專利名稱：用于裂解環(huán)境或臨床樣品中存在的微生物并從該微生物提取核酸以分析的裝置的制作方法
用于裂解環(huán)境或臨床樣品中存在的微生物并從該微生物提取核酸以分析的
裝置
本發(fā)明的技術(shù)領(lǐng)域是生物分析。更具體地，本發(fā)明涉及一種用于裂解 環(huán)境樣品如空氣樣品或臨床樣品中存在的微生物的裝置。
幾年來，已經(jīng)觀察到醫(yī)院中再出現(xiàn)院內(nèi)感染。這些感染通過入院并且 因而定義為免疫抑制的個(gè)體受到醫(yī)院環(huán)境中存在的致病微生物污染而解 釋，其中所述的致病微生物即便在總是極小心地進(jìn)行器械及表面消毒和空 氣處理的情況下也未能破壞。相對(duì)于這些日益增加的環(huán)境微生物污染常見 案例，對(duì)于醫(yī)護(hù)人員而言需要開發(fā)用于改善和促進(jìn)環(huán)境控制的裝置和方 法。
除了院內(nèi)感染問題之外，環(huán)境條件控制在過去幾年期間也已經(jīng)在工業(yè) 環(huán)境、尤其食品加工工業(yè)或制藥工業(yè)或化妝品工業(yè)中變成再次關(guān)注點(diǎn)。在 食品加工工業(yè)中，已知產(chǎn)品甚至原材料被致病微生物污染可對(duì)消費(fèi)者健康 造成的災(zāi)難性后果。實(shí)際上，因細(xì)菌如李斯特菌屬(i^^7'")或沙門氏菌屬 (&!/附0^//0)的那些細(xì)菌所致的食物中毒今日是常見事件?？諝赓|(zhì)量控制也 是制藥工業(yè)或化妝品工業(yè)的質(zhì)量措施中的關(guān)鍵過程。
另外，這些控制措施必須滿足因管理日益嚴(yán)格所致的日益高水平的要求。
在醫(yī)護(hù)人員或制造商可獲得用于進(jìn)行環(huán)境控制的工具中，空氣生物收
集器(aerobiocollector)是用于檢測(cè)空氣中微生物的選擇方案。在需要測(cè)量空 氣生物污染的前提下，將這些裝置置于適宜地點(diǎn)。它們一般由偶聯(lián)于培養(yǎng) 基的空氣收集器構(gòu)成。由空氣收集器收集的空氣與該培養(yǎng)基接觸，可能含 于所收集空氣中的微生物沉積在該培養(yǎng)基上。隨后回收培養(yǎng)基并置于培養(yǎng) 箱中，以便促進(jìn)所述微生物生長(zhǎng)。因而有可能通過常規(guī)微生物學(xué)技術(shù)檢測(cè)并鑒定所述微生物。
然而，這些裝置具有與所用技術(shù)關(guān)聯(lián)的重大缺點(diǎn)。這個(gè)缺點(diǎn)是獲得分 析結(jié)果所需要的時(shí)間。其原因是使用了這樣的常規(guī)微生物學(xué)、尤其細(xì)菌學(xué) 技術(shù)手段意味著不得不堅(jiān)持細(xì)胞生長(zhǎng)所需的保溫時(shí)間、甚至在特殊培養(yǎng)基 上的再保溫階段的時(shí)間以便能夠進(jìn)行鑒定。隨之而來的是獲得結(jié)果所需要 的時(shí)間相對(duì)長(zhǎng)，實(shí)際上當(dāng)意圖檢測(cè)和鑒定導(dǎo)致院內(nèi)感染或食物中毒的致病 生物時(shí)甚至太長(zhǎng)。
這種類型裝置的另一個(gè)缺點(diǎn)是培養(yǎng)的使用盡管使得有可能區(qū)分細(xì)菌的 屬和物種，但一般不可能區(qū)分相同細(xì)菌物種的菌株?，F(xiàn)在已知微生物的致 病性可能根據(jù)所討論的菌株顯著變化。
另外，存在用于回收空氣中存在的粒子、尤其微生物的裝置。文件
GB-2 254 024因此描述了一種用于收集空氣中所含粒子的裝置，其原理基 于旋風(fēng)作用。盡管發(fā)現(xiàn)這種裝置適于收集收集空氣中所含的粒子，包括微 生物，然而無論如何不會(huì)研究它用于處理如此獲得的樣品，尤其提取意圖 用來分析的遺傳物質(zhì)。
更一般地，無論對(duì)于臨床樣品或環(huán)境樣品，就鑒定微生物和/或就提供 結(jié)果的迅捷性而言，最重要的技術(shù)無疑是分子診斷技術(shù)。以分析微生物的 遺傳物質(zhì)并且尤其分析某些特異性序列為基礎(chǔ)的這些技術(shù)有可能在極短時(shí) 間(record time)內(nèi)實(shí)現(xiàn)微生物的極精確鑒定，因?yàn)樗鼈冇锌赡苋サ襞囵B(yǎng)步 驟。
然而，此類技術(shù)的用途提出了某些限制，這些限制當(dāng)中最重要的是在 空氣中存在并且因而可回收用于進(jìn)行分析的潛在限定的微生物數(shù)量。事實(shí) 上，已知環(huán)境樣品以及一些臨床樣品具有相對(duì)低的微生物數(shù)量。則從這種 原材料獲得的遺傳物質(zhì)的數(shù)量少。就產(chǎn)率而言，用來提取核酸的技術(shù)的有 效性因而成為一個(gè)重要參數(shù)。另外，大部分用于裂解微生物的現(xiàn)有技術(shù)冗長(zhǎng)，要求合格人員來進(jìn)行 人工步驟。
文件WO-A-2005/038025描述一種從(尤其取自空氣的)微生物提取核 酸的方法。這種方法在于進(jìn)行3種不同裂解方法也即化學(xué)裂解法、熱休克 裂解法和機(jī)械裂解法。盡管這種方法無疑有可能優(yōu)化核酸提取產(chǎn)率并且因 而提高可用于分析的遺傳物質(zhì)的數(shù)量，然而，這種產(chǎn)率仍取決于所回收微 生物的數(shù)量。然而，該文件中沒有描述優(yōu)化所述微生物的回收。
文件US-5,707,861描述了一種用于分解微生物類型的活細(xì)胞的裝置。 該裝置有可能通過使用玻璃珠和振動(dòng)作用裂解細(xì)胞，其中振動(dòng)作用因含有 微生物的管子與攜帶所述管子的夾持器的孔洞之間存在的空隙所致。因 而，這種裝置有可能優(yōu)化細(xì)胞裂解并且因而優(yōu)化遺傳物質(zhì)的提取。這種裝 置和使用的方法提出了如上文所提到那樣相同的限制，即它們?nèi)匀Q于所 回收微生物的數(shù)量。另外，它們具有不得不依次進(jìn)行核酸濃縮步驟，以便 從細(xì)胞碎片分離所述核酸的額外缺點(diǎn)。最后，它們要求在濃縮步驟結(jié)束時(shí) 手工回收核酸。
這些問題也伴隨文件US-5,567,050中所述的裝置出現(xiàn)。
還已經(jīng)描述了更為集成的系統(tǒng)。因而，文件WO-A-2004/018704描述
用于收集空氣中微生物并使用PCR(聚合酶鏈反應(yīng))擴(kuò)增技術(shù)鑒定它們的裝 置和方法。該系統(tǒng)特別適于在郵件分揀中心對(duì)付蓄意生物污染攻擊。該系 統(tǒng)由沿著郵件運(yùn)輸回路安置的空氣收集裝置、通過旋風(fēng)作用過濾/分離粒子 的裝置、用于濃縮/回收液體樣品中粒子的裝置和用于將樣品級(jí)分轉(zhuǎn)移到 Cepheid公司CepheidGeneXpertTMpCR分析套筒的裝置構(gòu)成。隨后將該套 筒手工地轉(zhuǎn)移到一個(gè)獨(dú)立的自動(dòng)化生物分析裝置以鑒定從空氣收集的微生 物。
盡管該系統(tǒng)有可能解決與上文所述裝置和方法關(guān)聯(lián)的眾多技術(shù)問題， 然而它具有重大缺點(diǎn)。這些缺點(diǎn)中第一個(gè)缺點(diǎn)是用于轉(zhuǎn)移至分析套筒之前處理樣品(收集、分離、濃縮/回收)的系統(tǒng)相對(duì)復(fù)雜且笨重。第二缺點(diǎn)是在 僅分析其一部分的液體樣品中回收所收集的微生物。這意味著存在沒有回 收全部微生物的風(fēng)險(xiǎn)并且因而所有核酸都很高，極大限制該分析的相關(guān)
性。另外，即便復(fù)雜，該系統(tǒng)還需要將套筒手工轉(zhuǎn)移至GeneXpert 自動(dòng) 化分析裝置。
因而，本發(fā)明的第一目的是提供用于全部裂解的裝置和方法，所述的 裝置和方法可有效地用于環(huán)境樣品和臨床樣品，以及有效地用于極其多樣 的微生物，無論它們是細(xì)菌、病毒或可能處于營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)或孢子形式的真
菌o
本發(fā)明的另一個(gè)目的將是提供能夠以集成方式有效裂解環(huán)境樣品如空 氣中或臨床樣品中含有的所述微生物的裝置，以便從中提取核酸并回收所 述核酸用于分析。
本發(fā)明的另一個(gè)目的將是提供能夠收集空氣樣品中含有的全部微生物 的裝置。
本發(fā)明的另一個(gè)目的將是提供具有簡(jiǎn)單設(shè)計(jì)的裝置。
本發(fā)明的另一個(gè)目的將是提供一種極緊湊的裝置。
本發(fā)明的另一個(gè)目的將是提供一種密閉裝置，其中上文所述的多個(gè)步 驟在沒有任何外部污染風(fēng)險(xiǎn)的情況下進(jìn)行。
本發(fā)明的另一個(gè)目的將是提供一種裝置，其中所述步驟在不由操作員 轉(zhuǎn)移的情況下進(jìn)行，因而防止其污染。
