專利名稱：念珠菌顯色培養(yǎng)基、檢測試劑盒及檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及微生物診斷領(lǐng)域，特別是醫(yī)學(xué)微生物標(biāo)本、藥品及醫(yī)療器械衛(wèi)生檢驗 樣品、公共衛(wèi)生監(jiān)測樣品和食品(包括化妝品)衛(wèi)生檢驗樣品中酵母菌的培養(yǎng)和鑒定，尤其 是念珠菌屬細菌的分離培養(yǎng)和該屬白色念珠菌、熱帶念珠菌、克柔氏念珠菌和光滑念珠菌 等重要菌株的鑒別，以及對白色念珠菌的鑒定。
背景技術(shù)：
念珠菌(Candida spp.，也稱假絲酵母)是一類真菌，不僅廣泛存在于自然界里， 通常也存在于正常人口腔、上呼吸道、腸道及陰道，一般在正常機體中數(shù)量少，不引起疾病， 當(dāng)機體免疫功能或一般防御力下降或正常菌群相互制約作用失調(diào)，則本菌大量繁殖并改變 生長形式(芽生菌絲相)侵入細胞引起皮膚、粘膜及內(nèi)臟器官急性、亞急性及慢性炎癥，稱 為念珠菌病。念珠菌一直是醫(yī)學(xué)微生物檢驗的重要病原菌之一。鑒于其致病性及分布的廣 泛性，對其重視程度已逐漸延伸到預(yù)防醫(yī)學(xué)范疇，如藥品及醫(yī)療器械衛(wèi)生、公共衛(wèi)生和食品 (包括化妝品)衛(wèi)生等領(lǐng)域?qū)ζ鋵嵤z驗和監(jiān)測。目前對念珠菌的檢測以傳統(tǒng)方法為主，采取分離培養(yǎng)、鏡檢觀察、生化鑒定等多個 步驟，檢測周期長，整個過程大約4-7天，操作繁瑣，已不能滿足對念珠菌快速、便利檢測的 需要，而且當(dāng)樣本中雜菌較多時會影響真正目標(biāo)菌的識別。盡管近年來已有分子生物學(xué)、免 疫學(xué)技術(shù)的應(yīng)用，但一方面不能直接檢測目標(biāo)菌，不排除假陽性結(jié)果的出現(xiàn)，當(dāng)結(jié)果為陽性 時，仍需要分離出目標(biāo)菌進行驗證或者配合治療方案的制定(如抗生素敏感試驗)來確定。 另一方面，需要專業(yè)技術(shù)人員操作、需要添置設(shè)備等。利用酶活性測定鑒別細菌是診斷微生物的一種有效手段，但過去由于底物種類較 少、受PH影響較大、不穩(wěn)定等缺點限制了這一技術(shù)的發(fā)展。隨著對致病菌研究的深入，陸續(xù) 發(fā)現(xiàn)了更多反映細菌屬性的特異性酶；通過化學(xué)合成技術(shù)合成的一系列新型酶底物，為這 一技術(shù)的發(fā)展奠定了基礎(chǔ)，因此，基于傳統(tǒng)細菌培養(yǎng)理論，將人工合成的酶底物與支持細菌 生長的多種營養(yǎng)物質(zhì)相結(jié)合，開發(fā)出了顯色培養(yǎng)基，使細菌在分離的同時得到有效鑒別，操 作簡便，大大提高了工作效率。在分離與鑒別念珠菌屬細菌的培養(yǎng)基方面，加拿大專利CA2634325描述了 利用甜土豆浸粉、酵母浸粉為培養(yǎng)基基礎(chǔ)的主要原料，在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加顯色劑 5-溴-4-氯-3-吲哚基-N-乙?；?β -D-氨基吡喃葡糖苷(5-Bromo-4-chloro-3-indolyl N-acetyl- β -D-glucopyranoside 或 X-N-acetyl- β -D-glucopyranoside)禾口焚光底物
4-甲基傘形酮-N-乙酰基-β-D-氨基半乳糖苷(4MU-N-acetyl-0-D-galactosaminid e)，通過觀察菌落色澤(藍色、黃色和白色)以及菌落是否產(chǎn)生熒光將念珠菌幾個主要 種區(qū)分開來，但一方面熒光不能通過肉眼直接觀察，不太便利，另一方面淺黃色和乳白色 不易分辨，這會導(dǎo)致在結(jié)果判斷上出現(xiàn)偏差。日本專利JP2003310298，描述了一種通過
