專利名稱：一種促進(jìn)植物生長的藻菌的共培方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種促進(jìn)植物生長的藻菌的共培方法，是一種海水小球藻和光合細(xì)菌的共同培養(yǎng)技術(shù)。屬于農(nóng)業(yè)種植肥料的領(lǐng)域，尤其微生物肥料技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
海水小球藻是一種營養(yǎng)豐富的單胞藻，通常用作貝類、對蝦等經(jīng)濟(jì)品種的生物餌料，還可以用來培養(yǎng)輪蟲、橈足類等魚類的開口餌料，富含必需氨基酸、必需脂肪酸、糖蛋白、核酸等生物活性物質(zhì)，可以增強(qiáng)水產(chǎn)動物機(jī)體免疫力，在海水養(yǎng)殖中具有重要的應(yīng)用價值。此外，小球藻吸收水體的氮磷、C02等，并進(jìn)行產(chǎn)氧光合作用，一方面可以有效降低水體C0D、氮磷負(fù)荷，還釋放氧氣，改善水質(zhì)，保持水產(chǎn)動物健康。光合細(xì)菌是地球上出現(xiàn)最早、自然界中普遍存在、具有原始光能合成體系的原核生物，廣泛分布于自然界的土壤、水田、沼澤、湖泊、江海等處，主要分布于水生環(huán)境中光線能透射到的缺氧區(qū)。光合細(xì)菌的菌體以有機(jī)酸、氨基酸、氨和醣類等有機(jī)物和硫化氫作為供氧體，通過光合磷酸化獲得能量，在水中光照條件下可直接利用降解有機(jī)質(zhì)和硫化氫并使自身得以增殖，同進(jìn)凈化了水體。除此之外，細(xì)胞內(nèi)還含有碳素儲存物質(zhì)糖原和聚P —羥基丁酸、輔酶Q、抗病毒物質(zhì)和生長促進(jìn)因子，具有很高的營養(yǎng)價值，在養(yǎng)殖業(yè)上也有廣闊的應(yīng)用前景。通常，人們對小球藻和光合細(xì)菌進(jìn)行分別培養(yǎng)，再進(jìn)行單獨或混合使用。不僅貯存、使用麻煩，而且由于培養(yǎng)濃度差異導(dǎo)致藻菌比例失衡，難以完全發(fā)揮其協(xié)同作用。本發(fā)明通過研究小球藻與光合細(xì)菌的培養(yǎng)條件與生長特性，配制培養(yǎng)基，再按一定比例進(jìn)行接種，實現(xiàn)藻菌共培。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的，是為了克服現(xiàn)有技術(shù)對小球藻和光合細(xì)菌進(jìn)行分別培養(yǎng)、單獨或混合使用存在存貯和使用不方便、難以發(fā)揮協(xié)同作用的缺點，提供一種促進(jìn)植物生長的藻菌的共培方法。本發(fā)明的目的可以通過采取如下技術(shù)方案達(dá)到一種促進(jìn)植物生長的藻菌的共培方法，其特征在于包括如下步驟I)配制培養(yǎng)基溶液，由NaHC03、乙酸鈉、NH4C1、KNO3、KH2PO4、酵母膏、CaCl2、檸檬酸鈉按比例配制而成；所述各物質(zhì)組份在培養(yǎng)基溶液濃度為NaHCO3 I. 0 3. Omg/1、乙酸鈉
I.0 3. Omg/1、NH4Cl I. 0 2. Omg/1、KNO3 0. I 0. 3mg/l、KH2PO4 0. 5 I. 5mg/l、酵母膏 0. 25 0. 75mg/l、CaCl2 0. 08 0. 12mg/l、檸檬酸鈉 0. 25 0. 75mg/l ;培養(yǎng)基溶液的pH值為7.0 7. 5;2)接種，準(zhǔn)備好海水小球藻原液，該海水小球藻原液分光光度值為0D680 = 3. 0
