專利名稱：功能性雙歧桿菌高密度培養(yǎng)及其凍干產(chǎn)品的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及雙歧桿菌培養(yǎng)及其凍干產(chǎn)品的制備方法。
背景技術(shù)：
雙歧桿菌是腸內(nèi)最有益的菌群，在人體腸內(nèi)發(fā)酵后可產(chǎn)生乳酸和醋酸，能提高鈣、 磷、鐵的利用率，促進(jìn)鐵和維生素D的吸收；雙歧桿菌發(fā)酵乳糖產(chǎn)生半乳糖，是構(gòu)成腦神經(jīng) 系統(tǒng)中腦苷脂的成分，與嬰兒出生后腦的迅速生長有密切關(guān)系；雙歧桿菌可以產(chǎn)生維生素 B1、B2、B6、B12及丙氨酸、纈氨酸、天冬氨酸和蘇氨酸等人體必需的營養(yǎng)物質(zhì)，對于人體具有 不容忽視的重要營養(yǎng)作用；并且還具有抗衰老、抗過敏、抗腫瘤、調(diào)整腸道功能及改善營養(yǎng) 的作用等。目前，雙歧桿菌生產(chǎn)，多是采用離心濃縮的方式，存在處理量較小、離心機(jī)取料程 序繁雜、菌體死亡率較高及收獲率較低的缺點(diǎn)，致使產(chǎn)品中活菌含量小、用量大、發(fā)酵效果 差；且其產(chǎn)品主要為凍干制劑，制造和使用成本均較高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有雙歧桿菌生產(chǎn)存在產(chǎn)品中活菌含量小、用量大、發(fā) 酵效果差，而且其凍干制劑的制造和使用成本均較高的問題，而提供功能性雙歧桿菌高密 度培養(yǎng)及其凍干產(chǎn)品的制備方法。功能性雙歧桿菌高密度培養(yǎng)按以下步驟進(jìn)行一、將經(jīng)過耐氧馴化的功能性雙歧 桿菌接種到發(fā)酵罐的增菌培養(yǎng)基中，在溫度為35 37°C、pH值為6. 5 6. 8的條件下培養(yǎng) 15 17h，得發(fā)酵液；二、發(fā)酵液在0 20°C時，加入與發(fā)酵液等重量的質(zhì)量濃度為10%的 檸檬酸鈉溶液或質(zhì)量濃度為10 %的磷酸鈉溶液對發(fā)酵液進(jìn)行蛋白的洗脫，再加入質(zhì)量濃度 為0. 2 2%的殼聚糖進(jìn)行菌體的絮凝；三、絮凝后的發(fā)酵液使用孔徑為100 200nm、面積 為0. 5m2的陶瓷膜，在跨膜壓力為IlOKPa進(jìn)行膜濃縮處理至絮凝后的發(fā)酵液的濃縮倍數(shù)達(dá) 到6，得到含有功能性雙歧桿菌的膜濃縮產(chǎn)物，即完成功能性雙歧桿菌高密度培養(yǎng)；其中步 驟一中接種量為2%;步驟一中增菌培養(yǎng)基由80 120g的脫脂乳粉，40 60g的胰蛋白酶 水解乳清粉，30 60g的番茄汁、30 60g的麥芽汁、10 30g乳糖、0. 50 0. 70g的酵母 膏或酵母粉、6. 8 7. 2mg的腺嘌呤和50 54mg的L-半胱氨酸鹽酸鹽加入蒸餾水并定容 至IOOOmL組成；步驟三中膜濃縮處理的方式為兩個陶瓷膜管串聯(lián)。功能性雙歧桿菌凍干產(chǎn)品的制備方法按以下步驟進(jìn)行一、按重量比1 1 2將 含有功能性雙歧桿菌的膜濃縮產(chǎn)物與冷凍保護(hù)劑混合，在溫度0 10°C的條件下進(jìn)行10 12h的冷凍前預(yù)冷處理，得混合物；二、將混合物置于_70°C冷凍機(jī)的冷凍盤中進(jìn)行預(yù)凍，直 至混合物的溫度達(dá)到_45°C，保持30min，然后以5°C /30min的速率升溫至_28°C，并維持 此溫度至真空度達(dá)到0. 05MPa完成主干燥階段，再升溫至10°C并維持此溫度至真空度達(dá)到 0. 03MPa完成解析干燥階段，取出后用顆粒機(jī)粉碎，再用無菌鋁箔紙盒包裝并置于-20°C的 環(huán)境中貯藏，即完成功能性雙歧桿菌凍干產(chǎn)品的制備；其中步驟一中冷凍保護(hù)劑10 20g的脫脂乳粉、1 3g的甘油、1 2g的維生素C、0. 5 Ig的谷氨酸或甘氨酸、5g的蔗糖和 3 15g的海藻糖加入蒸餾水并定容至IOOOmL組成；步驟二中混合物置于_70°C冷凍機(jī)的 冷凍盤中的大小為長40cmX寬50cmX高20mm。