5-溴-4-氯-3-吲哚基-β -D-吡喃葡糖苷(X-gluc)底物將白色念珠菌和熱帶念珠菌與 其它真菌區(qū)分開來的方法，但不能鑒別該屬的其他種。Venitia M. Cooke (New Chromogenic
4Agar Medium for theldentification of Candida spp., Applied and Environmental Microbiology, Vol. 68 (7) =3622-3627,2002)描述了 一種基于沙保羅培養(yǎng)基添加了測定 白色念珠菌(C. albicans)和都柏林念珠菌(C. dubliniensis)的氨基葡糖苷酶活性的顯 色底物(VLPA-GlcNAc)來鑒別念珠菌屬的顯色培養(yǎng)基，白色念珠菌在該培養(yǎng)基上生長為 呈紅色點狀的白色菌落，其他念珠菌則只能分為白色或粉色菌落而無法區(qū)分。A. Gaschet 等(Evaluation of CandiSelect4, a newchromogenic medium for isolation and presumptive identification of Candidaspecies from clinical specimens, J. of Medical Mycology, V. 18 (2)，89-95，2008)描述了一種新的分離和鑒定臨床標(biāo)本中念珠菌 屬細菌的顯色培養(yǎng)基CandiSelect4，該培養(yǎng)基和CHROMAgar Candida (科瑪嘉公司)對念珠 菌的分離效果一致，但二者對該屬重要的白色念珠菌均不能獲得完全滿意的鑒定結(jié)果(少 部分為假陽性結(jié)果)，也不能將都柏林念珠菌與白色念珠菌區(qū)分開來，而且二者至少培養(yǎng) 48h目標(biāo)菌才能出現(xiàn)肉眼可分辨的色澤，最佳時間為72h。因此，本領(lǐng)域需要一種高效、快速、低廉、操作簡便的方法，進行念珠菌的檢測。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個目的在于，提供一種選擇性高、檢測周期短、成本低、可操作性強，適 用于多種檢測樣本中念珠菌的分離與鑒別，在分離的同時能即時區(qū)分該屬主要致病真菌白 色念珠菌、熱帶念珠菌、克柔氏念珠菌、光滑念珠菌等念珠菌的顯色培養(yǎng)基和對白色念珠菌 進行確證以及將都柏林念珠菌與白色念珠菌區(qū)分開的檢測試劑盒。
本發(fā)明的另一個目的在于，提供快速、簡便、高效地檢測樣本中念珠菌的方法。本發(fā)明的還一個目的在于，提供本發(fā)明的念珠菌顯色培養(yǎng)基或念珠菌檢測試劑盒 在制備用于檢測念珠菌的診斷劑中的應(yīng)用。針對上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案在一個實施方案中，本發(fā)明提供了一種念珠菌顯色培養(yǎng)基，其包含酵母粉2 5重量份，麥芽浸粉2 5重量份，蛋白胨5 10重量份，葡萄糖10 20重量份，瓊脂12 18重量份，氯霉素0. 02 0. 06重量份，混合顯色底物1 2. 5重量份(由氨基己糖苷酶和堿性磷酸酶底物1 1 (w/w) 組成)，甘氨酸0. 5 4重量份，pH 6. 2士0. 2。在一個實施方案中，所述氨基己糖苷酶和堿性磷酸酶底物分別為 5-溴-4-氯-3-吲哚基-N-乙?；? β -D-氨基葡糖苷(5-bromo-4-chloro-3-ind olylN-acetyl-β -D-glucosaminide)和5_溴_6_氯_3_吲哚基磷酸酯對甲苯胺鹽 (5-bromo-6-chloro-3-indolyl phosphate p-toluidine salt)。所述的氛基己 ΡΒΙ禾口 堿性磷酸酶底物5-溴-4-氯-3-吲哚基-N-乙?；?β -D-氨基葡糖苷可例如從sigma公 司購得，而堿性磷酸酶底物5-溴-6-氯-3-吲哚基磷酸酯對甲苯胺鹽可例如從Fluka公司購得。