4.0，對應(yīng)濃度> 3X 106/ml ;準(zhǔn)備好沼澤紅假單胞菌原液，該沼澤紅假單胞菌原液分光光度值為0D805 = 2. 0 2. 5，對應(yīng)濃度> 3 X 108/ml ;首先將所述海水小球藻原液與沼澤紅假單胞菌原液按藻菌體積比例為I : 10混合后形成藻菌混合液，然后將藻菌混合液與步驟I)配制的培養(yǎng)基溶液混合，構(gòu)成接種藻菌混合液；培養(yǎng)基溶液占接種藻菌混合液體積25% ；3)培養(yǎng)，采用人工光源進(jìn)行間歇光照培養(yǎng)72小時，所述間歇光照培養(yǎng)培養(yǎng)是指12小時光照-12小時黑暗-12小時光照-12小時黑暗-12小時光照-12小時黑暗共72小時，后得到促進(jìn)植物生長的藻菌，所述12小時光照的照度為2000勒克斯。
本發(fā)明的目的還可以通過采取如下技術(shù)方案達(dá)到實現(xiàn)本發(fā)明目的的一種技術(shù)改進(jìn)方案是步驟I)所述各物質(zhì)組份在培養(yǎng)基溶液濃度為 NaHCO3 2. Omg/1、乙酸鈉 2. Omg/1、NH4Cl I. 5mg/l、KNO3 0. 2mg/1、KH2PO4 I. Omg/1、酵母膏 0. 5mg/l、CaCl2 0. lmg/1、梓檬酸鈉 0. 5mg/l。實現(xiàn)本發(fā)明目的的一種技術(shù)改進(jìn)方案是步驟I)所述各物質(zhì)組份在培養(yǎng)基溶液濃度為 NaHCO3 I. Omg/1、乙酸鈉 I. Omg/1、NH4Cl I. 0/1、KNO3 0. lmg/1、KH2PO4 0. 5mg/l、酵母膏0. 25mg/l、CaCl2 0. 08mg/l、檸檬酸鈉0. 25mg/l ;培養(yǎng)基溶液的pH值為7. 0 7. 5。實現(xiàn)本發(fā)明目的的一種技術(shù)改進(jìn)方案是步驟I)所述各物質(zhì)組份在培養(yǎng)基溶液濃度為 NaHCO3 3. Omg/1、乙酸鈉 3. Omg/1、NH4Cl 2. Omg/1、KNO3 0. 3mg/1、KH2PO4 I. 5mg/l、酵母膏0. 75mg/l、CaCl2 0. 12mg/l、檸檬酸鈉0. 75mg/l ;培養(yǎng)基溶液的pH值為7. 0 7. 5。實現(xiàn)本發(fā)明目的的一種技術(shù)改進(jìn)方案是步驟I)所述各物質(zhì)組份在培養(yǎng)基溶液濃度為 NaHCO3 I. Omg/1、乙酸鈉 3. Omg/1、NH4Cl 2. Omg/1、KNO3 0. lmg/1、KH2PO4 I. 5mg/l、酵母膏0. 25mg/l、CaCl2 0. 12mg/l、檸檬酸鈉0. 25mg/l ;培養(yǎng)基溶液的pH值為7. 0 7. 5。實現(xiàn)本發(fā)明目的的一種技術(shù)改進(jìn)方案是步驟I)所述各物質(zhì)組份在培養(yǎng)基溶液濃度為 NaHCO3 3. Omg/1、乙酸鈉 I. Omg/1、NH4Cl I. Omg/1、KNO3 0. 3mg/l、KH2PO4 0. 5mg/l、酵母膏0. 75mg/l、CaCl2 0. 08mg/l、檸檬酸鈉0. 75mg/l ;培養(yǎng)基溶液的pH值為7. 0 7. 5。實現(xiàn)本發(fā)明目的的一種技術(shù)改進(jìn)方案是步驟3)的培養(yǎng)，采用血球計數(shù)板計數(shù)，接種藻菌混合液中海水小球藻細(xì)胞濃度為5X 106/ml、沼澤紅假單胞菌細(xì)胞濃度為5X 108/ml。本發(fā)明具有如下有益效果I、本發(fā)明由于采取將小球藻和光合細(xì)菌混合在同一培養(yǎng)基中培養(yǎng)，特別是采用了經(jīng)申請人反復(fù)試驗及驗證的特定配比的組方，利用二者協(xié)同作用，實現(xiàn)藻菌共培，比傳統(tǒng)培養(yǎng)方式中藻、菌濃度分別提高43. 4%和58. 1%，培養(yǎng)成本分別節(jié)約30. 7%和38. 3%。2、本發(fā)明利用小球藻和光合細(xì)菌的協(xié)作關(guān)系，在特定培養(yǎng)基和接種條件下，能夠形成良好的共培體系，小球藻和光合細(xì)菌二者充分利用培養(yǎng)基中的無機(jī)和有機(jī)營養(yǎng)物，有效控制養(yǎng)殖水環(huán)境中氨態(tài)氮、亞硝酸態(tài)氮、硫化氫等有害物含量；共培出來的小球藻和光合細(xì)菌具有豐富營養(yǎng)，可以作為水產(chǎn)動物的餌料或間接餌料被利用。