本發(fā)明中功能性雙歧桿菌高密度培養(yǎng)，所得含有功能性雙歧桿菌的膜濃縮產(chǎn)物中 雙歧桿菌的活菌數(shù)為5. 4X1010CFU/g,比現(xiàn)有的活菌數(shù)提高10倍以上，乳桿菌用量減少，僅 取0. 005% 0. 010%與酸奶發(fā)酵劑配合使用即可滿足益生菌發(fā)酵乳生產(chǎn)的要求，可以作 為優(yōu)質(zhì)的益生菌直投式發(fā)酵劑，且發(fā)酵效果好，同時增菌培養(yǎng)基中所用的腺嘌呤，為后續(xù)凍 干產(chǎn)品的制備過程中增加了功能性雙歧桿菌的存活率。本發(fā)明中功能性雙歧桿菌凍干產(chǎn)品的制備方法，將功能性雙歧桿菌高密度培養(yǎng)所 得的膜濃縮產(chǎn)物進(jìn)行加工，這樣減小冷凍處理的負(fù)荷，同時，優(yōu)化后的冷凍保護(hù)劑，也可以 提高功能性雙歧桿菌的存活率，與凍干制品相比具有生產(chǎn)成本低而活性高的優(yōu)點(diǎn)，達(dá)到直 接使用目的，而且工藝簡單；此外，本發(fā)明中功能性益生性乳桿凍干產(chǎn)品還可以作為輔料添 加到奶粉中，在12個月的保質(zhì)期內(nèi)益生菌奶粉的雙歧桿菌的活菌數(shù)均大于1. OX 106CFU/g。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明技術(shù)方案不局限于以下所列舉具體實(shí)施方式
，還包括各具體實(shí)施方式
間的 任意組合。
具體實(shí)施方式
一本實(shí)施方式功能性雙歧桿菌高密度培養(yǎng)按以下步驟進(jìn)行一、 將經(jīng)過耐氧馴化的功能性雙歧桿菌接種到發(fā)酵罐的增菌培養(yǎng)基中，在溫度為35 37°C、pH 值為6. 5 6. 8的條件下培養(yǎng)15 17h，得發(fā)酵液；二、發(fā)酵液在0 20°C時，加入與發(fā)酵 液等重量的質(zhì)量濃度為10%的檸檬酸鈉溶液或質(zhì)量濃度為10%的磷酸鈉溶液對發(fā)酵液進(jìn) 行蛋白的洗脫，再加入質(zhì)量濃度為0. 2 2%的殼聚糖進(jìn)行菌體的絮凝；三、絮凝后的發(fā)酵 液使用孔徑為100 200nm、面積為0. 5m2的陶瓷膜，在跨膜壓力為IlOKPa進(jìn)行膜濃縮處理 至絮凝后的發(fā)酵液的濃縮倍數(shù)達(dá)到6，得到含有功能性雙歧桿菌的膜濃縮產(chǎn)物，即完成功能 性雙歧桿菌高密度培養(yǎng)；其中步驟一中接種量為2%;步驟一中增菌培養(yǎng)基由80 120g的 脫脂乳粉，40 60g的胰蛋白酶水解乳清粉，30 60g的番茄汁、30 60g的麥芽汁、10 30g乳糖、0. 50 0. 70g的酵母膏或酵母粉、6. 8 7. 2mg的腺嘌呤和50 54mg的L-半胱 氨酸鹽酸鹽加入蒸餾水并定容至IOOOmL組成；步驟三中膜濃縮處理的方式為兩個陶瓷膜 管串聯(lián)。本實(shí)施方式步驟一中耐氧馴化的功能性雙歧桿菌，是從自然發(fā)酵食品或人類腸道 中分離出功能性雙歧桿菌，然后對其進(jìn)行紫外線誘變，誘變條件為15_25W紫外線燈，菌株 懸浮液距紫外光源30cm，照射2mic。本實(shí)施方式步驟三中所用陶瓷膜可以再生，再生工藝為50°C的熱水清洗5min， 質(zhì)量濃度為0. 5%的氫氧化鈉溶液清洗10min，50°C的熱水清洗5min，質(zhì)量濃度為0. 5%的 硝酸清洗10min，5(TC的熱水清洗5min，即完成陶瓷膜再生。本實(shí)施方式采用流加法補(bǔ)充增菌培養(yǎng)基。
具體實(shí)施方式
二 本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一不同的是步驟一中采用中和劑調(diào) 節(jié)增菌培養(yǎng)基的PH值，中和劑為質(zhì)量濃度為10 15%的氫氧化鈉、質(zhì)量濃度為10 15% 的氨水或質(zhì)量濃度為20%的Na2CO3 ；步驟一中培養(yǎng)15 17h的過程中需補(bǔ)加乳糖，乳糖補(bǔ)加量為所消耗的中和劑中堿性物質(zhì)摩爾量的3 5倍，同時采用D301型樹脂吸附培養(yǎng)過程 中產(chǎn)生的鈉鹽。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一相同。
