專利名稱：一種定量檢測鰻弧菌的選擇性培養(yǎng)基及其制備的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及微生物培養(yǎng)基，具體地說是一種定量檢測養(yǎng)殖海水中鰻弧菌M3的選擇性培養(yǎng)基及其制備。
背景技術：
對海水中鰻弧菌進行定量檢測的方法有菌落雜交(Aoki，T.，I.Hirono，T.de Castro，and T.Kitao.1989.Rapid identification of Vibrio anguillarum bycolony hybridization.J.Appl.Ichthyol.567-73.)，southern雜交(Martinez-Picado，J.，A.R Blanch，and J.Jofre.1994.Rapid detection andidentification of Vibrio anguillarum by using a specific oligonucleotide probecomplementary to 16S rRNA.Appl.Environ.Microbiol.60732-737.和Rehnstam，A.-S.，A.Norqvist，H.Wolf-Watz，and A.Hagstrom.1989.Identification of Vibrio anguillarum in fish by using partial 16S rRNA sequencesand a specific 16S rRNA oligonucleotide probe.Appl.Environ.Microbiol.551907-1910.)，但雜交的方法對技術和設備的要求高，不利于養(yǎng)殖人員操作。而已有的對鰻弧菌進行定量檢測的方法(MERCEDES ALSINA，JAVIERMARTINEZ-PICADO，JOAN JOFRE，AND ANICET R.BLANCH*，AMedium for Presumptive Identification of Vibrio anguillarum，，Appl.Environ.Microbiol.，May 1994，p.1681-1683)則不適于M3的檢測。

發(fā)明內容
為了克服現(xiàn)有技術在對鰻弧菌的定量檢測中對技術和設備要求高、操作復雜的缺點，本發(fā)明提供一種可對鰻弧菌M3進行定量快速地檢測的選擇性培養(yǎng)基。
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術方案如下培養(yǎng)基組成為，山梨醇15g；酵母粉或酵母膏2～5g；NaCl 20～60g；氨芐青霉素5mg；甲酚紅40mg；溴麝香酚藍蘭40mg；瓊脂12～20g；蒸餾水1000ml。
按上述培養(yǎng)基組成稱取各組份，將除了氨芐青霉素外(山梨醇、酵母粉或酵母膏、NaCl、甲酚紅、溴麝香酚藍蘭、瓊脂、蒸餾水)，所有的成分加在一起并加熱攪動，使其溶解。溶解后冷卻到45～50℃，將pH用3～5MNaOH調到8.6(±0.2)，然后加入氨芐青霉素。將培養(yǎng)基倒入平板中，冷卻后倒置放于15℃培養(yǎng)箱；保存時間不能超過3周。將養(yǎng)殖海水直接涂布于該培養(yǎng)基上，對養(yǎng)殖海水中的鰻弧菌M3進行定量檢測，鰻弧菌M3菌落在該培養(yǎng)基上呈黃色。
本發(fā)明利用鰻弧菌對氨芐青霉素的抗性，以及細菌對碳源利用能力的不同，可有效將鰻弧菌M3從坎氏弧菌，哈維氏弧菌，燦爛弧菌，解藻酸弧菌，河流弧菌，副溶血弧菌，創(chuàng)傷弧菌中區(qū)分出來，從而方便快速地對養(yǎng)殖海水中的鰻弧菌M3進行定量檢測，以減少M3對魚類養(yǎng)殖造成的損失。
具體實施例方式
下面通過實施例對本發(fā)明作進一步說明。
實施例1培養(yǎng)基組成山梨醇15g；酵母粉4g；NaCl 35g；氨芐青霉素5mg；甲酚紅40mg；溴麝香酚藍蘭40mg；瓊脂15g；蒸餾水1000ml。
除了氨芐青霉素外，所有的成分加在一起并加熱攪動，使其溶解；溶解后冷卻到50℃，將pH用5M NaOH調到8.6(±0.2)，然后加入氨芐青霉素；將培養(yǎng)基倒入平板中，冷卻后倒置放于15℃培養(yǎng)箱；保存時間不能超過3周。鰻弧菌M3菌落在該培養(yǎng)基上呈黃色。
實施例2培養(yǎng)基組成山梨醇15g；酵母粉5g；NaCl 30g；氨芐青霉素5mg；甲酚紅40mg；溴麝香酚藍蘭40mg；瓊脂15g；蒸餾水1000ml。
除了氨芐青霉素外，所有的成分加在一起并加熱攪動，使其溶解。溶解后冷卻到50℃，將pH用4M NaOH調到8.6，然后加入氨芐青霉素；將培養(yǎng)基倒入平板中，冷卻后倒置放于15℃培養(yǎng)箱；保存時間不能超過3周。鰻弧菌M3菌落在該培養(yǎng)基上呈黃色。
