專利名稱：檢測(cè)對(duì)大環(huán)內(nèi)酯-林可酰胺-鏈陽(yáng)性菌素b的可誘導(dǎo)抗性的制作方法
檢測(cè)對(duì)大環(huán)內(nèi)酯_林可酰胺_鏈陽(yáng)性菌素b的可誘導(dǎo)抗性
背景技術(shù)：
現(xiàn)有的許多常規(guī)系統(tǒng)用于對(duì)與患者診斷和治療相關(guān)的微生物學(xué)樣品進(jìn)行測(cè)試。微 生物樣品可來(lái)自各種來(lái)源，包括感染的傷口、生殖器感染、腦脊髓液、血液和膿腫。根據(jù)產(chǎn)生 預(yù)定濃度的細(xì)菌或細(xì)胞懸浮液的規(guī)定程序來(lái)從那些微生物樣品制備接種物。懸浮液的進(jìn)一 步處理則可取決于應(yīng)用的檢測(cè)方法。這些系統(tǒng)例如用于鑒定患者的樣品中存在哪些微生物。典型地在這種系統(tǒng)中，把 試劑置于其內(nèi)存在微生物變色的活性生長(zhǎng)培養(yǎng)物的鑒定盤的吸盤或試孔中?；陬伾淖?或缺乏顏色改變，就能夠通過(guò)利用參照表來(lái)鑒定微生物。已經(jīng)開(kāi)發(fā)了用于微生物的易感性測(cè)試的其他系統(tǒng)。這些系統(tǒng)用于確定樣品中微生 物對(duì)各種治療(如抗生素)的易感性?；谶@些測(cè)驗(yàn)結(jié)果，醫(yī)生由此能夠例如開(kāi)出將成功 殺死或抑制該微生物的抗微生物產(chǎn)品的處方。更具體地，定性易感性測(cè)試產(chǎn)生一種微生物 對(duì)一種特定抗生素是有抗性或是易感性的指示，但是不提供該微生物的易感性或抗性程度 的指示。另一方面，定量易感性測(cè)試則提供抑制該微生物的生長(zhǎng)所需的抗微生物劑的濃度 的指示。術(shù)語(yǔ)最低抑菌濃度(MIC)用于指代抑制該微生物生長(zhǎng)所需的抗微生物劑的最低濃 度。進(jìn)行這些測(cè)試需要自動(dòng)化系統(tǒng)來(lái)最小化技術(shù)人員處理時(shí)間，同時(shí)最小化人為誤差 的可能性。另外，優(yōu)選快速并準(zhǔn)確獲得結(jié)果的自動(dòng)化系統(tǒng)。其公開(kāi)通過(guò)引用合并在此的美國(guó)專利No. 6，096，272、美國(guó)專利No. 6，372，485、和 美國(guó)專利No. 7，115，384描述了這樣一種自動(dòng)化微生物測(cè)試系統(tǒng)，該系統(tǒng)測(cè)試多個(gè)用于鑒 定和易感性的多孔測(cè)試板，且在測(cè)試過(guò)程期間人為干預(yù)最小。此外，該系統(tǒng)進(jìn)行比色型與熒 光型測(cè)試。另外，該系統(tǒng)快速分析積聚的測(cè)試數(shù)據(jù)，以產(chǎn)生準(zhǔn)確的鑒定和/或易感性測(cè)試結(jié)^ ο葡萄球菌屬和/或鏈球菌屬的某些菌株可表達(dá)一種抗生素抗性表型，該表型已知 被稱為可誘導(dǎo)的大環(huán)內(nèi)酯-林可酰胺-鏈陽(yáng)性菌素b(inducible-macrolide-lincosamid e-streptogramin b，iMLSb)。這些微生物顯示具有erm基因，而且只有當(dāng)該微生物生長(zhǎng)于 誘導(dǎo)條件下時(shí)才會(huì)表達(dá)該基因產(chǎn)物。臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)研究所(CLSI)推薦使用“D-測(cè)試 (D-test) ”來(lái)檢測(cè)iMLSb表型。“D-測(cè)試”是基于生長(zhǎng)培養(yǎng)基中存在紅霉素將誘導(dǎo)erm基因 表達(dá)的這一認(rèn)識(shí)。但是為了使“D-測(cè)試”對(duì)于檢測(cè)iMLSb表型有診斷價(jià)值，首先必須對(duì)微生物進(jìn)行測(cè) 試以證實(shí)對(duì)紅霉素的抗性和對(duì)克林霉素的易感性。為了進(jìn)行“D-測(cè)試”，首先必須制備該測(cè)試微生物的標(biāo)準(zhǔn)化懸浮液。然后把該微生 物的薄菌苔置于瓊脂平板上。把灌注有特定量紅霉素的濾盤置于菌苔上。把灌注有特定量 克林霉素的第二濾盤以與紅霉素盤相隔固定的距離置于相同的菌苔上。隨后該瓊脂平板孵 育過(guò)夜。孵育期間，濾盤中的抗生素將彌散到瓊脂培養(yǎng)基中，形成跨越整個(gè)瓊脂平板的抗生 素梯度。由于紅霉素盤與克林霉素盤彼此接近，在兩個(gè)盤之間的瓊脂中形成兩種抗生素的 復(fù)合梯度。如果測(cè)試微生物具有可誘導(dǎo)的erm基因，它將變得對(duì)兩個(gè)盤之間區(qū)域內(nèi)的克林