具體實(shí)施方式
三本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一或二不同的是步驟一中在溫度為 35°C、pH值為6. 5的條件下培養(yǎng)17h，得發(fā)酵液。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一或二相 同。
具體實(shí)施方式
四本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一或二不同的是步驟一中在溫度為 37°C、pH值為6. 8的條件下培養(yǎng)15h，得發(fā)酵液。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一或二相 同。
具體實(shí)施方式
五本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一或二不同的是步驟一中在溫度為 36°C、pH值為6. 6的條件下培養(yǎng)16h，得發(fā)酵液。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一或二相 同。
具體實(shí)施方式
六本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至五之一不同的是步驟一中增菌 培養(yǎng)基由80g的脫脂乳粉，40g的胰蛋白酶水解乳清粉，30g的番茄汁、30g的麥芽汁、IOg乳 糖、0. 50g的酵母膏或酵母粉、6. Smg的腺嘌呤和50mg的L-半胱氨酸鹽酸鹽加入蒸餾水并 定容至IOOOmL組成。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一至五之一相同。
具體實(shí)施方式
七本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至五之一不同的是步驟一中增菌 培養(yǎng)基由120g的脫脂乳粉，60g的胰蛋白酶水解乳清粉，60g的番茄汁、60g的麥芽汁、30g 乳糖、0. 70g的酵母膏或酵母粉、7. 2mg的腺嘌呤和54mg的L-半胱氨酸鹽酸鹽加入蒸餾水 并定容至IOOOmL組成。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一至五之一相同。
具體實(shí)施方式
八本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至五之一不同的是步驟一中增菌 培養(yǎng)基由90 IlOg的脫脂乳粉，45 55g的胰蛋白酶水解乳清粉，40 50g的番茄汁、 40 50g的麥芽汁、15 25g乳糖、0. 55 0. 65g的酵母膏或酵母粉、6. 9 7. Img的腺嘌 呤和51 53mg的L-半胱氨酸鹽酸鹽加入蒸餾水并定容至IOOOmL組成。其它步驟及參數(shù) 與具體實(shí)施方式
一至五之一相同。
具體實(shí)施方式
九本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至五之一不同的是步驟一中增菌 培養(yǎng)基由IOOg的脫脂乳粉，50g的胰蛋白酶水解乳清粉，45g的番茄汁、45g的麥芽汁、20g 乳糖、0. 60g的酵母膏或酵母粉、7mg的腺嘌呤和52mg的L-半胱氨酸鹽酸鹽加入蒸餾水并 定容至IOOOmL組成。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一至五之一相同。
具體實(shí)施方式
十本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至九之一不同的是步驟二中加入 質(zhì)量濃度為0. 2%的殼聚糖進(jìn)行菌體的絮凝。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一至九之一 相同。
