專利名稱：一種分離病毒變異序列的方法及其分離的口蹄疫病毒變異序列的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及病毒防疫，尤其涉及一種分離病毒變 異序列的方法及其分離的口蹄疫病毒變異序列。
背景技術(shù)：
口蹄疫(foot and mouth disease, FMD)是偶蹄動物的一種急性、熱性、 高度傳染性傳染病，是由口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus, FMDV)
感染引起的人畜共患的傳染病，是當今世界上最為嚴重的家畜傳染病，危害牛、 豬、羊等偶蹄類動物，以傳播迅速、感染率高而著稱，國際獸疫局將其列為A 類傳染病之首。世界上絕大多數(shù)國家都流行過口蹄疫，目前該病主要在亞洲部 分國家和地區(qū)、非洲、中東和南美呈地方性流行或零星散發(fā)。
由于病毒的快速變異，口蹄疫疫苗難以對被免疫動物達到有效的保護，已 消滅口蹄疫的國家和地區(qū)常常會重新暴發(fā)口蹄疫，如1967年，在英國發(fā)生了持 續(xù)5個月的口蹄疫，為了遏止疾病的蔓延，在幾千個流行疫區(qū)內(nèi)有442,000頭家 畜被殺掉，1981年英國再次爆發(fā)口蹄疫，2000年口蹄疫首先在亞洲和非洲爆發(fā)， 繼而蔓延至歐洲和美洲，2001年英國又發(fā)生口蹄疫，共發(fā)現(xiàn)病例2030起，其間 共有400多萬頭牲畜被屠宰，損失慘重。由于目前控制口蹄疫主要是采取屠宰 措施，因此給畜禽養(yǎng)殖業(yè)帶來毀滅性打擊。
當前，控制病毒性疾病最經(jīng)濟有效的手段就是疫苗，然而隨著病毒的快速 變異，越來越多的疫苗出現(xiàn)喪失保護作用的現(xiàn)象，如流感疫苗、禽流感疫苗、 乙肝疫苗等都出現(xiàn)這種情況，如何能針對病毒變異快這一情況，提出合適有效的解決方法是目前擺在人們面前的一道難題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種通過對病毒變異區(qū)域進 行分析，并結(jié)合隨機肽技術(shù)，分離病毒變異序列的方法。
本發(fā)明的另一個目的在于提供采用上述方法分離得到的口蹄疫病毒變異 序列。
本發(fā)明的上述目的是通過如下方案予以實現(xiàn)的
針對病毒變異速度快，現(xiàn)有疫苗易失去保護作用的現(xiàn)象，本發(fā)明提供一種 分離病毒變異序列的方法，該方法通過先對病毒變異區(qū)域進行分析，然后利用 隨機肽技術(shù)，分離得到能夠模擬病毒變異的多條多肽，將這些多肽用于疫苗研 發(fā)，可以使得疫苗研制能兼顧病毒的變異，起到未雨綢繆的作用。
本發(fā)明的分離病毒變異序列的方法，包括如下步驟
(1) 分析對比數(shù)據(jù)庫中病毒的氨基酸序列，根據(jù)現(xiàn)有對該病毒抗原性的研 究，找出該病毒抗原決定簇位點的編碼序列以及高可變區(qū)域的編碼序列，并設(shè) 計混合多肽，根據(jù)該混合多肽設(shè)計隨機引物；
(2) 將上述隨機引物進行不對稱PCR拼接；
(3) 將上述拼接產(chǎn)物與酵母分泌表達信號肽序列制備融合基因；將該融合 基因和大腸桿菌-釀酒酵母穿梭載體分別進行雙酶切，大腸桿菌-釀酒酵母穿梭 載體在雙酶切位點間再多進行一次酶切，且酶切后用牛小腸堿性磷酸酶
(CIAP)處理；將融合基因的雙酶切產(chǎn)物和大腸桿菌-釀酒酵母穿梭載體的三 酶切產(chǎn)物連接；
(4) 將上述連接產(chǎn)物電激轉(zhuǎn)化大腸桿菌，得到質(zhì)粒，酶切處理該質(zhì)粒后，再次電激轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)化產(chǎn)物經(jīng)篩選后，挑取克隆進行測序，即分離得到病毒變異 序列。
上述步驟(1)中，病毒抗原決定簇位點可選擇T細胞抗原決定簇位點、 B細胞抗原決定簇位點等。
上述歩驟(2)中，現(xiàn)有對隨機引物的拼接有很多種方法，如鳥槍法、限 制性內(nèi)切酶拼接法等，本發(fā)明人通過試驗發(fā)現(xiàn)對隨機引物采用不對稱PCR拼
接，可取得較好的拼接效果，不對稱PCR的操作采用本領(lǐng)域常規(guī)操作即可。 上述步驟(3)中，為拼接產(chǎn)物加上酵母分泌表達信號肽序列，可使得拼
接產(chǎn)物能很好地分泌表達到胞外，易于純化，酵母分泌表達信號序列可采用任
意一種本領(lǐng)域技術(shù)人員常用的，如釀酒酵母(x凌配因子(AMF)的信號肽序 列。
上述步驟(3)中，大腸桿菌-釀酒酵母穿梭載體可采用任意一種本領(lǐng)域技 術(shù)人員常用的，如pYES2/CT、 pYES6/CT或YEp352等。
上述步驟(3)中，對大腸桿菌-釀酒酵母穿梭載體進行三酶切，是因為常 規(guī)操作——雙酶切經(jīng)常不能酶切徹底，留下少量環(huán)狀DNA載體，這些沒有插 入片段的空載體會形成大量菌落，從而影響陽性菌落的篩選，而本發(fā)明采用三 酶切處理載體，使得酶切更加徹底，酶切后再進行一歩CIAP處理，使得未插 入目的片段的空載體被切成線性DNA并去磷酸化后不能被轉(zhuǎn)化大腸桿菌，從 而可減少非重組質(zhì)粒的混入，保證最終獲得的均為陽性克隆。
上述步驟(4)中，將上述連接產(chǎn)物進行大腸桿菌電激轉(zhuǎn)化并涂板，收菌 并生長后提取質(zhì)粒，并用限制性內(nèi)切酶NotI和CIAP處理所提取的質(zhì)粒，以 徹底去掉沒有插入片段的空載體，然后再次電激轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布于含有花青素的LBGG氨卞青霉素抗性平板，挑取克隆進行測序，即分離得到病毒變 異序列。
本發(fā)明采用上述分離病毒變異序列的方法，對口蹄疫病毒的變異序列進行 了分離，其具體步驟如下
(1) 搜索數(shù)據(jù)庫中多個O型口蹄疫病毒(FMDV) VP1蛋白的氨基酸序 列進行分析比對，設(shè)計具有E-F-PPS"G結(jié)構(gòu)的混合多肽，其中E段與T細胞 抗原決定簇位點有關(guān)，F(xiàn)段與B細胞抗原決定簇位點有關(guān)，G段為G-H環(huán)區(qū) 域，該G-H環(huán)區(qū)域為口蹄疫病毒中主要的中和性抗原位點，F(xiàn)段與G段之間 由一個二脯氨酸接頭(PPS)連接，因為G-H環(huán)是O型口蹄疫病毒(FMDV) 上重要的可變區(qū)，因此將G段設(shè)計為有限隨機化的區(qū)域；根據(jù)該E-F-PPS"G 結(jié)構(gòu)的混合多肽，設(shè)計隨機引物；
(2) 將上述隨機引物進行不對稱PCR拼接；
(3) 將上述拼接產(chǎn)物與酵母分泌表達信號肽序列制備融合基因；將該融合 基因和大腸桿菌"fi酒酵母穿梭載體分別進行雙酶切，大腸桿菌-釀酒酵母穿梭 載體在雙酶切位點間再多進行一次酶切，且酶切后用牛小腸堿性磷酸酶
(CIAP)處理；將融合基因的雙酶切產(chǎn)物和大腸桿菌"l良酒酵母穿梭載體的三 酶切產(chǎn)物連接；
(4) 將上述連接產(chǎn)物進行大腸桿菌高效電激轉(zhuǎn)化并涂板，收菌并生長后提 取質(zhì)粒，并用限制性內(nèi)切酶NotI和CIAP處理所提取的質(zhì)粒，使得未插入目的 片段的空載體被切成線性DNA并去磷酸化后不能被轉(zhuǎn)化大腸桿菌，從而可減 少非重組質(zhì)粒的混入。然后再次高效電激轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布于含有花青素的 LBGG氨卞青霉素抗性平板，挑取克隆進行測序，即分離得到病毒變異序列。，上述步驟(1)中，從Genebank中搜索到目前已報道的如下多種O型口 蹄疫病毒(FMDV) VP1蛋白的氨基酸順序AJ294914、 AJ303520、 AJ29491 8、 AJ303521、 AJ296328、 AJ004663、 AJ303522、 AJ303484、 AJ303523、 AJ3 03483、 AJ318833、 AJ318844、 AJ318847、 AJ303525、 AJ303526、 AJ318848、 AJ131469、 AF095884、 AF095885、 AF026168、 AJ296322、 AJ294923、 AJ318 836、 AJ294925、 AJ294922、 AJ294924、 AF525458、 AJ131468、 AJ131470、 A J294917、 AJ294913、 AJ294915、 AJ294916、 AJ294919和AJ294920。根據(jù)這 些氨基酸的分析比對，設(shè)計出具有E-F-PPS《結(jié)構(gòu)的混合多肽，其中E段為E TQTQRRHHTDVAFVLDRFV, F段為RHKQPLIAPAKQLL, G段設(shè)計為部分
(N/K/T)VRGDL(Q/R)VL(A/T)QK(A/T)(E/A/T)R(T/A/P/S)Lp和完全隨機肽鏈K YXXXXXXXVRGDL(Q/R)VL(A/T)QK(A/T)(E/A/T)R(T/A/P/S)LP兩種，具體如
下所示
a. 該混合多肽的部分隨機肽鏈為ETQTQRRHHTDVAFVLDRFV-RHKQPL IAPAKQLL-PPS-KY(G/S/A)(D/T/V/G/E/Q)(T/A/G/S)(S/R/H/P/A/L)(T/V/A/L)(N/ S/T/A)(N/K/T)VRGDL(Q/R)VL(A/T)QK(A/T)(E/A/T)R(T/A/P/S)LP，該部分隨機 肽鏈的核苷酸序列如SEQ ID No: 201所示；
b. 該混合多肽的完全隨機肽鏈為ETQTQRRHHTDVAFVLDRFV- RHKQP LIAPAKQLL-PPS-KYXXXXXXXVRGDL(Q/R)VL(A/T)QK(A/T)(E/A/T)R(T/A/ P/S)LP，該完全隨機肽鏈的核苷酸序列如SEQ ID NO: 202所示。
上述步驟(1)中，根據(jù)序列SEQ ID No: 1和SEQ ID NO: 2分別設(shè)計 隨機引物fmdl (其核苷酸序列如SEQ ID No: 203所示)、fmd2 (其核苷酸
8序列如SEQ ID No: 204所示)、fmd3 (其核苷酸序列如SEQ ID No: 205所 示)、fmd4 (其核苷酸序列如SEQ ID No: 206所示)和fmd5 (其核苷酸序 列如SEQ ID No: 207所示)，其中引物fmd4主要是針對G-H環(huán)設(shè)計的，由 于G-H環(huán)為高可變區(qū)，因此采用部分隨機設(shè)計出引物fmd4，同時再根據(jù)完全 隨機設(shè)計出引物fmd4b (其核苷酸序列如SEQ ID No: 208所示)，引物fmd 4b中有7個密碼子采用了 VNN密碼子，除了不編碼芳香族氨基酸和半胱氨酸 之外，可編碼其它任意氨基酸。
上述步驟(2)中，采用不對稱PCR對隨機引物進行拼接，采用本領(lǐng)域技 術(shù)人員常用的不對稱PCR操作均可實現(xiàn)本發(fā)明。
上述步驟(4)中，采用了兩次超高效電激處理；篩選轉(zhuǎn)化子時，可在所 用的抗性平板上加入適量的花青素，因為隨機肽通常是帶有一點毒性的，而抗 氧化劑花青素的加入可以減弱毒性，使轉(zhuǎn)化子生長的更好。
本發(fā)明分離病毒變異序列的方法中，利用Xhol酶切是為了去除大部分未 插入目的片段的空載體，只有這些空載體才具有XhoI位點， 一旦被切成線性 DNA后并去磷酸化后不能被轉(zhuǎn)化大腸，可以減少非重組質(zhì)粒的混入；利用Notl 酶切是為了去除大部分未插入目的片段的空載體，只有這些空載體才具有Notl 位點， 一旦被切成線性DNA后并去磷酸化后不能被轉(zhuǎn)化大腸，可以減少非重 組質(zhì)粒的混入。
本發(fā)明釆用上述分離方法，最終獲得100條口蹄疫病毒變異序列，其氨基 酸序列如SEQ ID NO: 101 200所示，其對應(yīng)的核苷酸序列如SEQ ID NO: 1 100所示。
本發(fā)明的分離方法適用于分離各種新的病毒變異序列，這些病毒變異序列可用于病毒疫苗的制備，因為這些病毒變異序列可模擬病毒進化，因此所制備 的疫苗能夠起到兼顧病毒變異的作用。
本發(fā)明得到的ioo條口蹄疫病毒變異序列可用于口蹄疫病毒疫苗的制備。
本發(fā)明的DNA編碼序列其中，M=A/C、 R=A/G、 W=A/T 、 S=G/C、 Y=C/T、 K=G/T、 V=A/G/C、 H=A/C/T、 D=A/G/T、 B=G/C/T、 N=A/G/C/T; X
代表任意氨基酸。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果
1. 本發(fā)明提供一種可適用于分離各種新的病毒變異序列的方法，由該方法 獲得的病毒變異序列可用于疫苗的研制，由于變異是病毒的一大特點，而疫苗 是防制病毒傳染性疾病最有效的手段，因此利用本發(fā)明所得病毒變異序列研制 疫苗，能兼顧病毒的變異，起到未雨綢繆的作用，對經(jīng)濟發(fā)展和人類健康產(chǎn)生 良好的、巨大的效益；
2. 本發(fā)明的分離方法利用隨機肽技術(shù)進行混合多肽疫苗的研發(fā)，同時對分 離方法進行優(yōu)化改進，如采用不對稱PCR進行隨機引物拼接、對大腸桿菌魂 母穿梭表達載體采用三酶切和CIAP處理、采用高效電激轉(zhuǎn)化等，都使得本發(fā) 明取得很好的分離效果；
3. 本發(fā)明的方法能簡單、高效地發(fā)現(xiàn)病毒新的變異序列，為廣譜疫苗的開 發(fā)開辟新途徑，也為全國的畜禽養(yǎng)殖業(yè)帶來有力的保障，也會為開發(fā)相應(yīng)的禽 流感疫苗、愛滋病疫苗等積累寶貴的經(jīng)驗。
具體實施例方式
下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明做進一歩地解釋，但具體實施例并不對本發(fā) 明做任何限定。實施例l
本實施例的口蹄疫病毒變異序列的分離方法，其具體步驟如下所示
