專(zhuān)利名稱：：雞多重病毒核酸探針斑點(diǎn)雜交檢測(cè)試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種雞多重病毒核酸探針斑點(diǎn)雜交檢測(cè)試劑盒，屬于獸用生物制品領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：在雞群中，不同病毒特點(diǎn)是免疫抑制性病毒感染已非常普遍。如I型雞馬立克氏病毒(Marek’sdisenseVirus,Serotyres,MDV)、禽網(wǎng)狀內(nèi)皮增生病病毒(ReticuloendotheliosisVirus,REV)>Xl#^^ifil#(ChickinfectiousanemiaVirus,CAV)、禽呼腸孤病毒(AvianReovirus,ARV)、雞傳染性支氣管炎病毒(chickeninfectiousbronchitisvirus，IBV)N蛋白基因(IBV-N)。這些病單獨(dú)感染雛雞后，除在少數(shù)雞引起特定病理變化和癥狀甚至死亡外，對(duì)多數(shù)雞往往只顯示輕微的致病作用，只呈現(xiàn)亞臨床感染。但是，如果有二種或二種以上病毒同時(shí)感染一只雞時(shí)，它們?cè)谥虏⌒陨系膮f(xié)同作用可能使病程更為嚴(yán)重。在雞場(chǎng)遇到的一些發(fā)病死亡，往往是不同病毒和細(xì)菌共同感染的結(jié)果。因此，如果能對(duì)一只雞同一份樣品對(duì)不同病毒感染作病原學(xué)檢測(cè)，將有助于闡明一個(gè)雞群發(fā)病的真正原因。本
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種能對(duì)一只雞同一份樣品對(duì)不同病毒感染(I型雞馬立克氏病毒(MDV1)、禽網(wǎng)狀內(nèi)皮增生病病毒(REV)、雞傳染性貧血病毒(CAV)、禽呼腸孤病毒(ARV)、雞傳染性支氣管炎病毒(IBV)作病原學(xué)檢測(cè)，將有助于闡明一個(gè)雞群發(fā)病的真正原因的檢測(cè)試劑盒。本發(fā)明所涉及的試劑盒是分別利用MDV1特異性的pp38基因、CAV的Vp1基因、REV的pol基因和ARV的sigmac基因、IBV-N蛋白基因?yàn)槟０澹锰囟ㄒ锿ㄟ^(guò)PCR合成了經(jīng)狄高辛(Digoxiaenin，DIG)標(biāo)記的特異性核酸探針。通過(guò)斑點(diǎn)分子雜交，這些探針將可用于檢測(cè)病料樣品中某種病毒特異性核酸的存在，用于判定有無(wú)某種病毒感染。利用這一方法，在1張8X8cm大小的硝酸纖維膜或尼龍膜上可同時(shí)檢測(cè)約100份病料的核酸樣品。病料在組織樣品核酸提取后，斑點(diǎn)分子雜交可在2436小時(shí)內(nèi)完成檢測(cè)并報(bào)告結(jié)果。如將同一樣品的核酸提取物分點(diǎn)在五張膜上，即可同時(shí)檢測(cè)四種不同的病毒。發(fā)明的詳細(xì)描述一、核酸探針及基因DNA對(duì)照品的制備1.MDV(l)MDV-pp38核酸探針標(biāo)記1)以本發(fā)明人保存的MDV-pp38基因(姜世金，丁家波，孟珊珊等.型馬立克氏病病毒pp38和pp24基的真核表達(dá).中國(guó)病毒學(xué)，2005年20卷4期)，基因大小為981bp作為模版用所設(shè)計(jì)并合成的一對(duì)引物(序列1、2)擴(kuò)增出片段大小為641BP產(chǎn)物(序列3)，此段序列為I型MDV特異性的。所用引物(序列1、2)pp38-F:AGGCAGGGCATGGGAAAACAGAAGpp38-R:ACCGACTAACATACCAGCGAAAAA2)探針標(biāo)記反應(yīng)程序(標(biāo)記效果較好的程序)<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>*PCRDIG探針合成混合物為含有DIG-11-dUTP的dNTP的混和物，購(gòu)自Roche公司PCR反應(yīng)條件為95°C預(yù)變性3min，95°C變性40sec，55°C退火40sec，72°C延伸50sec，共32個(gè)循環(huán)，最后72°C延伸7min。