最后，本發(fā)明的另一個(gè)目的將是提供能夠在緩沖液中產(chǎn)生靶核酸的裝 置，其中所述的靶核酸可以直接用在包含例如擴(kuò)增和檢測(cè)步驟在內(nèi)的分子 診斷步驟中，而無額外的預(yù)處理步驟，如離心或過濾。這些連同其他目的由本發(fā)明實(shí)現(xiàn)，其中本發(fā)明首先涉及一種可以置于 空氣收集工具內(nèi)部并容納核酸回收工具的套筒，所述的套筒基本上是圓柱 形的并且包含微生物滯留區(qū)，所述的滯留區(qū)包含微生物裂解工具。
有利地，微生物滯留區(qū)包含能夠滯留微生物、維持裂解工具就位和在 液體存在下溶解的材料。該材料優(yōu)選地是膠化材料。
該膠化材料可以有利地是微生物培養(yǎng)基。
根據(jù)該裝置的一個(gè)變化，此裝置包含用于連接分析裝置的工具。 優(yōu)選地，該裂解工具由珠子構(gòu)成。甚至更優(yōu)選地，所述珠子的直徑在
200和600 nm之間。
本發(fā)明還涉及一種用于收集空氣中所含微生物的裝置，所述裝置包
含
-空氣收集工具，包含含有空氣輸入導(dǎo)管的上部單元和含有空氣輸出
導(dǎo)管的下部單元，所述上部單元和下部單元可互相聯(lián)鎖(interlock)，從而可 以在所述的空氣收集工具內(nèi)部產(chǎn)生空氣流；
-包含微生物滯留區(qū)的基本上圓柱形的套筒，該滯留區(qū)包含微生物裂 解工具，該套筒置于所述空氣收集工具內(nèi)部。
該空氣收集工具能夠與空氣再循環(huán)回路連接。
本發(fā)明還涉及一種用于微生物裂解的裝置，以便從所述的微生物分離
核酸，所述裝置包含
-根據(jù)本發(fā)明的套筒，該套筒包含置于微生物滯留區(qū)中的微生物；
-可以裝配到套筒中的基本上圓柱形的核酸回收工具，所述的回收工
具與微生物裂解工具協(xié)作，以便裂解所述的微生物并且能夠釋放核酸。
14有利地，該核酸回收工具包含用于抽吸/送遞液體的工具。 值得注意地，該核酸回收工具也包含液體貯存區(qū)。
根據(jù)一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，該套筒的內(nèi)徑大于核酸回收工具的外徑， 從而當(dāng)核酸回收工具安裝到該套筒中時(shí)，該套筒內(nèi)壁與核酸回收工具外壁 分隔的距離是足夠大的，以容許裂解工具存在于這個(gè)間隙空間中，并且是 足夠小的，以使該裂解工具與所述壁中的一個(gè)或另一個(gè)接觸。
本發(fā)明還涉及一種用于濃縮空氣中所含微生物的方法，所述的方法包 括以下步驟
a) 將套筒安置在空氣收集工具內(nèi)部，使得在所述套筒內(nèi)部的滯留區(qū)與
空氣收集工具的空氣輸入導(dǎo)管連通，
b) 通過任意適宜的手段使空氣進(jìn)入所述的空氣收集工具，
c) 在套筒滯留區(qū)中濃縮空氣中所含的微生物。
根據(jù)一個(gè)具體實(shí)施方案，該方法還包括使滯留區(qū)中的微生物生長(zhǎng)的步 驟d)。
有利地，微生物滯留于滯留區(qū)內(nèi)存在的裂解工具上。 本發(fā)明還涉及一種用于裂解空氣中所含微生物的方法，所述的方法包
括以下步驟
a) 將套筒安置在空氣收集工具內(nèi)部，使得在所述套筒內(nèi)部的滯留區(qū)
與空氣收集工具的空氣輸入導(dǎo)管連通，
b) 通過任意適宜的手段使空氣進(jìn)入所述的空氣收集工具，
c) 在套筒滯留區(qū)中濃縮空氣中所含的微生物，
d) 從所述空氣收集工具取出套筒，
e) 將核酸回收工具安置在該套筒中，
f) 將目的液體導(dǎo)入該套筒中，這導(dǎo)致位于此套筒的微生物滯留區(qū)內(nèi) 的裂解工具處于懸浮狀態(tài)，和g)通過轉(zhuǎn)動(dòng)套筒內(nèi)部的核酸回收工具以機(jī)械方式裂解微生物，所述 的核酸回收工具轉(zhuǎn)動(dòng)其上滯留有微生物的裂解工具。
本發(fā)明還涉及一種用于裂解空氣中所含微生物的方法，所述的方法包 括以下步驟
a) 將套筒安置在空氣收集工具內(nèi)部，使得在所述套筒內(nèi)部的滯留區(qū)
與空氣收集工具的空氣輸入導(dǎo)管連通，
b) 通過任意適宜的手段使空氣進(jìn)入所述的空氣收集工具，
c) 在套筒滯留區(qū)中濃縮空氣中所含的微生物，
d) 從所述空氣收集工具取出套筒，
e) 將核酸回收工具裝配到套筒中，
f) 引起事先位于核酸回收工具貯存區(qū)內(nèi)的目的液體的送遞，所述的 送遞通過核酸回收工具的抽吸/送遞工具獲得，如此送遞的液體充滿位于核 酸回收工具與套筒之間的間隙空間，這導(dǎo)致位于套筒的微生物滯留區(qū)中的 裂解工具處于懸浮狀態(tài)，所述的裂解工具位于套筒的垂直內(nèi)壁與核酸回收 工具的垂直外壁之間，和
g) 通過轉(zhuǎn)動(dòng)套筒內(nèi)部的核酸回收工具以機(jī)械方式裂解微生物，所述 的核酸回收工具轉(zhuǎn)動(dòng)其上滯留有微生物的裂解工具。
本發(fā)明的另一個(gè)主題涉及一種用于從空氣中所含微生物中提取核酸的 方法，所述的方法包括以下步驟
a) 將套筒安置在空氣收集工具內(nèi)部，使得在所述套筒內(nèi)部的滯留區(qū) 與空氣收集工具的空氣輸入導(dǎo)管連通，
b) 通過任意適宜的手段使空氣進(jìn)入所述的空氣收集工具，
c) 在套筒滯留區(qū)中濃縮空氣中所含的微生物，
d) 從所述空氣收集工具取出套筒，
e) 將核酸回收工具安置在該套筒中，
f) 將目的液體導(dǎo)入該套筒中，這導(dǎo)致位于此套筒的微生物滯留區(qū)內(nèi) 的裂解工具處于懸浮狀態(tài)，和
g) 通過轉(zhuǎn)動(dòng)套筒內(nèi)部的核酸回收工具以機(jī)械方式裂解所述微生物， 所述的核酸回收工具轉(zhuǎn)動(dòng)其上滯留有微生物的裂解工具，和h)抽吸含有在裂解期間所釋放的所述微生物的核酸的目的液體。 本發(fā)明還涉及一種用于從空氣中所含微生物提取核酸的方法，所述的
方法包括以下步驟
a) 將套筒安置在空氣收集工具內(nèi)部，使得在所述套筒內(nèi)部的滯留區(qū)與 空氣收集工具的空氣輸入導(dǎo)管連通，
b) 通過任意適宜的手段使空氣進(jìn)入所述的空氣收集工具，
c) 在套筒滯留區(qū)中濃縮空氣中所含的微生物，
d) 從所述空氣收集工具取出套筒，
e) 將核酸回收工具裝配到套筒中，
f) 引起事先位于核酸回收工具貯存區(qū)內(nèi)的目的液體的送遞，所述的送 遞通過核酸回收工具的抽吸/送遞工具獲得，如此送遞的液體充滿位于核酸 回收工具與套筒之間的間隙空間，這導(dǎo)致位于套筒的微生物滯留區(qū)中的裂 解工具處于懸浮狀態(tài)，所述的裂解工具位于套筒的垂直內(nèi)壁與核酸回收工 具的垂直外壁之間，
g) 通過轉(zhuǎn)動(dòng)套筒內(nèi)部的核酸回收工具以機(jī)械方式裂解所述微生物，所 述的核酸回收工具轉(zhuǎn)動(dòng)其上滯留有微生物的裂解工具，由此釋放來自所述 微生物的核酸，和
h) 引起核酸回收工具的貯存區(qū)內(nèi)的目的液體抽吸，所述的抽吸通過核 酸回收工具的抽吸/送遞工具獲得，如此抽吸的目的液體含有在裂解期間所 釋放的所述微生物的核酸。
這些提取方法優(yōu)選地包括使套筒滯留區(qū)中的濃縮微生物生長(zhǎng)的額外步 驟d')。
通過在培養(yǎng)箱中保溫該套筒2至24小時(shí)的一段時(shí)間獲得所述生長(zhǎng)。
本發(fā)明的另一個(gè)主題涉及一種用于裂解空氣中所含微生物的方法，所 述的方法包括以下步驟
a) 獲得其中微生物位于滯留區(qū)附近的套筒，
b) 將核酸回收工具裝配到套筒中，C)引起事先位于核酸回收工具貯存區(qū)內(nèi)的目的液體的送遞，所述的 送遞通過核酸回收工具的抽吸/送遞工具獲得，如此送遞的液體充滿位于核 酸回收工具與套筒之間的間隙空間，這導(dǎo)致位于套筒的微生物滯留區(qū)中的 裂解工具處于懸浮狀態(tài)，所述的裂解工具位于套筒的垂直內(nèi)壁與核酸回收 工具的垂直外壁之間，和
d)通過轉(zhuǎn)動(dòng)套筒內(nèi)部的核酸回收工具以機(jī)械方式裂解所述微生物， 所述的核酸回收工具轉(zhuǎn)動(dòng)其上滯留有微生物的裂解工具。
本發(fā)明的另一個(gè)主題涉及一種用于裂解微生物的方法，所述的方法包 括以下步驟
a) 獲得其中微生物在滯留區(qū)中濃縮的套筒，
b) 將核酸回收工具安置在該套筒中，
c) 將目的液體導(dǎo)入該套筒中，這導(dǎo)致位于此套筒的微生物滯留區(qū)內(nèi) 的裂解工具處于懸浮狀態(tài)，和
d) 通過轉(zhuǎn)動(dòng)套筒內(nèi)部的核酸回收工具以機(jī)械方式裂解所述微生物， 所述的核酸回收工具轉(zhuǎn)動(dòng)其上滯留有微生物的裂解工具。
本發(fā)明的另一個(gè)主題涉及一種用于從微生物提取核酸的方法，所述的
方法包括以下步驟
a) 獲得其中微生物在滯留區(qū)中濃縮的套筒，