(1) 從Genebank中搜索到以下多個O型口蹄疫病毒VP1蛋白G-H環(huán)的 氨基酸序列并對這些氨基酸序列進行分析比對AJ294914、 AD03520、 AJ294 918、 AJ303521、 AJ296328、 AJ004663、 AJ303522、 AJ303484、 AJ303523、 A J303483、 AJ318833、 AJ318844、 AJ318847、 AJ303525、 AJ303526、 AJ31884 8、 AJ131469、 AF095884、 AF095885、 AF026168、 AJ296322、 AJ294923、 AJ 318836、 AJ294925、 AJ294922、 AJ294924、 AF525458、 AJ131468、 AJ131470、 AJ294917、 AJ294913、 AJ294915、 AJ294916、 AJ294919和AJ294920;根據(jù) 這些氨基酸序列的一致序列設(shè)計出具有E-F-PPS《結(jié)構(gòu)的混合多肽，該混合多 肽的氨基酸序列為ETQTQRRHHTDVAFVLDRFV-RHKQPLIAPAKQLL-PPS-K
GDL(Q/R)VL(A/T)QK(A/T)(E/A/T)R(T/A/P/S)Lp,其核苷酸序列如SEQ ID N
o: 201所示；根據(jù)該混合多肽設(shè)計出隨機引物fmdl (其核苷酸序列如SEQI D No: 203所示)、fmd2 (其核苷酸序列如SEQ ID No: 204所示)、fmd3 (其 核苷酸序列如SEQ ID No: 205所示)、fmd4 (其核苷酸序列如SEQ ID No: 206所示)和fmd5 (其核苷酸序列如SEQ ID No: 207所示)；
(2) 將上述隨機引物通過不對稱PCR進行拼接，其過程如下 a.利用不對稱PCR技術(shù)，按重量比fmd2: fmd3=15: 1禾卩fmd4: fmd5 = l:
15，采用高保真的PfuDNA聚合酶(市售)在有2.5%的24t咯烷酮(體積 百分比)存在的情況下，分別進行引物fmd2和fmd3，以及引物fmd4和fmd5 的融合拼接，其PCR反應(yīng)條件是94。C預(yù)變性2分鐘，94。C變性20秒，35°C退火45秒，72°C延伸35秒，進行26個循環(huán)，最后7(TC延伸5分鐘；
b.將上述PCR反應(yīng)的拼接產(chǎn)物fmd23和fmd45以重量比1: 4混合，繼 續(xù)使用上述的反應(yīng)條件進行擴增，除了改變退火溫度為3(TC外，其余條件不 變，從而獲得一個長175bp的fmd25拼接產(chǎn)物；然后將引物fmdl和fmd25以 相等的摩爾比混合，擴增出長220bp的產(chǎn)物fmd15，此反應(yīng)的條件是94。C預(yù) 變性2分鐘，95。C變性30秒，27'C退火45秒，72°C延伸30秒，進行30個 循環(huán)，最后7(TC延伸5分鐘；
(3)將上述拼接產(chǎn)物再通過PCR連接在釀酒酵母a々配因子分泌信號 的Kex2信號切割位點序列的下游，其過程如圖2所示以40ng質(zhì)粒pPICZ a A (市售，含釀酒酵母a A配因子分泌信號序列)和50ng fmdl5為模板， 以P6 (其核苷酸序列如SEQ ID NO: 209所示)和fmd5為引物，PCR擴增 475bp的釀酒酵母a凌配因子分泌信號的片段和組合多肽的嵌合片段，PCR 反應(yīng)條件為94。C預(yù)變性2分鐘，94。C變性20秒，37。C退火45秒，72°C延 伸35秒，進行30個循環(huán)反應(yīng)，最后7(TC延伸5分鐘，所得PCR產(chǎn)物即為融 合基因；
凝膠回收上述PCR產(chǎn)物，然后用40U的EcoRI和Xbal雙酶切4小時，隨后酶 切產(chǎn)物70。C失活15分鐘，用乙醇沉淀后融于30pl去離子水；
將釀酒酵母的穿梭質(zhì)粒pYES2/CT各用40U的EcoRI、 XhoI和XbaI酶切過 夜，并用40UCIAP處理三酶切產(chǎn)物，隨后產(chǎn)物進行酶失活處理并用乙醇沉淀； 因為XhoI位于EcoRI和XbaI之間，利用XhoI酶切是為了去除大部分未插入目的 片段的空載體，只有這些空載體才具有XhoI位點， 一旦被切成線性DNA后不 能被轉(zhuǎn)化大腸，可以減少非重組質(zhì)粒的混入；取350ng上述融合基因的雙酶切產(chǎn)物和質(zhì)粒pYES2/CT的三酶切產(chǎn)物，以 摩爾比10: l進行連接反應(yīng)，并用乙醇沉淀連接產(chǎn)物；
(4)將上述乙醇沉淀后的連接產(chǎn)物用電激高效轉(zhuǎn)化DH10B感受態(tài)細胞 (ElectroMax-DH10B，市售)，涂布在加有10mg/L花青素的LBGG氨卞青霉 素抗性平板上3(TC培養(yǎng)，水洗下轉(zhuǎn)化子后擴培并提取質(zhì)粒，并用限制性內(nèi)切 酶20U Notl和16U CIAP過夜處理所提取的質(zhì)粒，利用Notl酶切是為了去除 殘余的未插入目的片段的空載體，只有這些空載體才具有Notl位點， 一旦被 切成線性DNA后并用CIAP去磷酸化后不能被轉(zhuǎn)化大腸，可以減少非重組質(zhì) 粒的混入。然后再次電激轉(zhuǎn)化(操作同前)，轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布于含有10mg/L花 青素的LBGG氮卞青霉素抗性平板，37"C培養(yǎng)；
用引物P7 (其核苷酸序列如SEQIDNO: 210所示)和P8 (其核苷酸序 列如SEQ ID NO: 211所示)配對對上述培養(yǎng)后的菌落進行菌落PCR檢測， 陽性菌落應(yīng)該產(chǎn)生相應(yīng)的730bp條帶，有80%的克隆子可以檢測到這些相應(yīng) 大小的片段，最后提取單菌落的質(zhì)粒，用引物T7(其核苷酸序列如SEQ ID NO: 212所示)進行測序，測定了 100個左右克隆，獲得了正確序列的克隆再用反 向引物P9 (其核苷酸序列如SEQIDNO: 213所示)進行反向測序檢驗。
測序是由廣州景瑞生物科技有限公司和華大基因深圳測序中心的 ABI3730XL測序儀完成，絕大部分序列Qv值大于30，表明錯誤的幾率小于 0.1%。個別序列的個別堿基Qv值為10-20左右，表明錯誤的幾率為10%-1% 左右，本實施例得到的口蹄疫病毒變異序列為Y1 Y10(其氨基酸序列如SEQ ID NO: 100 110所示，相對應(yīng)的核苷酸序列如SEQ ID NO: 1 10所示)， Y23 30 (其氨基酸序列如SEQ ID NO: 123 130所示，相對應(yīng)的核苷酸序列如SEQ ID NO: 23 30所示)，Y32 Y94 (其氨基酸序列如SEQ ID NO: 132 194所示，相對應(yīng)的核苷酸序列如SEQIDNO: 32 94所示)。 實施例2
本實施例的口蹄疫病毒變異序列的分離方法，為了達到完全隨機化片段的 目的，采用引物fmd4b代替引物fmd4，其余制備步驟同實施例1，本實施例 得到的口蹄疫病毒變異序列為Y11 Y22(其氨基酸序列如SEQ ID NO: 111 122所示，相對應(yīng)的核苷酸序列如SEQ ID NO: 11 22所示)，Y95 Y100 (其氨基酸序列如SEQ ID NO: 195 200所示，相對應(yīng)的核苷酸序列如SEQ ID NO: 95 100所示)。 實施例3
本實施例的口蹄疫病毒變異序列的分離方法，其第一步隨機引物的獲得同
實施例l，其余三步如下所示
(2)以質(zhì)粒pPICZaA (含釀酒酵母a凌配因子分泌信號序列，市售)作 為模板，以P6(其核苷酸序列如SEQIDNO: 209所示)為上游引物，以fmdl (其核苷酸序列如SEQ ID No: 203所示)為下游引物，采用高保真活性的P> DNA聚合酶(市售)進行PCR反應(yīng)，其PCR反應(yīng)條件是9(C預(yù)變性5分鐘， 然后94。C變性30秒，46C退火40秒，72°C延伸1分鐘，30個循環(huán)反應(yīng)，最 后72"C延伸10分鐘，得到擴增產(chǎn)物l，其長度為305bp;
同時，將引物fmd2 (其核苷酸序列如SEQ ID No: 204所示)、fmd3 (其 核苷酸序列如SEQ ID No: 205所示)、fmd4 (其核苷酸序列如SEQ ID No: 206所示)和fmd5 (其核苷酸序列如SEQ ID No: 207所示)按照2: 1: 1: 2 的摩爾比加入PCR管中，在2.5%的2—吡咯烷酮存在的情況下采用Pfu DNAPolymerase進行擴增，其反應(yīng)條件是95"C預(yù)變性5分鐘，95'C變性30秒，44 。C退火2分鐘，72°C延伸2分鐘，進行30個循環(huán)，最后，72。C延伸10分鐘， 得到擴增產(chǎn)物2;
將上述得到的擴增產(chǎn)物1和擴增產(chǎn)物2混合作為模板(體積為400pl)， 以P6 (其核苷酸序列如SEQIDNO: 209所示)為上游引物，以fmd5 (其核 苷酸序列如SEQ ID No: 207所示)為下游引物，在2.5%的2—吡咯垸酮存 在的情況下采用PfiiDNA Polymerase進行PCR反應(yīng)，其反應(yīng)條件如下95°C 預(yù)變性5分鐘，95。C變性30秒，33。C退火1分鐘40秒，72°C延伸2分鐘， 進行30個循環(huán)，最后，72。C延伸10分鐘，獲得長度為457bp的片段，產(chǎn)物用 乙醇沉淀后溶于50^1 ddH20。
G)取上述經(jīng)乙醇沉淀并溶于ddH20的擴增產(chǎn)物80ng，EcoRI和Xbal在 37。C酶切過夜，再用乙醇失活、沉淀，低溫烘干后溶于10pl雙蒸水；將15pg 的釀酒酵母穿梭質(zhì)粒pYES2/CT進行EcoRI和Xbal雙酶切，其中6pg用10U CIAP處理30分鐘，去除5'的磷酸根離子，防止載體自連，酶切產(chǎn)物用苯酚/ 氯仿抽提，并用乙醇沉淀，低溫烘干后溶于60nl雙蒸水；取200ng pYES2/CT (用EcoRl/Xbal雙酶切)和150ng的擴增產(chǎn)物(用EcoRI/Xbal雙酶切)，加 入3ji1 T4 DNA連接酶buffer和15U T4 DNA連接酶，4。C連接過夜，連接產(chǎn) 物用乙醇失活并沉淀，低溫烘干后溶于13(il雙蒸水；
(4)將上述連接產(chǎn)物通過電激轉(zhuǎn)化至大腸桿菌XL1-Blue MRF，菌株(市 售)，涂LB/氨芐青霉素抗性平板，37'C培養(yǎng)過夜；從抗性平板上挑取單菌落， 轉(zhuǎn)入5mlLB/氨芐青霉素液體培養(yǎng)基，37。C過夜，200rpm搖床培養(yǎng)后提質(zhì)粒； 將抗性平板上的菌落用無菌水洗下，擴大培養(yǎng)之后，大量提質(zhì)粒；將所得混合質(zhì)粒用限制性內(nèi)切酶20U Notl處理；
因為在pYES2/CT質(zhì)粒的EcoRI和Xbal位點之間有Notl酶切位點，在有 插入片段的重組質(zhì)粒上該位點不存在。在此使用限制性內(nèi)切酶Notl切割之后， 由于線性片段轉(zhuǎn)化效率很低，因此可以減少非重組質(zhì)粒的混入。將所得的質(zhì)粒 再次電轉(zhuǎn)XL1-Blue MRF'菌株，涂LB/氨芐青霉素抗性平板，37。C培養(yǎng)15小 時，挑取單菌落作為PCR模板，以P7 (其核苷酸序列如SEQIDNO: 210所 示)為上游引物，以fmd3 (其核苷酸序列如SEQIDNo: 205所示)為下游引 物，進行PCR反應(yīng)，其條件如下95'C預(yù)變性5分鐘，95。C變性30秒，53 。C退火1分鐘，72°C延伸1分鐘，進行41個循環(huán)，最后，72"延伸10分鐘， 檢測到擴增產(chǎn)物中490bp的片段后就用P9 (其核苷酸序列如SEQ ID NO: 213 所示)引物測序，發(fā)現(xiàn)了ZX序列的氨基酸序列如SEQIDNO: 131所示，其 編碼核苷酸序列如SEQ ID NO: 31所示。
上述實施例l、 2、 3和4中所用的LB配方為(500ml): 5g蛋白胨，2.5g 酵母抽提物(市售)，5g氯化鈉，用蒸餾水補至500ml， pH7.0。
上述實施例l、 2和4中所用的LBGG配方為(500ml): 5g蛋白胨，2.5g 酵母抽提物(市售)，5g氯化鈉，2%葡萄糖，4%甘油，用蒸餾水補至500ml， pH7.0。
上述實施例1、 2和4中所用的花青素為上?？稻呕び邢薰井a(chǎn)品，純度 為98.75%,其使用終濃度為10毫克/升。
16-種分離病毒變異序列的方法及其分離的口蹄疫病毒變異序列序列表 SEQUENCE LISTING
<110〉中山大學(xué)、廣東溫氏食品集團有限公司
〈120> —種分離病毒變異序列的方法及其分離的口蹄疫病毒變異序列 〈130〉
〈160〉 213
<170〉 Patentln version 3.5
<210> 1
〈211〉 192
〈212〉 腿
<213〉 人工序列
〈400〉 1
gaaactcaaa ctcaaagaag acatcatact gatgtcgctt agacataaac agccattgat tgctccagct aaacaattgt ctttgtgcat ttgatactgt cagaggtgat ttgcaagttt acattgccat ga
tcgttttgga tagatttgtt tgccaccatc taagtactgt
60 120 180 192
〈210> 2
<211〉 192
〈212〉 腿
<213〉 人工序列
〈400〉 2
gaaactcaaa ctca肪gaag acatcatact gatgtcgctt agacataaac agccattgat tgctccagct aaacaattgt gtaagtggta ctgctactgt cagaggtgat ttgcaagttt acattgccat ga
tcgttttgga tagatttgtt tgccaccatc taagtactgt tggctc朋肪肌ctgasaga
60 120 180 192
<210> 3
<211> 192
<212> DNA
<213> 人工序列
〈400> 3
gaaactcaaa ctcaaagaag acatcatact gatgtcgctt agacataaac agccattgat tgctccagct aaacaattgt cattgtcttt cgtctaaagt cagaggtgat ttgcaagttt acattgccat ga
tcgttttgga tagatttgtt tgccaccatc taagtacgct tg3ctc肪aa aactgstag3
60 120 180 192
<210> 4
〈211〉 192
<212> DNA <213〉人工序列
〈400〉 4