PCR產(chǎn)物通過(guò)1%瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行分析。由此合成的為有DIG標(biāo)記的641pb的探針DNA.。(2)MDV-PP38基因DNA(未標(biāo)記對(duì)照)的PCR擴(kuò)增<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>PCR反應(yīng)條件為95°C預(yù)變性3min，95°C變性40sec，55°C退火40sec，72°C延伸50sec，共32個(gè)循環(huán)，最后72°C延伸7min。PCR產(chǎn)物通過(guò)1%瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行分析。由此合成如序列3所述核酸序列的為未標(biāo)記的641pbDNA作為陽(yáng)性對(duì)照或其他基因探針的陰性對(duì)照。(3)電泳結(jié)果見(jiàn)圖1，同樣是641bp，有DIG標(biāo)記的探針DNA分子量大，電泳中變慢。(樣品各取2μ1，maker2000各5μ1和10μ1電泳)(4)定量結(jié)果探針標(biāo)記量為50ng/μ1；共10管(1100μ1)，110μ1/管(5.5μg/管)；總量為55μg。2.REV(l)REV-pol核酸探針標(biāo)記1)本發(fā)明人以本實(shí)驗(yàn)室保存的REV-pol基因(王玉，崔治中，姜世金.網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒中國(guó)分離株HA9901全基因組核苷酸序列的測(cè)定與分析，中國(guó)科學(xué)，C輯，2005,35:1_9.)，基因大小為3500bp作為模版用所設(shè)計(jì)并合成的一對(duì)引物(序列4、5)擴(kuò)增出片段大小為775BP產(chǎn)物(序列6)，此段序列為REV特異性的。所用引物(序列4、5)REV-P0L-F4GGACTCAATTCCCGTATCAGAREV-P0L-R4:TCTTCCCAGCGACCTTTAC2)標(biāo)記反應(yīng)程序(標(biāo)記效果較好)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>PCR反應(yīng)條件為95°C預(yù)變性3min，95°C變性40sec，54°C退火40sec，72°C延伸lmin，共32個(gè)循環(huán)，最后72°C延伸7min。PCR產(chǎn)物通過(guò)1%瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行分析。(2)REV-po1基因DNA(未標(biāo)記對(duì)照)的PCR擴(kuò)增<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>PCR反應(yīng)條件為95°C預(yù)變性3min，95°C變性40sec，55°C退火40sec，72°C延伸50sec，共32個(gè)循環(huán)，最后72°C延伸7min。PCR產(chǎn)物通過(guò)1%瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行分析。由此合成的為有未標(biāo)記的641pbDNA作為陽(yáng)性對(duì)照或其他基因探針的陰性對(duì)照。(3)電泳結(jié)果見(jiàn)圖2(樣品各取2μ1，maker2000各5μ1禾Π10μ1電泳)(4)定量結(jié)果探針標(biāo)記量為50ng/yl；共9管(990μ1)，110μ1/管(5.5μg/管)；總量為49.5μg。3.CAV(I)CAV核酸探針標(biāo)記1)本發(fā)明人以本實(shí)驗(yàn)室保存的CAV-Vp1基因作為模版用(李延鵬，崔治中.一株雞傳染性貧血病毒野毒株致病性及全基因組序列比較.微生物學(xué)報(bào)，2007年47卷5期)，所設(shè)計(jì)并合成的一對(duì)引物(序列7、8)擴(kuò)增出片段大小為842BP產(chǎn)物(序列9)，此段序列為CAV特異性的。