b) 將核酸回收工具裝配到套筒中，
c) 引起事先位于核酸回收工具貯存區(qū)內(nèi)的目的液體的送遞，所述的 送遞通過核酸回收工具的抽吸/送遞工具獲得，如此送遞的液體充滿位于核 酸回收工具與套筒之間的間隙空間，這導(dǎo)致位于套筒的微生物滯留區(qū)中的
裂解工具處于懸浮狀態(tài)，所述的裂解工具位于套筒的垂直內(nèi)壁與核酸回收 工具的垂直外壁之間，
d) 通過轉(zhuǎn)動(dòng)套筒內(nèi)部的核酸回收工具以機(jī)械方式裂解所述微生物， 所述的核酸回收工具轉(zhuǎn)動(dòng)其上滯留有微生物的裂解工具，由此釋放來自所 述微生物的核酸，和
e) 引起核酸回收工具貯存區(qū)內(nèi)的目的液體的抽吸，所述的抽吸通過 核酸回收工具的抽吸/送遞工具獲得，如此抽吸的目的液體含有在裂解期間所釋放的所述微生物的核酸。
本發(fā)明的另一個(gè)主題涉及一種用于從微生物提取核酸的方法，所述的 方法包括以下步驟
a) 獲得其中微生物在滯留區(qū)中濃縮的套筒，
b) 將核酸回收工具安置在該套筒中，
c) 將目的液體導(dǎo)入該套筒中，這導(dǎo)致位于此套筒的微生物滯留區(qū)內(nèi)
的裂解工具處于懸浮狀態(tài)，和
d) 通過轉(zhuǎn)動(dòng)套筒內(nèi)部的核酸回收工具以機(jī)械方式裂解所述微生物， 所述的核酸回收工具轉(zhuǎn)動(dòng)其上滯留有微生物的裂解工具，和
e) 抽吸含有在裂解期間所釋放的所述微生物的核酸的目的液體。 本發(fā)明也涉及一種用于裂解微生物的方法，所述的方法包括以下步
驟
a) 將含有所述微生物的液體樣品導(dǎo)入本發(fā)明的套筒中，靠近滯留 區(qū)，從而所述的液體樣品導(dǎo)致位于套筒的所述微生物滯留區(qū)內(nèi)的裂解工具 處于懸浮狀態(tài)，
b) 將核酸回收工具安置在該套筒中，
c) 通過轉(zhuǎn)動(dòng)套筒內(nèi)部的核酸回收工具以機(jī)械方式裂解所述微生物， 所述的核酸回收工具轉(zhuǎn)動(dòng)其上滯留有微生物的裂解工具。
術(shù)語"液體樣品"意指可能含有微生物的任意液體樣品。它可以是人或 動(dòng)物來源的液體樣品。這種樣品可以例如是尿樣、全血樣品、血漿樣品或 任何其他體液的樣品。該液體樣品可以是食物來源的，如飲料。它也可以 是環(huán)境來源的，如水。另外，液體樣品也可以是"轉(zhuǎn)移"液體，其中在拭子 型表面采樣裝置(如公司Copan以名稱群集(flocked)SWABS出售的那些)上 所含有的可能微生物通過在所述轉(zhuǎn)移液體中攪動(dòng)所述拭子來重懸。
另外，本發(fā)明涉及一種用于從微生物提取核酸的方法，所述的方法包 括以下步驟
a)將含有所述微生物的液體樣品導(dǎo)入本發(fā)明的套筒中，靠近滯留區(qū)，從而所述的液體樣品導(dǎo)致位于套筒的所述微生物滯留區(qū)內(nèi)的裂解工具 處于懸浮狀態(tài)，
b)將核酸回收工具安置在該套筒中，
C)通過轉(zhuǎn)動(dòng)套筒內(nèi)部的核酸回收工具以機(jī)械方式裂解所述微生物， 所述的核酸回收工具轉(zhuǎn)動(dòng)其上滯留有微生物的裂解工具，
d)抽吸含有在裂解期間所釋放的所述微生物的核酸的目的液體。
另外，本發(fā)明的另一個(gè)主題涉及一種用于鑒定一種或多種微生物的方 法，所述的方法包括以下步驟
a) 通過本發(fā)明的裝置分離來自所述樣品中所含微生物的核酸，
b) 鑒定如此分離的微生物。
根據(jù)本發(fā)明鑒定方法的一個(gè)有利變化，所述方法也包含純化核酸的中 間步驟。這種純化步驟有可能將核酸與裂解步驟中所釋放的其他細(xì)胞成分
分開。該步驟總體上有可能濃縮核酸，并且適合用于純化DNA或RNA。
例如，有可能使用通過吸附或共價(jià)作用而任選用寡核苷酸涂層的磁性粒子
(在該方面，見專利US4,672，040和US5，750,338)并且因而有可能通過洗滌
步驟純化與這些磁性粒子結(jié)合的核酸。當(dāng)意圖依次地?cái)U(kuò)增所述的核酸時(shí)，
這個(gè)核酸純化步驟是特別有利的。這些磁性粒子的一個(gè)特別有利的實(shí)施方
案在專利申請(qǐng)WO-A-97/45202和WO-A-99/35500中描述。用于純化核酸
的方法的另一個(gè)有利實(shí)例是使用柱子形式或惰性粒子形式的二氧化硅
(Boom R等，J. Clin. Microbiol., 1990， n。 28(3),第495-503頁)或磁性粒子
(Merck: MagPrep Silica， Promega: MagneSilTM順磁粒子)。其他廣泛使用
的方法基于柱形式或順磁顆粒形式的離子交換樹脂(Whatman: DEAE-
Magarose) (Levison PR等人，J. Chromatography, 1998,第337-344頁)。另一
種極重要但非本發(fā)明獨(dú)有的方法是吸附到金屬氧化物支持物(公司Xtrana: Xtra-BindTM基質(zhì))。
尤其，鑒定步驟包含以下的分步驟:
a) 特異性地?cái)U(kuò)增分離的核酸，
b) 檢測(cè)如此擴(kuò)增的核酸。
20根據(jù)鑒定方法的一個(gè)優(yōu)選變化，鑒定步驟在與本發(fā)明裝置的套筒處于 流體連通的鑒定裝置中進(jìn)行。
因此，將分離的核酸從本發(fā)明裝置的核酸回收工具轉(zhuǎn)移到該鑒定裝置。
通過送遞含有該核酸的目的液體有利地獲得核酸的轉(zhuǎn)移，通過核酸回 收工具的抽吸/送遞工具在核酸回收工具的貯存區(qū)內(nèi)包含所述的目的液體。
微生物選自包含細(xì)菌、病毒、酵母、霉菌和寄生蟲的組。
從中分離微生物的樣品是環(huán)境來源的。因此，它們可以是空氣樣品或 液體樣品，如水，或表面樣品。樣品也可以是臨床來源的，即能夠進(jìn)行分 析以搜索并且鑒定微生物、任選致病微生物的人或動(dòng)物來源的任意樣品。
靶核酸的存在通過使雜交反應(yīng)可視化而證實(shí)。術(shù)語"雜交反應(yīng)"意指在 捕獲核酸與靶核酸之間的任意反應(yīng)，其中所述的靶核酸通過轉(zhuǎn)錄，逆轉(zhuǎn)錄
或NASBA(基于核酸序列的擴(kuò)增)或PCR(聚合酶鏈反應(yīng))型擴(kuò)增的步驟分離 或產(chǎn)生。
術(shù)語"核酸""意指寡核苷酸、脫氧核糖核酸和核糖核酸，并且還意指其 衍生物。術(shù)語"寡核苷酸"指能夠在合適雜交條件下與至少部分互補(bǔ)的寡核 苷酸雜交的一串至少2個(gè)天然或修飾的核苷酸(脫氧核糖核苷酸或核糖核苷 酸或兩者)。術(shù)語"修飾的核苷酸"意指例如包含修飾堿基和/或在核苷酸間 鍵水平和/或在主鏈水平包含修飾的核苷酸。作為修飾堿基的實(shí)例，可以提 到的是肌苷、甲基-5-脫氧胞苷酸、二甲基氨基-5-脫氧尿苷、二氨基-2,6-嘌 呤和溴-5-脫氧尿苷。
核苷酸間鍵例如硫代磷酸酯、N-烷基氨基磷酸酯、垸基膦酸酯和烷基 磷酸二酯鍵。a誦寡核苷酸如在FR-A-2 607 507中描述的那些、LNA如Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters,第8巻，第16期，1998年8月18日第2219-2222頁中描述的硫代磷酸-LNA和2'-硫代-LNA和作為M. Egholm等人，J. Am. Chem. Soc. (1992), 114, 1895-1897論文主題的PNA是由主鏈被修飾的 核苷酸組成的寡核苷酸的實(shí)例。
雜交反應(yīng)可以由任意檢測(cè)手段如直接或間接手段可視化。
在直接檢測(cè)即無需標(biāo)記的情況下，雜交反應(yīng)通過等離子共振或通過攜 帶導(dǎo)電聚合物的電極上的循環(huán)伏安法觀察。
在間接檢測(cè)即借助標(biāo)記的情況下，可直接標(biāo)記靶核酸或可對(duì)所述核酸 的特異性結(jié)合伴侶進(jìn)行預(yù)標(biāo)記。
表述"所述核酸的特異性結(jié)合伴侶"意指能夠與耙核酸結(jié)合的任何伴 侶，并且將給出的實(shí)例是核酸、寡核苷酸或多核苷酸及酶底物。
術(shù)語"標(biāo)記"意指能夠直接或間直接地產(chǎn)生可檢測(cè)信號(hào)的標(biāo)記物的結(jié) 合。這些標(biāo)記的非限制性實(shí)例包括產(chǎn)生可以通過例如電化學(xué)、比色法、 熒光、發(fā)光來檢測(cè)的信號(hào)的酶，或酶如辣根過氧化物酶(HRP)、堿性磷酸 酶(ALP)、 a-半乳糖苷酶或葡萄糖-6-磷酸脫氫酶；酶抑制劑；酶輔因子； 粒子如金粒子、磁性粒子(magnetic latices)、脂質(zhì)體；生色團(tuán)如發(fā)光或顯色 化合物、放射性分子如32P、 35S或125I、熒光分子如熒光素、羅丹明、 Alexa 、傘形酮、魯米諾或藻藍(lán)蛋白。在熒光的情況下，它可以涉及酶底 物反應(yīng)的熒光產(chǎn)物、熒光團(tuán)-猝滅劑組合、熒光猝滅作用或基于熒光屬性的 任何其他系統(tǒng)。