具體實(shí)施方式
十一本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至九之一不同的是步驟二中加 入質(zhì)量濃度為的殼聚糖進(jìn)行菌體的絮凝。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一至九之一 相同。
具體實(shí)施方式
十二 本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至九之一不同的是步驟二中加 入質(zhì)量濃度為0. 5 1. 5%的殼聚糖進(jìn)行菌體的絮凝。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一 至九之一相同。
具體實(shí)施方式
十三本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至九之一不同的是步驟二中加 入質(zhì)量濃度為2%的殼聚糖進(jìn)行菌體的絮凝。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一至九之一
6相同。
具體實(shí)施方式
十四本實(shí)施方式功能性雙歧桿菌凍干產(chǎn)品的制備方法按以下步驟 進(jìn)行一、按重量比1 1 2將含有功能性雙歧桿菌的膜濃縮產(chǎn)物與冷凍保護(hù)劑混合， 在溫度0 10°C的條件下進(jìn)行10 12h的冷凍前預(yù)冷處理，得混合物；二、將混合物置 于-70°C冷凍機(jī)的冷凍盤中進(jìn)行預(yù)凍，直至混合物的溫度達(dá)到_45°C，保持30min，然后以 5°C /30min的速率升溫至-28°C，并維持此溫度至真空度達(dá)到0. 05MPa完成主干燥階段，再 升溫至10°C并維持此溫度至真空度達(dá)到0. 03MPa完成解析干燥階段，取出后用顆粒機(jī)粉 碎，再用無菌鋁箔紙盒包裝并置于-20°C的環(huán)境中貯藏，即完成功能性雙歧桿菌凍干產(chǎn)品的 制備；其中步驟一中冷凍保護(hù)劑10 20g的脫脂乳粉、1 3g的甘油、1 2g的維生素C、 0. 5 Ig的谷氨酸或甘氨酸、5g的蔗糖和3 15g的海藻糖加入蒸餾水并定容至IOOOmL 組成；步驟二中混合物置于_70°C冷凍機(jī)的冷凍盤中的大小為長40cmX寬50cmX高20mm。
具體實(shí)施方式
十五本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
十四不同的是步驟一中按重量比 1 1將含有功能性雙歧桿菌的膜濃縮產(chǎn)物與冷凍保護(hù)劑混合，在溫度0°c的條件下進(jìn)行 12h的冷凍前預(yù)冷處理，得混合物。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
十四相同。
具體實(shí)施方式
十六本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
十四不同的是步驟一中按重量比 1 2將含有功能性雙歧桿菌的膜濃縮產(chǎn)物與冷凍保護(hù)劑混合，在溫度10°C的條件下進(jìn)行 IOh的冷凍前預(yù)冷處理，得混合物。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
十四相同。
具體實(shí)施方式
十七本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
十四不同的是步驟一中按重量比 1 1.5將含有功能性雙歧桿菌的膜濃縮產(chǎn)物與冷凍保護(hù)劑混合，在溫度5°C的條件下進(jìn)行 Ilh的冷凍前預(yù)冷處理，得混合物。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
十四相同。
具體實(shí)施方式
十八本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