gaaactcaaa ctcaaagaag acatcatact gatgtcgctt agacata肪c agccattgat tgctccagct aaacaattgt ctatctgttt tggctactgt cagaggtgat ttgcaagttt acattgccat ga
tcgttttgga tagatttgtt tgccaccatc taagtacgct tggctcaaaa aactgaaaga
60 120 180 192
〈210〉 5 〈211〉 192 <212> DNA
17<213〉 人工序列
一種分離病毒變異序列的方法及其分離的U蹄疫病毒變異序列序列表
<400> 5
gaaactcaaa ctcaaagaag acatcatact gatgtcgctt agacataaac agccattgat tgctccagct aaacaattgt gttggtccat ttgatacagt cagaggtgat ttgcaagttt acattgccat ga
tcgttttgga tagatttgtt tgccaccatc taagtactct tgactc肪a3 3gCtgatElg3
60 120 180 192
<210〉 6
<211〉 192
〈212> DNA <213>人工序列
〈400> 6
gaaactcaaa ctcaaagaag acatcatact gatgtcgctt agacataaac agccattgat tgctccagct aaacaattgt gattctgttg ttcataatgt cagaggtgat ttgcaagttt acattgccat ga
tcgttttgga tagatttgtt tgccaccatc taagtactgt tg3ctca肪a aactgcsags
60 120 180 192
〈210〉 7
<211> 192
<212> 醒
<213〉 人工序列
〈400〉 7
gaaactcaaa ctcaaagaag acatcatact gatgtcgctt agacataaac agccattgat tgctccagct aaacaattgt gattctgctg tgtctactgt cagaggtgat ttgcaagttt acattgccat ga
tcgttttgga tagatttgtt tgccaccatc taagtactgt tgactcaasa agctgaaaga
60 120 180 192
<210> 8
<211〉 192
<212〉 DNA 〈213〉人工序列
〈400〉 8
gaaactcaaa ctcaaagaag acatcatact gatgtcgctt agacataaac agccattgat tgctccagct aaacaattgt gttgctctat tgcctacagt cagaggtgat ttgcaagttt ccattgccat ga
tcgttttgga tagatttgtt tgccaccatc taagtactgt tgsctcaaaa aactg肪ags
60 120 180 192
〈210〉 9
<211> 192
<212> 腿 <213〉人工序列
〈400> 9
gaaactcaaa ctcaaagaag acatcatact gatgtcgctt agacataaac agccattgat tgctccagct aaacaattgt catggtcgat tggatactgt cagaggtgat ttgcaagttt acattgccat ga
tcgttttgga tagatttgtt tgccaccatc taagtacgct
tg3CtC3aaa 83Ctg3肪g3
60 120 180 192
<210> 10 <211> 192 〈212〉 醒〈213〉人工序列
一種分離病毒變異序列的方法及其分離的口蹄疫病毒變異序列序列表
〈400〉 10
gaaactcaaa ctc腿agaag acstcatact agacataaac agccattgat tgctccagct ctaagtgttg tgtctactgt cagaggtgat acattgccat ga
gatgtcgctt tcgttttgga tagatttgtt aaacaattgt tgccaccatc taagtacggt ttgcaagttt tggctcaaaa aactgcaaga
60 120 180 192
〈210> 11
〈211〉 192
〈212〉 DNA 〈213〉人工序列
〈柳> 11
gaaactcaaa ctcaaagaag acatcatact agacataaac agccattgat tgctccagct gtaagcatta gtgttgttgt cagaggtgat tcattgccat ga
gatgtcgctt tcgttttgga tagatttgtt aaacaattgt tgccaccatc taagtacatt ttgcaagttt tggctcaaaa aactgaaaga
60 120 180 192
〈210〉 12
〈211〉 192
〈212〉 DNA
<213> 人工序列
〈400〉 12
gaaactca旭ctcaaagaag acatcatact agacataaac agccattgat tgctccagct attcttggca atggacaagt cagaggtgat cctttgccat ga
gatgtcgctt tcgttttgga tagatttgtt aaacaattgt tgccaccatc taagtacatg ttgcgagttt tggctcaaaa agctgctaga
60 120 180 192
<210> 13
<211> 192
<212〉 DNA 〈213〉人工序列
<400> 13
gsaactcaaa ctca朋g肌g acatcatact agacataaac agccattgat tgctccagct 卿gtgcaca gsgtggccgt csgsggtgst actttgccat ga
gatgtcgctt tcgttttgga tagatttgtt aaacaattgt tgccaccatc taagtacact
ttgCgagttt tggCtC3333 3gCtgC,a3g3
60 120 180 192
<210> 14
<211〉 192
<212> DNA <213>人工序列
〈400〉 14
g肪actca肪ctc肌agaag acatcatsct agacata朋c agccattgat tgctccagct agagttcgaa atacaaaagt cagaggtgat actttgccat ga
gatgtcgctt tcgttttgga tagatttgtt aaacaattgt tgccaccatc taagtacaat ttgcgagttt tgactcaaaa agctgataga
60 120 180 192
〈210〉 15 <211〉 192 <212〉 腿<213> 人工序列
一種分離病毒變異序列的方法及其分離的口蹄疫病毒變異序列序列表
<400> 15
gaaactc3肌ctca肪g肪g acatcatsct agacataaac agccattg3t tgctccsgct catattagta gtacgattgt cagaggtgat actttgccat ga
gatgtcgctt tcgttttgga tagatttgtt 333C33ttgt tgccscc3tc taagt,acata ttgcaagttt tggctcaaaa agctgctaga
60 120 180 192
〈210〉 16
〈211> 192
〈212〉 靈
〈213〉 人工序列
〈400〉 16
gaaactcaaa ctcaaagaag acatcatact agacataaac agccattgat tgctccagct gtgcatcaaa atcgtctggt cagaggtgat gctttgccat ga
gatgtcgctt tcgttttgga tagatttgtt aaacaattgt tgccaccatc taagtacaat ttgcgagttt tggctcaaaa aactgctaga
60 120 180 192
<210> 17
<211> 192
<212> DNA
<213> 人工序列
〈400〉 17
gaaactcaaa ctca肪gaag acatcstact agacataaac agccattgat tgctccagct atcattccga gtattgccgt cagaggtgat tctttgccat ga
gatgtcgctt tcgttttgga tagatttgtt aaacaattgt tgccaccatc t肪gtacatt ttgcaagttt tggctcaaaa aactgctaga
60 120 180 192
<210> 18
〈211> 192
<212〉 腿
〈213〉 人工序列
<400〉 18
g肪actcaaa ctcaaagaag acBtceitact agacataaac agccattgat tgctccagct catattgccc tggtagtggt cagaggtgat tcattgccat ga
gatgtcgctt tcgttttgga tagatttgtt aa3c3attgt tgccaccatc taagtacaga ttgcaagttt tggctcaaaa agctgcaaga
60 120 180 192
<210> 19
〈211〉 192
〈212〉 腿
〈213> 人工序列
〈400〉 19
gaaactcasa ctcaaagaag acatcatsct agacataaac agccattgat tgctccagct ataaccagta caaatggtgt cagaggtgat gcattgccat ga
gatgtcgctt tcgttttgga tagatttgtt aaacaattgt tgccaccatc taagtacatg ttgcaagttt tggctcaaaa agctgctaga
60 120 180 192
<210> 20 <211> 192 <212> 腿〈213〉 人工序列 <400> 20
gaaactcaaa ctcaaagaag
3gaC3ta肪C 3gCC3ttg3t
attataattc atgtcaccgt tctttgccat ga
〈210〉 21
〈211〉 192
<212> DNA
〈213〉 人工序列
<400〉 21
ga朋ctca朋ctcsaagaag agacataaac agccattgat cttagtcatg atcgtgttgt cctttgccat ga
〈210〉 22
<211〉 192
〈212> 腿
<213〉 人工序列
<柳> 22
gaaactcsaa ctca33g朋g agacataaac agccattgat atcgatgtca ttcgcacggt gctttgccat ga
<210> 23
<211> 192
<212> DNA
<213> 人工序列
<柳〉23
ga肪ctca3a ctcaasgaag 3gacat朋ac agccattg3t catactgttg ttgataatgt acattgccat ga
〈210〉 24
〈211〉 192
<212〉 跳
<213> 人工序列
<400> 24
gaaactcaaa ctcaaagaag agacataaac agccattgat catactcgaa ttgctaatgt cctttgccat ga
<210〉 25 〈211〉 192 〈212〉 腿
種分離病毒變異序列的方法及其分離的口蹄疫病毒變異序列序列表
acatcatact tgctccagct cagaggtgat
gatgtcgctt Ugcgagttt
tcgttttgga tgccaccatc tgactcaaaa
tagatttg"tt aactgctaga
60 120 180 192
acatcatact tgctccagct
gatgtxgctt ttgcgagttt
tcgttttgga tgccaccatc tggctc朋aa
tagatttgtt taagtacgtt agctgctaga
60 120 180 192
acatcatact tgctccagct cagaggtgat
gatgtcgctt a犯caattgt ttgcgagttt
tcgttttgga tgccaccatc tgactcaaaa
tagatttgtt taagtacgtt agctgcaaga
60 120 180 192
acatcata^ct tgctccagct cagaggtgat
gatgtcgct1: aaacaattgt ttgcaagttt
tcgttttgga tgccaccatc tggctcaaaa
tagatttgtt taagtacggt aactgaaaga
60 120 180 192
acatcatact tgctccagct cagaggtgat
gatgtcgctt ttgcaagttt
tcgttttgga tgccaccatc tgactcaaaa
tagatttgtt taag"tactct 3gctga犯g3
60 120 180 192〈213〉人工序列 <400〉 25
ga33CtC333 CtC333g3ag
agacataasc agccattgat gtttgtcgtt cggctacagt gcattgccat ga
<210〉 26
〈211〉 192
<212〉 腿
〈213〉 人工序列
〈400> 26
gaaactcaaa ctc肪agaag agacataaac agccattgat gttactgttt cggctactgt ccattgccat ga
<210〉 27
〈211〉 192
<212〉 腿
<213〉 人工序列
<400> 27
gaaactcaaa ctcaaag助g agacata肪c agccattgst ctatgtcgag ctgctaatgt acattgccat ga
<210> 28
〈211> 192
〈212> 腿 <213〉人工序列
〈400> 28
g3肪ctcaa3 ctcsasgaag agacataaac agccattgat catgctcttg ttgatacagt tcattgccat ga
<210> 29
〈211> 192
〈212> DNA <213>人工序列
<400> 29
gaaactcaaa ctcaaagaag ag3C3t肪ac 3gccattgat cttagtggag ctgctactgt acattgccat ga.
