， 其中的微生物充分分散成單個(gè)細(xì)胞，取一定量的稀釋樣液接種到平板上，經(jīng)過培養(yǎng)，由每個(gè)單細(xì)胞生長繁殖而形成肉眼可見的菌落，即一個(gè)單菌落應(yīng)代表原樣品中的一個(gè)單細(xì)胞。統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)，根據(jù)其稀釋倍數(shù)和取樣接種量即可換算出樣品中的含菌數(shù)。平板菌落計(jì)數(shù)法操作較繁，結(jié)果需要培養(yǎng)一段時(shí)間才能取得，且獲得的數(shù)據(jù)不能代表食品中存在的全部活細(xì)菌，而僅僅代表在特殊物理環(huán)境和供給各種營養(yǎng)物時(shí)有生長能力的細(xì)菌，同時(shí)連成塊狀的或鏈狀的多個(gè)細(xì)胞或僅僅一個(gè)單細(xì)胞均將產(chǎn)生一個(gè)菌落，影響計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性。本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)存的食品微生物快速檢測方法均存在這樣或那樣的問題，沒有一種方法能夠真正達(dá)到檢測速度快、檢測成本低、檢測的準(zhǔn)確率高并且檢測限低的問題而提出的一種檢測速度快、檢測成本低、檢測準(zhǔn)確度高的固體食品中細(xì)菌總數(shù)的檢測方法。本發(fā)明的技術(shù)方案是一、無菌條件下稱取20_30g固體樣品溶于50_60ml的蛋白胨水溶液中后震蕩混勻；二、吸取Iml樣品離心；三、取0. 8ml上清再次離心；四、棄掉0. 3ml 上清后混勻；五、取5ul菌液滴到載玻片上，干燥后用染色液染色l-3min ；六、蒸餾水沖洗后用擦鏡紙擦干；七、用顯微鏡觀察后通過細(xì)菌總數(shù)快速檢測系統(tǒng)計(jì)算，即可得到細(xì)菌總數(shù)。本發(fā)明具有檢測速度快、檢測成本低的優(yōu)點(diǎn)；本發(fā)明采用次甲基藍(lán)作為染液，可以精確地分辨細(xì)菌與非細(xì)菌成分，使得本發(fā)明還具有檢測準(zhǔn)確度高的優(yōu)點(diǎn)。
具體實(shí)施例方式具體實(shí)施方式
一本實(shí)施方式快速檢測固體食品中細(xì)菌總數(shù)的方法按以下步驟實(shí)現(xiàn)一、無菌條件下稱取20-30g固體樣品溶于50-60ml的蛋白胨水溶液中后震蕩混勻；二、 吸取Iml樣品離心；三、取0. 8ml上清再次離心；四、棄掉0. 3ml上清后混勻；五、取5ul菌液滴到載玻片上，干燥后用染色液染色Hmin ；六、蒸餾水沖洗后用擦鏡紙擦干；七、用顯微鏡觀察后通過細(xì)菌總數(shù)快速檢測系統(tǒng)計(jì)算，即可得到細(xì)菌總數(shù)。本實(shí)施方式中蛋白胨、染色液均為市售的常規(guī)試劑。
具體實(shí)施方式
二 本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一不同的是步驟一中采用0. 5%濃度的蛋白胨水溶液。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一相同。
具體實(shí)施方式
三本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一不同的是驟一中在無菌條件下準(zhǔn)確稱取25g固體樣品，放入55ml的蛋白胨水溶液中，并在搖床上以160r/min震蕩^iin混勻。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一相同。
具體實(shí)施方式
四本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一不同的是步驟二中離心條件為 1000r/min,Smin0其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一相同。
具體實(shí)施方式
五本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一不同的是步驟三中離心條件為 11000r/min, 12min。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一相同。
具體實(shí)施方式
六本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一不同的是步驟四中棄掉0. 3ml上清后在搖床上以120r/min震蕩^iin混勻。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一相同。
具體實(shí)施方式
七本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一不同的是步驟五中染色液為次甲基藍(lán)。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一相同。