具體實施例方式具體實施例I本實施例涉及一種促進(jìn)植物生長的藻菌的共培方法，包括如下步驟I)配制培養(yǎng)基溶液，由NaHC03、乙酸鈉、NH4C1、KNO3、KH2PO4、酵母膏、CaCl2、檸檬酸鈉按比例配制而成；所述各物質(zhì)組份在培養(yǎng)基溶液濃度為NaHCO3 I. 0 3. Omg/1、乙酸鈉1.O 3. Omg/1、NH4Cl I. O 2. Omg/1、KNO3 0. I 0. 3mg/l、KH2PO4 0. 5 I. 5mg/l、酵母膏 0. 25 0. 75mg/l、CaCl2 0. 08 0. 12mg/l、檸檬酸鈉 0. 25 0. 75mg/l ;培養(yǎng)基溶液的pH值為7. 0 7. 5。2)接種，準(zhǔn)備好海水小球藻原液，該海水小球藻原液分光光度值為0D680 = 3. 0
4.0，對應(yīng)濃度> 3X 106/ml ;準(zhǔn)備好沼澤紅假單胞菌原液，該沼澤紅假單胞菌原液分光光度值為0D805 = 2. 0 2. 5，對應(yīng)濃度> 3 X 108/ml ;首先將所述海水小球藻原液與沼澤紅假單胞菌原液按藻菌體積比例為I : 10混合后形成藻菌混合液，然后將藻菌混合液與步驟I)配制的培養(yǎng)基溶液混合，構(gòu)成接種藻菌混合液；培養(yǎng)基溶液占接種藻菌混合液體積25% ；3)培養(yǎng)，采用人工光源進(jìn)行間歇光照培養(yǎng)72小時，所述間歇光照培養(yǎng)培養(yǎng)是指12小時光照-12小時黑暗-12小時光照-12小時黑暗-12小時光照-12小時黑暗共72小時，后得到促進(jìn)植物生長的藻菌，所述12小時光照的照度為2000勒克斯。本實施例中，0D680、0D805分別是指波長690nm和805nm下的分光光度值，值越大，說明其細(xì)胞濃度越大。具體實施例2 本實施例2的特點是步驟I)所述各物質(zhì)組份在培養(yǎng)基溶液濃度為NaHCO3
2.Omg/1、乙酸鈉 2. Omg/1、NH4Cl I. 5mg/l、KN03 0. 2mg/1、KH2PO4 I. Omg/1、酵母膏 0. 5mg/l、CaCl2O. lmg/1、朽1檬酸鈉0. 5mg/l。其余方法步驟同具體實施例I。具體實施例3 本實施例3的特點是步驟I)所述各物質(zhì)組份在培養(yǎng)基溶液濃度為NaHCO3
I.Omg/1、乙酸鈉 I. Omg/1、NH4Cl I. 0/1、KNO3 0. lmg/1、KH2PO4 0. 5mg/l、酵母膏 0. 25mg/l、CaCl2O. 08mg/l、檸檬酸鈉0. 25mg/l ;培養(yǎng)基溶液的pH值為7. 0 7. 5。其余方法步驟同具體實施例I。具體實施例4:本實施例4的特點是步驟I)所述各物質(zhì)組份在培養(yǎng)基溶液濃度為NaHCO3
3.Omg/1、乙酸鈉 3. Omg/1、NH4Cl 2. Omg/1、KNO3 0. 3mg/1、KH2PO4 I. 5mg/l、酵母膏 0. 75mg/
I、CaCl2 0. 12mg/l、檸檬酸鈉0. 75mg/l ;培養(yǎng)基溶液的pH值為7. 0 7. 5。其余方法步驟同具體實施例I。具體實施例5 本實施例5的特點是步驟I)所述各物質(zhì)組份在培養(yǎng)基溶液濃度為NaHCO3
I.Omg/1、乙酸鈉 3. Omg/1、NH4Cl 2. Omg/1、KNO3 0. lmg/1、KH2PO4 I. 5mg/l、酵母膏 0. 25mg/
、I、CaCl2 0. 12mg/l、檸檬酸鈉0. 25mg/l ;培養(yǎng)基溶液的pH值為7. 0 7. 5。其余方法步驟同具體實施例I。具體實施例6 本實施例6的特點是步驟I)所述各物質(zhì)組份在培養(yǎng)基溶液濃度為NaHCO3