所用引物(序列7、8)CAV-FlGCATTCCGAGTGGTTACTATTCCCAV-RlCGTCTTGCCATCTTACAGTCTTAT2)標(biāo)記反應(yīng)程序(標(biāo)記效果較好)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>PCR反應(yīng)條件為95°C預(yù)變性3min，95°C變性40sec，55°C退火40sec，72°C延伸lmin，共32個(gè)循環(huán)，最后72°C延伸7min。PCR產(chǎn)物通過(guò)1%瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行分析。(2)CAV-Vp1基因DNA(未標(biāo)記對(duì)照)的PCR擴(kuò)增<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>PCR反應(yīng)條件為95"C預(yù)變性3min，95°C變性40sec，55°C退火40sec，72"C延伸50sec，共32個(gè)循環(huán)，最后72°C延伸7min。PCR產(chǎn)物通過(guò)1%瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行分析。由此合成的為有未標(biāo)記的641pbDNA作為陽(yáng)性對(duì)照或其他基因探針的陰性對(duì)照。(3)電泳結(jié)果見(jiàn)圖3(樣品各取1μl，maker2000各5μ1和10μ1電泳)(4)定量結(jié)果探針標(biāo)記量為50ng/yl；共9管(990μ1)，110μ1/管(5.5μg/管)；總量為55μg。4.ARV(I)ARV核酸探針標(biāo)記1)本發(fā)明人以本實(shí)驗(yàn)室保存的ARV-sigmaC基因(孫愛(ài)軍，莊國(guó)慶，崔治中.禽呼腸孤病毒分離株ΡΙΟ、P17、δ3蛋白基因表達(dá)及抗血清的制備；病毒學(xué)報(bào)；2006年22卷6期)，基因大小為993bp作為模版用所設(shè)計(jì)并合成的一對(duì)引物擴(kuò)增出片段大小為528bp產(chǎn)物(序列12)，此段序列為ARV特異性的。2)所用引物(序列10,11)ARV-sigmaC-F:ATCTATGAACGGCTGACCAATCTARV-sigmaC-RGTTAGTACCCCGTGCCATCCA3)標(biāo)記反應(yīng)程序(標(biāo)記效果較好)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>PCR反應(yīng)條件為95°C預(yù)變性3min，95°C變性40sec，55°C退火40sec，72°C延伸40s，共30個(gè)循環(huán)，最后72°C延伸7min。PCR產(chǎn)物通過(guò)0.8%瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行分析。(2)ARV-sigma基因DNA(未標(biāo)記對(duì)照)的PCR擴(kuò)增<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>PCR反應(yīng)條件為95"C預(yù)變性3min，95°C變性40sec，55°C退火40sec，72"C延伸50sec，共32個(gè)循環(huán)，最后72°C延伸7min。PCR產(chǎn)物通過(guò)1%瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行分析。由此合成的為有未標(biāo)記的641pbDNA作為陽(yáng)性對(duì)照或其他基因探針的陰性對(duì)照。(3)電泳結(jié)果見(jiàn)圖4(樣品各取2μ1，maker2000取5μ1電泳)。(4)定量結(jié)果探針標(biāo)記量為40ng/l·!1；共10管(1100μ1)，110μ1/管(4.4μg/管)；總量為<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>(1)IBV-N核酸探針標(biāo)記1)本發(fā)明人以本發(fā)明人保存的從IBV-H52株N蛋白基因(B.W.Calnek.DiseasesofPoutryTenthedition.IowaStateUniversityPressAmes,Iowa,USA,511-526),大小為1247bp作為模版用所設(shè)計(jì)并合成的一對(duì)引物擴(kuò)增出片段大小為1229BP產(chǎn)物(序列15)，此段序列為IBV特異性的。