4霉素具有更強(qiáng)的抗性，從而形成“D”形生長(zhǎng)抑制區(qū)。D-測(cè)試是一種用于檢測(cè)iMLSb表型的 高度有效的方法，但是需要對(duì)測(cè)試微生物和抗生素試劑進(jìn)行大量操作，以及對(duì)測(cè)試結(jié)果的 主觀解釋。需要一種用戶友好的測(cè)試用以在自動(dòng)化抗菌素易感性測(cè)試(AST)系統(tǒng)中檢測(cè)微 生物對(duì)大環(huán)內(nèi)酯_林可酰胺_鏈陽(yáng)性菌素b的可誘導(dǎo)抗性(iMLSb)，而無(wú)需處理抗生素盤。發(fā)明概述在一個(gè)實(shí)施方案中，提供了一種用于諸如自動(dòng)化微生物鑒定(ID)與抗微生物易 感性測(cè)定(AST)系統(tǒng)之類的測(cè)試系統(tǒng)的測(cè)試板，該測(cè)試板具有多個(gè)孔、林可酰胺劑、以及大 環(huán)內(nèi)酯劑，其中一個(gè)或多個(gè)孔含有林可酰胺劑與大環(huán)內(nèi)酯劑兩者。合適的林可酰胺劑的一 個(gè)例子是克林霉素，合適的大環(huán)內(nèi)酯劑的一個(gè)例子是紅霉素。在另一個(gè)實(shí)施方案中，提供了一種用于諸如自動(dòng)化微生物鑒定(ID)與抗微生物 易感性測(cè)定(AST)系統(tǒng)之類的測(cè)試系統(tǒng)的測(cè)試板，該測(cè)試板具有多個(gè)孔、林可酰胺劑、以及 大環(huán)內(nèi)酯劑，其中一個(gè)或多個(gè)孔含有林可酰胺劑且不含有大環(huán)內(nèi)酯劑，一個(gè)或多個(gè)孔含有 大環(huán)內(nèi)酯劑且不含有林可酰胺劑，并且一個(gè)或多個(gè)孔含有林可酰胺劑與大環(huán)內(nèi)酯劑兩者。在又一個(gè)實(shí)施方案中，提供了一種用于諸如自動(dòng)化微生物鑒定(ID)與抗微生物 易感性測(cè)定(AST)系統(tǒng)之類的測(cè)試系統(tǒng)的測(cè)試板，該測(cè)試板具有多個(gè)孔、至少一種林可酰 胺劑、以及至少一種大環(huán)內(nèi)酯劑，其中一個(gè)或多個(gè)孔含有林可酰胺劑且不含有大環(huán)內(nèi)酯劑， 一個(gè)或多個(gè)孔含有大環(huán)內(nèi)酯劑且不含有林可酰胺劑，并且一個(gè)或多個(gè)孔含有林可酰胺劑與 大環(huán)內(nèi)酯劑兩者。在另一個(gè)實(shí)施方案中，提供了一種用于在測(cè)試系統(tǒng)中通過(guò)用測(cè)試微生物接種具 有多個(gè)孔的測(cè)試板來(lái)檢測(cè)微生物對(duì)大環(huán)內(nèi)酯-林可酰胺-鏈陽(yáng)性菌素b的可誘導(dǎo)抗性 (iMLSb)的方法，其中一個(gè)或多個(gè)孔含有林可酰胺劑與大環(huán)內(nèi)酯劑兩者，一個(gè)或多個(gè)孔含 有林可酰胺劑且不含有大環(huán)內(nèi)酯劑，以及一個(gè)或多個(gè)孔含有大環(huán)內(nèi)酯劑且不含有林可酰胺 劑，將該測(cè)試板置于測(cè)試系統(tǒng)中，以合適的溫度孵育該測(cè)試板，監(jiān)視該測(cè)試微生物在這些孔 中的生長(zhǎng)速率，隨后將在含有林可酰胺劑且不含有大環(huán)內(nèi)酯劑的孔中測(cè)試微生物的生長(zhǎng)速 率、在含有大環(huán)內(nèi)酯劑且不含有林可酰胺劑的孔中測(cè)試微生物的生長(zhǎng)速率、以及在含有林 可酰胺劑與大環(huán)內(nèi)酯劑兩者的孔中測(cè)試微生物的生長(zhǎng)速率進(jìn)行比較。通過(guò)含有大環(huán)內(nèi)酯 劑且不含有林可酰胺劑的孔中的抗性，含有林可酰胺劑且不含有大環(huán)內(nèi)酯劑的孔中的易感 性，以及含有林可酰胺劑與大環(huán)內(nèi)酯劑兩者的所述孔中的抗性，指示測(cè)試微生物中存在對(duì) 大環(huán)內(nèi)酯-林可酰胺_鏈陽(yáng)性菌素b的抗性(iMLSb)。在再一個(gè)實(shí)施方案中，提供了一種用于在自動(dòng)測(cè)試系統(tǒng)中通過(guò)用測(cè)試微生物接種 具有多個(gè)孔的測(cè)試板來(lái)檢測(cè)已知抗紅霉素且對(duì)克林霉素易感的微生物對(duì)大環(huán)內(nèi)酯-林可 酰胺-鏈陽(yáng)性菌素b的可誘導(dǎo)抗性(iMLSb)的方法，其中一個(gè)或多個(gè)孔含有林可酰胺劑與 大環(huán)內(nèi)酯劑兩者，把該測(cè)試板置于自動(dòng)檢測(cè)系統(tǒng)中，以合適的溫度孵育該測(cè)試板，并且監(jiān)測(cè) 含有林可酰胺劑與大環(huán)內(nèi)酯劑兩者的孔中測(cè)試微生物的生長(zhǎng)速率。含有林可酰胺劑與大環(huán) 內(nèi)酯劑兩者的一個(gè)或多個(gè)孔中微生物生長(zhǎng)的存在，指示存在對(duì)大環(huán)內(nèi)酯-林可酰胺-鏈陽(yáng) 性菌素b的抗性(iMLSb)。


