專利名稱：一種制備l-天冬氨酸的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及用富馬酸發(fā)酵液制備L-天冬氨酸的方法。
背景技術(shù)：
L-天冬氨酸(L-Asparticacid，縮寫為L-Asp)，化學名稱a-氨基丁二酸。L-天冬氨 酸作為一種常見的酸性氨基酸，在醫(yī)藥、食品、美容、化工、材料等方面具有非常廣泛 的用途。以天冬氨酸為唯一單體的新型可生物降解高分子材料聚天冬氨酸應(yīng)用越來越廣 泛；天冬氨酸還是新型甜味劑阿斯巴甜的兩大原料之一，同時它還是L-賴氨酸及嘌呤、 嘧啶堿基的合成前體，作為K+、 Mg^離子載體向心肌輸送電解質(zhì)，用于改善心肌功能。 因此，天冬氨酸市場應(yīng)用前景越來越被人所看好。
現(xiàn)有技術(shù)中，L-天冬氨酸的生產(chǎn)方法主要有蛋白質(zhì)水解提取法、微生物發(fā)酵法、化 學合成法、酶催化轉(zhuǎn)化法。
蛋白質(zhì)水解提取法是從天然蛋白質(zhì)的水解液中提取L-天冬氨酸，但由于其產(chǎn)量低， 產(chǎn)物分離純化困難，成本高，現(xiàn)己很少使用。
微生物發(fā)酵法主要是利用微生物利用葡萄糖等作為碳源直接發(fā)酵得到天冬氨酸的 方法。日本科學家在微生物發(fā)酵法生產(chǎn)天冬氨酸方面開展了大量的工作，內(nèi)尾等報道用 ^^v.^avwm的谷氨酸缺陷型突變株，在含3.6%葡萄糖的培養(yǎng)基中，30'C培養(yǎng)4天，生產(chǎn) 天冬氨酸4 g/L (內(nèi)尾良輔等特許公報38836(1972));椎尾等用Brev. y m;wm的檸檬酸 合成酶缺失株，在含3.6%葡萄糖的培養(yǎng)基中，3(TC培養(yǎng)2天，生產(chǎn)天冬氨酸10.6g/L (椎 尾等.公開特許公報，昭57-107184);后來椎尾等還進一步用5^v./av,的丙酮酸激酶缺 失株，在限制生物素條件下，培養(yǎng)2天，由100g/L葡萄糖生產(chǎn)天冬氨酸22.6g/L(椎尾等， 第61回日本生化學會大學抄錄，P.795(1988));后藤等用5%葡萄糖培養(yǎng)基培養(yǎng)佛拉氏 鏈霉菌生成天冬氨酸1.0g/L (后藤等公開特許公報28836(1976))。微生物發(fā)酵法的缺 點在于其生產(chǎn)周期均較長，產(chǎn)酸率較低，難于實現(xiàn)L-天冬氨酸的工業(yè)化連續(xù)生產(chǎn)。
國內(nèi)外文獻報道的化學合成工藝主要有兩種， 一種是由馬來酸酐、氨氣為原料，分 別以二氧六環(huán)、二甲苯為溶劑進行一系列反應(yīng)，最后催化加氫合成DL-天冬氨酸；第二 種方法是以丙二酸二乙酯、醋酸、亞硝酸鈉為原料進行一系列反應(yīng)來合成。但這兩種方法工藝流程均特別長，難以大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)，同時上述工藝副產(chǎn)物多，且產(chǎn)物為光學 消旋體DL-天冬氨酸，需進行光學拆分，成本高。
酶催化轉(zhuǎn)化法是目前產(chǎn)業(yè)化制備天冬氨酸的主要方法，是以富馬酸銨或富馬酸和氨
水為原料，在天冬氨酸酶的催化作用下制得天冬氨酸。如木住等用含6.5%富馬酸銨的培 養(yǎng)基，培養(yǎng)大腸桿菌突變株，37'C振蕩培養(yǎng)1天后，靜置3天，生成天冬氨酸56 g/L (木 住等特許公報38831 (1978));王雪根等釆用含富馬酸銨0.4%、富馬酸鈉2%以及其 他營養(yǎng)物的培養(yǎng)基培養(yǎng)大腸桿菌ATCC11303，采用固定細胞和游離細胞催化富馬酸銨轉(zhuǎn) 化為L-天冬氨酸，摩爾轉(zhuǎn)化率為98% 99% (工業(yè)微生物，2000, 30(1): 32 35.)。對于 產(chǎn)天冬氨酸酶的微生物而言大腸桿菌等微生物在其培養(yǎng)產(chǎn)酶過程中均需加入富馬酸 (鹽)作為產(chǎn)酶培養(yǎng)的必須條件，至富集產(chǎn)酶后再用于天冬氨酸的催化生產(chǎn)。