3.Omg/1、乙酸鈉 I. Omg/1、NH4Cl I. Omg/1、KNO3 0. 3mg/l、KH2PO4 0. 5mg/l、酵母膏 0. 75mg/
I、CaCl2 0. 08mg/l、檸檬酸鈉0. 75mg/l ;培養(yǎng)基溶液的pH值為7. 0 7. 5。其余方法步驟同具體實施例I。具體實施例7
本實施例7的特點是步驟3)的培養(yǎng)，采用血球計數(shù)板計數(shù)，接種藻菌混合液中海水小球藻細(xì)胞濃度為5X 106/ml、沼澤紅假單胞菌細(xì)胞濃度為5X 108/ml。其余方法步驟同具體實施例I。本實施例的應(yīng)用方法如下藻類和細(xì)菌是水生態(tài)系統(tǒng)調(diào)控體系中最重要的功能微生物，但是二者具有不同的作用特點光合細(xì)菌繁殖較慢，一般對水體中有機(jī)物濃度要求較高，可將有機(jī)氮、氨態(tài)氮轉(zhuǎn)化為無毒害作用的硝態(tài)氮；小球藻的繁殖速度快，能高效吸收水體無機(jī)營養(yǎng)鹽，并對水體中較低濃度的有機(jī)物也能充分利用。(I) 二者都能進(jìn)行光合作用，對光照等培養(yǎng)條件的要求一致；(2)小球藻是自養(yǎng)型，光合細(xì)菌是異養(yǎng)型，使二者能夠充分利用水中的無機(jī)和有機(jī)營養(yǎng)物，有效控制養(yǎng)殖水環(huán)境中氨態(tài)氮、亞硝酸態(tài)氮、硫化氫等 有害物含量；(3) 二者具有豐富營養(yǎng)，可以作為水產(chǎn)動物的餌料或間接餌料被利用。
權(quán)利要求
1.一種促進(jìn)植物生長的藻菌的共培方法，其特征在于 1)配制培養(yǎng)基溶液，由NaHC03、乙酸鈉、NH4C1、KN03、KH2PO4、酵母膏、CaCl2、檸檬酸鈉按比例配制而成；所述各物質(zhì)組份在培養(yǎng)基溶液濃度為NaHCO3 I. 0 3. Omg/1、乙酸鈉I. 0 3.Omg/1,NH4Cl I. 0 2. 0mg/l、KN03 0. I 0. 3mg/l、KH2P04 0. 5 I. 5mg/l、酵母膏 0. 25 0.75mg/l、CaCl2 0. 08 0. 12mg/l、檸檬酸鈉0. 25 0. 75mg/l ;培養(yǎng)基溶液的pH值為7.0 7. 5 ; 2)接種，準(zhǔn)備好海水小球藻原液，該海水小球藻原液分光光度值為0D680= 3. 0 4.0，對應(yīng)濃度> 3 X 106/ml ;準(zhǔn)備好沼澤紅假單胞菌原液，該沼澤紅假單胞菌原液分光光度值為0D805 = 2. 0 2. 5，對應(yīng)濃度> 3X 108/ml ;首先將所述海水小球藻原液與沼澤紅假單胞菌原液按藻菌體積比例為I : 10混合后形成藻菌混合液，然后將藻菌混合液與步驟I)配制的培養(yǎng)基溶液混合，構(gòu)成接種藻菌混合液；培養(yǎng)基溶液占接種藻菌混合液體積25% ； 3)培養(yǎng)，采用人工光源進(jìn)行間歇光照培養(yǎng)72小時，所述間歇光照培養(yǎng)培養(yǎng)是指12小時光照-12小時黑暗-12小時光照-12小時黑暗-12小時光照-12小時黑暗共72小時，后得到促進(jìn)植物生長的藻菌，所述12小時光照的照度為2000勒克斯。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的促進(jìn)植物生長的藻菌的共培方法，其特征在于步驟3)的培養(yǎng),采用血球計數(shù)板計數(shù),接種藻菌混合液中海水小球藻細(xì)胞濃度為5X 106/ml、沼澤紅假單胞菌細(xì)胞濃度為5 X 108/ml。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的促進(jìn)植物生長的藻菌的共培方法，其特征在于步驟I)所述各物質(zhì)組份在培養(yǎng)基溶液濃度為NaHCO3 2. Omg/1、乙酸鈉2. Omg/1、NH4Cl I. 5mg/l、KNO3 0. 2mg/l、KH2PO4 I. Omg/1、酵母膏 0. 5mg/l、CaCl2 0. lmg/1、檸檬酸鈉 0. 5mg/l。