也可以使用間接系統(tǒng)，例如涉及另一個(gè)配對(duì)，即配體/反配體 (antiligand)對(duì)。配體/反配體對(duì)是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的，例如生物素/鏈 霉抗生物素、糖/外源凝集素、多核苷酸/與該多核苷酸互補(bǔ)的序列。在這種情況下，它是攜帶結(jié)合物質(zhì)的配體。反配體可以是通過前述段落中所述 的標(biāo)記物直接檢測(cè)的，或本身可以是可通過配體/反配體檢測(cè)的。
這些間接檢測(cè)系統(tǒng)可以在某些條件下導(dǎo)致信號(hào)放大。這種信號(hào)放大技
術(shù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的，并且可以參考申請(qǐng)人先前的專利申請(qǐng)F(tuán)R-A-2781802或WO-A-95/08000或參考論文J. Histochem. Cytochem. 45: 481-491, 1997。
靶核酸的預(yù)標(biāo)記可以通過在末端借助聚合酶或借助激酶隨機(jī)或特異性 地直接或間接摻入標(biāo)記物或通過在該分子"內(nèi)部"摻入來進(jìn)行。
標(biāo)記對(duì)靶分析物為特異的結(jié)合伴侶是本領(lǐng)域技術(shù)人員廣泛己知的并且 例如由Greg T. Hermanson在Bioconjugate Techniques, 1996, Academic Press Inc， 525B Street, San Diego, CA92101 USA中描述。
根據(jù)對(duì)所用綴合物標(biāo)記的類型，例如使用酶，本領(lǐng)域技術(shù)人員將添加 試劑以觀察該標(biāo)記過程。該步驟對(duì)應(yīng)于顯現(xiàn)。在此之前是使用洗滌緩沖 液，該洗滌緩沖液有可能除去不參與反應(yīng)或微弱或非特異性結(jié)合的分析物 部分或成分，以便限制背景噪音。
參考附圖，在以下非限制性實(shí)施例的影響下將更清楚地理解本發(fā)明裝 置的目的和優(yōu)勢(shì)，其中
圖1代表根據(jù)本發(fā)明第一實(shí)施方案的空氣收集工具的縱截面分解圖。
圖2代表根據(jù)本發(fā)明第一實(shí)施方案的空氣收集工具的縱截面圖，在所 述空氣收集工具中已經(jīng)在收集微生物的步驟期間安置了套筒。
圖3代表根據(jù)本發(fā)明第一實(shí)施方案的套筒和核酸回收工具的縱截面
圖，其處在將所述工具裝配在套筒內(nèi)的過程的初始階段。圖4代表根據(jù)本發(fā)明第一實(shí)施方案的套筒和核酸回收工具的縱截面 圖，其處在將所述工具裝配在套筒內(nèi)的過程的進(jìn)展(advanced)階段。
圖5代表根據(jù)本發(fā)明第一實(shí)施方案的套筒和核酸回收工具的縱截面 圖，其處在將所述工具裝配在套筒內(nèi)的過程的最終階段。
圖6代表根據(jù)本發(fā)明第一實(shí)施方案的核酸回收工具的縱截面圖，其中 所述的核酸回收工具在以機(jī)械方式裂解微生物的步驟期間裝配到套筒中。
圖7代表根據(jù)本發(fā)明第一實(shí)施方案的核酸回收工具的縱截面圖，其中 所述的核酸回收工具在抽吸含有核酸的目的液體至核酸回收工具的貯存區(qū) 中的期間裝配到套筒中。
圖8代表根據(jù)本發(fā)明第一實(shí)施方案的核酸回收工具的縱截面圖，當(dāng)全 部含有核酸的目的液體已經(jīng)被抽吸至核酸回收工具的貯存區(qū)中時(shí)，所述的 核酸回收工具裝配到套筒中。
圖9代表根據(jù)本發(fā)明第一實(shí)施方案的核酸回收工具的縱截面圖，其中 所述的核酸回收工具在提供該工具以鑒定微生物的期間裝配到套筒中。
圖10代表根據(jù)本發(fā)明第一實(shí)施方案的核酸回收工具的縱截面圖，其 中一旦用于鑒定微生物的工具與套筒處于流體連通狀態(tài)，就將所述的核酸 回收工具裝配到套筒中。
圖11代表在轉(zhuǎn)移含有核酸的目的液體到微生物鑒定工具中的初始階 段，根據(jù)本發(fā)明第一實(shí)施方案的核酸回收工具-套筒-微生物鑒定工具組件 的縱截面圖。
圖12代表在轉(zhuǎn)移含有核酸的目的液體到微生物鑒定工具中后，根據(jù) 本發(fā)明第一實(shí)施方案的核酸回收工具-套筒-微生物鑒定工具組件的縱截面 圖。圖13代表根據(jù)本發(fā)明第二實(shí)施方案的空氣收集工具的縱截面圖，在
所述空氣收集工具中已經(jīng)在收集微生物的步驟期間安置了套筒。
圖14代表在手動(dòng)分布目的液體的步驟期間，根據(jù)第二實(shí)施方案的套 筒的縱截面圖。
圖15代表根據(jù)本發(fā)明第二實(shí)施方案的核酸回收工具的縱截面圖，其 中所述的核酸回收工具在以機(jī)械方式裂解微生物的步驟期間置于套筒中。
圖16代表根據(jù)本發(fā)明第二實(shí)施方案的核酸回收工具的縱截面圖，其 中所述的核酸回收工具在抽吸含有核酸的目的液體的步驟期間置于套筒 中。
圖17代表試驗(yàn)臺(tái)的功能性示意圖，所述的試驗(yàn)臺(tái)意圖測(cè)試用本發(fā)明 裝置捕獲氣溶膠中所含細(xì)菌的能力。
圖18是顯示本發(fā)明裝置的收集效率的示意圖，其中所述的收集效率 是所產(chǎn)生氣溶膠粒子的尺寸的函數(shù)。
圖19是比較采用本發(fā)明裝置和現(xiàn)有技術(shù)備選方法的細(xì)菌裂解效率的 示意圖。
圖20是顯示在通過本發(fā)明裝置裂解多種混懸液中所含細(xì)菌并回收核 酸后，使用實(shí)時(shí)NASBA技術(shù)，實(shí)時(shí)檢測(cè)這些細(xì)菌的示意圖。
圖21是顯示在通過本發(fā)明裝置裂解多種全血樣品中所含細(xì)菌并回收 核酸后，使用實(shí)時(shí)NASBA技術(shù)，實(shí)時(shí)檢測(cè)這些細(xì)菌的示意圖。
根據(jù)第一實(shí)施方案，構(gòu)成本發(fā)明裝置的第一要素是空氣收集工具10。 該工具由上部單元12和下部單元14組成。上部單元12—般具有圓柱形狀。該圓柱體的下端是不受約束的，而上端借助水平壁13被部分阻塞。 壁13在中心具有借助導(dǎo)管18在上部單元12內(nèi)部延伸的孔眼，其基部基本 上是圓錐形的。該部分實(shí)際上構(gòu)成空氣注入空氣收集工具10中的導(dǎo)管。 根據(jù)一個(gè)具體實(shí)施方案，該空氣輸入導(dǎo)管可以通過任何適宜的工具與空氣 再循環(huán)回路的管道連接。
空氣收集工具10可以例如具有在10和40 mm之間、優(yōu)選20 mm的 外徑?？諝廨斎雽?dǎo)管的內(nèi)徑是例如6mm。
這種空氣收集工具10可以有利地由可消毒、尤其通過高壓滅菌消毒 的材料制成。它因而可以由金屬如鋁或鋼制成。它也可以由聚合物(如聚 (甲基丙烯酸甲基酯(PMM))制成。
上部單元12的垂直環(huán)形壁20的下端在其外側(cè)面包含肩形突出物 201。圍繞壁20的完整周邊產(chǎn)生該凹槽。該凹槽意圖有利于上部單元12 和下部單元14的聯(lián)鎖。
下部單元14 一般也是圓柱形狀的。這種圓柱體的上端是不受約束 的，而下端借助水平壁21被部分阻塞，其中所述的水平壁21在其中心包 含一個(gè)基本上圓柱形的空氣輸出導(dǎo)管22，其中所述導(dǎo)管的基部與該水平壁 整合。導(dǎo)管22的下端是不受約束的。該導(dǎo)管與下部單元14的內(nèi)部連通， 從而當(dāng)空氣收集工具10的上部單元12和下部單元14聯(lián)鎖時(shí)，導(dǎo)管22起 到空氣輸出導(dǎo)管的作用，其中使所述空氣通過空氣輸入導(dǎo)管18進(jìn)入空氣 收集工具10。
下部單元14的垂直環(huán)形壁24的上端在其內(nèi)側(cè)面包含肩形突出物 241。圍繞壁24的完整周邊產(chǎn)生該肩形突出物。該肩形突出物也意圖有利 于上部單元12和下部單元14的聯(lián)鎖，這是由于壁20和24的末端具有形 狀互補(bǔ)的交叉部分，從而便于裝配在一起。最重要的是這種聯(lián)鎖是可逆 的。 一旦裝配在一起，單元12和14應(yīng)當(dāng)能夠彼此脫離。聯(lián)鎖單元12和14的一種備選方式可以通過將一個(gè)單元擰到另一個(gè)單 元上的聯(lián)鎖。為此目的，單元12或14之一的壁的末端可以攜帶凸螺紋并 且第二單元的壁的末端可以攜帶相應(yīng)的凹螺紋。
重要的是該收集工具是以密封方式封閉的，以便防止空氣的任何附加 進(jìn)入。