而現(xiàn)有技術(shù)的工藝中所用的富馬酸原料均來源于順酐異構(gòu)法制備，為石油基產(chǎn)品， 而隨著化石資源的日益緊缺，其生產(chǎn)成本日益偏高；同時隨著化石資源的枯竭也必將影 響L-天冬氨酸的可持續(xù)性生產(chǎn)。于是，富馬酸原料來源的變更將成為大勢所趨，需要形 成一個全新的生產(chǎn)L-天冬氨酸的工藝路線。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的技術(shù)目的在于提供一種利用新的制備L-天冬氨酸的方法，該方法可以避免 使用現(xiàn)有技術(shù)的石油基來源的富馬酸底物，將發(fā)酵法制備富馬酸的物料及產(chǎn)物最大化地 合理利用，通過該方法天冬氨酸來源于糖基原料，比當前發(fā)酵法制備天冬氨酸的轉(zhuǎn)化率 高，可以大幅節(jié)約生物來源L-天冬氨酸的制備成本。
為了實現(xiàn)本發(fā)明的技術(shù)目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下
一種制備L-天冬氨酸的方法，其特征在于將微生物發(fā)酵法得到的富馬酸發(fā)酵液的清 液部分用于富集天冬氨酸酶微生物的培養(yǎng)，收獲富集天冬氨酸酶的微生物菌體，將其添 加至由富馬酸發(fā)酵液的沉淀部分制備而得的富馬酸銨底物中進行酶催化反應(yīng)得到L-天 冬氨酸。
本發(fā)明所述的微生物發(fā)酵法得到的富馬酸發(fā)酵液指的是現(xiàn)有技術(shù)中任何的利用微 生物發(fā)酵制備富馬酸的方法得到的富馬酸發(fā)酵液，該發(fā)酵液主要包含沉淀部分和清液部 分。其中，所述的沉淀部分包括由于在富馬酸培養(yǎng)過程中為了防止富馬酸產(chǎn)物抑制而加 入的中和劑碳酸鈣與產(chǎn)物富馬酸結(jié)合而得到的富馬酸鈣沉淀，以及發(fā)酵微生物菌體；所 述的清液即殘余的發(fā)酵培養(yǎng)基，主要含有少量溶解的富馬酸以及殘余葡萄糖等未被完全
4利用的營養(yǎng)成分等，其中富馬酸的含量為0.3% 0.8%(w/v)，葡萄糖含量為0 l%(w/v);
本發(fā)明所述的產(chǎn)天冬氨酸酶微生物為現(xiàn)有技術(shù)中任何可以利用富馬酸為誘導底物 產(chǎn)天冬氨酸酶的微生物菌種，主要包括大腸桿菌；
本發(fā)明所述的將微生物發(fā)酵法得到的富馬酸發(fā)酵液的清液部分用于培養(yǎng)產(chǎn)天冬氨 酸酶微生物的富集培養(yǎng)并產(chǎn)酶的方法為
(1) 配制用于產(chǎn)天冬氨酸酶微生物的產(chǎn)酶培養(yǎng)基 將發(fā)酵法制備富馬酸工藝的清液部分，加入產(chǎn)天冬氨酸酶微生物培養(yǎng)必需的營養(yǎng)物
質(zhì)，配制成產(chǎn)酶培養(yǎng)基；
其中，所述產(chǎn)天冬氨酸酶培養(yǎng)基所需添加的營養(yǎng)物質(zhì)包括蛋白胨0 6g/L，牛肉 膏0 4g/L，玉米干粉0 10g/L，硫酸鎂0 0.25 g/L，硫酸二氫鉀0 0.5 g/L，氯化鈉 0 1g/L， pH7.0 (用氨水調(diào)節(jié))；