優(yōu)選地，根據(jù)本發(fā)明的顯色培養(yǎng)基包含酵母粉3重量份，麥芽浸粉3重量份，蛋白胨5重量份，葡萄糖20重量份，瓊脂15重量份，氯霉素0. 05重量份，混合顯色底物 2重量份(由氨基己糖苷酶和堿性磷酸酶底物組成，同上)甘氨酸1重量份。根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案，本發(fā)明提供檢測試劑盒，其包含本發(fā)明的念珠菌顯
色培養(yǎng)基。在一個實施方案中，本發(fā)明的檢測試劑盒進一步包含鑒定紙片A和B，其中A 為含酶底物5-溴-4-氯-3-吲哚基-N-乙?；?β -D-氨基半乳糖苷(X-N-acetyl β -D-galactosaminide)的鑒定紙片；B為含酶底物5_溴_4_氯_3_吲哚基-β -D-吡喃葡 糖苷(X-gluc)的鑒定紙片。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述檢測試劑盒由白色念珠菌顯色培養(yǎng)基、鑒定紙片A 和B組成，其中所述白色念珠菌顯色培養(yǎng)基包含酵母粉2 5重量份，麥芽浸粉 2 5重量份，蛋白胨5 10重量份，葡萄糖10 20重量份，瓊脂12 18重量份，氯霉素0. 02 0. 06重量份，混合顯色底物 1 2. 5重量份(由氨基己糖苷酶和堿性磷酸酶底物組成，同 上)；A為含酶底物5-溴-4-氯-3-吲哚基-N-乙?；?β -D-氨基半乳糖苷的鑒定紙 片；B為含酶底物5-溴-4-氯-3-吲哚基-β -D-吡喃葡糖苷的鑒定紙片。在一個更優(yōu)選的實施方案中，所述檢測試劑盒由白色念珠菌顯色培養(yǎng)基、鑒定紙 片A和B組成，其中所述白色念珠菌顯色培養(yǎng)基包含酵母粉3重量份，麥芽浸粉3重量份，蛋白胨5重量份，葡萄糖20重量份，瓊脂15重量份，氯霉素0. 05重量份，
混合顯色底物 2重量份(由氨基己糖苷酶和堿性磷酸酶底物組成，同上)，甘氨酸1重量份，A為含酶底物5-溴-4-氯-3-吲哚基_N_乙?；?β -D-氨基半乳糖苷的鑒定紙 片；B為含酶底物5-溴-4-氯-3-吲哚基-β -D-吡喃葡糖苷的鑒定紙片。注上述底物為商購獲得，如sigma-aldrich，或自行合成。另一方面，本發(fā)明提供檢測念珠菌的方法，所述方法包括使用本發(fā)明的念珠菌顯 色培養(yǎng)基或檢測試劑盒。本發(fā)明的方法可以用于所有領(lǐng)域，包括醫(yī)學(xué)微生物標(biāo)本、藥品及醫(yī)療器械衛(wèi)生檢 驗樣品、公共衛(wèi)生監(jiān)測樣品和食品(包括化妝品)衛(wèi)生檢驗樣品中念珠菌的檢測和鑒定。在 一個實施方案中，本發(fā)明的方法用于工業(yè)制品中的念珠菌的檢測。在另一個實施方案中，本 發(fā)明的方法不用于疾病的診斷。在一個實施方案中，本發(fā)明的方法進一步包括制備顯色平板、制作鑒定紙片、樣本 處理、接種顯色平板和進行鑒定試驗的步驟。在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的方法包括如下步驟制備顯色平板將所述顯色培養(yǎng)基干粉加入水中，加熱融化，混合均勻后，調(diào)整pH 6. 2士0. 2，煮沸，待冷至適于鋪板的溫度，倒平板，備用；樣本處理；接種培養(yǎng)將樣品處理液、經(jīng)過非選擇性或選擇性增菌的培養(yǎng)液涂布或劃線接種 于顯色平板上，35 °C 士 1°C培養(yǎng)24h-48h ；和結(jié)果分析若平板上出現(xiàn)淡綠色或綠色菌落，說明樣本中存在白色念珠菌；出現(xiàn) 深藍色或青色菌落，說明樣本中存在熱帶念珠菌；出現(xiàn)淺紫色或紫紅色并且邊緣為白色的 扁平菌落，說明樣本中存在克柔氏念珠菌；出現(xiàn)淺粉色或粉紅色的光滑菌落，為光滑念珠菌 或其他酵母菌。