根據(jù)使用該空氣收集工具的一個(gè)具體模式，空氣輸出導(dǎo)管22的下端 可以與空氣空氣吸泵(未顯示)或任何其他等同的泵送工具連接。當(dāng)需要例 如在給定環(huán)境(如醫(yī)院房間或用于生產(chǎn)藥品或食品加工產(chǎn)品的房間)中進(jìn)行 環(huán)境空氣分析時(shí)，該泵有可能將環(huán)境空氣吸入空氣收集工具中。為此目 的，可以優(yōu)選的是具有自主運(yùn)行的泵送工具。
圖2代表在運(yùn)行期間與套筒30組合的空氣收集工具10。從該圖中可 以看到，套筒30安置在空氣收集工具IO內(nèi)部。為做到這點(diǎn)，將構(gòu)成空氣 收集工具10的單元12和14隔開。安置套筒30以承載空氣收集工具10的 下部單元14。隨后將上部單元12再放置于下部單元14上并將這兩個(gè)工具 聯(lián)鎖。如上文所述，由空氣收集工具IO和套筒30構(gòu)成的組件隨后與再循 環(huán)回路連接或與泵送裝置連接，以便引起在空氣收集工具10內(nèi)部的空氣 循環(huán)。
圖2中所述的套筒30在縱截面上具有大致圓柱體的形狀，帶有一個(gè) 基本上環(huán)狀的橫斷截面。該圓柱體的上端是不受約束的，而下端由在其中
心具有一個(gè)孔洞的壁構(gòu)成，其中隨該孔洞延伸，存在一個(gè)在套筒30內(nèi)部 延伸的導(dǎo)管32。應(yīng)當(dāng)指出當(dāng)?shù)诌_(dá)該導(dǎo)管的上端時(shí)，導(dǎo)管的內(nèi)部橫截面變得 更小。還要指出導(dǎo)管的下端由膜34封閉，所述的膜34發(fā)揮隔膜的作用。 構(gòu)成膜34的材料適合因采用尖銳物體單純壓迫而破裂。該過程在下相對(duì) 于圖9和IO進(jìn)行描述。該材料例如是聚對(duì)苯二甲酸乙二醇酯(PET)或聚乙 烯聚碳酸酯。
如可以在圖2中看到，套筒30的下部壁35的內(nèi)表面呈傾斜狀，該斜
27面的最低點(diǎn)與導(dǎo)管32接觸/并且最高點(diǎn)與套筒30的垂直壁36接觸。所述 壁35充當(dāng)裂解工具38的支持物并且構(gòu)成微生物滯留區(qū)。在這種情況下， 這些裂解工具由尺寸相同的珠子構(gòu)成。根據(jù)一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，這些珠 子由玻璃制成。不過，它們可能由任何其他等效材料(如鐵)構(gòu)成。這些珠 子有利地具有200和800微米Oim)之間的直徑。
根據(jù)一個(gè)有利的變化，所述珠子可以是不同尺寸的。因而，使用直徑 在200和300 nm之間的珠子與直徑在400和600 pm之間的珠子的混合物 可以是特別合適的。
珠子以一個(gè)或多個(gè)疊加層形式通過以層形式沉積的膠化材料保持就 位，在所述膠化材料中埋入珠子層。該膠化材料應(yīng)當(dāng)滿足幾項(xiàng)要求。第一 是它應(yīng)當(dāng)是惰性的，從而部影響在套筒內(nèi)部實(shí)施的過程。第二是它應(yīng)當(dāng)具 有在液體中溶解的能力，以便釋放它截獲的粒子以實(shí)現(xiàn)微生物裂解。這種 材料例如可以是瓊脂糖。
或者，膠化材料可以有利地是微生物培養(yǎng)基。實(shí)際上，已經(jīng)在體外診 斷領(lǐng)域中常規(guī)地使用瓊脂培養(yǎng)基很長(zhǎng)時(shí)間。使用這種培養(yǎng)基具有幾個(gè)優(yōu) 點(diǎn)。主要優(yōu)點(diǎn)是它能夠在進(jìn)行裂解微生物之前賦予微生物一個(gè)生長(zhǎng)期。即 便本發(fā)明裝置尋求滿足與快速檢測(cè)致病微生物相關(guān)的需求，幾分鐘至幾小 時(shí)的生長(zhǎng)期仍將使得微生物繁殖，這直接影響獲得更多數(shù)量的核酸。使用 培養(yǎng)基的第二個(gè)優(yōu)點(diǎn)是培養(yǎng)基可以對(duì)一種或多種給定物種具有選擇性。隨 之而來的是，使用這種培養(yǎng)基可以選擇性生長(zhǎng)并且因而選擇性地檢測(cè)某些 致病微生物，殺滅無關(guān)的且在分析中可能有干擾作用的其他微生物。因 而，可以考慮的是具有幾個(gè)專用套筒，每個(gè)套筒適于檢測(cè)特定的微生物物 種。
套筒30的尺度就內(nèi)徑而言可以例如是從8至16mm，優(yōu)選地是12 mm。珠子層的總厚度一般在1和2 mm之間，這對(duì)應(yīng)于0.4與1克之間的 玻璃珠數(shù)量。套筒30有利地使用壓射成形術(shù)產(chǎn)生。所用材料例如是聚丙烯、聚苯 乙烯、聚碳酸酯或PMMA。
當(dāng)啟動(dòng)空氣中收集裝中空氣的循環(huán)時(shí)，所述空氣遵循的路徑由圖2中 箭頭指示。因而，應(yīng)當(dāng)指出空氣通過空氣輸入導(dǎo)管18進(jìn)入空氣收集工具 10。由于套筒30的導(dǎo)管32部分地插入空氣輸入導(dǎo)管18中，導(dǎo)管18中的 空氣流在導(dǎo)管32的頂部被轉(zhuǎn)換成至周緣流。這由導(dǎo)管32上端基本上是圓 錐形的事實(shí)解釋。另外，膜34在導(dǎo)管32基部存在以防止空氣穿透進(jìn)入導(dǎo) 管32，因?yàn)樵诩訅毫顟B(tài)下這是極為迅速的。由于輸入導(dǎo)管18的壁與導(dǎo) 管32的壁之間的間隙空間因?qū)Ч?2末端的圓錐形狀而驟然縮窄，因而存 在對(duì)周緣空氣流的加速作用。隨后，周緣空氣流在珠子38的上層停頓， 在該位置上導(dǎo)致空氣流中所輸送的微生物因沖擊作用在膠化材料或培養(yǎng)基 的表面滯留。該過程因而相對(duì)地類似于空氣生物收集器中發(fā)生的過程。
空氣就其本身而言繼續(xù)前進(jìn)，由泵送工具抽吸?？諝庋刂淄?0的 垂直壁36的內(nèi)面反轉(zhuǎn)上升至其因循環(huán)路徑變寬而失去速度的水平?？諝?沿著同一個(gè)壁的外側(cè)面再次下沉并且在空氣輸出導(dǎo)管22的入口出被轉(zhuǎn)換 成中心流，所述的中心流通過所述空氣輸出導(dǎo)管離開空氣收集工具10。
空氣中收集裝置IO中收集的空氣的流速可以例如在20和100升/分鐘 (1/min)之間。它有利地是50 1/min。
一旦已經(jīng)進(jìn)行套筒內(nèi)部的微生物滯留/濃縮步驟，則通過松開(脫位或 擰下)所述工具的上部單元12和下部單元14從所述空氣收集工具取出套 筒。
在該階段，若需要培養(yǎng)所述套筒中濃縮的微生物，則有機(jī)會(huì)將套筒在 37°C的培養(yǎng)箱中保溫。如上文所述，這種保溫一般持續(xù)幾分鐘至幾小時(shí)， 從而不過多延長(zhǎng)分析時(shí)間。然而，若不急于獲得分析結(jié)果，可以考慮將套 筒保溫適合約束細(xì)菌生長(zhǎng)的較長(zhǎng)時(shí)間段，即大約24小時(shí)。類似地，若需要推遲分析，也可以構(gòu)思的是將套筒貯藏在適合這種貯 藏的環(huán)境中，如冷室。
根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)變化，可以提供直接安置在空氣中收集裝置10中
的套筒30。該類型的提供具有避免用戶不得不在空氣收集裝置中安裝套筒 并且因而降低該步驟期間污染風(fēng)險(xiǎn)的優(yōu)點(diǎn)。在這種情況下特別有利的是空 氣收集工具10由與套筒30相同的材料(即聚丙烯、聚碳酸酯或PMMA)制 成。隨后通過壓射成形法制造是特別合適的。
當(dāng)進(jìn)行分析時(shí)，套筒30與核酸回收工具40聯(lián)鎖，如圖3中所示。根 據(jù)箭頭A所示的垂直平移運(yùn)動(dòng)，將所述工具經(jīng)套筒的自由末端插入該套 筒。
在圖3的縱截面中所示的核酸回收工具40包含具有圓形橫截面的總 體上為圓柱形的實(shí)體42。實(shí)體42在其外壁的上半部分具有肩形突出物 43，其功能是當(dāng)在套筒30中完全插入所述核酸回收工具時(shí)，通過抵住套 筒30的垂直壁36的上末端，確保套筒30-核酸回收工具40組件無泄漏。 另外，實(shí)體42的外壁在其頂端部分具有幾個(gè)連續(xù)凹槽。位于肩形突出物 43下方的凹槽44本身起到肩形突出物的作用，因?yàn)楫?dāng)在套筒30中完全插 入工具40時(shí)，凹槽44抵住在垂直壁36的上末端產(chǎn)生的肩形突出物45, 如圖5中所示。位于凹槽44下方的第二凹槽46本身具有能夠減小實(shí)體42 的直徑的功能，從而在實(shí)體42的垂直壁的外表面與套筒30的垂直壁36 的內(nèi)表面之間存在間隙空間。這種空間的作用下文待述。另外，全部這些 肩形突出物和凹槽使得加強(qiáng)由套筒30和核酸回收工具40構(gòu)成的組件的無 泄漏性成為可能。
在其基部，實(shí)體42在中心位置具有基本上呈圓柱形狀的具有圓形橫 截面的腔體47，該腔體上端基本上呈圓錐形狀。類似地，它還在其上部分 在中心位置包含腔體48。腔體48構(gòu)成其中安置目的液體50的貯存區(qū)，其 中所述的腔體48基本上是帶圓形橫截面的圓柱形狀，其下端基本上呈圓 錐形狀。這種液體不但可以重懸玻璃珠38，還可以回收核酸， 一旦微生物已經(jīng)裂解。因而重要的是，這種液體一方面對(duì)微生物是惰性的，并且另一 方面就生物學(xué)方法而言對(duì)核酸是惰性的。因而，這種目的液體一般是適于