(2) 富集天冬氨酸酶微生物的培養(yǎng) 取一環(huán)生長良好的斜面種子于產(chǎn)酶培養(yǎng)基中，37 °C， 180r/min下恒溫搖床培養(yǎng)12
16h得到種子液。將種子液以10% (v/v)接種量轉(zhuǎn)接到產(chǎn)酶培養(yǎng)基中進行擴大培養(yǎng)，溫 度37'C，通風0.6 0.8 vvm，攪拌轉(zhuǎn)速150 r/min，培養(yǎng)14 16h，收獲菌體細胞。
本發(fā)明所述的由富馬酸發(fā)酵液的沉淀部分制備而得的富馬酸銨底物的制備方法為 按照富馬酸鈣與硫酸銨的摩爾比為1:L2 1:1.5的比例，向富馬酸發(fā)酵液中的固體沉淀 部分中加入硫酸銨，在8(TC的條件下反應(yīng)1 2小時，結(jié)束后過濾硫酸鈣、菌體細胞等 固體物質(zhì)獲得富馬酸銨溶液，并將其濃縮至100 300g/L。
本發(fā)明所述的酶催化反應(yīng)制備L-天冬氨酸的方法為將發(fā)酵獲得的產(chǎn)天冬氨酸酶微 生物細胞(濕重)按1% 5%的添加量加入到富馬酸銨底物中，置于溫度為30 37'C， 攪拌轉(zhuǎn)速50 100r/min，轉(zhuǎn)化反應(yīng)3 5小時，過濾除菌體，濾液中加入硫酸調(diào)pH至2.8 2.9，獲得L-天冬氨酸晶體。
本發(fā)明的有益效果在于 (l)天冬氨酸產(chǎn)業(yè)的傳統(tǒng)制備方法中所使用的富馬酸底物來源于順酐異構(gòu)法制備， 為石油基產(chǎn)品，而隨著化石資源的日益緊缺，利用該方法生產(chǎn)成本日益偏高；而傳統(tǒng)的 富馬酸發(fā)酵產(chǎn)業(yè)中，發(fā)酵液的清液部分往往被作為廢水處理，而其中少量的富馬酸及葡 萄糖等被白白浪費而未被有效利用。通常，現(xiàn)有技術(shù)中富馬酸發(fā)酵液的清液中的富馬酸 的含量為0.3% 0.8%，可作為微生物產(chǎn)天冬氨酸酶的培養(yǎng)基中需要添加的誘導物富馬 酸。因此，本發(fā)明將發(fā)酵富馬酸結(jié)束后的發(fā)酵清液進行再次利用，用于富集天冬氨酸酶微生物的培養(yǎng)，變廢為寶，節(jié)約了天冬氨酸制備工藝的生產(chǎn)成本；
(2) 本發(fā)明所述的富馬酸發(fā)酵液的沉淀部分通過加入硫酸銨、過濾等得到的富馬 酸銨底物溶液，可以直接用于酶轉(zhuǎn)化反應(yīng)生產(chǎn)L-天冬氨酸；而且富馬酸銨底物的來源也 是可再生的糖基資源，更加有利于L-天冬氨酸的可持續(xù)性生產(chǎn)；
(3) 本發(fā)明直接利用富馬酸發(fā)酵液制備天冬氨酸酶及L-天冬氨酸，使用于現(xiàn)有技 術(shù)中任何可產(chǎn)天冬氨酸酶的微生物，因此沒有任何的微生物的使用限制，適用領(lǐng)域廣； 而且無論從酶轉(zhuǎn)化底物還是產(chǎn)酶培養(yǎng)基的來源，都是有效結(jié)合了富馬酸發(fā)酵工業(yè)的現(xiàn)有 工藝，且無需額外處理，有效地降低L-天冬氨酸的生產(chǎn)成本，具備優(yōu)異的工業(yè)化生產(chǎn)前
旦
豕；


圖l制備L-天冬氨酸的工藝流程圖
具體實施例方式
實施例1
富馬酸發(fā)酵液
采用米根霉(i /^o;myoo;z^ME-F12)菌株，發(fā)酵培養(yǎng)基配方為葡萄糖130g/L， 尿素0.06 g/L， KH2 P04 0.6 g/L， MgS04-71120 0.5 g/L， ZnS04 .7H20 0. 0176 g/L， FeS04 '71120 0.000498 g/L， CaC03為葡萄糖濃度的60。/。 ， pH為5. 5。發(fā)酵條件見文獻(中 國生物工程雜志，2008,28(4): 59 64)。發(fā)酵結(jié)束后，發(fā)酵液中富馬酸(鈣鹽)濃度為 66.5 g/L，殘余葡萄糖濃度7.8 g/L，清液中富馬酸濃度為4.6 g/L。 菌種大腸桿菌(Eco"ATCC 11303)