4.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的促進(jìn)植物生長的藻菌的共培方法，其特征在于步驟I)所述各物質(zhì)組份在培養(yǎng)基溶液濃度為NaHCO3 I. Omg/1、乙酸鈉I. Omg/1、NH4Cl I. 0/1、KNO3O. lmg/1,KH2PO4 0. 5mg/l、酵母膏 0. 25mg/l,CaCl2 0. 08mg/l、檸檬酸鈉 0. 25mg/l ;培養(yǎng)基溶液的pH值為7.0 7. 5。
5.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的促進(jìn)植物生長的藻菌的共培方法，其特征在于步驟I)所述各物質(zhì)組份在培養(yǎng)基溶液濃度為NaHCO3 3. Omg/1、乙酸鈉3. Omg/1、NH4Cl 2. Omg/1、KNO3 0. 3mg/l、KH2PO4 I. 5mg/l、酵母膏 0. 75mg/l、CaCl2 0. 12mg/l、檸檬酸鈉 0. 75mg/l ;培養(yǎng)基溶液的pH值為7.0 7. 5。
6.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的促進(jìn)植物生長的藻菌的共培方法，其特征在于步驟I)所述各物質(zhì)組份在培養(yǎng)基溶液濃度為NaHCO3 I. Omg/1、乙酸鈉3. Omg/1、NH4Cl 2. Omg/1、KNO3 0. lmg/1、KH2PO4 I. 5mg/l、酵母膏 0. 25mg/l、CaCl2 0. 12mg/l、檸檬酸鈉 0. 25mg/l ;培養(yǎng)基溶液的pH值為7.0 7. 5。
7.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的促進(jìn)植物生長的藻菌的共培方法，其特征在于步驟I)所述各物質(zhì)組份在培養(yǎng)基溶液濃度為NaHCO3 3. Omg/1、乙酸鈉I. Omg/1、NH4Cl I. Omg/1、KNO3 0. 3mg/l、KH2PO4 0. 5mg/l、酵母膏 0. 75mg/l、CaCl2 0. 08mg/l、檸檬酸鈉 0. 75mg/l ;培養(yǎng)基溶液的pH值為7.0 7. 5。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種促進(jìn)植物生長的藻菌的共培方法，其特征在于1)配制培養(yǎng)基溶液，由NaHCO3、乙酸鈉、NH4Cl、KNO3、KH2PO4、酵母膏、CaCl2、檸檬酸鈉按比例配制而成；培養(yǎng)基溶液的pH值為7.0～7.5；2)接種，準(zhǔn)備好海水小球藻原液，該海水小球藻原液分光光度值為OD680＝3.0～4.0，對應(yīng)濃度＞3×106/ml；準(zhǔn)備好沼澤紅假單胞菌原液，該沼澤紅假單胞菌原液分光光度值為OD805＝2.0～2.5，對應(yīng)濃度＞3×108/ml；3)培養(yǎng)，采用人工光源進(jìn)行間歇光照培養(yǎng)72小時，得到促進(jìn)植物生長的藻菌。本發(fā)明采用了經(jīng)申請人反復(fù)試驗及驗證的特定配比的組方，利用二者協(xié)同作用，實現(xiàn)藻菌共培，比傳統(tǒng)培養(yǎng)方式中藻、菌濃度分別提高43.4％和58.1％，培養(yǎng)成本分別節(jié)約30.7％和38.3％。
文檔編號C12N1/20GK102628024SQ20121009346
公開日2012年8月8日 申請日期2012年3月31日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月31日
發(fā)明者孫建新, 張金燕, 徐中文 申請人:廣東綠百多生物科技有限公司