〈210> 30 〈211〉 192 〈212〉 DNA
種分離病毒變異序列的方法及其分離的口蹄疫病毒變異序列序列表
3catcat3ct tgctccagct c卿ggtgat
gatgtcgctt aaacaattgt ttgcaagttt
"tCgttttgg3
tgccaccatc
tagatttgtt taagtacgct
60 120 180 192
acatcatact gatgtcgctt tcgttttgga tagatttgtt 60 tgctccagct aaacaattgt tgccaccatc taagtacgct 120 cagaggtgat ttgcgagttt tggctcaaaa aactgaaaga 180
192
acatcatact tgctccagct cagaggtgat
gatgtcgctt ttgcaagttt
tcgttttgga tgccaccatc tgactcaaaa
tagatttgtt taagtactct aactgataga
60 120 180 192
acatcatact tgctccagct c卿ggtgat
gatgtcgctt
3犯C犯t"tgt
ttgcaagttt
tcgttttgga tgccaccatc tgactcaaaa
tagatttgtt taagtactgt aa_ctgaaaga
60 120 180 192
acatcatact tgctccagct cagaggtgat
gatgtcgctt aaacaattgt ttgcaagttt
tcgttttgga tgccaccatc tggctcaaaa
tagatttgtt taagtacgct agctgcaaga
60 120 180 192
22<213〉人工序列 <400〉 30
ga肪ctc^a ctc^3gaag agacataaac agccattgat ctaactgttg ctact朋tgt acattgccat ga
〈210〉 31
<211〉 192
<212〉 腿 〈213〉人工序列
〈400〉 31
gaaactcaaa ctxaaagaag agacataaac agccattgat gatggtctat cgtctacagt ccattgccat ga
<210> 32
〈211〉 192
<212> 腿 〈213〉人工序列
<400〉 32
gaaactcaaa ctcaaagaag agacat朋ac agccattgat catgctcgat cgtctaaagt cctttgccat ga
〈210〉 33
〈211〉 192
<212> DNA <213〉人工序列
〈400〉 33
ga^ctx朋a ctc^i3gaag agacataaac agccattgat catactgctt ttgctaaagt ccattgccat ga
〈210〉 34
<211〉 192
〈212〉 DNA <213〉人工序列
<400〉 34
gaaactxaaa ctcaaagaag
gttggtcgag cggctaatgt gcattgccat ga
〈210〉 35 <211> 192 <212〉 腿
一種分離病毒變異序列的方法及其分離的口蹄疫病毒變異序列序列表
acatcatact tgctccagct cagaggtgat
gatgtcgctt aacc朋ttgt ttgcaagttt
tcgttttgga tgccaccatc tgactc犯犯
tagatttgtt aactgaaaga
60 120 180 192
acatcatact gatgtcgctt tcgttttgga tagatttgtt 60 tgctccagct aaacaattgt tgccaccatc taagtacggt 120 cagaggtgat ttgcgagttt tggctcaaaa aactgataga 180
192
acatcatact tgctccagct cagaggtgat
gatgtcgctt ttgcaagttt
tcgttttgga tgccaacatc tgactcaaaa
tagatttgtt taagtacggt
60 120 180 192
tgctccagct cagaggtgat
gatgtcgctt "ttgcgagttt
txgttttgga tgccaccatc tgactc^a3
tagatttgtt taagtacggt agctga犯ga
60 120 180 192
acatxatact tgctccagct c卿ggtgat
gatgtcgctt aaacaattgt ttgcaagttt
tcgttttgga tgccaccatc tgactcaaaa
tagatttgtt taagtactct agctgctaga
60 120 180 192
23〈213〉人工序列 〈400〉 35
gaaactcaaa ctcaaag朋g agacataaac agccattgat cttagtcttg ttgataatgt actttgccat ga
<210〉 36
<211〉 192
<212〉 DNA 〈213>人工序列
<400〉 36
gaaactcaaa ctcaaagaag 3gacat肌3c 3gccattgat cttgctgtat ttgataatgt tcattgccat ga
〈210〉 37
〈211〉 192
<212〉 DNA
<213> 人工序列
<400> 37
gaaactcaaa ctcaaagaag agacataaac agccattgat ctatgtcctt, cggctacagt ccattgccat ga
<210> 38
〈211〉 192
〈212> DNA 〈213〉人工序列
<400> 38
gaaactca^ ctc肌ag犯g agacataaac agccattgat gttagtcgat ttgctactgt acattgccat ga
〈210〉 39
〈211〉 192
〈212〉 DNA 〈213〉人工序列
〈400〉 39
gaaactcaaa ctcaaagaag agacataaac agccattgat gUagtgcag cggctacagt acattgccat ga
<210〉 40 <211> 192 <212〉 DNA
一種分離病毒變異序列的方法及其分離的口蹄疫病毒變異序列序列表
acatcatact tgctccagct cagaggtgat
gatgtcgctt
3EL3C肌ttgt
ttgcaagttt
tcgttttgga tgccaccatc
tagatttgtt taagtacggt
60 120 180 192
acatcatact tgctccagct cag3ggtgat
gatgtcgctt aaacaattgt ttgcaagttt
tcgttttgga tgccaccatx tgactcaaaa
tsgstttgtt
60 120 180 192
acatcatwt tgctccagct c卿ggtgat
gatgtcgctt ttgcgagttt
tcgttttgga tgccaccatc "tggctca肪3
tagatttgtt taagtacggt
60 120 180 192
aca/tcatact tgctccagct cagaggtgat
gatgtcgctt aaacaattgt ttgcgagttt
■tcgttttgga tgccaccatc tgactcaaaa
tagatttgtt taagtacgct
60 120 180 192
acatcatact tgctccagct c卿ggtgat
gatgtcgctt ttgcaagttt
tcgttttgga tgccaccatc tggctcaaaa
tagatttgtt taagtactct agctgcaaga
60 120 180 192<213〉 人工序列 〈400> 40
gaaactcaaa ctcaaagaag agacat肪ac 3gccattgat cttagtgct.g tgactactgt acattgccat ga
〈210〉 41
〈211> 192
<212> DNA <213>人工序列
〈400〉 41
gaaactcaaa ctcaaagaag agacataaac agccattgat ctatgtgcaa ctcctaaagt acattgccat g3
<210> 42
<211〉 192
〈212> DNA <213>人工序列
〈400〉 42
gaaactcaaa ctca肪gaag agacataaac agccattgat gatactcgtt tgtctaaagt ccattgccat ga
<210> 43
<211> 192
<212> DNA
<213> 人工序列
<400〉 43
ga朋ctcaaa ctcaaagaag agacataaac agccattgat catactgtag ttcctactgt acattgccat ga
〈210〉 44
<211〉 192
<212〉 DNA
〈213> 人工序列
<400〉 44
g朋3CtC333 Ctca33g83g
agacataaac agccattgat cattgtggtt tgcataatgt acattgccat ga
〈210> 45 <211> 192 <212〉 腿
種分離病毒變異序列的方法及其分離的U蹄疫病毒變異序列序列表
acatcatact tgctccagct C3gsggtgat
gatgtcgctt aaac貼t tgt
tcgttttgga tgccaccatc tgactcaaaa
taagtactgt aac"Lgataga
60 120 180 192
acatcatact gatgtcgctt tcgttttgga tagatttgtt 60 tgctccagct aaacaattgt tgccaccatc taagtacggt 120 cagaggtgat ttgcgagttt tgactcaaaa aactgaaaga 180
192
acatcatact tgctccagct cagaggtgat
gatgtcgctt aaacaattgt
ngcg3gtn
tcgttttgga tgccaccatc tg3ctc犯aEi
tagatttgtt taagtactxt agctgcaaga
60 120 180 192
acstcatEict tgctccagct
gatgtcgctt aaacaattgt ttgcaagttt
tcgttttgga tgccaccatc
■tagatttgtt taagtacgct,
3gCtgC33g3
60 120 180 192
tgctccagct c卿ggtgat
ttgc朋gttt
tcgttttgga tgccaccatc
t3辟tttgtt taagtactct
60 120 180 192〈213〉 人工序列 <400> 45gaaactcaaa ctcaaagaag 3gacataaac agccattgat ctttctctat ttcatacagt acattgccat ga〈210〉 46<211> 192<212> DNA<213〉 人工序列<400〉 46agacataaac agccattgat gttactctaa tttctaatgt 3cattgccat ga<210> 47<211> 192<212〉 DNA<213〉 人工序列<柳> 47gaaactcaaa ctcaaagaag agac.ataaac agccattgat catgctcttg ctgctacagt acattgccat ga<210> 48<211> 192〈212〉 DNA〈213> 人工序列<400〉 48ggi朋ctca33 ctca幼g肪g3gaC3t33aC 8gCC3ttg3tctagctgctg tggctacagt tcattgccat ga<210〉 49<211> 192<212> DNA<213> 人工序列<400> 49g肪actcaaa ctcaaagaag agacataaac agccattgat catagtgctg tgcataatgt actttgccat ga〈210〉 50 <211> 192 <212> DNA-種分離病毒變異序列的方法及其分離的口蹄疫病毒變異序列序列表acatcatact tgctccagctgatgtcgcU aaacwttgt ttgc犯gttttcgttttgga tgccaccatc tggctcaa肪tagatttgtt taagtactct aactgaaaga60 120 180 192acatcatact tgctccagct cagaggtgatgatgtcgctt aaacaattgt ttgcaagttttcgttttgga tgccaccatc tgactcaaaatagatttgtt "taagtacgct60 120 180 192acatcatact tgctccagct cagaggtgatgatgtcgctt ttgcaagttttcgttttgga tgccaccatc tggctcaaaatagatttgtt taagtacgct agctgaeiaga60 120 180 192acatcatact tgctxcagct cagaggtgatgatgtcgctt aaacaattgt Ugcgagttttcgttttgga tgccaccatc tgactcaaaatagatttgtt taagtactgt 犯ctg3taga60 120 180 192acatxatact tgctccagct cagaggtgatgatgtcgctt aaacaattgtttgcgagtntcgttttgga tgccaccatctagat.ttgtt taagtacggt agctgcteiga60 120 180 192<213> 人工序列一種分離病毒變異序列的方法及其分離的口蹄疫病毒變異序列序列表<400> 50gaaactcaaa ctcaaagaag acatcatact gatgtc.gctt agacataaac agccatt.gat tgctccagct aaacaattgt gtttctcttg tgtatactgt cagaggtgat t.tgcgagttt acattgccat gatcgttttgga tagatttgtt tgccaccatc taagtactgt. tgactcaaaa aactgctaga60 120 180 192〈210〉 51<211> 192〈212〉 腿<213> 人工序列<■> 51gaaactcaaa ctcaaagaag acatcatact gatgtcgctt agacataaac agccattgat tgctccagct幼acaattgtctaggtcgat tggataatgt cagaggtgat ttgcaagttt tcattgccat gatcgttttgga tagatttgtt tgccaccatc taagta(:tgt tgactc肪aa agctgcaaga60 120 180 192<210> 52〈211〉 192<212> 脆<213> 人工序列<400> 52gsaactc333 ctc333gsag 3C3tcatact gatgtcgctt agacataaac agccattgat tgctccagct a朋caattgt gtttgtgtta tgtatactgt cagaggtgat ttgcaagttt acattgccat gatcgt.tttgga tagatttgtt tgccaccatc taagtacgct tggctcaaaa agctgaaaga60 120 180 192<210〉 53<211> 192<212> DNA〈213〉 人工序列<400> 53ga朋ctcaaa ctcaaagaag acatcatact gatgtcgctt agacataaac agccattgat tgctccagct aaacaatt.gt gttggtcttg ttactaaagt cagaggtgat ttgcaagttt gctttgccat gatcgttttgga tagatttgtt tgccaccatc taagtactgt tgactcaaaa aactgcaaga60 120 180 192〈210〉 54<211〉 192<212〉 腿 <213>人工序列〈400〉 54gaaactcaaa ctca朋gaag acatcatact gatgt.cgctt 3gacat3a3c agccattgst tgctccsgct 333c33ttgt gtatgtcctg ttgctaaagt cagaggtgat ttgcgagttt acattgccat gatcgttttgga tagatttgt.t tgccaccatc taagtactgt tggctcaaaa aactgaaaga60 120 180 192〈210〉 55 〈211〉 192 <212> 醒<213〉人工序列 <400〉 55g犯actc肪3 ctca犯g^gcatagtggtt tggctacagt cctttgccat ga<210> 56<211〉 192〈212〉 DNA<213〉 人丄序列<400〉 56g3^ctcaaa_ ctc肪ag33g agacataaac agccattgat gaagctgcat cgcatacagt ccattgccat ga〈210〉 57<211> 192<212〉 DNA<213〉 人工序列〈400〉 57g3朋CtC肪3 CtC犯3g犯gagacataaac agccattgat ctttatggat tgtctactgt actttgccat ga〈210〉 58〈211〉 192〈212〉 DNA <213〉人工序列<400〉 58gaaactcaaa ctcaaagaag agacataaac agccattgat cttggtcttt ctgctactgt gcattgccat ga<210〉 59<211〉 192<212> DNA<213〉 人工序列<400〉 59gaaactcaaa ctcaaagaag agacataaac agccattgat gaatgtcctt ctactactgt acattgccat ga<210> 60 <211〉 192 <212〉 DNA種分離病毒變異序列的方法及其分離的口蹄疫病毒變異序列序列表acstcatact tgctccagct cagaggtgatgatgtcgctt aaacaattgt ttgcaagttttcgttttgga tgccac.catc tggctcaaaatagatttgtt taagtacggt60 120 180 192acatcatact "tgctccagct cagaggtgatgatgtcgctt aaacaattgt ttgcgagttttcgttttgga tgccaccatc tgactcaaaatagatttgtt taagtacggt aactgcaaga60 120 180 192acatcatact tgctccagct cagaggtgatgatgtcgctt aaacaattgt ttgcgagttttcgttttgga tgccaccatc tgsctc犯犯tagatttgta taagtactgt aactgataga60 120 180 192tgctccagct cagaggtgatgatgtcgctt aaacaattgt ttgcaagttttcg"ttttgga tgcccccatc tggctcaaaatagatttgtt taagtactgt aactgataga60 120 180 192acatcatac1: tgctccagct c卿ggtgatgatgtcgctt aaacaattgt ttgcaagttttcgttttgga tgccaccatc tgactcaaaatagatttgtt taagtactct60 120 180 192〈213〉人工序列 <400〉 60gaaactcaaa ctcaaagaag agacataaac agccattgat catgctcgag tggatacagt gcattgccat ga〈210> 61〈211〉 192<212〉 腿 <213〉人工序列<400> 61gaaactcaaa ctcaaagaag agacataaac agccattgat cattgtgcag ttcgtacagt acattgccat ga〈210〉 62〈211〉 192〈212〉 腿 〈213〉人工序列<400> 62gaaactcaaa ctcaaagaag agacataaac agccattgat cttaatc"tta tgtctaatgt acattgccat ga<210> 63〈211〉 192〈212〉 腿 <213>人工序列〈400〉 63gatagtgcta tggataaagt acattgccat ga<210> 64〈2U〉 192〈212〉 DNA 〈213>人工序列〈400〉 64gaaactcaaa ctcaaagaag agacataaac agccattgat ctaggtggtt tgcctaatgt acattgccat ga〈210〉 65 〈211〉 192 <212〉 DNA種分離病毒變異序列的方法及其分離的口蹄疫病毒變異序列序列表tgctccagct c卿ggtgatgatgtcgctt aaacaattgt ttgcaagttttcgttttgga tgccaccatc tg3ctca朋atagatttgtt taagtacgct60 120 180 192acatxatact tgctccagct c卿ggtgatgatgtcgctt aaacaattgt ttgc犯gttttcgttttgga tgccaccatc tggctcaaaatagatttgtt taagtacgct aactgaaaga60 120 180 192acatcatact tgctccagct c卿ggtgatgatgtcgctt a^caattgt ttgcgagttttcgttttgga tgccaccatctagatttgtt taagtacgct60 120 180 192acatcatact tgctccagct cagaggtgatgatgtcgctt ttgcaagttttcgttttgga tgccaccatc tggctcaaaatagatttgtt taagtactct aactgaaaga60 120 180 192acstcatact tgctccagct cagaggtgatgatgtcgctt aaacaa/ttgt ttgcaagttttcgttttgga tgccaccatc tgactcaaaatagatttgtt t肌gtacggt aactgctaga60 120 180 192<213〉 人工序列 <400〉 65
gaaactcaaa ctcaaagaag agscataaac agccsttgat gtatg"tcctt tggctaatgt ccattgcca"t ga
<210> 66
<211〉 192
<212〉 ■
<213〉 人工序列
<400〉 66