(1) 配制用于產(chǎn)天冬氨酸酶微生物的產(chǎn)酶培養(yǎng)基
向富馬酸發(fā)酵液的清液在其中加入營養(yǎng)物質(zhì)牛肉膏2g/L，蛋白胨6g/L，硫酸鎂 0.25 g/L，硫酸二氫鉀0.5 g/L，氯化鈉1 g/L，用氨水調(diào)節(jié)至pH 7.0;
(2) 富集天冬氨酸酶微生物的培養(yǎng) 取一環(huán)生長良好的斜面種子于裝有30 mL上述產(chǎn)酶培養(yǎng)基的250 mL搖瓶中，置于
溫度為37°C、轉(zhuǎn)速為180r/min的搖床上，震蕩培養(yǎng)12h得到種子液；將種子液以10% (v/v)接種量轉(zhuǎn)接到產(chǎn)酶培養(yǎng)基中進行擴大培養(yǎng)，溫度37。C，通風0.8wm，攪拌轉(zhuǎn)速 150r/min，培養(yǎng)16h，收獲菌體細胞。(3) 富馬酸銨底物的制備
按照富馬酸鈣與硫酸銨的摩爾比為1:1.2的比例，向富馬酸發(fā)酵液中的固體沉淀部 分中加入硫酸銨，在8(TC的條件下攪拌反應(yīng)1小時，將過濾獲得的富馬酸銨溶液稀釋至 100 g/L (以富馬酸計)，加入氨水調(diào)整pH至8.5。
(4) 細胞酶催化轉(zhuǎn)化產(chǎn)L-天冬氨酸
向轉(zhuǎn)化底物中加入1% (w/v)的富集天冬氨酸酶的菌體(濕重)，在溫度37'C， 攪拌轉(zhuǎn)速50r/min的條件下，轉(zhuǎn)化3小時結(jié)束反應(yīng)，過濾除菌體細胞，加入硫酸調(diào)整濾 液pH值至2.85，收集L-天冬氨酸晶體。
(5) 結(jié)果如表l
表l轉(zhuǎn)化結(jié)果
實驗富馬酸濃度L-天冬氨酸質(zhì)量轉(zhuǎn)化率
NOg/Lg%
11008282
實施例2
本實施例與實施例l方法相同，條件改變。 富馬酸發(fā)酵液
采用米根霉(i Wzo; ^ or少zae ME-F12)菌株，發(fā)酵培養(yǎng)基配方為葡萄糖130 g/L， 尿素0.06 g/L， KH2P04 0.6 g/L， MgS04'7H20 0.5 g/L， ZnS04.7H20 0.0176 g/L， FeS04 -7H20 0.000498 g/L， CaC03為葡萄糖濃度的60%, pH為5.5。發(fā)酵條件見文獻(中 國生物工程雜志，2008， 28(4): 59 64)。發(fā)酵結(jié)束后，發(fā)酵液中富馬酸(鈣鹽)濃度為 62g/L，殘余葡萄糖濃度10.3 g/L，清液中富馬酸濃度為4,2g/L。
菌種大腸桿菌(￡.co/z'ATCC 11303)
(1) 配制用于產(chǎn)天冬氨酸酶微生物的產(chǎn)酶培養(yǎng)基
向富馬酸發(fā)酵液的清液中加入營養(yǎng)物質(zhì)玉米干粉10 g/L，蛋白胨4 g/L， pH 7.0 (用氨水調(diào)節(jié))；
(2) 富集天冬氨酸酶細胞的培養(yǎng)
取一環(huán)生長良好的斜面種子于裝有30 mL上述產(chǎn)酶培養(yǎng)基的250 mL搖瓶中，置于 溫度為37"、轉(zhuǎn)速為180r/min的搖床上，震蕩培養(yǎng)16h得到種子液；將種子液以10% (v/v)接種量轉(zhuǎn)接到產(chǎn)酶培養(yǎng)基中進行擴大培養(yǎng)，溫度37'C，通風0.6wm，攪拌轉(zhuǎn)速 150r/min，培養(yǎng)14h，收獲菌體細胞。