圖1是美國(guó)專利No. 6，096，272中公開(kāi)的用于進(jìn)行微生物鑒定(ID)和抗微生物易 感性測(cè)定(AST)的現(xiàn)有系統(tǒng)的機(jī)箱門關(guān)閉的正面透視圖。圖2是美國(guó)專利No. 6，096，272中公開(kāi)的用于進(jìn)行微生物鑒定(ID)和抗微生物易 感性測(cè)定(AST)的現(xiàn)有系統(tǒng)的機(jī)箱門打開(kāi)的正面透視圖。圖3A是一種美國(guó)專利No. 6，096，3A73A中公開(kāi)的用于進(jìn)行微生物鑒定(ID)和抗 微生物易感性測(cè)定(AST)的現(xiàn)有系統(tǒng)的ID/AST測(cè)試板的透視圖。圖3B是一種美國(guó)專利No. 6，096，272中公開(kāi)的用于進(jìn)行微生物鑒定(ID)和抗微 生物易感性測(cè)定(AST)的現(xiàn)有系統(tǒng)的ID/AST測(cè)試板的俯視圖。圖3C是一種美國(guó)專利No. 6，096，272中公開(kāi)的用于進(jìn)行微生物鑒定(ID)和抗微 生物易感性測(cè)定(AST)的現(xiàn)有系統(tǒng)的ID/AST測(cè)試板的仰視圖。圖4是美國(guó)專利No. 6，096，272中公開(kāi)的圖1設(shè)備的內(nèi)部組件的示意性俯視圖。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明的實(shí)施方案提供了一種測(cè)試板和方法，用于在測(cè)試系統(tǒng)中檢測(cè)微生物對(duì)大 環(huán)內(nèi)酯_林可酰胺_鏈陽(yáng)性菌素b的可誘導(dǎo)抗性(iMLSb)。合適的測(cè)試系統(tǒng)包括微生物鑒定 (ID)測(cè)試系統(tǒng)，或抗微生物易感性測(cè)定(AST)測(cè)試系統(tǒng)，或組合的微生物鑒定(ID)和抗微生 物易感性測(cè)定(AST)測(cè)試系統(tǒng)。此外，該測(cè)試系統(tǒng)可以是自動(dòng)的、半自動(dòng)的或人工檢測(cè)系統(tǒng)。其公開(kāi)內(nèi)容通過(guò)引用合并在此的美國(guó)專利No. 6，096，272公開(kāi)了一種用于進(jìn)行高 度可靠的微生物鑒定(ID)和抗微生物易感性測(cè)定(AST)的合適的自動(dòng)化測(cè)試系統(tǒng)的例子。 該系統(tǒng)基于來(lái)自ID/AST板30中所含的孔31的讀數(shù)來(lái)確定身份和易感性(參見(jiàn)圖1和圖 2)。例如，在一個(gè)實(shí)施方案中，孔31含有在用微生物接種以后有時(shí)可能改變光學(xué)特性的不 同的抗微生物稀釋劑和/或不同的試劑底物。美國(guó)專利No. 6，096，272中描述的檢測(cè)方法 測(cè)量在吸收、擴(kuò)散和/或熒光的變化。也可以測(cè)定發(fā)光性。對(duì)這些變化進(jìn)行處理以確定微 生物的身份和易感性。該系統(tǒng)允許技術(shù)人員例如在用未知微生物接種ID/AST板30的孔31以后，把該板 置于儀器20中(圖4中所示)，其中以設(shè)定的溫度孵育該板，定期詢問(wèn)變化，并分析微生物 身份和抗微生物易感性。設(shè)備20容納有多個(gè)ID/AST板30，并且如下所述為技術(shù)人員提供 肯定的分析結(jié)果。如圖1-3中所示，ID/AST板30是灌注有ID與AST測(cè)試所需試劑的一次性裝置。 在每個(gè)ID/AST板30上，對(duì)由置于單獨(dú)的孔31中的樣品與試劑生成的反應(yīng)進(jìn)行測(cè)試?？?1 以具有行和列的二維陣列布置在ID/AST板30上。儀器20獨(dú)立且充分自治，用以測(cè)試ID/AST板30并提供合適的測(cè)試結(jié)果。儀器20 儲(chǔ)存、孵育并讀取ID/AST板30。儀器20具有圖1示出為關(guān)閉且圖2示出為打開(kāi)的門21， 以允許進(jìn)入儀器20內(nèi)部。圖1示出了個(gè)人計(jì)算機(jī)(PC)工作站40與儀器20通訊連接。PC工作站補(bǔ)充儀器 20的微生物學(xué)信息系統(tǒng)報(bào)告與數(shù)據(jù)管理特征，這在如下進(jìn)行討論。PC工作站40提供了改 善經(jīng)驗(yàn)治療決定及確定治療介入情況的工具。PC工作站40還包括用以輔助感染控制和流 行病學(xué)的報(bào)告工具。