執(zhí)行生物方法的緩沖液。腔體47中所含的目的液體的體積可以例如在0.1 和0.4毫升(ml)之間。
為了使目的液體能夠發(fā)揮其作用，腔體48與由其形狀互補(bǔ)于腔體48 下部分的柱塞52和處于垂直位置的臂54構(gòu)成的抽吸/送遞工具協(xié)作，其中 所述的臂54與柱塞52成為整體并伸出腔體48之外。該臂與連接柱塞52 的末端相對(duì)的末端可以具有一個(gè)特定形狀的頭部，所述頭部能夠嚙合用于 以平移方式根據(jù)基本上垂直的運(yùn)動(dòng)驅(qū)動(dòng)(未顯示)抽吸/送遞工具的工具。這 種驅(qū)動(dòng)工具優(yōu)選地是自動(dòng)化工具。
腔體48通過通道56與腔體47處于流體連通狀態(tài)，其中所述的通道 56將腔體48的下端連接到腔體47的上端。在圖3中，通道56由位于腔 體47上端的膜58阻塞，從而防止清空腔體47。該膜也由可以穿透的材料 制成。尤其，可以借助套筒30的導(dǎo)管32上端穿透該膜。
如圖4中所示，核酸回收工具40外部形狀完美地互補(bǔ)于套筒30的內(nèi) 部形狀。隨后，工具40完美地安放在套筒30內(nèi)部，導(dǎo)管32通過自身插入 腔體47內(nèi)部而發(fā)揮引導(dǎo)作用。安放工具40直至工具40的下部壁60抵住 珠子38。
在此階段，根據(jù)圖5中所示的箭頭B，在核酸回收工具上并且同時(shí)在 抽吸/送遞工具上存在壓力運(yùn)動(dòng)。抽吸/送遞工具的這種平移運(yùn)動(dòng)導(dǎo)致目的 液體50經(jīng)通道56送遞到腔體47中并且更具體地送遞到腔體47的內(nèi)壁與 導(dǎo)管32的外壁之間的間隙空間中。這種送遞是可能的，因?yàn)樗鲆后w對(duì) 膜58所產(chǎn)生的壓力導(dǎo)致該膜的穿透或脫離。目的液體50隨后移動(dòng)到其中 存在玻璃珠38的套筒滯留區(qū)內(nèi)，并灌滿該滯留區(qū)，導(dǎo)致截獲珠子的膠化 材料懸浮，從而在由抽吸/送遞工具產(chǎn)生的目的液體流中的珠子被夾帶到核 酸回收工具40與套筒30之間的間隙空間62。應(yīng)當(dāng)指出這種間隙空間優(yōu)選 地具有600和800 pm之間的寬度。此寬度與所用珠子38的直徑直接相關(guān)。具體而言，所述珠子應(yīng)當(dāng)能夠在這種空間中輕易地循環(huán)，還應(yīng)當(dāng)能夠
被核酸回收工具40轉(zhuǎn)動(dòng)。為此目的，實(shí)體42的外部垂直壁64優(yōu)選地具有 促進(jìn)珠子轉(zhuǎn)動(dòng)的粗糙表面。
一旦全部珠子沿實(shí)體42的外部垂直壁64分布，則可以將核酸回收工 具完全插入套筒，因而產(chǎn)生組件的無泄漏性，尤其借助肩形突出物43和 44，其中所述的肩形突出物43和44分別抵住套筒30的壁的末端和抵住肩 形突出物45，如圖5中所示。
當(dāng)然，通過目的液體流，將滯留于膠化材料和珠子上的微生物以如同 珠子那樣的相同方式轉(zhuǎn)移到間隙空間62。
就轉(zhuǎn)移目的液體而言，當(dāng)將目的液體推入通道56時(shí)，膜34在導(dǎo)管32 基部的存在似乎防止導(dǎo)管32中含有的空氣被逐出。隨后，導(dǎo)管32中由所 截獲空氣產(chǎn)生的壓力防止目的液體進(jìn)入該導(dǎo)管，所述的目的液體因而浸潤(rùn) 腔體47的內(nèi)壁與所述導(dǎo)管32的外壁之間的間隙空間。 一旦珠子38沿著實(shí) 體42的外部垂直壁64分布并且核酸回收工具40-套筒30組件聯(lián)鎖，則啟 動(dòng)裂解步驟本身。該步驟在圖6中描述。如可以在該圖中看到，將核酸回 收工具40以箭頭C所示的方向轉(zhuǎn)動(dòng)。為此，將核酸回收工具40的實(shí)體42 通過任何適宜的機(jī)械偶聯(lián)工具與自動(dòng)裝置聯(lián)鎖。這種系統(tǒng)尤其有可能精確 調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)動(dòng)的速度。
然而，可以構(gòu)思手工轉(zhuǎn)動(dòng)核酸回收工具。為此，可以在實(shí)體42的上 部分專門地提供持握工具(未顯示)。隨后可以用一只手抓緊這些持握工 具，而用另一只握住套筒30。
例如，轉(zhuǎn)動(dòng)速度值可以在300和2000轉(zhuǎn)/分鐘之間，優(yōu)選地是1000轉(zhuǎn) /分鐘。
就轉(zhuǎn)動(dòng)時(shí)間而言， 一般在1和2分鐘之間。顯而易見，這兩個(gè)參數(shù)的選擇取決于意圖裂解的微生物類型。因此，
為了裂解釀酒酵母(5""cc/;^ww;;ce5 ce^v/Wae)型酵母，最佳裂解條件由同于1000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)動(dòng)速度持續(xù)2分鐘組成。
在該步驟期間，通過針對(duì)核酸回收工具中實(shí)體42的摩擦作用圍繞對(duì)稱軸轉(zhuǎn)動(dòng)珠子38。這種雙重轉(zhuǎn)動(dòng)導(dǎo)致機(jī)械地裂解在珠子38與實(shí)體42之間截獲的微生物。
一旦裂解步驟已經(jīng)結(jié)束并且釋放核酸，則將目的液體通過抽吸/送遞工具抽吸到腔體48中，如圖7中所示。詳細(xì)言之，通過在臂54上牽引的任何適宜的自動(dòng)或手動(dòng)工具，以垂直平移方式根據(jù)箭頭D移動(dòng)抽吸/送遞工具。這種平移運(yùn)動(dòng)導(dǎo)致抽吸目的液體50至腔體48。在這種抽吸期間，目的液體沿著裂解步驟之前該液體在送遞期間所遵循途徑的逆向途徑行進(jìn)。具體而言，該液體行進(jìn)到核酸回收工具40與套筒30之間的間隙空間中，返回至通道56并停留在腔體48中。如可以在7和8圖中看到，充滿腔體48的目的液體載有微生物的靶核酸70。
由于核酸回收工具40完全地插入套筒30中，該工具40的下部壁60與釋放了珠子的該套筒底部之間的間隙空間不足以允許珠子38通過，其中所述的底部起到微生物滯留區(qū)的作用。隨后，珠子38仍沿著實(shí)體42的垂直壁64分布。
類似地，在腔體47的內(nèi)壁與導(dǎo)管32的外壁之間的間隙空間特別適合發(fā)揮濾器的作用，尤其用于滯留裂解步驟期間產(chǎn)生的細(xì)胞碎片。這是因?yàn)樵谥圃焯淄埠秃怂峄厥展ぞ咂陂g，可以以如此方式調(diào)整所述套筒和所述核酸回收工具尺寸，從而極好地控制這種間隙空間的尺寸并優(yōu)化過濾作用。
一旦已經(jīng)將全部目的液體抽吸到腔體48中，可以構(gòu)思將所述液體轉(zhuǎn)移到一個(gè)生物分析裝置中。這種轉(zhuǎn)移可以直接在該分析裝置或在其最終部件為該分析裝置的流體回路中進(jìn)行。
33當(dāng)將目的液體直接轉(zhuǎn)移到該裝置時(shí)，構(gòu)思在該裝置本身中進(jìn)行用于鑒定微生物的全部核酸處理步驟。因而，可以構(gòu)思例如在該裝置中進(jìn)行靶核酸的擴(kuò)增、切割和標(biāo)記這些靶核酸并且通過與互補(bǔ)性序列雜交而檢測(cè)靶核酸。
在圖9中，在縱截面上部分地描述流體分析裝置80。這種裝置80在其上半部分包含用于射流連接到核酸回收工具40-套筒30組件的優(yōu)先區(qū)82。優(yōu)先連接區(qū)82總體上是圓錐形的，更具體地互補(bǔ)于導(dǎo)管32的形狀。在其頂部，它具有接觸裝置80的內(nèi)部射流回路86的孔隙84。如圖9中所示，根據(jù)箭頭E，將射流分析裝置80通過如此方式與核酸回收工具40-套筒30組件連接，即把優(yōu)先連接區(qū)82提升到所述組件的基部、具體是提升到阻塞導(dǎo)管32的膜34的水平。由于優(yōu)先連接區(qū)82的末端是尖銳的，當(dāng)該末端與膜34接觸時(shí)，它穿透該膜，從而打開指向?qū)Ч?2的通道。隨后將分析裝置80插入導(dǎo)管32，直到它有觸感，即直至該優(yōu)先連接區(qū)的外壁與導(dǎo)管32的內(nèi)壁接觸，如圖10中所示。當(dāng)分析裝置80因而與核酸回收工具40-套筒30組件連接時(shí)，應(yīng)當(dāng)指出優(yōu)先連接區(qū)82的末端與通道56的下端接觸。隨后，在優(yōu)先連接區(qū)82的上半部分中的射流裝置80的壁切斷了通道56和位于腔體47內(nèi)壁與導(dǎo)管32外壁之間的間隙空間之間的流體連通。