十四至十七之一不同的是步驟一 中冷凍保護(hù)劑IOg的脫脂乳粉、Ig的甘油、Ig的維生素C、0. 5g的谷氨酸或甘氨酸、5g的蔗 糖和3g的海藻糖加入蒸餾水并定容至IOOOmL組成。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
十四 至十七之一相同。
具體實(shí)施方式
十九本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
十四至十七之一不同的是步驟一 中冷凍保護(hù)劑20g的脫脂乳粉、3g的甘油、2g的維生素C、lg的谷氨酸或甘氨酸、5g的蔗糖 和15g的海藻糖加入蒸餾水并定容至IOOOmL組成。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
十四 至十七之一相同。
具體實(shí)施方式
二十本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
十四至十七之一不同的是步驟一 中冷凍保護(hù)劑12 18g的脫脂乳粉、1. 5 2. 5g的甘油、1. 2 1. 8g的維生素C、0. 6 0. 9g的谷氨酸或甘氨酸、5g的蔗糖和5 IOg的海藻糖加入蒸餾水并定容至IOOOmL組成。 其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
十四至十七之一相同。
具體實(shí)施方式
二十一本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
十四至十七之一不同的是步驟 一中冷凍保護(hù)劑15g的脫脂乳粉、2g的甘油、1. 5g的維生素C、0. 8g的谷氨酸或甘氨酸、5g 的蔗糖和8g的海藻糖加入蒸餾水并定容至IOOOmL組成。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
十四至十七之一相同。
具體實(shí)施方式
二十二 本實(shí)施方式功能性雙歧桿菌高密度培養(yǎng)按以下步驟進(jìn)行 一、將經(jīng)過耐氧馴化的功能性雙歧桿菌接種到發(fā)酵罐的增菌培養(yǎng)基中，在溫度為36°C、pH 值為6. 6的條件下培養(yǎng)16h，得發(fā)酵液；二、發(fā)酵液在10°C時，加入與發(fā)酵液等重量的質(zhì)量濃度為10%的檸檬酸鈉溶液或質(zhì)量濃度為10%的磷酸鈉溶液對發(fā)酵液進(jìn)行蛋白的洗脫， 再加入質(zhì)量濃度為的殼聚糖進(jìn)行菌體的絮凝；三、絮凝后的發(fā)酵液使用孔徑為150nm、 面積為0. 5m2的陶瓷膜，在跨膜壓力為IlOKPa進(jìn)行膜濃縮處理至絮凝后的發(fā)酵液濃縮倍數(shù) 達(dá)到6，得到含有功能性雙歧桿菌的膜濃縮產(chǎn)物，即完成功能性雙歧桿菌高密度培養(yǎng)；其中 步驟一中接種量為2% ；步驟一中增菌培養(yǎng)基由IOOg的脫脂乳粉，50g的胰蛋白酶水解乳 清粉，45g的番茄汁、45g的麥芽汁、20g乳糖、0. 60g的酵母膏或酵母粉、6. Smg的腺嘌呤和 52mg的L-半胱氨酸鹽酸鹽加入蒸餾水并定容至IOOOmL組成；步驟三中膜濃縮處理的方式 為兩個陶瓷膜管串聯(lián)。功能性雙歧桿菌凍干產(chǎn)品的制備方法按以下步驟進(jìn)行一、按重量比1 1. 5將含 有功能性雙歧桿菌的膜濃縮產(chǎn)物與冷凍保護(hù)劑混合，在溫度6°C的條件下進(jìn)行12h的冷凍 前預(yù)冷處理，得混合物；二、將混合物置于-70°C冷凍機(jī)的冷凍盤中進(jìn)行預(yù)凍，直至混合物 的溫度達(dá)到_45°C，保持30min，然后以5°C /30mi η的速率升溫至_28°C，并維持此溫度至 真空度達(dá)到0. 05MPa完成主干燥階段，再升溫至10°C并維持此溫度至真空度達(dá)到0. 03MPa 完成解析干燥階段，取出后用顆粒機(jī)粉碎，再用無菌鋁箔紙盒包裝并置于-20°C的環(huán)境中貯 藏，即完成功能性雙歧桿菌凍干產(chǎn)品的制備；其中步驟一中冷凍保護(hù)劑15g的脫脂乳粉、2g 的甘油、1. 