所用引物(序列13、14)N-F:ATGGCAAGCGGTAAAGCN-R:ACTCAAAGTTCATTCTC2)標(biāo)記反應(yīng)程序(標(biāo)記效果較好)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>PCR反應(yīng)條件為95°C預(yù)變性3min，95°C變性40sec，55°C退火40sec，72°C延伸40sec，共30個(gè)循環(huán)，最后72°C延伸7min。PCR產(chǎn)物通過(guò)0.8%瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行分析。(2)IBV-N基因DNA(未標(biāo)記對(duì)照)的PCR擴(kuò)增<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>PCR反應(yīng)條件為95°C預(yù)變性3min，95°C變性40sec，55°C退火40sec，72°C延伸50sec，共32個(gè)循環(huán)，最后72°C延伸7min。PCR產(chǎn)物通過(guò)1%瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行分析。由此合成的為有未標(biāo)記的641pbDNA作為陽(yáng)性對(duì)照或其他基因探針的陰性對(duì)照。(3)電泳結(jié)果見(jiàn)圖5(樣品各取2iil，maker2000取5yl電泳)。(4)定量結(jié)果探針標(biāo)記量為40ng/iil；共10管(1100iil)，110ill/管(4.4iig/管)；總量為44ug0二、試劑盒的組成1.特異性核酸探針試劑管#1狄高辛標(biāo)記的MDV-pp38特異性核酸探針，1Ug/1U1，10u1-50u1/瓶；試劑管#2狄高辛標(biāo)記的CAV-vPl核酸探針，lug/lul,10u1-50yl/瓶;試劑管#3狄高辛標(biāo)記REV-pol核酸探針，lug/lul,10u1-50yl/瓶;試劑管#4狄高辛標(biāo)記的ARV-sigmac核酸探針，lug/lul,10u1-50yl/瓶;試劑管#5狄高辛標(biāo)記的IBV-N核酸探針，lug/lul,10u1-50u1/瓶。2.未標(biāo)記的基因DNA的對(duì)照品試劑管#6:PCR擴(kuò)增的MDVrpp38基因DNA，10pg/yl，50yl/瓶；試劑管#7:PCR擴(kuò)增的CAV-VPl基因DNA,10pg/yl，50yl/瓶；試劑管#8，PCR擴(kuò)增的REV-pol基因DNA,10pg/yl，50yl/瓶；試劑管#9，PCR擴(kuò)增的ARV-sigmac基因DNA,10pg/yl，50ill/瓶；試劑管#10,PCR擴(kuò)增的IBV-N基因DNA,10pg/yl，50ill/瓶。3.硝酸纖維膜8X8cm,10片。4.其他試劑試劑管#11:封閉試劑(購(gòu)自購(gòu)自Roche公司，CatlogNo.1096176)lg/瓶，9瓶試劑管#12堿基磷酸酶標(biāo)記的抗Digoxiaenin抗體(購(gòu)自Roche公司，，10yl/瓶；(anti-digoxigenin-APconjugate,Cat.No1093274)。試劑瓶#135-溴-4氯-3吲哚-磷酸溶液(5-bromo-4-chloro-3-inolyl-phosphate,BCPI)5ml,(250mg)試劑瓶#14氮藍(lán)四唑(4-Ntroblueterazoliumchloride,NBT)溶液5ml，(500mg)5.自備試劑和消耗品20XSSC溶液(3MNaCl，0.3M枸櫞酸三鈉，調(diào)整pH至7.0)，可塑封塑料袋，尖頭一次性滴頭。6.需配備設(shè)備水浴鍋，壓膜機(jī)，5iil、100ia移液器。三、試劑盒的操作方法1.