具體實(shí)施方式
八本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一不同的是步驟五中取5ul菌液滴到載玻片上，干燥后用染色液染色anin。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一相同。
具體實(shí)施方式
九本實(shí)施方式一種快速檢測固體食品中細(xì)菌總數(shù)的方法按以下步驟實(shí)現(xiàn)一、在無菌條件下準(zhǔn)確稱取25g固體樣品，放入55ml濃度為0. 5%的蛋白胨水溶液中，并在搖床上以160r/min震蕩aiiin混勻；二、吸取Iml樣品在lOOOr/min的條件下離心 8min ；三、取0. 8ml上清在11000r/min的條件下再次離心12min ；四、棄掉0. 3ml上清后在搖床上以120r/min震蕩^iin混勻；五、取5ul菌液滴到載玻片上，干燥后用次甲基藍(lán)染色液染色anin ；六、蒸餾水沖洗后用擦鏡紙擦干；七、用顯微鏡觀察后通過細(xì)菌總數(shù)快速檢測系統(tǒng)計(jì)算，即可得到細(xì)菌總數(shù)。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一相同。
權(quán)利要求
1.一種快速檢測固體食品中細(xì)菌總數(shù)的方法，其特征在于快速檢測固體食品中細(xì)菌總數(shù)的方法按以下步驟實(shí)現(xiàn)一、無菌條件下稱取20-30g固體樣品溶于50-60ml的蛋白胨水溶液中后震蕩混勻；二、吸取Iml樣品離心；三、取0. 8ml上清再次離心；四、棄掉0. 3ml上清后混勻；五、取5ul菌液滴到載玻片上，干燥后用染色液染色Hmin ；六、蒸餾水沖洗后用擦鏡紙擦干；七、用顯微鏡觀察后通過細(xì)菌總數(shù)快速檢測系統(tǒng)計(jì)算，即可得到細(xì)菌總數(shù)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速檢測固體食品中細(xì)菌總數(shù)的方法，其特征在于步驟一中采用0. 5%濃度的蛋白胨水溶液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速檢測固體食品中細(xì)菌總數(shù)的方法，其特征在于步驟一中在無菌條件下準(zhǔn)確稱取25g固體樣品，放入55ml的蛋白胨水溶液中，并在搖床上以 160r/min 震蕩 2min 混勻。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速檢測固體食品中細(xì)菌總數(shù)的方法，其特征在于步驟二中離心條件為1000r/min，8min。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速檢測固體食品中細(xì)菌總數(shù)的方法，其特征在于步驟三中離心條件為11000r/min，12min。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速檢測固體食品中細(xì)菌總數(shù)的方法，其特征在于步驟四中棄掉0. 3ml上清后在搖床上以120r/min震蕩aiiin混勻。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速檢測固體食品中細(xì)菌總數(shù)的方法，其特征在于步驟五中染色液為次甲基藍(lán)。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速檢測固體食品中細(xì)菌總數(shù)的方法，其特征在于步驟五中取5ul菌液滴到載玻片上，干燥后用染色液染色aiiin。
全文摘要
一種快速檢測固體食品中細(xì)菌總數(shù)的方法，涉及一種快速檢測固體食品中細(xì)菌總數(shù)的方法。本發(fā)明了解決現(xiàn)存的食品微生物快速檢測方法不能夠真正達(dá)到檢測速度快、檢測成本低、檢測的準(zhǔn)確率高并且檢測限低的問題。檢測方法1.稱固體樣品與蛋白胨水溶液震蕩混勻；2.吸取1ml樣品離心；3.取0.8ml上清再次離心；4.棄掉0.3ml上清后混勻；5.取5ul菌液滴到載玻片上干燥后染色；6.蒸餾水沖洗后擦干；7.用顯微鏡觀察后通過細(xì)菌總數(shù)快速檢測系統(tǒng)計(jì)算，即可得到細(xì)菌總數(shù)。本發(fā)明具有檢測速度快、檢測成本低、檢測準(zhǔn)確度高的優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)C12Q1/06GK102453745SQ201010527560
公開日2012年5月16日 申請(qǐng)日期2010年11月2日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月2日
發(fā)明者張文龍 申請(qǐng)人:張文龍