隨后，當(dāng)操作員希望將含有靶核酸70的目的液體50轉(zhuǎn)移到分析裝置80時(shí)，足以對(duì)抽吸/送遞工具的臂54再次施加壓力，從而該工具以垂直平移方式根據(jù)箭頭B移動(dòng)到腔體48中。這在圖ll中描述。
抽吸/送遞工具的移動(dòng)導(dǎo)致將目的液體50和核酸70轉(zhuǎn)移到將腔體48與腔體47連接的通道56中。由于通道56借助優(yōu)先連接區(qū)82的孔隙84與內(nèi)射流分析裝置80的內(nèi)部射流回路86處于直接流體連通狀態(tài)，目的液體隨后被直接地轉(zhuǎn)移到分析裝置80中，而沒有所述液體與外部環(huán)境接觸的任何風(fēng)險(xiǎn)。也不存在目的液體逃逸進(jìn)入核酸回收工具40與套筒30之間的間隙空間，因?yàn)橥ǖ?6和位于腔體47內(nèi)壁與導(dǎo)管32外壁之間的間隙空間之間的任何流體連通被阻斷。這在圖12中描述。一旦全部目的液體50和全部核酸70已經(jīng)轉(zhuǎn)移到射流分析裝置80中，則可以從核酸回收工具40-套筒30組件脫離該裝置。由于所述組件是用過的，因而拋棄這些組件。射流分析裝置80本身隨后用來進(jìn)行微生物的鑒定。
根據(jù)一個(gè)有利的實(shí)施方案，上文聯(lián)系圖1至12所述的全部步驟并且尤其與微生物裂解、核酸提取和轉(zhuǎn)移所述核酸至射流分析裝置有關(guān)的那些
步驟可以通過用于此目的的系統(tǒng)加以自動(dòng)化。
圖13至16描述本發(fā)明裝置的第二實(shí)施方案。所考慮的裝置具有比第一實(shí)施方案的裝置更簡(jiǎn)單的設(shè)計(jì)。
根據(jù)這個(gè)第二實(shí)施方案的裝置也包含空氣收集工具90。該工具由上部單元92和下部單元94組成。上部單元92—般是圓柱形狀的。該圓柱體的下端是不受約束的，而上端借助水平壁93被部分阻塞。壁93在中心具有經(jīng)由導(dǎo)管98延伸到上部單元92中的一個(gè)孔眼，其基部是圓錐形的。該部分實(shí)際上構(gòu)成空氣注入空氣收集工具90中的導(dǎo)管。根據(jù)一個(gè)具體實(shí)施方案，該空氣輸入導(dǎo)管可以通過任何適宜的工具與空氣再循環(huán)回路的管道連接。
在其下部分，導(dǎo)管98包含一個(gè)篩板99。該篩板的功能導(dǎo)致空氣流均勻地分布在空氣收集工具90內(nèi)部。
上部單元92的垂直環(huán)形壁100的下端在其外側(cè)面包含肩形突出物1001Q圍繞壁100的完整周邊產(chǎn)生該凹槽。該凹槽意圖便利上部單元92和下部單元94裝配在一起。
下部單元94 一般也是圓柱形狀的。這種圓柱體的上端是不受約束的，而下端借助水平壁101被部分阻塞，其中所述的水平壁101在其中心包含一個(gè)基本上圓柱形的空氣輸出導(dǎo)管102,其中所述導(dǎo)管的基部與該水平壁整合。導(dǎo)管102的下端是不受約束的。該導(dǎo)管與下部單元94的內(nèi)部連通，從而當(dāng)空氣收集工具卯的上部單元92和下部單元94聯(lián)鎖時(shí)，導(dǎo)管 102起到空氣輸出導(dǎo)管的作用，其中使所述空氣通過空氣輸入導(dǎo)管98進(jìn)入 空氣收集工具90。
下部單元14的垂直環(huán)形壁104的上端在其內(nèi)側(cè)面包含肩形突出物 10+。圍繞壁104的完整周邊產(chǎn)生該肩形突出物。該肩形突出物也意圖便 利上部單元92和下部單元94裝配在一起，其原因在于如此事實(shí)壁100 和104的末端具有形狀互補(bǔ)的交叉部分，從而便于裝配在一起。最重要的 是這種裝配在一起是可逆的。 一旦裝配在一起，單元92和94應(yīng)當(dāng)能夠彼 此脫離。
將單元92和94裝配起來的一種備選方式可以通過將一個(gè)單元擰到另 一個(gè)單元上而裝配起來。為此目的，單元92或94之一的壁的末端可以攜 帶凸螺紋并且第二單元的壁的末端可以攜帶相應(yīng)的凹螺紋。
重要的是該收集工具是以密封方式封閉的，以便防止空氣的任何附加 進(jìn)入。
根據(jù)使用該空氣收集工具的一個(gè)具體模式，空氣輸出導(dǎo)管102的下端 可以與空氣空氣吸泵(未顯示)或任何等同的泵送工具連接。
套筒110安置在空氣收集工具90內(nèi)部。為做到這點(diǎn)，將構(gòu)成空氣收 集工具90的單元92和94隔開。安置套筒110以承載空氣收集工具90的 下部單元94。隨后將上部單元92再放置于下部單元94上并將這兩個(gè)工具 聯(lián)鎖。如上文所述，由空氣收集工具90和套筒110構(gòu)成的組件隨后與再 循環(huán)回路連接或與泵送裝置連接，以便引起在空氣收集工具10內(nèi)部的空 氣循環(huán)。
套筒110在縱截面上具有大致圓柱體的形狀，具有低高度和一個(gè)基本 上環(huán)狀的橫斷截面。這種圓柱體的上端是不受約束的，而下端由壁112構(gòu) 成。所述壁112充當(dāng)裂解工具118的支持物并且構(gòu)成微生物滯留區(qū)。如上所述，這些裂解工具由珠子構(gòu)成。珠子以一個(gè)或多個(gè)疊加層形式通過如上 所述的以層形式沉積的膠化材料保持就位，在所述膠化材料中埋入珠子層。
當(dāng)啟動(dòng)空氣中收集裝中空氣的循環(huán)時(shí)，所述空氣遵循的路徑由圖13 中箭頭指示。因而，應(yīng)當(dāng)指出空氣通過空氣輸入導(dǎo)管98進(jìn)入空氣收集工 具90。借助篩板99，空氣均勻地分布并且在珠子118的上層停頓，在該 位置上導(dǎo)致空氣流中所輸送的微生物因沖擊作用在膠化材料或培養(yǎng)基的表 面滯留。
空氣就其本身而言繼續(xù)前進(jìn)，由泵送工具抽吸。它沿著套筒110的壁 的內(nèi)面上升返回?？諝庋刂粋€(gè)壁的外側(cè)面再次下沉并且在空氣輸出導(dǎo) 管102的入口出被轉(zhuǎn)換成中心流，所述的中心流通過所述空氣輸出導(dǎo)管離 開空氣收集工具90。
一旦已經(jīng)進(jìn)行空氣收集，則松開空氣收集工具90的單元92和94并回 收套筒110。
隨后進(jìn)行分布目的液體的步驟，如14圖中所示。在該步驟期間，使 用圖14中局部所示的移液器122，操作員將給定體積的目的液體120置于 套筒110中。如上所述，目的液體可以例如是裂解緩沖液。目的液體與截 獲珠子的膠化材料之間的借助導(dǎo)致懸浮該材料并且因而懸浮珠子本身。置 于套筒110中的目的液體的體積可以例如是0.5 ml。
一旦已經(jīng)進(jìn)行該步驟，操作員將核酸回收工具124置于套筒110內(nèi)。 不同于第一實(shí)施方案中所述的工具40，工具124既不包含抽吸/送遞工 具，也不包含能夠接受目的液體的腔體。工具124具有基本上圓柱形的橫 斷截面并且在其上半部分具有優(yōu)先夾扣區(qū)126。工具124的下部壁128基 本上是扁平的并且抵住珠子。隨后由操作員將工具124按照箭頭F的方向 圍繞對(duì)稱軸轉(zhuǎn)動(dòng)來進(jìn)行裂解。壁128的轉(zhuǎn)動(dòng)導(dǎo)致珠子118圍繞對(duì)稱軸轉(zhuǎn) 動(dòng)。這種雙重轉(zhuǎn)動(dòng)導(dǎo)致機(jī)械地裂解在珠子118與壁128之間截獲的微生物。這引起核酸釋放到目的液體中。
一旦裂解步驟已經(jīng)結(jié)束并且釋放核酸，則由操作員借助移液器122抽 吸含有所述核酸70的目的液體，如圖16中所示。
一旦全部目的液體位于移液器中，則可以將所述液體轉(zhuǎn)移到分析裝置 中，以便其中進(jìn)行如上文所述的多個(gè)核酸處理步驟。也可以將它置于以便 貯存的容器中或置于意圖用于核酸處理步驟之前的步驟的任意裝置中。這 種步驟可以例如是意圖通過將核酸與仍存在的細(xì)胞成分分開而濃縮所述核 酸的純化步驟。當(dāng)本發(fā)明裝置在其第二實(shí)施方案中使用時(shí)，此步驟是特別 重要的，因?yàn)橥ㄟ^第二實(shí)施方案的簡(jiǎn)單設(shè)計(jì)，含有核酸的目的液體不再進(jìn) 行任何過濾，如同它在第一實(shí)施方案的裝置中和如上文所述那樣。
實(shí)施例
實(shí)施例1:使用本發(fā)明裝置捕獲氣溶膠中所含枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)孢子的效率的測(cè)量