待檢測(cè)的樣品即懷疑有病毒感染的動(dòng)物的不同組織或細(xì)胞，按常規(guī)的方法(J.薩姆布魯克、E.F.弗里奇、T.曼尼阿蒂斯著.金冬雁，黎孟楓等譯.分子克隆實(shí)驗(yàn)指南第二版.科學(xué)出版社，1996)提取其基因組DNA或RNA，即作為檢測(cè)的樣品。2.斑點(diǎn)分子雜交檢測(cè)步驟(1)一張適當(dāng)大小的NC膜或尼龍膜，劃好格子，長(zhǎng)和寬各8mm，做好標(biāo)記；(2)吸取l.Oiil核酸樣品(約lyg待檢樣品或?qū)φ贞?yáng)品的DNA)點(diǎn)于膜上各個(gè)格子的中央；(3)將NC膜或尼龍膜(點(diǎn)樣面朝上)放于已用變性液(0.5mol/LNaOH1.5mol/LNaCl)飽和的雙層濾紙上變性lOmin，再放于已用中和液(0.5mol/LTris-Cl；3.Omol/LNaClpH7.4)飽和的雙層濾紙上中和5min；(4)NC膜室溫干燥30min，然后在80°C干烤2h固定DNA。(5)將NC膜放于預(yù)雜交液(5XSSC,0.2%SDS，2%封閉試劑BlockingReagent,0.1%(ff/V)N-lauroylsarcosine)于6568°C反應(yīng)2h，期間經(jīng)常搖動(dòng)NC膜容器；(6)將探針于沸水中變性lOmin，取出立即置于預(yù)先冰凍的無(wú)水乙醇中速凍5min；(防止探針變性后復(fù)性)(7)將變性的探針倒入預(yù)雜交液中，充分混勻即成雜交液，使NC膜在其中65-68°C雜交6h以上，最好過(guò)夜；(雜交后回收雜交液，可用三次)(8)將NC膜放于洗液I(2XSSC，0.1%SDS)中于室溫洗滌15min，2次；(9)將NC膜放于洗液II(0.5XSSC，0.1%SDS)中于68°C(視待檢樣品核酸與探針的同源性程度調(diào)正溫度，如6065°C，這非常重要)洗滌15min，2次；(10)置NC膜于緩沖液1(0.lmol/LTris-Cl,0.15mol/LNaCl,pH7.5)中洗lmin；(11)置NC膜于緩沖液II(緩沖液1+2%封閉試劑BlockingReagent)中反應(yīng)30min，再用緩沖液I洗lmin；(12)在20ml緩沖液II中加入4u1抗狄高辛抗體的堿性磷酸酶標(biāo)記物(用之前離心5min，10000r/min)，置于適當(dāng)大小(略大于NC膜，為了有效利用試劑)的容器中，將膜放于其中于37°C浸泡30min(不要超過(guò)這一時(shí)間，免得影響酶活性)；(13)緩沖液I洗滌；5minX5次；(14)置NC膜于緩沖液111(0.lmol/LTris-Cl,0.lmol/LNaCl，0.05mol/LMgCl2,pH9.5)中反應(yīng)浸泡2min；(15)在適當(dāng)大小(為了有效利用試劑)的容器中加入10ml緩沖液III和100u1(NBT和BCIP混合物)，將NC膜放入其中顯色一定時(shí)間(218小時(shí))；(避光，不要搖動(dòng))(16)加入TE緩沖液(pH8.0)終止顯色反應(yīng)。10圖1:MDV-pp38核酸探針標(biāo)記電泳圖1陰性對(duì)照(去離子水)PCR結(jié)果2以MDV-pp38目的片段為模板的PCR結(jié)果(2ill)；3地高辛標(biāo)記PCR結(jié)果(2yl)；Ml:5ulDNAMarker(DL2000)；M2:10u1DNAMarker(DL2000)。圖2:REV-pol核酸探針標(biāo)記電泳圖1.以REV-pol目的片段為模板的PCR結(jié)果(2u1)；2.地高辛標(biāo)記PCR結(jié)果(2iil)；Ml:5u1DNAMarker(DL2000)；M2:10u1DNAMarker(DL2000)；3陰性對(duì)照(去離子水)PCR結(jié)果。圖3:CAV-vpl核酸探針標(biāo)記電泳圖1地高辛標(biāo)記PCR結(jié)果(1u1)；2以CAV_vpl目的片段為模板的PCR結(jié)果(1ii1)；Ml5u1DNAMarker(DL2000)；M2:10u1DNAMarker(DL2000)；3陰性對(duì)照(去離子水)PCR結(jié)果。