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如圖2所示，儀器20包括轉(zhuǎn)盤50。轉(zhuǎn)盤50包括由環(huán)和肋條組成的組件51，該環(huán) 和肋條栓接至驅(qū)動(dòng)環(huán)52以形成圓柱形籠。轉(zhuǎn)盤50垂至于儀器外殼60安裝(圖1所示)。 儀器外殼60限定了轉(zhuǎn)盤艙61和電子器件艙62 (圖4所示)。轉(zhuǎn)盤艙61是隔熱的以提供基 本上恒溫的孵育環(huán)境，而且在正常條件下是不透光的以防止環(huán)境光線進(jìn)入。優(yōu)選地，轉(zhuǎn)盤艙61持續(xù)保持在35 °C的溫度，且?guī)в蟹謩e設(shè)定在39°C和33 °C的第一 預(yù)定設(shè)定點(diǎn)和第二預(yù)定設(shè)定點(diǎn)。但是如本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解的，可以使用其他溫度設(shè)定 來(lái)實(shí)現(xiàn)特定的檢測(cè)要求。如圖4中所示，轉(zhuǎn)盤艙61內(nèi)部以及組件51的圓周外部安裝有多個(gè)光源組件。在 本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，光源組件包括可見(jiàn)光組件80及紫外(UV)光源組件81。在圖3A-3C中以組合形式提供ID/AST板30。每個(gè)ID/AST組合板30都具有能夠 在同一個(gè)板上進(jìn)行ID與AST測(cè)試的試劑孔位置。ID/AST板30包括孔31，其被分隔成ID 部分33與AST部分34。ID/AST板30的ID部分33包括51個(gè)孔31。ID/AST板30的AST 部分34包括其中含有干燥抗生素的85個(gè)孔31。但是，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將理解，可以使 用分開(kāi)的ID板或AST板來(lái)代替ID/AST組合板。在一個(gè)實(shí)施方案中，測(cè)試板具有至少一個(gè)或多個(gè)孔31，孔中含有濃度范圍為0. 05 微克/ml到8. 0微克/ml再水合的干燥林可酰胺劑且不含有大環(huán)內(nèi)酯劑，例如，3個(gè)孔含有 濃度為0. 125微克/ml再水合的干燥克林霉素。而且，至少一個(gè)或多個(gè)孔31含有濃度范圍 為0. 05微克/ml到8. 0微克/ml再水合的干燥大環(huán)內(nèi)酯劑且不含有林可酰胺劑，例如2個(gè) 孔含有濃度為0. 4微克/ml再水合的干燥紅霉素。至少一個(gè)或多個(gè)孔31含有濃度范圍為 0. 05微克/ml到8. 0微克/ml再水合的干燥林可酰胺劑與干燥大環(huán)內(nèi)酯劑兩者，例如，一 個(gè)孔含有濃度為0. 125微克/ml再水合的干燥克林霉素以及濃度為0. 4微克/ml再水合的 干燥紅霉素。在這個(gè)特定實(shí)施方案中，僅含有林可酰胺劑的孔、僅含有大環(huán)內(nèi)酯劑的孔、以 及含有兩種試劑組合的孔位于測(cè)試板的AST部分，不過(guò)這些孔也可以位于AST或者ID部分 的任一部分。此外，在該實(shí)施方案中，相同種類的林可酰胺劑(克林霉素)與相同種類的大 環(huán)內(nèi)酯劑(紅霉素)用于單獨(dú)的試劑孔中以及含有兩種試劑的組合的孔中。然而，單獨(dú)的 試劑孔可以含有不同類型的林可酰胺劑和/或大環(huán)內(nèi)酯劑，其不同于含有兩種試劑組合的 孔中使用的林可酰胺劑種類和大環(huán)內(nèi)酯劑種類。在其中待檢測(cè)的微生物已知具有對(duì)紅霉素的抗性MIC和對(duì)克林霉素的易感性MIC 的另一個(gè)實(shí)施方案中，測(cè)試板具有至少一個(gè)或多個(gè)孔，孔中含有濃度為0. 05微克/ml到 8. 0微克/ml的再水合范圍的干燥林可酰胺劑與干燥大環(huán)內(nèi)酯劑，例如一個(gè)孔含有濃度為 0. 125微克/ml再水合的干燥克林霉素與濃度為0. 4微克/ml再水合的干燥紅霉素。ID/AST板30還包括支架35、底盤36、蓋子37、和醋酸纖維素墊38。每個(gè)ID/AST 板30還包括板標(biāo)記(未示出)，該標(biāo)記包括確定特定ID/AST板30的全部制造歷史的信息。