5g的維生素C、0. 8g的谷氨酸或甘氨酸、5g的蔗糖和IOg的海藻糖加入蒸餾水并 定容至IOOOmL組成；步驟二中混合物置于_70°C冷凍機(jī)的冷凍盤中的大小為長40cmX寬 50cmX 高 20mm。本實(shí)施方式中所得凍干產(chǎn)品，經(jīng)測試其中活菌數(shù)為5. 4X1010CFU/g,與酸奶發(fā)酵劑 配合使用以0. 005% -0. 010%的量接種到滅菌脫脂乳和鮮牛奶中，在41 43°C的條件下發(fā) 酵3. 5h，乳凝固并產(chǎn)酸70° T，組織狀態(tài)、風(fēng)味良好，在21天酸奶的保質(zhì)期內(nèi)益生菌的活菌 數(shù)均大于1.0X106CFU/g，可以作為優(yōu)質(zhì)的益生菌直投式發(fā)酵劑；此外，還可以作為輔料添 加到奶粉中，在12個月的保質(zhì)期內(nèi)益生菌奶粉的雙歧桿菌的活菌數(shù)均大于1. OX 106CFU/g。
權(quán)利要求
功能性雙歧桿菌高密度培養(yǎng)，其特征在于功能性雙歧桿菌高密度培養(yǎng)按以下步驟進(jìn)行一、將經(jīng)過耐氧馴化的功能性雙歧桿菌接種到發(fā)酵罐的增菌培養(yǎng)基中，在溫度為35～37℃、pH值為6.5～6.8的條件下培養(yǎng)15～17h，得發(fā)酵液；二、發(fā)酵液在0～20℃時，加入與發(fā)酵液等重量的質(zhì)量濃度為10％的檸檬酸鈉溶液或質(zhì)量濃度為10％的磷酸鈉溶液對發(fā)酵液進(jìn)行蛋白的洗脫，再加入質(zhì)量濃度為0.2～2％的殼聚糖進(jìn)行菌體的絮凝；三、絮凝后的發(fā)酵液使用孔徑為100～200nm、面積為0.5m2的陶瓷膜，在跨膜壓力為110KPa進(jìn)行膜濃縮處理至絮凝后的發(fā)酵液的濃縮倍數(shù)達(dá)到6，得到含有功能性雙歧桿菌的膜濃縮產(chǎn)物，即完成功能性雙歧桿菌高密度培養(yǎng)；其中步驟一中接種量為2％；步驟一中增菌培養(yǎng)基由80～120g的脫脂乳粉，40～60g的胰蛋白酶水解乳清粉，30～60g的番茄汁、30～60g的麥芽汁、10～30g乳糖、0.50～0.70g的酵母膏或酵母粉、6.8～7.2mg的腺嘌呤和50～54mg的L 半胱氨酸鹽酸鹽加入蒸餾水并定容至1000mL組成；步驟三中膜濃縮處理的方式為兩個陶瓷膜管串聯(lián)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的功能性雙歧桿菌高密度培養(yǎng)，其特征在于步驟一中采用中和 劑調(diào)節(jié)增菌培養(yǎng)基的pH值，中和劑為質(zhì)量濃度為10 15%的氫氧化鈉、質(zhì)量濃度為10 15%的氨水或質(zhì)量濃度為20%的Na2CO3 ；步驟一中培養(yǎng)15 17h的過程中需補(bǔ)加乳糖，乳 糖補(bǔ)加量為所消耗的中和劑中堿性物質(zhì)摩爾量的3 5倍，同時采用D301型樹脂吸附培養(yǎng) 過程中產(chǎn)生的鈉鹽。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的功能性雙歧桿菌高密度培養(yǎng)，其特征在于步驟一中在溫 度為36°C、pH值為6. 6的條件下培養(yǎng)16h，得發(fā)酵液。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的功能性雙歧桿菌高密度培養(yǎng)，其特征在于步驟一中增菌培養(yǎng) 基由90 IlOg的脫脂乳粉，45 55g的胰蛋白酶水解乳清粉，40 50g的番茄汁、40 50g的麥芽汁、15 25g乳糖、0. 55 0. 65g的酵母膏或酵母粉、6. 9 7. Img的腺嘌呤和 51 53mg的L-半胱氨酸鹽酸鹽加入蒸餾水并定容至IOOOmL組成。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的功能性雙歧桿菌高密度培養(yǎng)，其特征在于步驟一中增菌培養(yǎng) 基由IOOg的脫脂乳粉，50g的胰蛋白酶水解乳清粉，45g的番茄汁、45g的麥芽汁、20g乳糖、 0. 60g的酵母膏或酵母粉、7mg的腺嘌呤和52mg的L-半胱氨酸鹽酸鹽加入蒸餾水并定容至 IOOOmL 組成。