3gacataaac agccattgat ctttctctag ctcatactgt acattgccat ga
〈210〉 67
<211〉 192
<212〉 DNA
<213〉 人工序列
<400〉 67
gaaactcaaa ctcaaagaag agacataaac agccattgat gatactcctt cttctactgt actttgccat ga
<210> 68
〈211〉 192
<212〉 腿
〈213〉 人工序列
<400〉 68
gaaactcaaa ctcaaagaeLg agacataaac agccattgat gttactcctt ttcatacagt acattgccat ga
<210> 69
〈211〉 192
<212〉 DNA
<213〉 人工序列
〈400〉 69
gaaactcaaa ctcaaagaag agacataaac agccattgat gaaggtgcat ttgct犯tgt cctttgcc3t ga
〈210> 70 <211〉 192 〈212〉 腿
一種分離病毒變異序列的方法及其分離的口蹄疫病毒變異序列序列表
acatcatact tgctccagct cagaggtgat
gatgtcgctt 犯scaattgt ttgcgagttt
tcgttttgga tgccaccatc tgactcaaaa
tagatttgtt taagtactgt
60 120 180 192
acatcatact gatgtcgctt tcgttttgga tagatttgtt 60 tgctccagct aaacaattgt tgccaccatc taagtacggt 120 cagaggtgat ttgcaagttt tgactcaaaa aactgcaaga 180
192
acatcatact tgctccagct c卿ggtgat
gatgtcgctt 犯acasttgt ttgcaagttt
tcgttttgga tgccaccatc tggctcaaaa
tagatttgtt taagtactgt aactgataga
60 120 180 192
acatcatact tgctccagct cagaggtgat
gatgtcgctt ttgcaagttt
tcgttttgga tgccaccatc tgactcaaaa
tagatttgtt taagtactct aactgstaga
60 120 180 192
acatcatact tgctccagct c卿ggtgat
gatgtcgctt ttgcaagttt
tcgttttgga tgccaccatc tgactcaaaa
tagatttgtt taagtactgt
60 120 180 192<213〉人工序列 <400> 70
gaaactcaaa ctcaaagaag agacataaac agccattgat catactgcat tttctacagt gcattgccat ga
<210〉 71
<211〉 192
〈212〉 DNA
<213〉 人工序列
〈400〉 71
g犯actcaaa ctcaaagaag agacataaac agccattgat gtaactxttg tggatacagt gcat"tgccat ga
<210> 72
<211〉 192
〈212〉 腿
<213〉 人工序列
<■〉 72
g3犯ctc朋3 ctc^agsag agacataaac agccattgat gaagatgtag ttgatactg"t actttgccat ga
〈210〉 73
〈211> 192
<212〉 DNA
<213〉 人工序列
〈400〉 73
gaaactcaaa ctcaaagaag agacataaac agccattgat gattgtcgtt tgactaaagt cca"ttgccat ga
〈210〉 74
〈211> 192
〈212〉 腿 <213〉人工序列
<■〉 74
gaaactcaaa ctcaaagaag agacataaac agccattgat ctaggtgcag tgtctactgt tcattgccat ga
〈210〉 75 <211> 192 <212> 腿
一種分離病毒變異序列的方法及其分離的口蹄疫病毒變異序列序列表
acatcatac"t tgctccagct c聊ggtgat
gatgtcgctt aaacaattgt ttgcgagttt
tcgttttgga tgccaccatc tgactcaaaa
tagatttgtt taagtacggt aactgcaaga
60 120 180 192
acatcatact tgctccagct cagaggtgat
gatgtcgctt ttgcaagttt
tcgttttgga tgccaccatc tggctcaaaa
tagatttgtt taagtactct
60 120 180 192
acatxatact. tgctccagct cagaggtgat
gatgtcgctt ttgc朋gttt
tcgttttgga tgccaccatc tgactca肪3
tagatttgtt taagtactct aactgcaaga
60 120 180 192
3catc3tact tgctccagct
gatgtcgctt ttgcaagttt
tcgttttgga tgccacaatc
tagatttgtt taagtacgct aactgcaaga
60 120 180 192
acatcatact tgctccagct c卿ggtgat
gatgtcgctt ttgc肌gttt
tcgttttgga "tgccaccatc tggctcaaaa
tagatttgtt t朋gtacggt aactgcaaga
60 120 180 192<213〉人工序列 <400〉 75
g犯3ctc犯3 ctca犯g犯g agacataaac agccattgat ctatgtggtg tggatacagt acattgccat ga
<210〉 76
〈211〉 192
<212〉 腿 <213>人工序列
〈400〉 76
ga朋ctcaaa ctcaaagaag agacataaac agccattgat ctttgtgcta ttaataaagt acattgccat ga
〈210> 77
〈211〉 192
〈212〉 腿 <213〉人工序列
〈400〉 77
gaaactcaaa ctcaaagaag agacataaac agccattgat cattctggag ctcctactgt ccattgccat ga
<210〉 78
<211〉 192
〈212〉 腿
<213〉 人工序列
〈400〉 78
gaaactcaaa ctcaaagaag agacataaac agccattgat gatactgctt tgaataatgt ccattgccat ga
<210> 79
〈211〉 192
<212> 靈 <213〉人工序列
〈400〉 79
gaaactcaaa ctcaaagaag agacataaac agccattgat ctttctacag ctgatactgt acattgtcat ga
<210〉 80 <211〉 192 <212〉 靈
一種分離病毒變異序列的方法及其分離的口蹄疫病毒變異序列序列表
acatcatact gatgtcgctt tcgttttgga tagatttgtt 60 tgctccagct aaacaattgt tgccaccatc taagtacggt 120 cagaggtgat ttgcgagttt tgactcaaaa aactgctaga 180
192
acatcatact gatgtcgctt tcgttttgga tagatttgtt 60 tgctccagct aaacaattgt tgccaccatc taagtactct 120 cagaggtgat ttgcgagttt tgactcaaaa aactgcaaga 180
192
acatc3twt tgctccagct cagaggtgat
gatgtcgctt aaacaattgt ttgcaagttt
tcgttttgga tgccaccatc tggctcaaaa
tagatttgtt t肌gtacgct aactgaaaga
60 120 180 192
awtcatact tgctccagct c卿ggtgat
gatgtcgctt aaacaattgt ttgcaagttt
tcgttttgga tgccaccatc tgactcaaaa
tagatttgtt taagtactgt aactg犯aga
60 120 180 192
acatcatact tgctccagct c卿ggtgat
gatgtxgctt aaacaattgt ttgcaagttt
tcgttttgga "tgccaccatc tggctcaaaa
tagatttgtt taagtacggt aactgaaaga
60 120 180 192〈213〉 人工序列 〈400〉 80
gaaactcaaa ctcaaagaag
gtttgtxgta tttctactgt acattgccat ga
〈210> 81
<211〉 192
<212〉 DNA
〈213〉 人工序列
<400> 81
gaaactcaaa ctcaaagaag agacataaac agccattgat catgctgtaa cgtctactgt acattgccat ga
<210〉 82
〈211> 192
<212〉 DNA
<213〉 人工序列
〈400〉 82
gaaactcaaa ctcaaagaag agacataaac agccattgat gttgctcttg ctcatacagt acattgccat ga
〈210> 83
<211> 192
<212〉 腿 〈213〉人工序列
〈400〉 83
agacataaac agccattgat cttgctgctt tgtctaaagt gcattgccat ga
〈210〉 84
〈211〉 192
〈212〉 麗
<213〉 人工序列
〈400> 84
gaaactcaaa ctcaaagaag eLgeLcataaac etgccattgat ctaactgctt ttgctaatgt actttgccat ga
<210> 85 <211〉 192 〈212〉 醒
種分離病毒變異序列的方法及其分離的口蹄疫病毒變異序列序列表
acatcatact tgctccagct cagaggtgat
gatgtcgctt ttgcgagttt
tcgttttgga tgccaccatc
tagatttgtt taagtactgt
60 120 180 192
acatcatact tgctccagct c柳ggtgst
gatgtcgctt ttgcgagttt
tcgttttgga tgccaccatc
tagatttgtt taagt已cgct aactgcaaga
60 120 180 192
tgctccagct
C卿ggtg3t
gatgtcgctt a犯caattgt ttgcaagttt
tcgtntgga tgccaccatc tgactcaaaa
taagtacggt
33Ctg朋3ga
60 120 180 192
acstcatact tgctccagct c卿ggtgat
gatgtcgctt ttgcaagttt
tcgttttgga tgccaccatc
tagatttgtt taagtacgct
60 120 180 192
tgctccagct cagaggtgat
gatgtcgctt ttgcaagttt
tcgttttgga tgccaccatc
tagatttgtt taagtactgt aactgataga
60 120 180 192<213〉 人工序列 <400〉 85
gaaactcaaa ctcaaagaag 3gac3t肪3c stccattgat gaagctgctt ttcctaatgt acattgccat ga
<210〉 86
〈211〉 192
<212> DNA
<213> 人工序列
<400〉 86
gaaactcaaa ctc肌agaag agacataaac agccattgat gttagtattg tgcataatgt acattgccat ga
<210> 87
<211> 192
<212> DNA
<213〉 人工序列
<400> 87
gaaactCEiaa ctcaaagaag
agaC3t333C 3gCC3ttg3t
gttgctcttt tggctaatgt acattgccat ga
<210> 88
<211> 192
<212〉 腿 <213〉人工序列
<400> 88
gaaactcaaa ctcaaagaag 3gacata朋c agccattgst gtaagtcttt tgtatactgt cctttgccat ga
<210〉 89
<211〉 192
<212> DNA <213>人工序列
<400〉 89
g333CtC朋3 CtC333g33g
agacataaac agccattgat catggtccaa ttgctaatgt acattgccat ga
<210> 90 〈211〉 192 〈212〉 DNA
種分離病毒變異序列的方法及其分離的口蹄疫病毒變異序列序列表
acatcatact tgctccagct
gatgtcgctt ttgc朋gttt
tcgnttgga tgccaccatx
tagatttgtt taagtacgct 朋ct g3肪g3
60 120 180 192
acatcstact tgctccagct cagaggtgat
gatgtcgctt ttgcgagttt
tcgtUtgga tgccaccatc tgactcaaaa
tagatttgtt taagtactct aactgaaaga
60 120 180 192
acatcatact tgctccagct c卿ggtgat
gatgtcgctt ttgcaagttt
tcgttttgga tgccaccatc tgactcaaaa
tagatttgtt taagtactgt aactgataga
60 120 180 192
acatcatact tgctccagct c卿ggtgat
gatgtcgctt ttgcaagttt
tcgttttgga tgccaccat:c tgactcaaaa
tagatttgtt taagtacggt aactgcaaga
60 120 180 192
tgctccagct
C聊ggtg3t
g3tgtCgCtt
ttgcgagttt
tcgttttgga tgccaccatc tgactc犯aa
t觀3tttgtt t犯gtacggt aactgataga
60 120 180 192<213〉 人工序列 <■〉 90
gaaactcaaa ctxaaagaag agacataaac agccattgat gtaactcctg cgactaatgt actttgccat ga
〈210〉 91
〈211〉 192
〈212〉 靈
<213〉 人工序列
〈400〉 91
gaaactcaaa ctcaaagaag agacataaac agccattgat gttagtcctt ttaatacagt ccattgccat ga
<210> 92
<211> 192
〈212> 腿
〈213〉 人工序列
〈400〉 92
gaaactcaaa ctcaaagaag agacata犯c agccattgat cattgtgctg cgaataatgt acattgccat ga
<210> 93
<211> 192
〈212〉 DNA
〈213〉 人工序列
<400> 93
gaaactcaaa ctcaaagaag agacataaac agccattgat gtttctcttg cttctactgt gcattgccat ga
<210> 94
〈211〉 192
<212〉 DNA
<213〉 人工序列
〈400〉 94
gaaactcaaa ctcaaagaag agacataaac agccattgat catagtgtag tgtctacagt gcattgccat ga
〈210〉 95 〈211〉 192 <212〉 DNA
一種分離病毒變異序列的方法及其分離的口蹄疫病毒變異序列序列表
acatcatact gatgtcgctt txgttttgga tagatttgtt 60 tgctccagct aaacaattgt tgccaccatc taagtactct 120 cagaggtgat ttgcaagttt tgactcaaaa aactgaaaga 180
192
acatcatact gatgtcgctt tcgttttgga tagatttgtt 60 tgctccagct aaacaattgt tgccaccatc taagtactgt 120 cagaggtgat ttgcaagttt tgactcaaaa aactgaaaga 180
192
3catcatact tgctccagct c卿ggtgat
gatgtcgctt aaacaattgt ttgcaagttt
tcgttttgga tgccaccatc tgactc肌犯
tagatttgtt taagtscgga aactgataga
60 120 180 192
acatcatact tgctccagct c卿ggtgat
gatgtcgctt "ttgcgagttt
tcgttttgga tgccaccatc
tagatttgtt tasgtactct aactgaaaga
60 120 180 192
acatcatact tgctccagct cagaggtgat
gatgtcgctt aaacaattgt ttgcaag"ttt
tcgttttgga tgccaccatc
tagatttgtt taagtactgt aac"tg3taga
60 120 180 192<213〉 人工序列 <400〉 95
gaaactcaaa ctcaaagaag agacataaac agccattgat agtataatcg tgaacgcggt ccattgccat ga
<210> 96
<211> 192
〈212> DNA
<213〉 人工序列
〈400〉 96
g333CtC333 Ct.C333g33g
3aacat肪ac agccsttgat gtaatcacgc tgc鄰gcggt ccattgccat ga
<210〉 97
〈211〉 192
<212> 醒
〈213〉 人工序列
〈400> 97
agacataaac agccattgat cattgtgctg cggata.cagt acattgccat ga
<210〉 98
〈211> 192
<212〉 DNA 〈213〉人工序列
<400> 98
agacataaac agccattgat gatgctcaca gtgtt.gatgt. tctttgccat ga
〈210〉 99
<211> 192
〈212> 腿 〈213>人工序列
<400〉 99
gaaactcaaa ctcassgaag agacataaac agccattgat attattagta atcttggagt gcattgccat ga
<210> 100 <211〉 192 〈212〉 隱
一種分離病毒變異序列的方法及其分離的口蹄疫病毒變異序列序列表
ac3tcatact tgctccagct cagaggtgat
gatgtcgctt aaacaattgt ttgcaagttt
tcgttttgga tgccaccatc tgactc朋aa
tagatttgtt aactgataga
60 120 180 i92
3C3tc3t3ct gatgtcgctt tcgttttgga tag3tttgtt 60 tgctccagct aaacaattgt tgccaccatc taagtacgat 120 cagaggtgat ttgcgagttt tggctxaaaa agctgctaga 180
192
acatcatact gatgtcgctt tcgttttgga tagatttgtt 60 tgctccagct aaacaattgt tgccaccatc taagtacgct 120 cagaggtgat ttgcaagttt tggctcaaaa agctgcaaga 180
192
acatcatact tgctccagct c卿ggtgat
gatgtcgctt aaacaattgt ttgcgagtn
tcgttttgga tgccaccatc tggctcaaaa
tagatttgtt taagtac-8ta aactgctaga
60 120 180 192
acatcatact gatgtcgctt tcgttttgga tagatttgtt GO tgctccagct aaacaattgt tgccaccatc taagtacatg 120 cagaggtgat ttgcgagttt tggctcaaaa agctgcaaga 180
192<213> 人工序列
4巾分離病毒變異序列的方法及其分離的口蹄疫病毒變異序列序列表
<■> 100 gaaactcaaa
agacataaac
attattatgc
cctttgccat
ctcaaagaag acatcatact gatgtcgctt tcgttttgga tagatttgtt 60
agccattgat tgctccagct 祖acaattgt tgccaccatc taagtacgtt 120
tggctaatgt cagaggtgat ttgcaagttt tgactcaaaa agctgctaga 180
ga 192
〈210> 101
<211> 63
<212> PRT
〈213〉 人工序列
<400〉 101
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Cys Leu Cys Ala Phe Asp Thr Val Arg 35 ' 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Glu Arg Thr Leu Pro 50 55 60
<210> 102
〈211〉 63
〈212〉 PRT <213>人工序列
〈400〉 102
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Cys Val Ser Gly Thr Ala Thr Val Arg 35 ' '40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Ala Gin Lys Thr Glu Arg Thr Leu Pro 50 55 60
<210> 103
<211> 63
〈212〉 PRT <213>人工序列
〈400〉 103