7(3) 富馬酸銨底物的制備
按照富馬酸鈣與硫酸銨的摩爾比為1:1.5的比例，向富馬酸發(fā)酵液中的固體沉淀部 分中加入硫酸銨，在80'C的條件下攪拌反應(yīng)2小時，將過濾獲得的富馬酸銨溶液濃縮至 200g/L (以富馬酸計)，加入氨水調(diào)整pH至8.5。
(4) 細胞酶催化轉(zhuǎn)化產(chǎn)L-天冬氨酸
向轉(zhuǎn)化底物中加入2% (w/v)的富集天冬氨酸酶的菌體(濕重)，在溫度30°C， 攪拌轉(zhuǎn)速100 r/min的條件下，轉(zhuǎn)化5小時結(jié)束反應(yīng)，過濾除細胞，加入硫酸調(diào)整濾液 pH值至2.8，收集L-天冬氨酸晶體。
(5) 結(jié)果如表2
表2轉(zhuǎn)化結(jié)果
實驗富馬酸濃度L-天冬氨酸質(zhì)量轉(zhuǎn)化率
NOg/Lg/L%
220018492
實施例3
本實施例與實施例1方法和菌種、富馬酸發(fā)酵液來源相同，條件改變。
(1) 配制用于產(chǎn)天冬氨酸酶微生物的產(chǎn)酶培養(yǎng)基
向富馬酸發(fā)酵液的清液中加入營養(yǎng)物質(zhì)玉米干粉8 g/L，牛肉膏4 g/L，硫酸鎂0.20 g/L，硫酸二氫鉀0.4g/L ， pH7.0 (用氨水調(diào)節(jié))；
(2) 富集天冬氨酸酶細胞的培養(yǎng)
取一環(huán)生長良好的斜面種子于裝有30 mL上述產(chǎn)酶培養(yǎng)基的250 mL搖瓶中，置于溫 度為37"、轉(zhuǎn)速為180 r/min的搖床上，震蕩培養(yǎng)14 h得到種子液；將種子液以10% (v/v)接種量轉(zhuǎn)接到產(chǎn)酶培養(yǎng)基中進行擴大培養(yǎng)，溫度37'C，通風0.7wm，攪拌轉(zhuǎn)速 150r/min，培養(yǎng)15h，收獲菌體細胞。
(3) 富馬酸銨底物的制備
按照富馬酸鈣與硫酸銨的摩爾比為1:1.4的比例，向富馬酸發(fā)酵液中的固體沉淀部 分中加入硫酸銨，在8(TC的條件下攪拌反應(yīng)1.5小時，將過濾獲得的富馬酸銨溶液濃縮 至300g/L (以富馬酸計)，加入氨水調(diào)整pH至8.5。
(4) 細胞酶催化轉(zhuǎn)化產(chǎn)L-天冬氨酸
向轉(zhuǎn)化底物中加入5% (w/v)的富集天冬氨酸酶的菌體(濕重)，在溫度34°C， 攪拌轉(zhuǎn)速70r/min的條件下，轉(zhuǎn)化4小時結(jié)束反應(yīng)，過濾除細胞，加入硫酸調(diào)整濾液pH值至2.9，收集L-天冬氨酸晶體。 (5)結(jié)果如表3
表3轉(zhuǎn)化結(jié)果
實驗富馬酸濃度L-天冬氨酸質(zhì)量轉(zhuǎn)化率
NOg/Lg/L%
330029498
9
權(quán)利要求
1、一種制備L-天冬氨酸的方法，其特征在于將微生物發(fā)酵法得到的富馬酸發(fā)酵液的清液部分用于富集天冬氨酸酶微生物的培養(yǎng)，收獲富集天冬氨酸酶的微生物菌體，將其添加至由富馬酸發(fā)酵液的沉淀部分制備而得的富馬酸銨底物中進行酶催化反應(yīng)得到L-天冬氨酸。