條型碼標(biāo)記提供了與ID/AST板類型相關(guān)的信息，并且還具有用于鑒定目的的唯 一序號(hào)。條型碼標(biāo)記可提供為Code 128、數(shù)字格式或任何其他適合的條型碼形式。在置于儀器20內(nèi)之前，用液體培養(yǎng)基_懸浮的微生物接種每個(gè)ID/AST板30。實(shí) 際上，微生物是來(lái)自ID接種物液體或AST接種物液體中的原代培養(yǎng)物并在其后被倒入測(cè)試 板中的微生物生長(zhǎng)物的處理和重懸的稀釋物。ID/AST板30是傾斜的，其頂部具有用于裝 料的接種口 39。手動(dòng)添加單獨(dú)的接種物到ID與AST 口 39。用ID接種物液體接種ID部分33中的每個(gè)孔31，使該接種物朝向墊38流下測(cè)試板。用AST接種物液體接種AST部分34 中的每個(gè)孔31。接種物以螺旋方式流下ID/AST板30并填充孔31，使液體朝向墊38行進(jìn)。 每個(gè)孔31是有口的，以允許液體填充孔31。每個(gè)孔31具有明顯的圓形邊緣以將相容量的 液體與多余液體分開(kāi)，并將每個(gè)孔31與相鄰孔31中的液體隔離。墊38吸收多余的液體。在板接種位置(未示出)處用接種物液體接種ID/AST板30。每個(gè)位置容納2管 接種物液體(即，ID接種物液體與AST接種物液體)，并支持1個(gè)ID/AST板30。重力驅(qū)使 接種物液體通過(guò)ID/AST板30。ID接種物液體與AST接種物液體包括試劑子系統(tǒng)，該試劑子系統(tǒng)包括把隔離的菌 落處理成制備接種物所需的所有試劑，用以添加至ID/AST板30的ID部分33與AST部分 34。ID接種物液體用于微生物鑒定。可以使用各種ID接種物液體，但優(yōu)選鹽溶液。可 以添加去污劑以增加板接種位置中的ID/AST板30填充。優(yōu)選地，用于ID板接種的接種物 密度為至少IXlO5 cfu/mL·可以使用各種鑒定試劑，包括酚紅和碘代硝基四唑(INT)。也 可以使用各種底物，包括4-甲基傘形酮(4-MU)衍生物、甲基-氨基-香豆素(4-AMC)衍生 物、對(duì)硝基酚衍生物和七葉苷。用于AST測(cè)定的AST接種物液體是Mueller-Hinton液體培養(yǎng)基的改良制劑。優(yōu) 選地，AST板接種的接種物密度為至少IXlO5 cfu/mL·不同的接種物密度可用于本發(fā)明的 其他實(shí)施方案，諸如“快速”AST檢測(cè)結(jié)果。這些是ID/AST板30接種16小時(shí)內(nèi)獲得的AST 檢測(cè)結(jié)果。可以使用各種AST指示劑。用于本發(fā)明中AST測(cè)定的優(yōu)選指示劑是alamarBlue ， 一種氧化還原_緩沖的氧化_還原指示劑。把指示劑添加到AST接種物液體中，并正好在 添加通過(guò)儀器20待檢測(cè)的微生物樣品之前混合?？刂铺幚頇C(jī)70出于檢測(cè)、鑒定和易感性測(cè)試目的解釋來(lái)自孔31的數(shù)據(jù)?？刂铺?理機(jī)使用3個(gè)可變閾值水平來(lái)解釋該數(shù)據(jù)絕對(duì)閾值、動(dòng)態(tài)閾值和相對(duì)閾值。當(dāng)使用絕對(duì)閾 值時(shí)，通過(guò)確定標(biāo)準(zhǔn)化孔31的讀數(shù)是否高于(陽(yáng)性)或低于(陰性)給定的預(yù)定值來(lái)進(jìn)行 肯定性評(píng)估。當(dāng)使用動(dòng)態(tài)閾值時(shí)，使用第一和第二差異或者對(duì)檢測(cè)數(shù)據(jù)的其他數(shù)學(xué)變換來(lái) 計(jì)算試劑反應(yīng)測(cè)定，其中所述檢測(cè)數(shù)據(jù)的其他數(shù)學(xué)變換與隨時(shí)間變化的信號(hào)增加變化率有 關(guān)，而所述隨時(shí)間的變化率則通過(guò)在已經(jīng)超過(guò)計(jì)算的第一和/或第二差異的某些參數(shù)時(shí)確 定。當(dāng)使用相對(duì)閾值時(shí)，通過(guò)設(shè)定一個(gè)閾值進(jìn)行試劑反應(yīng)測(cè)定，該閾值是高于所討論的孔31 的起始信號(hào)水平的一個(gè)預(yù)定百分?jǐn)?shù)。在操作中，ID/AST板30被安裝，并在儀器20的轉(zhuǎn)盤50中孵育。隨著可見(jiàn)光源組 件80和UV光源組件81被順序激發(fā)，讀取對(duì)應(yīng)于紅光、綠光、藍(lán)光和熒光波長(zhǎng)的讀數(shù)?；?