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30一種分離病毒變異序列的方法及其分離的口蹄疫病毒變異序列序列表 Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ala His Cys Leu Ser Ser Lys Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Asp Arg Thr Leu Pro 50 55 60
<210> 104
<211> 63
<212〉 PRT
〈213〉 人工序列
<400> 104
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ala Leu Ser Val Leu Ala Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Ala Gin Lys Thr Glu Arg Thr I>eu Pro 50 55 60
〈210> 105
<211> 63
〈212> PRT <213〉人工序列
<400〉 105
Glu Thr Gin Thr 1
Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 5 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin
20
25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ser Val Gly Pro Phe Asp Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Ala Asp Arg Thr Leu Pro '50 55 60
〈210> 106
〈211〉 63
<212> PRT
〈213> 人工序列
<400〉 106
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu
1
5 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Cys Asp Ser Val Val His Asn Val Arg
35
40 45-種分離病毒變異序列的方法及其分離的口蹄疫病毒變異序列序列表
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Ala Arg Thr Leu Pro
50
55 60
<210> <211〉 〈212〉 <213〉
107
63
PRT
人工序列
<400〉 107
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Cys Asp Ser Ala Val Ser Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Ala Glu Arg Thr Leu Pro 50 55 60
〈210〉 108
〈211〉 63
<212> PRT
<213〉 人工序列
〈400〉 108
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Cys Val Ala Leu Leu Pro Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin匕ys Thr Glu Arg Pro Leu Pro 50 55 60
〈210> 109
<211〉 63
<212> PRT <213〉人工序列
<400〉 109
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ala His Gly Arg Leu Asp Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Glu Arg Thr Leu Pro 50 55 60
3一種分離病毒變異序列的方法及其分離的口蹄疫病毒變異序列序列表
〈210> 110
〈211〉 63
<212〉 PRT
〈213〉 人工序列
〈400〉 110
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 ' 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Gly Leu Ser Val Val Ser Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Ala Gin Lys Thr Ala Arg Thr Leu Pro 50 55 60
〈210〉 111
<211〉 63
<212〉 PRT <213>人工序列
〈400〉 111
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lvs Tyr lie Val Ser lie Ser Val Val Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Ala Gin Lys Thr Glu Arg Ser Leu Pro 50 55 60
<210〉 112
<211〉 63
<212> PRT 〈213〉人工序列
〈400〉 112
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Uu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Met lie Leu Gly Asn Gly Gin Val Arg 35 '40 45
Gly Asp Leu Arg Val Leu Ala Gin Lys Ala Ala Arg Pro Leu Pro 50 55 60
<210〉 113 〈211〉 63一種分離病毒變異序列的方法及其分離的口蹄疫病毒變異序列序列表
〈212〉 PRT 〈213〉人工序列
<柳> 113
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Uu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin
20
25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Thr Arg Val His Arg Val Ala Val Arg
35
40 45
Gly Asp Leu Arg Val Leu Ala Gin Lys Ala Ala Arg Thr Leu Pro
50
〈210〉 114
〈211〉 63
<212〉 PRT 〈213>人工序列
〈400〉 114
Glu Thr Gin Thr 1
55 60
Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 5 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin
20
25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Asn Arg Val Arg Asn Thr Lys Val Arg
35
40 45
Gly Asp Leu Arg Val !>eu Thr Gin L_ys Ala Asp Arg Thr Leu Pro
50
<210〉 115
〈211> 63
〈212> PRT
<213〉 人工序列
〈400> 115
55 60
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu
1
5 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin
20
25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr lie His lie Ser Ser Thr lie Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Ala Gin Lys Ala Ala Arg Thr Leu Pro 50 55 60
〈210〉 116
<211> 63
〈212〉 PRT
〈213> 人工序列
<400〉 116Glu Thr 1
一種分離病毒變異序列的方法及其分離的口蹄疫病毒變異序列序列表
Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 5 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 ' 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Asn Val His Gin Asn Arg Leu Val Arg 35 ' 40 45
Gly Asp Leu Arg Val Leu Ala Gin Lys Thr Ala Arg Ala Leu Pro
50
<210> 117
〈211〉 63
〈212〉 PRT 〈213〉人工序列
<400〉 117
55 60
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr lie lie lie Pro Ser lie Ala Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Ala Gin Lys Thr Ala Arg Ser Leu Pro 50 55 60
〈210〉 118
<211〉 63
<212> PRT 〈213〉人工序列
<400〉 118
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Arg His lie Ala Leu Val Val Val Arg 35 ' 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Ala Gin Lys Ala Ala Arg Ser Leu Pro 50 55 60
<210> 119
〈211〉 63
〈212> PRT <213>人工序列
<400> 119
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15一種分離病毒變異序列的方法及其分離的口蹄疫病毒變異序列序列表
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Met lie Thr Ser Thr Asn Gly Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Ala Gin Lys Ala Ala Arg Ala Leu Pro 50 55 60
〈210〉 120
〈211> 63
<212〉 PRT <213>人工序列
〈400〉 120
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr lie lie lie lie His Val Thr Val Arg 35 ' '40 45
Gly Asp I>eu Arg Val Leu Thr Gin Lys Thr Ala Arg Ser Leu Pro
50
55 60
<210> <211〉 〈212〉 〈213〉
121
63
PRT
人工序列
<400〉 121
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Val Leu Ser His Asp Arg Val Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Arg Val Leu Ala Gin Lys Ala Ala Arg Pro Leu Pro 50 55 60
〈210〉 122
<211> 63
〈212〉 PRT 〈213〉人工序列
<400> 122
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
43一種分離病毒變異序列的方法及其分離的口蹄疫病毒變異序列序列表
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Val lie Asp Val lie Arg Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Arg Val Leu Thr Gin Lys Ala Ala Arg Ala Leu Pro '50 55 60
〈210〉 123
<211> 63
<212〉 PRT <213>人工序列
<400> 123
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu
1
5 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Gly His Thr Val Val Asp Asn Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Ala Gin Lys Thr Glu Arg Thr Leu Pro
50
55 60
<210> 124
<211〉 63
<212> PRT <213>人工序列
〈400> 124
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro I>eu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ser His Thr Arg lie Ala Asn Val Arg 35 ' 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Ala Glu Arg Pro Leu Pro 50 55 60
<210> 125
〈211〉 63
〈212〉 PRT
〈213〉 人工序列
〈400〉 125
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr A印Val Ala Phe Val Leu
1
5 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 ' 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ala Val Cys Arg Ser Ala Thr Val Arg
35
40 45-種分離病毒變異序列的方法及其分離的口蹄疫病毒變異序列序列表
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Glu Arg Ala Leu Pro
50
55 60
〈210〉 〈211> 〈212> <213>
126
63
PRT
人工序列
〈400〉 126
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin
20
25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ala Val Thr Val Ser Ala Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Arg Val Leu Ala Gin Lys Thr Glu Arg Pro Leu Pro 50 55 60
〈210〉 127
〈211> 63
〈212〉 PRT
〈213〉 人工序列
〈400〉 127
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ser Leu Cys Arg Ala Ala Asn Val Arg 35 ' '40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Asp Arg Thr Leu Pro
50
55 60
<210〉 128
<211> 63
<212〉 PRT <213>人工序列
〈400〉 128
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Cys His Ala Leu Val Asp Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Glu Arg Ser Leu Pro
50
55 60-種分離病毒變異序列的方法及其分離的口蹄疫病毒變異序列序列表
<210> 129
<211> 63
〈212〉 PRT
<213> 人工序列
<400〉 129
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ala Leu Ser Gly Ala Ala Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Ala Gin Lys Ala Ala Arg Thr Leu Pro 50 55 60
〈210〉 130
〈211> 63
〈212〉 PRT
<213> 人工序列
〈400〉 130
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Asn Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Gly Leu Thr Val Ala Thr Asn Val Arg 35 '40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Glu Arg Thr Leu Pro 50 55 60
<210> 131
<211> 63
<212> PRT 〈213>人工序列
<400> 131
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Gly Asp Gly Leu Ser Ser Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Arg Val Leu Ala Gin Lys Thr Asp Arg Pro Leu Pro
50
〈210〉 132 〈211〉 63
55 60一種分離病毒變異序列的方法及其分離的口蹄疫病毒變異序列序列表
<212> PRT <213〉 人工序列
<400> 132
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Thr Ser Lys Tyr Gly His Ala Arg Ser Ser Lys Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Glu Arg Pro Leu Pro 50 55 60
<210> 133
〈211〉 63
<212> PRT
<213〉 人工序列
<400〉 133
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala I>ys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Gly His Thr Ala Phe Ala Lys Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Arg Val Leu Thr Gin Lys Ala Glu Arg Pro Leu Pro 50 55 60
〈210> 134
<211〉 63
<212> PRT <213>人工序列
〈400〉 134
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ser Val Gly Arg Ala Ala Asn Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Ala Ala Arg Ala Leu Pro 50 55 60
<210> 135
〈211〉 63
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 135
47一種分離病毒變異序列的方法及其分離的口蹄疫病毒變異序列序列表
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu
15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Gly Leu Ser Leu Val Asp Asn Val Arg
35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Glu Arg Thr Leu Pro
50
〈210〉 136
<211〉 63
〈212> PRT <213>人工序列
〈400> 136
55 60
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu
1
5 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin
20
25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ala Leu Ala Val Phe Asp Asn Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Ala Arg Ser Leu Pro 50 55 60
<210〉 137
<211〉 63
〈212〉 PRT <213>人工序列
〈400〉 137
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Gly Leu Cys Pro Ser Ala Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Arg Val Leu Ala Gin Lys Thr Asp Arg Pro Leu Pro 50 55 60
〈210> 138
<211〉 63
〈212〉 PRT
〈213〉 人工序列
<400〉 138
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30一種分離病毒變異序列的方法及其分離的口蹄疫病毒變異序列序列表
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ala Val Ser Arg Phe Ala Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Arg Val Leu Thr Gin Lys Thr Ala Arg Thr I>eu Pro 50 55 60
<210〉 139
<211〉 63
〈212〉 PRT 〈213>人工序列
<400> 139