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種制備L-天冬氨酸的方法，其特征在于所述的將微生 物發(fā)酵法得到的富馬酸發(fā)酵液的清液部分用于培養(yǎng)產(chǎn)天冬氨酸酶微生物的富集培養(yǎng)并產(chǎn)酶的方法為(1) 配制用于產(chǎn)天冬氨酸酶微生物的產(chǎn)酶培養(yǎng)基 將發(fā)酵法制備富馬酸工藝的清液部分，加入產(chǎn)天冬氨酸酶微生物培養(yǎng)必需的營養(yǎng)物質(zhì)，配制成產(chǎn)酶培養(yǎng)基；(2) 富集天冬氨酸酶微生物的培養(yǎng) 取一環(huán)生長良好的斜面種子于產(chǎn)酶培養(yǎng)基中，37 °C， 180r/min下恒溫搖床培養(yǎng)12 16h得到種子液；將種子液以10% (v/v)接種量轉(zhuǎn)接到產(chǎn)酶培養(yǎng)基中進行擴大培養(yǎng)，溫 度37。C，通風0.6 0.8 vvm，攪拌轉(zhuǎn)速150r/min，培養(yǎng)14 16h，收獲菌體細胞。
3、 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種制備L-天冬氨酸的方法，其特征在于所述的步驟(1) 中產(chǎn)天冬氨酸酶培養(yǎng)基所必需的營養(yǎng)物質(zhì)包括蛋白胨0 6g/L，牛肉膏0 4g/L，玉 米干粉0 10 g/L，硫酸鎂0 0.25 g/L，硫酸二氫鉀0 0.5 g/L，氯化鈉0 1 g/L， pH 7.0。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種制備L-天冬氨酸的方法，其特征在于所述的由富馬 酸發(fā)酵液的沉淀部分制備而得的富馬酸銨底物的制備方法為按照富馬酸鈣與硫酸銨的 摩爾比為1:1.2 1:1.5的比例，向富馬酸發(fā)酵液中的固體沉淀部分中加入硫酸銨，在80°C 的條件下反應(yīng)1 2小時，結(jié)束后過濾硫酸鈣、菌體細胞等固體物質(zhì)獲得富馬酸銨溶液， 并將其濃縮至100 300 g/L。
5、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種制備L-天冬氨酸的方法，其特征在于所述的酶催化 反應(yīng)制備L-天冬氨酸的方法為將發(fā)酵獲得的產(chǎn)天冬氨酸酶微生物細胞(濕重)按1% 5%的添加量加入到富馬酸銨底物中，置于溫度為30 37°。，攪拌轉(zhuǎn)速50 100r/min， 轉(zhuǎn)化反應(yīng)3 5小時，過濾除菌體，濾液中加入硫酸調(diào)pH至2.8 2.9，獲得L-天冬氨酸 晶體。
6、 根據(jù)權(quán)利要求l、 2、 5之一所述的一種制備L-天冬氨酸的方法，其特征在于所 述的產(chǎn)天冬氨酸酶微生物為大腸桿菌。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種利用富馬酸發(fā)酵液制備天冬氨酸酶以及L-天冬氨酸的方法。方法包括兩個部分，一是富馬酸發(fā)酵液的清液部分培養(yǎng)大腸桿菌生產(chǎn)天冬氨酸酶，二是利用發(fā)酵液的固體沉淀部分富馬酸鈣與硫酸銨反應(yīng)生成富馬酸銨，經(jīng)過濃縮后在天冬氨酸酶的作用下生成L-天冬氨酸。該種方法實現(xiàn)了以糖基路線生產(chǎn)L-天冬氨酸，實現(xiàn)了富馬酸發(fā)酵液全利用以至達到節(jié)能減排的目標，有效的降低了L-天冬氨酸的生產(chǎn)成本，減少了對環(huán)境的污染，使得L-天冬氨酸得到可持續(xù)的生產(chǎn)，具有較廣的工業(yè)化生產(chǎn)前景。
文檔編號C12R1/19GK101586131SQ20091003345
公開日2009年11月25日 申請日期2009年6月12日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月12日
發(fā)明者付永前, 霜 李, 盛曉燕, 振 高, 和 黃 申請人:南京工業(yè)大學