轉(zhuǎn)盤50的旋轉(zhuǎn)速度，通過(guò)光學(xué)測(cè)量系統(tǒng)100以預(yù)定的間隔讀取光強(qiáng)讀數(shù)。例如，當(dāng)轉(zhuǎn)盤50由驅(qū)動(dòng)系統(tǒng)56以每分鐘2. 0轉(zhuǎn)(RPM)的角速度驅(qū)動(dòng)時(shí)，轉(zhuǎn)盤50的 一次旋轉(zhuǎn)需要30秒。于是累積紅光、綠光、藍(lán)光和UV波長(zhǎng)的數(shù)據(jù)需要2分鐘。因此，在該 例中，每2分鐘由本發(fā)明讀取一整套數(shù)據(jù)。由于可以改變角速度，因此不同的角速度可用于 不同的檢測(cè)。例如，期望以1. ORPM累積UV數(shù)據(jù)(同時(shí)以2. ORPM累積其他測(cè)試數(shù)據(jù))。在 這種情況下，一整套數(shù)據(jù)組將需要2分半鐘來(lái)完成。預(yù)定的孵育期之后可以獲得基于孔31讀數(shù)的AST終點(diǎn)結(jié)果，雖然優(yōu)選的終點(diǎn)是在18-24小時(shí)的孵育之后。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，測(cè)定對(duì)大環(huán)內(nèi)酯_林可酰胺_鏈陽(yáng)性菌素b的可誘導(dǎo)抗性 (iMLSb)的方法的陽(yáng)性結(jié)果是這樣一種微生物，該微生物對(duì)紅霉素具有抗性因而在含有濃 度為不小于8yg/ml的紅霉素的孔中生長(zhǎng)，對(duì)克林霉素易感因而在含有濃度小于或等于 0. 5 μ g/ml的克林霉素的孔中生長(zhǎng)，而抗克林霉素與紅霉素的組合因而在含有克林霉素與 紅霉素的孔中生長(zhǎng)。根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，測(cè)定已知具有紅霉素抗性且對(duì)克林霉素易感的微生物對(duì)大 環(huán)內(nèi)酯-林可酰胺-鏈陽(yáng)性菌素b的可誘導(dǎo)抗性(iMLSb)的方法的陽(yáng)性結(jié)果，是在含有克 林霉素與紅霉素兩者的孔中存在微生物生長(zhǎng)?？刂铺幚頇C(jī)70包括ID分類群數(shù)據(jù)庫(kù)，其包括大于126種革蘭氏陰性生物體，和 103種革蘭氏陽(yáng)性生物體。控制處理機(jī)70還包括AST分類群數(shù)據(jù)庫(kù)，其革蘭氏陽(yáng)性和陰性 生物體與ID分類群數(shù)據(jù)庫(kù)的相等。為了 AST測(cè)試的目的，該系統(tǒng)還包括目前已知的所有人 類和獸醫(yī)抗微生物劑的數(shù)據(jù)庫(kù)。測(cè)試板30與光檢測(cè)單元100之間布置有多個(gè)光濾波器。這 些濾波器僅僅通過(guò)由孔(示出為圖3B中的單元31)發(fā)出或被其吸收的具有預(yù)定波長(zhǎng)的預(yù) 定帶寬的光。實(shí)施例根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案(Phoenix iMLSb)并使用“D_測(cè)試”來(lái)測(cè)試葡萄球菌 屬的各種集合。然后比較如表1所示的針對(duì)每種微生物的每種測(cè)試方法的結(jié)果。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案，測(cè)試板的AST部分中的4個(gè)孔含有以下濃度的干燥 的克林霉素與紅霉素(單位為μ g/ml) :0. 125與0. 4再水合；0. 125與0. 8再水合；0. 25與 0. 4再水合；0. 25與0. 80再水合。用于這種AST測(cè)定的AST接種物液體是Muel Ier-Hinton液體培養(yǎng)基的改進(jìn)制劑， 同時(shí)alamarBlue 用作指示劑。接種的ID/AST板30裝載到轉(zhuǎn)盤艙中，并以35°C的溫度孵育，直到獲得存在對(duì)大環(huán) 內(nèi)酯-林可酰胺-鏈陽(yáng)性菌素b的可誘導(dǎo)抗性(iMLSb)的陽(yáng)性或陰性結(jié)果。根據(jù)臨床與實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)研究所(CLSI) M100_S15，p. 114進(jìn)行D-測(cè)試使用紙片相 鄰測(cè)試(disk approximation test)通過(guò)在用于接種物純度檢驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)血液瓊脂板上遠(yuǎn)離 15微克紅霉素盤的邊緣15mm放置2微克克林霉素盤來(lái)檢測(cè)可誘導(dǎo)的克林霉素抗性。孵育 之后，未顯示出克林霉素區(qū)失去光澤(flatten)的微生物將被報(bào)告為克林霉素易感。顯示 出與紅霉素盤鄰近的克林霉素區(qū)(稱為“D”區(qū))失去光澤的微生物則具有可誘導(dǎo)的克林霉 素抗性。這種隔離群也報(bào)告為克林霉素抗性的。表 1