圖4:ARV-sigmac核酸探針標(biāo)記電泳圖A:5ii1DNAMarker(DL2000)；B地高辛標(biāo)記PCR結(jié)果(2yl);C:以ARV-sigmac目的片段為模板的PCR結(jié)果(2yl)；圖5IBV-N基因標(biāo)記的探針核酸探針標(biāo)記電泳圖1.5illDNAMarker(DL2000)；2.以IBV-N目的片段為模板的PCR結(jié)果(2y1)；3.地高辛標(biāo)記PCR結(jié)果(2yl)。本發(fā)明的積極意義利用本發(fā)明所涉及的試劑盒，提取病料組織樣品的核酸后，進(jìn)行斑點(diǎn)分子雜交可在2436小時(shí)內(nèi)完成檢測(cè)并報(bào)告結(jié)果。如將同一樣品的核酸提取物分點(diǎn)點(diǎn)在五張膜上，即可同時(shí)檢測(cè)五種不同的病毒。在1張8X8cm大小的硝酸纖維膜或尼龍膜上可同時(shí)檢測(cè)約100份病料的核酸樣品。權(quán)利要求一種雞多重病毒核酸探針斑點(diǎn)雜交檢測(cè)試劑盒，其特征在于該試劑盒含有1)分別經(jīng)狄高辛標(biāo)記的如序列3、序列6、序列9、序列12及序列15所述的核酸序列的MDV-pp-38核酸探針、REV-pol核酸探針、CAV-vp1核酸探針、ARV-Sigmac核酸探針和IBV-N核酸探針；2)未經(jīng)標(biāo)記的作為對(duì)照用如序列3、序列6、序列9、序列12及序列15所述的核酸序列的MDV-pp-38基因DNA、REV-pol基因DNA、CAV-vp1基因DNA、ARV-sigmac基因DNA和IBV-N基因DNA；3)硝酸纖維膜、封閉試劑、堿基磷酸酶標(biāo)記的抗狄高辛抗體、NCPI溶液、NBT溶液和20×SSC溶液。2.一種雞多重病毒核酸探針斑點(diǎn)雜交檢測(cè)試劑盒制備方法，其特征在于分別利用I型雞馬立克氏病毒特異性的PP38基因、禽網(wǎng)狀內(nèi)皮增生病病毒的pol基因、雞傳染性貧血病毒的VP1基因、禽呼腸孤病毒的sigmac基因、雞傳染性支氣管炎病毒N蛋白基因?yàn)槟０?，用各自?duì)應(yīng)的特定引物通過(guò)PCR合成了經(jīng)狄高辛標(biāo)記的特異性核酸探針，通過(guò)斑點(diǎn)分子雜交，這些探針將可用于檢測(cè)病料樣品中某種病毒特異性核酸的存在。3.如權(quán)利要求2所述一種雞多重病毒核酸探針斑點(diǎn)雜交檢測(cè)試劑盒的方法，其特征在于在用PCR合成經(jīng)狄高辛標(biāo)記的MDV-pp-38核酸探針、REV-pol核酸探針、CAV-Vp1核酸探針、ARV-sigmac核酸探針和IBV-N核酸探針?lè)謩e使用了序列1、2，序列4、5，序列7、8，序列10、11和序列3、14所述的核酸序列作為引物。4.如權(quán)利要求2所述一種雞多重病毒核酸探針斑點(diǎn)雜交檢測(cè)試劑盒的方法，其特征在于用PCR合成經(jīng)狄高辛標(biāo)記的MDV-pp-38基因DNA、REV-pol基因DNA、CAV-Vp1基因DNA、ARV-sigmac基因DNA禾ΠIBV-N基因DNA分別使用序列1、2，序列4、5，序列7、8，序列10、11和序列3、14所述的核酸序列作為引物。全文摘要本發(fā)明涉及一種雞多重病毒核酸探針斑點(diǎn)雜交檢測(cè)試劑盒。本發(fā)明所述的試劑盒分別利用I型雞馬立克氏病毒特異性的pp38基因、禽網(wǎng)狀內(nèi)皮增生病病毒的pol基因、雞傳染性貧血病毒的vp1基因、禽呼腸孤病毒的sigmac基因、雞傳染性支氣管炎病毒N蛋白基因?yàn)槟０?，用特定引物通過(guò)PCR合成了經(jīng)狄高辛標(biāo)記的特異性核酸探針，通過(guò)斑點(diǎn)分子雜交，這些探針將可用于檢測(cè)病料樣品中某種病毒特異性核酸的存在。利用本發(fā)明所涉及的試劑盒，提取病料組織樣品的核酸后，進(jìn)行斑點(diǎn)分子雜交可在24～36h內(nèi)完成檢測(cè)并報(bào)告結(jié)果。如將同一樣品的核酸提取物分點(diǎn)點(diǎn)在五張膜上，即可同時(shí)檢測(cè)五種不同的病毒。文檔編號(hào)C12Q1/68GK101824488SQ20101014227公開(kāi)日2010年9月8日申請(qǐng)日期2010年4月9日優(yōu)先權(quán)日2010年4月9日發(fā)明者崔治中申請(qǐng)人:山東農(nóng)業(yè)大學(xué)