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ser Val Ser Ala Ala Ala Thr Val Arg 35 ' '40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Ala Gin Lys Ala Ala Arg Thr Leu Pro '50 55 60
〈210〉 140
〈211> 63
<212〉 PRT
〈213〉 人工序列
〈400> 140
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Cys Leu Ser Ala Val Thr Thr Val Arg 35 ' 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Asp Arg Thr Leu Pro 50 55 60
〈210> 141
<211〉 63
<212> PRT 〈213>人工序列
〈400〉 141
Glu Thr Gin 1
Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 5 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Gly Leu Cys Ala Thr Pro Lys Val Arg
35
40 45一種分離病毒變異序列的方法及其分離的口蹄疫病毒變異序列序列表 Gly Asp Leu Arg Val Leu Thr Gin Lys Thr Glu Arg Thr Leu Pro '50 55 60
〈210〉142
〈211〉63
<212〉PRT
〈213〉人工序列
〈400>142
Glu Thr Gin Thr1
10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ser Asp Thr Arg Leu Ser Lys Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Arg Val Leu Thr Gin Lys Ala Ala Arg Pro Leu Pro 50 55 60
<210> 143
〈211〉 63
<212> PRT
<213> 人工序列
〈柳〉143
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ala His Thr Val Val Pro Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Uu Gin Val Leu Ala Gin I>ys Ala Ala Arg Thr Leu Pro 50 55 60
〈210〉 144
<211> 63
〈212〉 PRT 〈213>人工序列
<400> 144
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ser His Cys Gly Leu His Asn Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Ala Gin Lys Thr Glu Arg Thr Leu Pro 50 55 60
<210> 145 〈211〉 63一種分離病毒變異序列的方法及其分離的口蹄疫病毒變異序列序列表
<212〉 PRT 〈213〉人工序列
〈400〉 145
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ser Leu Ser Leu Phe His Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Ala Gin Lys Thr Glu Arg Thr Leu Pro 50 55 60
〈210〉 146
〈211〉 63
<212> PRT <213>人工序列
〈400> 146
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ala Val Thr Leu lie Ser Asn Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Glu Arg Thr Leu Pro 50 55 60
<210> 147
<211> 63
〈212> PRT
<213> 人工序列
<400〉 147
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ala His Ala Leu Ala Ala Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Ala Gin Lys Ala Glu Arg Thr Leu Pro 50 55 60
〈210〉 148
<211> 63
〈212〉 PRT <213>人工序列
<400> 148
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu一種分離病毒變異序列的方法及其分離的口蹄疫病毒變異序列序列表 5 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Cys Leu Ala Ala Val Ala Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Arg Val Leu Thr Gin Lys Thr Asp Arg Ser Leu Pro 50 55 60
〈210〉 149
<211> 63
<212〉 PRT <213>人工序列
〈400〉 149
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Gly His Ser Ala Val His Asn Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Arg Val Leu Thr Gin Lys Ala Ala Arg Thr Leu Pro 50 55 60
<210> 150
<211〉 63
<212> PRT 〈213〉人工序列
<400> 150
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Cys Val Ser Leu Val Tyr Thr Val Arg 35 4JD 45
Gly Asp Leu Arg Val Leu Thr Gin Lys Thr Ala Arg Thr Leu Pro 50 55 60
〈210〉 151
〈211> 63
<212> PRT <213>人工序列
〈400〉 151
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30-種分離病毒變異序列的方法及其分離的口蹄疫病毒變異序列序列表
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Cys Leu Gly Arg Leu Asp Asn Val Arg 35 4i) 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Ala Ala Arg Ser Leu Pro 50 55 60
<210〉 152
<211> 63
<212〉 PRT
〈213〉 人工序列
〈400> 152
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ala Val Cys Val Met Tyr Thr Val Arg 35 40 ' 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Ala Gin Lys Ala Glu Arg Thr Leu Pro 50 55 60
〈210〉 153
<211〉 63
〈212〉 PRT <213>人工序列
〈400> 153
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 ' 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Cys Val Gly Leu Val Thr Lys Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Ala Arg Ala Leu Pro 50 55 60
<210> 154
〈211〉 63
〈212〉 PRT 〈213>人工序列
〈400〉 154
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu
1
5 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin
20
25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Cys Val Cys Pro Val Ala Lys Val Arg 35 4b 45
Gly Asp Leu Arg Val Leu Ala Gin Lys Thr Glu Arg Thr Leu Pro一種分離病毒變異序列的方法及其分離的口蹄疫病毒變異序列序列表 50 55 60
<210>155
〈211〉63
<212>PRT
〈213>人工序列
<400>155
Glu Thr Gin Thr10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Gly His Ser Gly Leu Ala Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Ala Gin Lys Thr Glu Arg Pro Leu Pro 50 55 60
<210〉 156
<211> 63
<212> PRT
〈213> 人工序列
〈柳〉156
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Gly Glu Ala Ala Ser His Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Arg Val Leu Thr Gin Lys Thr Ala Arg Pro Leu Pro
50
55 60
<210> 157
<211〉 63
<212> PRT
〈213〉 人工序列
<400> 157
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30 '
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Cys Leu Tyr Gly Leu Ser Thr Val Arg 35 ' 40 45
Gly Asp Leu Arg Val Leu Thr Gin Lys Thr Asp Arg Thr Leu Pro 50 55 60
<210〉 158 <211> 63 <212〉 PRT一種分離病毒變異序列的方法及其分離的口蹄疫病毒變異序列序列表
<213〉人工序列 〈400〉 158
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 ' 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Cys Leu Gly Leu Ser Ala Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Ala Gin Lys Thr Asp Arg Ala Leu Pro 50 55 60
<210> 159
〈211> 63
<212> PRT <213>人工序列
〈400> 159
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala I>ys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ser Glu Cys Pro Ser Thr Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Glu Arg Thr Leu Pro 50 55 60
<210> 160
〈211〉 63
<212〉 PRT <213>人工序列
〈400> 160
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ala His Ala Arg Val Asp Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Glu Arg Ala Leu Pro 50 55 60
<210> 161
〈211> 63
〈212〉 PRT
〈213〉 人工序列
〈400> 161
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15一種分離病毒變異序列的方法及其分離的口蹄疫病毒變異序列序列表
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ala His Cvs Ala Val Arg Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Ala Gin Lys Thr Glu Arg Thr Leu Pro 50 55 60
〈210〉 162
<211> 63
〈212〉 PRT
<213> 人工序列
〈400> 162
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ala Leu Asn Leu Met Ser Asn Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Arg Val Leu Thr Gin Lys Thr Glu Arg Thr Leu Pro 50 55 60
〈210> 163
<211> 63
〈212〉 PRT
<213〉 人工序列
<400〉 163
Glu Thr Gin Thr 1
Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 5 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin
20
25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ser Asp Ser Ala Met Asp Lys Val Arg
35
40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Ala Gin Lys Thr Glu Arg Thr Leu Pro 50 55 60
<210> 164
〈211〉 63
<212〉 PRT
〈213〉 人工序列
〈400〉 164
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Tkr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30一種分離病毒變異序列的方法及其分離的口蹄疫病毒變異序列序列表 Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Gly Leu Gly Gly Leu Pro Asn Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Ala Arg Thr Leu Pro 50 55 ' 60
〈210〉 165
〈211〉 63
〈212〉 PRT
<213> 人工序列
〈400> 165
Glu Thr Gin ThrGin Arg Arg His HisThr Asp VslAlaPhe Val Leu
151015
Asp Arg Phe ValArg His Lys Gin ProLeu lie AlaProAls Lys Gin
202530
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Cys Val Cys Pro Leu Ala Asn Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Arg Val Leu Thr Gin Lys Thr Glu Arg Pro Leu Pro '50 55 60
〈210〉 166
〈211〉 63
〈212〉 PRT
<213〉 人工序列
〈400〉 166
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Gly Leu Ser Leu Ala His Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Ala Arg Thr Leu Pro 50 55 60
〈210〉 167
〈211〉 63
<212〉 PRT <213>人工序列
<400〉 167
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu
1
5 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Cys Asp Thr Pro Ser Ser Thr Val Arg 35 4b 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Ala Gin Lys Thr Asp Arg Thr Leu Pro
50
55 60一種分離病毒變異序列的方法及其分離的口蹄疫病毒變異序列序列表
<210> 168
〈211〉 63
〈212> PRT <213>人工序列
<柳〉168
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ser Val Thr Pro Phe His Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Asp Arg Thr Leu Pro 50 55 60
〈210〉 169
〈211> 63
〈212〉 PRT <213>人工序列
<400> 169
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Cys Glu Gly Ala Phe Ala Asn Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Ala Glu Arg Pro Leu Pro '50 55 60
〈210〉 170 〈212〉 PRT <213>人工序列
<■〉 170
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Gly His Thr Ala Phe Ser Thr Val Arg 35 40. 45
Gly Asp Leu Arg Val Leu Thr Gin Lys Thr Ala Arg Ala Leu Pro 50 55 60
<210> m
<212〉 PRT <213>人工序列
<400〉 171一種分離病毒變異序列的方法及其分離的口蹄疫病毒變異序列序列表
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu
15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin
20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ser Val Thr Leu Val Asp Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Ala Gin Lys Thr Glu Arg Ala Leu Pro
50
55 60
〈210> 172
〈211〉 63
〈212> PRT <213>人工序列
〈400> 172
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ser Glu Asp Val Val Asp Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Ala Arg Thr Leu Pro 50 55 60
〈210>173
〈211〉63
〈212〉PRT
<213>人工序列
<400>173
Glu Thr Gin Thr1
10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Gin Ser Lys Tyr Ala Asp Cys Arg Leu Thr Lys Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Ala Gin Lys Thr Ala Arg Pro Leu Pro 50 55 60
〈210〉 174
〈211〉 63
<212> PRT
〈213〉 人工序列
〈400〉 174
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30-種分離病毒變異序列的方法及其分離的口蹄疫病毒變異序列序列表
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Gly Leu Gly Ala Val Ser Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Ala Gin Lys Thr Ala Arg Ser Leu Pro '50 55 60
〈210〉 175
<211〉 63
〈212〉 PRT <213〉人工序列
<400> 175
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Gly Leu Cys Gly Val Asp Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Arg Val Leu Thr Gin Lys Thr Ala Arg Thr Leu Pro
50
〈210〉 176
<211> 63
<212> PRT
<213> 人工序列
<400〉 176
55 60
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ser Leu Cys Ala lie Asn Lys Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Arg Val Leu Thr Gin Lys Thr Ala Arg Thr Leu Pro 50 55 60