實施例3培養(yǎng)基組成山梨醇15g；酵母粉3g；NaCl 35g；氨芐青霉素5mg；甲酚紅40mg；溴麝香酚藍蘭40mg；瓊脂18g；蒸餾水1000ml。
除了氨芐青霉素外，所有的成分加在一起并加熱攪動，使其溶解；溶解后冷卻到50℃，將pH用5M NaOH調到8.6，然后加入氨芐青霉素；將培養(yǎng)基倒入平板中，冷卻后倒置放于15℃培養(yǎng)箱；保存時間不能超過3周。鰻弧菌M3菌落在該培養(yǎng)基上呈黃色。
實施例4培養(yǎng)基組成山梨醇15g；酵母膏2g；NaCl 20g；氨芐青霉素5mg；甲酚紅40mg；溴麝香酚藍蘭40mg；瓊脂20g；蒸餾水1000ml。
除了氨芐青霉素外，所有的成分加在一起并加熱攪動，使其溶解。溶解后冷卻到45℃，將pH用3M NaOH調到8.4，然后加入氨芐青霉素；將培養(yǎng)基倒入平板中，冷卻后倒置放于15℃培養(yǎng)箱；保存時間不能超過3周。鰻弧菌M3菌落在該培養(yǎng)基上呈黃色。
實施例5培養(yǎng)基組成山梨醇15g；酵母膏2g；NaCl 60g；氨芐青霉素5mg；甲酚紅40mg；溴麝香酚藍蘭40mg；瓊脂12g；蒸餾水1000ml。除了氨芐青霉素外，所有的成分加在一起并加熱攪動，使其溶解。溶解后冷卻到48℃，將pH用3M NaOH調到8.5，然后加入氨芐青霉素；將培養(yǎng)基倒入平板中，冷卻后倒置放于15℃培養(yǎng)箱；保存時間不能超過3周。鰻弧菌M3菌落在該培養(yǎng)基上呈黃色。
應用例1將養(yǎng)殖海水直接涂布于實施例1制備的培養(yǎng)基上，對養(yǎng)殖海水中的鰻弧菌M3進行定量檢測。
用無菌容器取養(yǎng)殖海水，取100ul均勻涂布到已經(jīng)制備好的選擇性平板上，半小時后倒置于28℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)36-48hr(本例為36hr)，數(shù)出黃色菌落的個數(shù)N。則1ml養(yǎng)殖海水中鰻弧菌M3的個數(shù)為10×N。
應用例2將養(yǎng)殖海水直接涂布于實施例3制備的培養(yǎng)基上，對養(yǎng)殖海水中的鰻弧菌M3進行定量檢測。
將100ml養(yǎng)殖海水用抽濾器抽濾，濾膜放置于已經(jīng)制備好的選擇性平板上，正置于28℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)36-48hr(本例為48hr)，數(shù)出黃色菌落的個數(shù)N。則100ml養(yǎng)殖海水中鰻弧菌M3的個數(shù)為N。
權利要求
1.一種定量檢測鰻弧菌M3的選擇性培養(yǎng)基，其特征在于培養(yǎng)基組成為，山梨醇15g；酵母粉或酵母膏2～5g；NaCl 20～60g；氨芐青霉素5mg；甲酚紅40mg；溴麝香酚藍蘭40mg；瓊脂12～20g；蒸餾水1000ml。
2.按照權利要求1所述的定量檢測鰻弧菌M3的選擇性培養(yǎng)基，其特征在于培養(yǎng)基組成為，山梨醇15g；酵母粉或酵母膏4g；NaCl 35g；氨芐青霉素5mg；甲酚紅40mg；溴麝香酚藍蘭40mg；瓊脂15g；蒸餾水1000ml。
3.一種權利要求1所述的定量檢測鰻弧菌M3的選擇性培養(yǎng)基的制備，其特征在于按權利要求1所述培養(yǎng)基組成稱取各組份，將山梨醇、酵母粉或酵母膏、NaCl、甲酚紅、溴麝香酚藍蘭、瓊脂、蒸餾水加在一起并加熱攪動，使其溶解，溶解后冷卻到45～50℃，將pH用3～5M NaOH調到8.4～8.8，然后加入氨芐青霉素，將培養(yǎng)基倒入平板中，冷卻后倒置放于培養(yǎng)箱中。
全文摘要
一種定量檢測鰻弧菌M3的選擇性培養(yǎng)基及其制備，培養(yǎng)基組成為，山梨醇15g；酵母粉或酵母膏2～5g；NaCl 20～60g；氨芐青霉素5mg；甲酚紅40mg；溴麝香酚藍蘭40mg；瓊脂12～20g；蒸餾水1000ml。本發(fā)明利用鰻弧菌對氨芐青霉素的抗性，以及細菌對碳源利用能力的不同，可有效將鰻弧菌M3從坎氏弧菌，哈維氏弧菌，燦爛弧菌，解藻酸弧菌，河流弧菌，副溶血弧菌，創(chuàng)傷弧菌中區(qū)分出來，從而方便快速地對養(yǎng)殖海水中的鰻弧菌M3進行定量檢測，以減少M3對魚類養(yǎng)殖造成的損失。
文檔編號C12Q1/04GK1769469SQ200410050688
公開日2006年5月10日 申請日期2004年10月27日 優(yōu)先權日2004年10月27日
發(fā)明者鄒玉霞, 莫照蘭, 張培軍, 徐永立, 王春玲, 張振冬, 肖鵬 申請人:中國科學院海洋研究所