在另一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的方法包括如下步驟制備顯色平板將所述顯色培養(yǎng)基干粉加入水中，加熱融化，混合均勻后，調(diào)整pH 6. 2士0. 2，煮沸，待冷至適于鋪板的溫度，倒平板，備用；鑒定紙片的制作將濾紙片置于玻璃皿中，高壓滅菌。用分析天平稱取4mg合成底 物溶于Iml蒸餾水中，用以浸透并均勻分布于濾紙片，置于35°C溫箱烘干備用；樣本處理按各領(lǐng)域的規(guī)范處理方法，如醫(yī)學(xué)微生物標(biāo)本按《全國臨床檢驗操作規(guī) 程》中的方法處理；藥品及醫(yī)療器械衛(wèi)生檢驗樣品按《中國藥典》中規(guī)定的方法處理；接種培養(yǎng)將樣品處理液、經(jīng)過非選擇性或選擇性增菌的培養(yǎng)液涂布或劃線接種 于顯色平板上，35°C 士 1°C培養(yǎng)24h-48h ；確證試驗將擬驗證的菌落(淡綠色或綠色菌落)轉(zhuǎn)接于制備好的YM平板上 30士2°C培養(yǎng)18-24h。將鑒定紙片A和B分別放在玻片上，加UtpH 6. 5磷酸鹽緩沖液浸 濕。以接種環(huán)取菌落膿涂于紙片上。35°C下孵育Ih觀察結(jié)果，菌落及周圍顯現(xiàn)綠色為陽性， 無綠色者為陰性。結(jié)果分析若在接種培養(yǎng)步驟中在顯色平板上出現(xiàn)淡綠色或綠色菌落，而在確證 實驗結(jié)果是A和B均為陽性，說明樣本中存在白色念珠菌；若A為陽性，B為陰性，說明樣本中存在都柏林念珠菌；若A和B均為陰性，則為其他念珠菌。此外，如果顯色平板上出現(xiàn)深 藍色或青色菌落，可能為熱帶念珠菌；出現(xiàn)淺紫色或紫紅色并且邊緣為白色的扁平菌落，可 能為克柔氏念珠菌；出現(xiàn)淺粉色或粉紅色的光滑菌落，可能為光滑念珠菌或其他酵母菌。在一個優(yōu)選的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的方法，所述制備顯色平板包括每 IOOOmL水中加入49g顯色培養(yǎng)基干粉，加熱融化，混合均勻后，調(diào)整pH 6. 2士0. 2，煮沸 2min,待冷至約50°C，倒平板，備用，而所述樣本處理可以按各領(lǐng)域規(guī)范方法進行處理，如醫(yī) 學(xué)標(biāo)本按照全國臨床檢驗操作規(guī)程。再一方面，本發(fā)明提供所述的念珠菌顯色培養(yǎng)基或檢測試劑盒在制備用于檢測念 珠菌的診斷劑中的應(yīng)用。本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，利用細菌特異性酶，在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加組合式人 工合成酶底物，當(dāng)目標(biāo)菌在培養(yǎng)基上生長時，底物被分解，發(fā)色基團使菌落著色，從而使目 標(biāo)菌得到初步區(qū)分，再通過確證實驗使目標(biāo)菌得到準確鑒別。首先，分析念珠菌屬中主要菌 種白色念珠菌、熱帶念珠菌、克柔氏念珠菌代謝過程中產(chǎn)生的特異性酶，根據(jù)主要念珠菌所 產(chǎn)生的酶的差異，將對應(yīng)底物進行組合，添加于可供念珠菌生長的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，為保證培 養(yǎng)基在鑒別念珠菌方面的特異性，添加了抑制目標(biāo)菌以外的細菌生長抑菌劑，三者相結(jié)合 組成念珠菌顯色培養(yǎng)基。