6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的功能性雙歧桿菌高密度培養(yǎng)，其特征在于步驟二中加入 質(zhì)量濃度為0. 5 1. 5%的殼聚糖進(jìn)行菌體的絮凝。
7.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的功能性雙歧桿菌高密度培養(yǎng)，其特征在于步驟二中加入 質(zhì)量濃度為2%的殼聚糖進(jìn)行菌體的絮凝。
8.制備如權(quán)利要求1所述的功能性雙歧桿菌高密度培養(yǎng)的所得功能性雙歧桿菌凍干 產(chǎn)品的方法，其特征在于功能性雙歧桿菌凍干產(chǎn)品的制備方法按以下步驟進(jìn)行一、按重量 比1 1 2將含有功能性雙歧桿菌的膜濃縮產(chǎn)物與冷凍保護(hù)劑混合，在溫度0 10°C的 條件下進(jìn)行10 12h的冷凍前預(yù)冷處理，得混合物；二、將混合物置于_70°C冷凍機(jī)的冷凍 盤中進(jìn)行預(yù)凍，直至混合物的溫度達(dá)到_45°C，保持30min，然后以5°C /30min的速率升溫 至-28°C，并維持此溫度至真空度達(dá)到0. 05MPa完成主干燥階段，再升溫至10°C并維持此溫 度至真空度達(dá)到0. 03MPa完成解析干燥階段，取出后用顆粒機(jī)粉碎，再用無菌鋁箔紙盒包 裝并置于_20°C的環(huán)境中貯藏，即完成功能性雙歧桿菌凍干產(chǎn)品的制備；其中步驟一中冷凍保護(hù)劑10 20g的脫脂乳粉、1 3g的甘油、1 2g的維生素C、0. 5 Ig的谷氨酸或 甘氨酸、5g的蔗糖和3 15g的海藻糖加入蒸餾水并定容至IOOOmL組成；步驟二中混合物 置于_70°C冷凍機(jī)的冷凍盤中的大小為長40cmX寬50cmX高20mm。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的功能性雙歧桿菌凍干產(chǎn)品的制備方法，其特征在于步驟一中 按重量比1 1.5將含有功能性雙歧桿菌的膜濃縮產(chǎn)物與冷凍保護(hù)劑混合，在溫度5°C的條 件下進(jìn)行Ilh的冷凍前預(yù)冷處理，得混合物。
10.根據(jù)權(quán)利要求8或9所述的功能性雙歧桿菌凍干產(chǎn)品的制備方法，其特征在于步驟 一中冷凍保護(hù)劑15g的脫脂乳粉、2g的甘油、1. 5g的維生素C、0. 8g的谷氨酸或甘氨酸、5g 的蔗糖和8g的海藻糖加入蒸餾水并定容至IOOOmL組成。
全文摘要
功能性雙歧桿菌高密度培養(yǎng)及其凍干產(chǎn)品的制備方法，它涉及雙歧桿菌培養(yǎng)及其凍干產(chǎn)品的制備方法。它解決了現(xiàn)有雙歧桿菌生產(chǎn)存在產(chǎn)品中活菌含量小、用量大、發(fā)酵效果差，而且其凍干制劑的制造和使用成本均較高的問題。培養(yǎng)一、耐氧馴化的功能性雙歧桿菌接種到增菌培養(yǎng)基中，得發(fā)酵液；二、洗脫和絮凝；三、膜濃縮處理后即完成。制備一、膜濃縮產(chǎn)物與冷凍保護(hù)劑混合預(yù)冷，得混合物；二、將混合物預(yù)凍后，經(jīng)主干燥和解析干燥，再進(jìn)行粉碎、包裝并貯藏即完成。本發(fā)明中雙歧桿菌的活菌數(shù)為5.4×1010CFU/g，用量減少，且發(fā)酵效果好，凍干產(chǎn)品的生產(chǎn)成本低、工藝簡單且活性高，可達(dá)到直接使用目的。
文檔編號C12R1/01GK101948775SQ20101026635
公開日2011年1月19日 申請日期2010年8月30日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月30日
發(fā)明者馮鎮(zhèn), 吳海波, 張?zhí)m威, 易華西, 李婧妍, 杜明, 韓雪, 馬春麗 申請人:哈爾濱工業(yè)大學(xué);張?zhí)m威