9 結(jié)果顯示本發(fā)明的實(shí)施方案與“D-測(cè)試”之間吻合，并由此證實(shí)使用該實(shí)施方案 作為一種替換方法用于檢測(cè)微生物對(duì)大環(huán)內(nèi)酯-林可酰胺-鏈陽(yáng)性菌素b的可誘導(dǎo)抗性 (iMLSb)是有效的。雖然如上已經(jīng)根據(jù)特定的實(shí)施方案對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了描述，但是應(yīng)當(dāng)理解本發(fā)明并 不旨在限于或局限于這里公開(kāi)的實(shí)施方案。相反地，本發(fā)明旨在覆蓋包括在所附權(quán)利要求 的精神和范圍內(nèi)的各種方法、結(jié)構(gòu)及其修改。雖然上面僅詳細(xì)描述了本發(fā)明的幾個(gè)示例性的實(shí)施方案，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員將 很容易理解可以對(duì)示例性實(shí)施方案進(jìn)行許多改進(jìn)而實(shí)質(zhì)上不背離本發(fā)明的新教導(dǎo)和優(yōu)點(diǎn)。 因此，所有這些修改都旨在包括在所附權(quán)利要求限定的本發(fā)明范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
一種測(cè)試板，包括多個(gè)孔，林可酰胺劑，和大環(huán)內(nèi)酯劑，其中所述孔的一個(gè)或多個(gè)孔含有所述林可酰胺劑與所述大環(huán)內(nèi)酯劑兩者。
2.如權(quán)利要求1的測(cè)試板，其中所述孔的一個(gè)或多個(gè)孔包括所述林可酰胺劑且不含有 所述大環(huán)內(nèi)酯劑。
3.如權(quán)利要求2的測(cè)試板，其中所述孔的至少3個(gè)孔含有所述林可酰胺劑且不含有所 述大環(huán)內(nèi)酯劑。
4.如權(quán)利要求1的測(cè)試板，其中所述林可酰胺劑是克林霉素。
5.如權(quán)利要求4的測(cè)試板，其中所述克林霉素處于脫水狀態(tài)。
6.如權(quán)利要求5的測(cè)試板，其中所述克林霉素再水合的濃度在0.05微克/ml到8微克 /ml的范圍內(nèi)。
7.如權(quán)利要求5的測(cè)試板，其中所述克林霉素再水合的濃度為0.125微克/ml。
8.如權(quán)利要求1的測(cè)試板，其中所述孔的一個(gè)或多個(gè)孔包括所述大環(huán)內(nèi)酯劑且不含有 所述林可酰胺劑。
9.如權(quán)利要求8的測(cè)試板，其中所述孔的至少3個(gè)孔含有所述大環(huán)內(nèi)酯劑且不含有所 述林可酰胺劑。
10.如權(quán)利要求1的測(cè)試板，其中所述大環(huán)內(nèi)酯劑是紅霉素。
11.如權(quán)利要求10的測(cè)試板，其中所述紅霉素處于脫水狀態(tài)。
12.如權(quán)利要求11的測(cè)試板，其中所述紅霉素再水合的濃度在0.05微克/ml到8微克 /ml的范圍內(nèi)。
13.如權(quán)利要求11的測(cè)試板，其中所述紅霉素再水合的濃度為0.4微克/ml。
14.一種方法，包括用測(cè)試微生物接種具有多個(gè)孔的測(cè)試板，其中所述孔的一個(gè)或多個(gè)孔含有林可酰胺劑 與大環(huán)內(nèi)酯劑兩者，所述孔的一個(gè)或多個(gè)孔含有林可酰胺劑且不含有大環(huán)內(nèi)酯劑，和所述 孔的一個(gè)或多個(gè)孔含有大環(huán)內(nèi)酯劑且不含有林可酰胺劑，把所述測(cè)試板置于測(cè)試系統(tǒng)中，以合適的溫度孵育所述測(cè)試板，和監(jiān)視所述測(cè)試微生物在所述孔中的生長(zhǎng)速率，比較在含有所述林可酰胺劑且不含有大環(huán)內(nèi)酯劑的所述孔中所述測(cè)試微生物的生長(zhǎng) 速率、在含有所述大環(huán)內(nèi)酯劑且不含有林可酰胺劑的所述孔中所述測(cè)試微生物的生長(zhǎng)速 率，和在含有所述林可酰胺劑與所述大環(huán)內(nèi)酯劑兩者的所述孔中所述測(cè)試微生物的生長(zhǎng)速 率，由此通過(guò)在含有所述大環(huán)內(nèi)酯劑且不含有林可酰胺劑的所述孔中的抗性，在含有所述 林可酰胺劑且不含有大環(huán)內(nèi)酯劑的所述孔中的易感性，和在含有所述林可酰胺劑與所述大 環(huán)內(nèi)酯劑兩者的所述孔中的抗性，指示所述測(cè)試微生物對(duì)大環(huán)內(nèi)酯_林可酰胺_鏈陽(yáng)性菌 素b的抗性(iMLSb)的存在。