其中蛋白胨為念珠菌生長提供氮源；酵母粉和麥芽浸粉為念珠菌 生長提供維生素和必要的生長因子；葡萄糖為念珠菌生長提供碳源；人工合成的混合酶底 物被念珠菌代謝過程中產(chǎn)生的特異性酶降解后釋放不同色素；甘氨酸為念珠菌快速和旺盛 生長補充氮源；氯霉素廣譜抑制其他細菌的生長。其次，本發(fā)明所述的檢測試劑盒除顯色培 養(yǎng)基外還提供了進一步確定白色念珠菌的鑒定紙片A和B，通過顯色底物5-溴-4-氯-3-吲 哚基-N-乙?；?β -D-氨基半乳糖苷和5-溴-4-氯-3-吲哚基-β -D-吡喃葡糖苷測定 疑似菌株的半乳糖苷酶活性和葡萄糖苷酶活性，提高了白色念珠菌鑒定結(jié)果的準確性，并 且能夠?qū)⒍及亓帜钪榫c白色念珠菌區(qū)分開來。本發(fā)明開發(fā)的念珠菌顯色培養(yǎng)基和檢測試劑盒，克服了目前應(yīng)用較廣的沙保羅培 養(yǎng)基在分離念珠菌時不能區(qū)分念珠菌屬各個種的缺點；與類似產(chǎn)品相比，保證了檢測結(jié)果 的可靠性；優(yōu)化后的培養(yǎng)基配方使念珠菌的生長速度加快，培養(yǎng)24h即出現(xiàn)菌落特征，在對 念珠菌中重要的白色念珠菌、熱帶念珠菌、克柔氏念珠菌、光滑念珠菌檢測過程中，準確、快 速、高效。使用本發(fā)明的念珠菌顯色培養(yǎng)基、檢測試劑及檢測方法操作簡便，適用于醫(yī)學(xué)微 生物標(biāo)本、藥品及醫(yī)療器械衛(wèi)生檢驗樣品、公共衛(wèi)生監(jiān)測樣品和食品(包括化妝品)衛(wèi)生檢 驗樣品中念珠菌的檢測，且價格低廉，具有很好的應(yīng)用推廣前景。
具體實施例方式實施例1 本發(fā)明所述的念珠菌顯色培養(yǎng)基營養(yǎng)能力評價1.培養(yǎng)基配制按表1中的配方稱取各組分，配制成兩種培養(yǎng)基，各加水IOOOmL,加熱融化后，調(diào) 整pH為6. 2，煮沸2min,冷卻至50°C，倒平板，備用。表1培養(yǎng)基組分(g/L)
權(quán)利要求
念珠菌顯色培養(yǎng)基，其特征在于所述培養(yǎng)基包含酵母粉2～5重量份，麥芽浸粉 2～5重量份，蛋白胨5～10重量份，葡萄糖10～20重量份，瓊脂 12～18重量份，氯霉素0.02～0.06重量份，混合顯色底物，其由氨基己糖苷酶和堿性磷酸酶底物組成，1～2.5重量份，甘氨酸0.5～4重量份，pH 6.2±0.2。
2.如權(quán)利要求1所述的念珠菌顯色培養(yǎng)基，其特征在于所述培養(yǎng)基包含 酵母粉 3重量份，麥芽浸粉3重量份， 蛋白胨 5重量份， 葡萄糖 20重量份， 瓊脂 15重量份， 氯霉素 0. 05重量份，混合顯色底物，其由氨基己糖苷酶和堿性磷酸酶底物組成，2重量份， 甘氨酸 1重量份，pH 6. 2士0.2。
3.念珠菌檢測試劑盒，其包含權(quán)利要求1或2所述的念珠菌顯色培養(yǎng)基。
4.如權(quán)利要求3所述的念珠菌檢測試劑盒，其進一步包含鑒定紙片A和B，其中鑒定紙 片A為含酶底物5-溴-4-氯-3-吲哚基-N-乙酰基-β -D-氨基半乳糖苷的鑒定紙片，而 鑒定紙片B為含酶底物5-溴-4-氯-3-吲哚基- β -D-吡喃葡糖苷的鑒定紙片。
5.一種檢測念珠菌的方法，所述方法包括使用權(quán)利要求1或2所述的念珠菌顯色培養(yǎng) 基或權(quán)利要求3或4所述的念珠菌檢測試劑盒。