〈210〉 177
〈211〉 63
〈212〉 PRT 〈213〉人工序列
<400〉 177
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ala His Ser Gly Ala Pro Thr Val Arg
35
40 45一種分離病毒變異序列的方法及其分離的口蹄疫病毒變異序列序列表 Gly Asp Leu Gin Val Leu Ala Gin Lys Thr Glu Arg Pro Leu Pro 50 55 60
<210> 178
〈211> 63
<212> PRT
〈213〉 人工序列
〈柳〉178
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Cys Asp Thr Ala Leu Asn Asn Val Arg 35 4b 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Glu Arg Pro Leu Pro
50
55 60
〈210〉 179 <211> 63 <212> PRT <213>人工序列
〈400〉 179
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Gly Leu Ser Thr Ala Asp Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Ala Gin Lys Thr Glu Arg Thr Leu Ser 50 55 60
<210〉 180
〈211〉 63
<212> PRT
〈213〉 人工序列
<400> 180
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Cys Val Cys Arg lie Ser Thr Val Arg 35 4b 45
Gly Asp Leu Arg Val Leu Thr Gin Lys Thr Asp Arg Thr Leu Pro
50
<210> 181 〈211〉 63
55 60一種分離病毒變異序列的方法及其分離的口蹄疫病毒變異序列序列表
<212> PRT 〈213>人工序列
〈400〉 181
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu
1
5 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ala His Ala Val Thr Ser Thr Val Arg 35 40 45
Gly Asp Leu Arg Val Leu Thr Gin Lys Thr Ala Arg Thr Leu Pro
50
〈210> 182
<211> 63
<212> PRT <213>人工序列
〈400> 182
55 60
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu
1
5 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Gly Val Ala Leu Ala His Thr Val Arg 35 40. 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Glu Arg Thr Leu Pro
50
<210〉 183
〈211〉 63
<212> PRT
〈213〉 人工序列
<■> 183
55 60
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ala Leu Ala Ala Leu Ser Lys Val Arg 35 ' '40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Ala Arg Ala Leu Pro 50 55 60
<210> 184
〈211〉 63
<212> PRT
〈213〉 人工序列
〈400〉 184
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu-種分離病毒變異序列的方法及其分離的口蹄疫病毒變異序列序列表5 1015Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin20 2530Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Cys Leu Thr Ala Phe Ala Asn Val Arg 35 ' '40 45Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Asp Arg Thr Leu Pro 50 55 60<210> 185<211> 63<212> PRT<213> 人工序列〈400〉 185Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15Asp Arg Phe Val Arg His Lys His Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ala Glu Ala Ala Phe Pro Asn Val Arg 35 '40 45Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Glu Arg Thr Leu Pro 50 55 60<210> 186<211> 63<212〉 PRT<213〉 人工序列〈400> 186Glu Thr Gin ThrGin Arg Arg His HisThr Asp ValAla Phe Val151015Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ser Val Ser lie Val His Asn Val Arg 35 40 45Gly Asp Leu Arg Val Leu Thr Gin Lys Thr Glu Arg Thr Leu Pro 50 55 60〈210〉 187〈211〉 63〈212〉 PRT <213〉人工序列〈400〉 187Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30一種分離病毒變異序列的方法及其分離的口蹄疫病毒變異序列序列表Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Cys Val Ala Leu Leu Ala Asn Val Arg 35 ' 4i) 45Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Asp Arg Thr Leu Pro 50 55 60<210〉 188<211> 63〈212〉 PRT <213〉人工序列<400> 188Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Gly Val Ser Leu Leu Tyr Thr Val Arg 35 40 45Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Ala Arg Pro Leu Pro 50 55 60〈210〉 189〈211〉 63〈212〉 PRT <213〉人工序列〈400> 189Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Gly His Gly Pro lie Ala Asn Val Arg 35 40 45Gly Asp Leu Arg Val Leu Thr Gin Lys Thr Asp Arg Thr Leu Pro 50 55 60<210> 190<211> 63<212〉 PRT<213> 人工序列<400> 190Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ser Val Thr Pro Ala Thr Asn Val Arg 35 ' 40 45Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Glu Arg Thr Leu Pro一種分離病毒變異序列的方法及其分離的口蹄疫病毒變異序列序列表 50 55 60〈210> 191〈211〉 63〈212> PRT 〈213>人工序列<400〉 191Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin2025 30Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Cys Val Ser Pro Phe Asn Thr Val Arg3540 45Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Glu Arg Pro Leu Pro50〈210〉 192〈211> 63<212> PRT 〈213〉人工序列<400〉 19255 60Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Gly His Cys Ala Ala Asn Asn Val Arg 35 40 45Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Asp Arg Thr Leu Pro 50 55 60〈210> 193<211> 63〈212〉 PRT <213>人工序列〈400〉 193Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ser Val Ser Leu Ala Ser Thr Val Arg 35 40 45Gly Asp Leu Arg Val Leu Thr Gin Lys Thr Glu Arg Ala Leu Pro 50 55 60<210> 194〈21D 63<212〉 PRT <213〉人工序列一種分離病毒變異序列的方法及其分離的口蹄疫病毒變異序列序列表<400〉 194PheGlu Thr 1Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala 5 10Val Leu 15Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin20 2530Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Cys His Ser Val Val Ser Thr Val Arg 35 40 45Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Asp Arg Ala Leu Pro50〈210> 195<211> 63〈212〉 PRT<213〉 人工序列<400> 19555 60Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Met Ser lie lie Val Asn Ala Val Arg 35 40 45Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Thr Asp Arg Pro Leu Pro 50 55 60<210> 196<211> 63〈212> PRT<213〉人工序列<400〉 196Glu Thr Gin ThrGin Arg Arg HisHis Thr Asp ValAla Phe Val151015Asp Arg Phe Val Lys His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin 20 25 30Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Asp Val lie Thr Leu Gin Ala Val Arg 35 40 45Gly Asp Leu Arg Val Leu Ala Gin Lys Ala Ala Arg Pro Leu Pro5055 60<210> 〈211〉 <212〉 〈213>19763PRT人工序列〈400〉 197Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu 15 10 15一種分離病毒變異序列的方法及其分離的口蹄疫病毒變異序列序列表
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Ala His Cys Ala Ala Asp Thr Val Arg35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Ala Gin Lys Ala Ala Arg Thr Leu Pro50 55 60
<210> 198
〈211〉 63
〈212〉 PRT〈213〉人工序列
〈400〉 198
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr lie Asp Ala His Ser Val Asp Val Arg35 40 45
Gly Asp Leu Arg Val Leu Ala Gin Lys Thr Ala Arg Ser Leu Pro50 55 60
〈210> 199
<211> 63
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 199
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr A印Val Ala Phe Val Leu15 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Met lie lie Ser Asn Leu Gly Val Arg35 40 45
Gly Asp Leu Arg Val Leu Ala Gin Lys Ala Ala Arg Ala Leu Pro50 55 60
<210> 200
〈211〉 63
<212> PRT
〈213〉 人工序列
〈400〉 200
Glu Thr Gin Thr Gin Arg Arg His His Thr Asp Val Ala Phe Val Leu
1
5 10 15
Asp Arg Phe Val Arg His Lys Gin Pro Leu lie Ala Pro Ala Lys Gin20 25 30
Leu Leu Pro Pro Ser Lys Tyr Val lie lie Met Leu Ala Asn Val Arg一種分離病毒變異序列的方法及其分離的口蹄疫病毒變異序列序列表35 40 45
Gly Asp Leu Gin Val Leu Thr Gin Lys Ala Ala Arg Pro Leu Pro50 55 60
<210> 201
<211〉 189
<212〉 DNA〈213>人工序列
〈400〉 201
gaaactcaaa ctcaaagaag acatcatact gatgtcgctt tcgttttgga tagatttgttagacataaac agccattgat tgctccagct aaacaattgt tgccaccatc taagtackstswwdstv鼎d yknmtamwgt cagaggtgat ttgcragttt tgrctcaaaa arctgmwagancwttgcca
60120180189
〈210〉 202
〈211〉 189
<212> DNA
〈213> 人工序列
<400> 202
gaaactcaaa ctcaaagaag acatcatact gatgtcgctt tcgttttgga tagatttgtt 60
agacataaac agccattgat tgctccagct肪acaattgt tgccaccatc taagtacvrm 120
vnnvnnvnnv rmvmivrmgt cagaggtgat ttgcragttt tgrctcaaaa arctg,aga 180
ncwttgcca 189
〈210〉 203
<211> 59
<212> 靈<213>人工序列
<■> 203
tctctcgaga aaagagaaac tcaaactcaa agaagacatc atactgatgt cgctttcgt 59
<210> 204
<211> 59
<212> DNA<213〉人工序列
〈400〉 204
catactgatg tcgctttcgt tttggataga tttgttagac ataaacagcc attgattgc 159
〈210〉 205
〈211> 56
〈212〉 DNA
<213> 人工序列
〈400〉 205
gtacttagat ggtggcaaca attgtttagc tggagcaatc aatggctgtt tatgtc 156
〈210> 206
<211> 56
<212〉 DNA<213>人工序列
〈400〉 206
tgttgccacc atctaagtac kstswwdstv nwdyknmtam wgtcagaggt gatttg 56
〈210> 207一種分離病毒變異序列的方法及其分離的口蹄疫病毒變異序列序列表
<211><212〉<213>
63腿
人工序列
<400> 207
cctctagatc atggcaawgn tctwkcagyt ttttgagyca aaactygcaa atcacctctt
〈210〉208
<211〉56
<212>DNA
<213〉人工序列
<400〉208
tgttgccacc atctaagtac vmrvnnvrmv rmvrmvnnvn ngtcagaggt gatttg 56
<210〉 209
<211> 28
<212〉 DNA〈213〉人工序列
<400〉 209
gcgaattcaa aaatgagatt tccttcaa 28
<210〉 210
〈211〉 40
<212> 腿
〈213〉 人工序列
<400〉 210
cctctatact ttaacgtcaa ggagaaaaaa ccccggatcg 40
<210> 211
<211> 40
<212〉 DNA〈213〉人工序列
<400〉 211
ggcgtgaatg taagcgtgac ataactaatt acatgatgcg 40
<210> 212
<211〉 20
〈212> DNA<213>人工序列
〈400〉 212
taatacgact cactataggg 20
<210〉 213
<211〉 22
<212> DNA〈213〉人工序列
〈400〉 213
taggatcagc gggtttaaac tc 2權(quán)利要求
1、一種分離病毒變異序列的方法，其特征在于該方法包括如下步驟(1)分析對比數(shù)據(jù)庫中該病毒的氨基酸序列，找出該病毒抗原決定簇位點的編碼序列以及高可變區(qū)域的編碼序列，設(shè)計混合多肽，并設(shè)計該混合多肽的隨機引物；(2)將上述隨機引物進行不對稱PCR拼接；(3)將上述拼接產(chǎn)物與酵母分泌表達信號肽序列構(gòu)建成融合基因；將該融合基因和大腸桿菌-釀酒酵母穿梭載體分別進行雙酶切，大腸桿菌-釀酒酵母穿梭載體在雙酶切位點間再多進行一次酶切，且酶切后用牛小腸堿性磷酸酶處理；將融合基因的雙酶切產(chǎn)物和大腸桿菌-釀酒酵母穿梭載體的三酶切產(chǎn)物連接；(4)將上述連接產(chǎn)物電激轉(zhuǎn)化大腸桿菌，得到質(zhì)粒，酶切處理該質(zhì)粒后，再次電激轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)化產(chǎn)物經(jīng)篩選后，挑取克隆進行測序，即分離得到病毒變異序列。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述分離方法，其特征在于所述病毒為口蹄疫病毒。
3、 根據(jù)權(quán)利要求2所述分離方法，其特征在于步驟(1)中，所述隨機引 物為如SEQIDNo: 203、 SEQIDNo: 204、 SEQIDNo: 205、 SEQIDNo: 206和SEQIDNo: 207所示核苷酸序列，或如SEQIDNo: 203、 SEQIDNo: 205、 SEQIDNo: 206、 SEQIDNo: 207和SEQIDNo: 208所示核苷酸序列。
4、 根據(jù)權(quán)利要求2所述分離方法，其特征在于步驟(3)中，所述酵母分 泌表達信號肽序列為釀酒酵母a凌配因子的信號肽序列。
5、 根據(jù)權(quán)利要求2所述分離方法，其特征在于步驟(3)中，所述雙酶切 的酶切位點為EcoRI和Xbal，所述三酶切的酶切位點為EcoRI、 Xhol和Xbal。
6、 根據(jù)權(quán)利要求2所述分離方法，其特征在于步驟(4)中，所述酶切處理是用限制性內(nèi)切酶Notl和牛小腸堿性磷酸酶處理質(zhì)粒。
7、 根據(jù)權(quán)利要求2所述分離方法，其特征在于步驟(4)中，所述篩選轉(zhuǎn) 化子的篩選平板上加有花青素。
8、 利用權(quán)力要求2方法分離得到的口蹄疫病毒變異序列，其氨基酸序列 如SEQ ID NO: 101 200所示。
9、 根據(jù)權(quán)利要求8所述口蹄疫病毒變異序列，其特征在于編碼所述氨基 酸序列的核苷酸序列如SEQ ID NO: 1 100所示。
全文摘要
本發(fā)明公開一種分離病毒變異序列的方法及其分離的口蹄疫病毒變異序列，該方法通過先對已報道的病毒變異區(qū)域進行分析，并利用隨機肽技術(shù)，分離得到能夠模擬病毒變異的多條多肽，將這些多肽用于疫苗研發(fā)，可使得疫苗研制能兼顧病毒的變異，起到未雨綢繆的作用。本發(fā)明還得到口蹄疫病毒的變異序列，其氨基酸序列如SEQ ID NO101～200所示，對應(yīng)的核苷酸序列如SEQ ID NO1～100所示。本發(fā)明的方法操作簡單，且可高效地發(fā)現(xiàn)病毒新的變異序列，有力地保障了全國畜禽養(yǎng)殖業(yè)，為廣譜疫苗的開發(fā)開辟新途徑，也為開發(fā)禽流感疫苗、愛滋病疫苗等提供了新的技術(shù)方向。
文檔編號C12P19/00GK101629195SQ20091004162
公開日2010年1月20日 申請日期2009年8月4日 優(yōu)先權(quán)日2009年8月4日
發(fā)明者于雯雯, 劉秋云, 周慶豐, 張瀟瀟, 王建兵, 陽新明, 馬小倩, 曄 高 申請人:中山大學(xué);廣東溫氏食品集團有限公司