15.如權(quán)利要求14的方法，其中所述孔的至少3個(gè)孔含有所述林可酰胺劑且不含有大環(huán)內(nèi)酯劑。
16.如權(quán)利要求14的方法，其中所述林可酰胺劑是克林霉素。
17.如權(quán)利要求14的方法，其中所述孔的至少3個(gè)孔含有所述大環(huán)內(nèi)酯劑且不含有林 可酰胺劑。
18.如權(quán)利要求14的方法，其中所述大環(huán)內(nèi)酯劑是紅霉素。
19.如權(quán)利要求14的方法，其中所述測(cè)試系統(tǒng)是自動(dòng)化的，半自動(dòng)化的或人工的測(cè)試 系統(tǒng)。
20.如權(quán)利要求19的方法，其中所述自動(dòng)化測(cè)試系統(tǒng)是微生物鑒定(ID)和抗微生物易 感性測(cè)定(AST)系統(tǒng)。
21.如權(quán)利要求14的方法，其中所述測(cè)試系統(tǒng)是微生物鑒定(ID)和抗微生物易感性測(cè) 定(AST)系統(tǒng)。
22.如權(quán)利要求14的方法，其中所述測(cè)試系統(tǒng)是抗微生物易感性測(cè)定(AST)系統(tǒng)。
23.一種方法，包括用具有紅霉素抗性并對(duì)克林霉素易感的測(cè)試微生物接種具有多個(gè)孔的測(cè)試板，其中所 述孔的一個(gè)或多個(gè)孔含有林可酰胺劑與大環(huán)內(nèi)酯劑兩者，把所述測(cè)試板置于測(cè)試系統(tǒng)中，以合適的溫度孵育所述測(cè)試板，和監(jiān)視所述孔中所述測(cè)試微生物的生長(zhǎng)速率，其中含有所述林可酰胺劑與所述大環(huán)內(nèi)酯劑兩者的所述孔的一個(gè)或多個(gè)孔內(nèi)存在生 長(zhǎng)，指示存在對(duì)大環(huán)內(nèi)酯-林可酰胺-鏈陽(yáng)性菌素b的抗性(iMLSb)。
24.如權(quán)利要求23的方法，其中所述測(cè)試系統(tǒng)是自動(dòng)化的，半自動(dòng)化的或人工的測(cè)試 系統(tǒng)。
25.如權(quán)利要求24的方法，其中所述自動(dòng)化測(cè)試系統(tǒng)是微生物鑒定(ID)和抗微生物易 感性測(cè)定(AST)系統(tǒng)。
26.如權(quán)利要求23的方法，其中所述測(cè)試系統(tǒng)是微生物鑒定(ID)和抗微生物易感性測(cè) 定(AST)系統(tǒng)。
27.如權(quán)利要求23的方法，其中所述測(cè)試系統(tǒng)是抗微生物易感性測(cè)定(AST)系統(tǒng)。
28.一種測(cè)試板，包括多個(gè)孔，至少一種林可酰胺劑，和至少一種大環(huán)內(nèi)酯劑，其中所述孔的一個(gè)或多個(gè)孔含有林可酰胺劑與大環(huán)內(nèi)酯劑兩者，所述孔的一個(gè)或多個(gè) 孔含有林可酰胺劑且不含有大環(huán)內(nèi)酯劑，和所述孔的一個(gè)或多個(gè)孔含有大環(huán)內(nèi)酯劑且不含 有林可酰胺劑。
全文摘要
本發(fā)明的實(shí)施方案提供了一種測(cè)試板和方法，用于在自動(dòng)化微生物鑒定(ID)和抗微生物易感性測(cè)定(AST)系統(tǒng)中檢測(cè)微生物對(duì)大環(huán)內(nèi)酯-林可酰胺-鏈陽(yáng)性菌素b的可誘導(dǎo)抗性(iMLSb)。多孔測(cè)試板的孔含有大環(huán)內(nèi)酯劑和林可酰胺劑以及大環(huán)內(nèi)酯劑與林可酰胺劑二者的組合。測(cè)試板與液體培養(yǎng)基懸浮的微生物一起孵育，并置于自動(dòng)化微生物鑒定(ID)和抗微生物易感性測(cè)定(AST)系統(tǒng)中。讓測(cè)試板在系統(tǒng)內(nèi)孵育，并監(jiān)視孔內(nèi)微生物的生長(zhǎng)。
文檔編號(hào)C12Q1/18GK101903533SQ200880119411
公開(kāi)日2010年12月1日 申請(qǐng)日期2008年11月25日 優(yōu)先權(quán)日2007年12月4日
發(fā)明者C·M·高斯內(nèi)爾, C·余, D·J·圖內(nèi)爾, V·懷特利 申請(qǐng)人:貝克頓·迪金森公司