6.如權(quán)利要求5所述的方法，當(dāng)使用所述念珠菌顯色培養(yǎng)基時，所述方法進一步包括 如下步驟制備顯色平板將所述顯色培養(yǎng)基干粉加入水中，加熱融化，混合均勻后，調(diào)整PH 6. 2士0. 2，煮沸，待冷至適于鋪板的溫度，倒平板，備用； 樣本處理；接種培養(yǎng)將樣品處理液、經(jīng)過非選擇性或選擇性增菌的培養(yǎng)液涂布或劃線接種于顯 色平板上，35°C 士 1°C培養(yǎng)24h-48h ；和結(jié)果分析若平板上出現(xiàn)淡綠色或綠色菌落，說明樣本中存在白色念珠菌；出現(xiàn)深藍 色或青色菌落，說明樣本中存在熱帶念珠菌；出現(xiàn)淺紫色或紫紅色并且邊緣為白色的扁平 菌落，說明樣本中存在克柔氏念珠菌；出現(xiàn)淺粉色或粉紅色的光滑菌落，為光滑念珠菌或其 他酵母菌。
7.如權(quán)利要求5所述的方法，當(dāng)使用所述念珠菌檢測試劑盒時，所述方法進一步包括 如下步驟制備顯色平板將所述顯色培養(yǎng)基干粉加入水中，加熱融化，混合均勻后，調(diào)整PH 6. 2士0. 2，煮沸，待冷至適于鋪板的溫度，倒平板，備用；鑒定紙片的制作將濾紙片置于玻璃皿中，高壓滅菌；用分析天平稱取4mg 5-溴-4-氯-3-吲哚基-N-乙酰基-β -D-氨基半乳糖苷和5-溴-4-氯-3-吲哚基-β -D-吡 喃葡糖苷底物分別溶于Iml蒸餾水中；用以浸透并均勻分布于濾紙片，得到鑒定紙片A和 B，置于35°C溫箱烘干備用；樣本處理； 接種培養(yǎng)將樣品處理液、經(jīng)過非選擇性或選擇性增菌的培養(yǎng)液涂布或劃線接種于顯 色平板上，35°C 士 1°C培養(yǎng)24h-48h ；確證試驗將擬驗證的菌落轉(zhuǎn)接于制備好的YM平板上30士2°C培養(yǎng)18-24h ；將鑒定紙 片A和B分別放在玻片上，加1滴pH 5. 5磷酸鹽緩沖液浸濕；以接種環(huán)取菌落膿涂于紙片 上，35°C下孵育30min觀察結(jié)果菌落及周圍顯現(xiàn)綠色為陽性，無綠色者為陰性；結(jié)果分析若在接種培養(yǎng)步驟中在顯色平板上出現(xiàn)淡綠色或綠色菌落，而在確證實驗 結(jié)果是A和B均為陽性，說明樣本中存在白色念珠菌；若A為陽性，B為陰性，說明樣本中存 在都柏林念珠菌；若A和B均為陰性，則為其他念珠菌。
8.如權(quán)利要求5-7中任一項所述的方法，所述方法用于工業(yè)制品的檢測。
9.如權(quán)利要求5-7中任一項所述的方法，所述方法用于藥品、食品和化妝品的檢測。
10.權(quán)利要求1或2所述的念珠菌顯色培養(yǎng)基或權(quán)利要求3或4所述的念珠菌檢測試 劑盒在制備用于檢測念珠菌的診斷劑中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及念珠菌顯色培養(yǎng)基、檢測試劑盒及檢測方法，屬于微生物診斷領(lǐng)域，特別是醫(yī)學(xué)微生物標(biāo)本、藥品及醫(yī)療器械衛(wèi)生檢驗樣品、公共衛(wèi)生監(jiān)測樣品和食品(包括化妝品)衛(wèi)生檢驗樣品中酵母菌的培養(yǎng)和鑒定。本發(fā)明的顯色培養(yǎng)基由基礎(chǔ)培養(yǎng)基、加入了念珠菌特異性酶的混合顯色底物氨基己糖苷酶和堿性磷酸酶底物和抑菌劑組成。本發(fā)明的檢測試劑盒由所述顯色培養(yǎng)基、含酶底物5-溴-4-氯-3-吲哚基-N-乙?；?β-D-氨基半乳糖苷的鑒定紙片A和含酶底物5-溴-4-氯-3-吲哚基-β-D-吡喃葡糖苷的鑒定紙片B組成。本發(fā)明所述的念珠菌顯色培養(yǎng)基和檢測試劑盒成本低、配置簡單，所述方法能夠快速、簡便、準確地用于念珠菌的分離和鑒定。
文檔編號C12Q1/04GK101948902SQ20101027756
公開日2011年1月19日 申請日期2010年9月10日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月10日
發(fā)明者趙勇勝, 趙貴明, 陳穎 申請人:中國檢驗檢疫科學(xué)研究院