設(shè)計(jì)無泄漏試驗(yàn)臺(tái)以便進(jìn)行這種測(cè)量。該試驗(yàn)臺(tái)在圖17中描述。它 由氣溶膠發(fā)生器202供應(yīng)氣溶膠的密閉空氣回路200構(gòu)成。這種發(fā)生器有 可能將恒定數(shù)量的枯草芽孢桿菌(CIP 52.62)孢子從濃度已知的孢子混懸液 導(dǎo)入空氣流。合適的氣溶膠發(fā)生器例如由公司TSI出售?？諝庠谠摶芈分?借助吸泵204循環(huán)。3個(gè)THE濾器206均沿著該回路安置，從而有可能取 出空氣中所含的粒子、尤其是塵粒子。氣壓計(jì)208可以驗(yàn)證回路中的壓力 并且兩個(gè)流量計(jì)210可以驗(yàn)證該回路中空氣的流速。本發(fā)明裝置稱作 212。它由內(nèi)部安置套筒30的空氣收集工具10構(gòu)成。該收集工具與如上 所述的空氣回路連接。最后，該空氣回路中的兩個(gè)采樣源緊鄰裝置212的 上游和下游安置。在這些水平上以恒定級(jí)分形式采樣的空氣進(jìn)入光譜儀 214以進(jìn)行粒子(即所述部分中所含枯草芽孢桿菌孢子)的空氣動(dòng)力學(xué)測(cè)量。 這種光譜儀是TSI公司出售的Aerodynamic Particle Sizer 3321型。借助閥 門216將空氣轉(zhuǎn)移到抵達(dá)光譜儀的輔助回路，其中所述閥門216可以允許或防止在裝置212上游和下游的采樣。對(duì)上游和下游級(jí)分的差異性分析有 可能計(jì)算本發(fā)明裝置捕獲枯草芽孢桿菌孢子的效率。
在受控濕度和溫度條件(25。C, 35%相對(duì)濕度)下，通過本發(fā)明裝置的空 氣的流速是501/min。該流速借助泵204獲得。
在以下兩個(gè)條件下研究本發(fā)明裝置的捕獲效率
-確定采用其中珠子36置于不含膠化材料的套筒內(nèi)的套筒捕獲枯草芽 孢桿菌孢子的效率，
-確定采用其中珠子36置于套筒內(nèi)并用甘油精細(xì)膜涂層覆蓋的套筒捕 獲枯草芽孢桿菌孢子的效率。這種產(chǎn)物具有足夠粘性以提供氣溶膠對(duì)收集 平板的良好黏附并且總體上不干擾后續(xù)的分子分析。
圖18中顯示伴以和不伴以甘油時(shí)所獲得的結(jié)果。在該圖中，可以將 收集枯草芽孢桿菌孢子的效率關(guān)聯(lián)為由發(fā)生器202所產(chǎn)生氣溶膠粒子的直 徑的函數(shù)。
在覆蓋套筒中珠子36的膠化材料不存在的情況下，本發(fā)明裝置收集 孢子的效率可達(dá)大于70%。
在覆蓋套筒中珠子36的膠化材料存在的情況下，收集效率攀升至大 于90%。
收集效率在甘油型膠化材料存在的情況下提高由孢子與這種材料黏連 的事實(shí)解釋。在膠化材料不存在下，出現(xiàn)孢子在珠子上回彈的微弱現(xiàn)象， 從而阻止孢子與珠子黏連。
實(shí)施例2:通過本發(fā)明裂解方法與備選方法之間的比較確定裂解效率
在這種情況下，將3種方法與本發(fā)明的裂解方法比較
- 使用FastPrep 儀(FP120型，BIO101 , Thermo Electron Corporation公司出售)的機(jī)械裂解方法；
- 使用溶菌酶的酶裂解方法；
- 使用離液劑(，藏氰酸胍，GuSCN)的方法，該方法與加熱細(xì)胞混 懸液至90。C的步驟、隨后凍融細(xì)胞的3個(gè)步驟組合。在本實(shí)施例中，所用的細(xì)胞是混懸液中的蠟狀芽孢桿菌(^^7/w
在裂解步驟后，使用本申請(qǐng)人出售NucliSENS easyMAGTM提取系統(tǒng) 純化所回收的核酸。使用SYBRGreen檢測(cè)方法(MolecularProbes)最終定量
純化的核酸。下文描述比較性研究的步驟
步驟1制備蠟狀芽孢桿菌混懸液
蠟狀芽孢桿菌培養(yǎng)在TSA(胰蛋白酶大豆肉湯)平板中的瓊脂培養(yǎng)基上 進(jìn)行。細(xì)菌菌落在該瓊脂上回收并在本申請(qǐng)人出售的NucliSENS easyMAGTM提取緩沖液3(參考號(hào)280132)中洗滌。 一旦已經(jīng)洗滌了細(xì)胞， 則將它們稀釋于5 ml的相同提取緩沖液中，以獲得在波長(zhǎng)600 nm上具有 0.5光密度的細(xì)菌混懸液。
步驟2a:用FastPrep⑧儀裂解
將0.5 ml細(xì)菌混懸液轉(zhuǎn)移到充以lg玻璃珠混合物(相等部分的多種尺 寸的珠子150-212|im、 420-600nm和700-1180nm)的2ml試管。以最大速 度使用FastPrep⑧儀(設(shè)置在6.0)持續(xù)60秒。 一旦裂解已經(jīng)完成，將100 |al 裂解物轉(zhuǎn)移到NucliSENS easyMAGTM儀中，從而進(jìn)行純化步驟。
-步驟2b:用本發(fā)明裝置裂解
將0.3 ml細(xì)菌混懸液轉(zhuǎn)移到與上文所述套筒IIO等同的套筒中。該套 筒隨后充以0.4g玻璃珠混合物(相等部分的多種尺寸的珠子150-212pm、 212-300pm和420-600pm)。使該套筒與核酸回收工具接觸。該核酸回收工 具以2000轉(zhuǎn)/分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)2min。 一旦已經(jīng)進(jìn)行該裂解步驟，將100nl裂解物 轉(zhuǎn)移到NucliSENS easyMAGTM儀中，從而進(jìn)行純化步驟。
在用溶菌酶裂解的這種方法中，將100pl細(xì)菌混懸液與100 pl溶菌酶 溶液(50mg/ml)混合。該混合物在37°C保溫30分鐘。在這種保溫后，將 全部裂解物(200 pl)轉(zhuǎn)移到NucliSENS easyMAGTM儀中，從而進(jìn)行純化步 驟。將100 pl細(xì)菌混懸液與100 plGuSCN濃溶液(5mol/l)混合并且將全部 混合物保溫30分鐘。在這種保溫后，將全部裂解物(200 jil)轉(zhuǎn)移到 NucliSENS easyMAGTM儀中，從而進(jìn)行純化步驟。
-步驟3:使用NucliSENS easyMAGTM儀純化裂解物
使用NucliSENS easyMAGTM儀通用提取方案進(jìn)行該純化步驟。將本 申請(qǐng)人:出售的2 ml NucliSENS easyMAGTM裂解緩沖液(參考號(hào)280134)和 本申請(qǐng)人出售的50 pi NucliSENS easyMAGTM磁性二氧化硅粒子混懸液 (參考號(hào)280133)添加到每份裂解物。在25 jal NucliSENS easyMAGTM提取 緩沖液3中稀釋每份裂解物的核酸。
-步驟4:核酸檢測(cè)
為了確定每份洗脫物中核酸的量，將lO]iil所述洗脫物置于0.2ml PCR管中。隨后添加180 )LilSyberGreen溶液至樣品并且使用本申請(qǐng)人出售 的NucliSENS EasyQ⑧儀測(cè)量熒光信號(hào)。
圖19中給出熒光測(cè)量的結(jié)果。響應(yīng)結(jié)果如下 A =用FastPrep⑧儀裂解 B二用本發(fā)明裝置裂解 C =酶裂解 D =離液裂解
通過分析圖19，應(yīng)當(dāng)指出本發(fā)明裝置的裂解效率與FastPrep 機(jī)械裂 解方法的裂解效率相似。另外，這兩種機(jī)械方法比酶裂解方法或使用離液 劑的化學(xué)裂解方法顯著更高效。
實(shí)施例3:使用本發(fā)明裝置裂解芽孢桿菌混懸液聯(lián)合用NASBA方法
檢測(cè)
將0.3 ml稀釋于NucliSENS easyMAG 提取緩沖液3中的蠟狀芽孢桿菌混懸液導(dǎo)入本發(fā)明的套筒中。重復(fù)如先前實(shí)施例中描述的本發(fā)明裂
解方法2分鐘。在裂解步驟后，使用5pl裂解物，利用蠟狀芽孢桿菌特異 性引物和探針，以實(shí)時(shí)NASBA方法，通過使用NucliSENS EasyQ⑧儀的 熒光進(jìn)行檢測(cè)。用于檢測(cè)的靶基因是EF-tu基因。擴(kuò)增產(chǎn)物的大小是115 個(gè)核苷酸。
使用范圍從6至6xl05的多個(gè)量的芽孢桿菌。
圖20顯示作為導(dǎo)入本發(fā)明裝置的蠟狀芽孢桿菌多個(gè)量的函數(shù)的實(shí)時(shí) 熒光產(chǎn)生。在本圖中，對(duì)應(yīng)如下 3=含6><105個(gè)芽孢桿菌的樣品 b-含6"04個(gè)芽孢桿菌的樣品 c-含6><103個(gè)芽孢桿菌的樣品 d:含600個(gè)芽孢桿菌的樣品 e-含60個(gè)芽孢桿菌的樣品 『=含6個(gè)芽孢桿菌的樣品 g-無芽孢桿菌的樣品
從圖20的觀點(diǎn)看，觀察到在檢測(cè)的熒光水平與樣品中所含細(xì)菌的數(shù) 目之間的極好相關(guān)性。另外，注意到不含細(xì)菌的樣品與僅含6個(gè)細(xì)菌的樣 品之間的顯著差異。最后，可以從該分析的結(jié)果中推斷，本發(fā)明的裝置提 供了適于使用NASBA型核酸擴(kuò)增方法的性能水平。
應(yīng)當(dāng)指出在借助NASBA方法進(jìn)行擴(kuò)增之前，通過濃縮核酸可能這種 分析的靈敏度。這種濃縮步驟可以使用例如NucliSENS easyMAGTM儀進(jìn) 行。
實(shí)施例4:使用本發(fā)明裝置分析全血樣品
在本實(shí)施例中，本發(fā)明裝置用來分析其中已經(jīng)添加蠟狀芽孢桿菌群游 全血樣品。該血樣源自健康個(gè)體。
蠟狀芽孢桿菌培養(yǎng)在TSA(胰蛋白酶大豆肉湯)平板中的瓊脂培養(yǎng)基上 進(jìn)行。細(xì)菌菌落在該瓊脂上回收并用NucliSENS easyMAG 提取緩沖液 3洗滌。 一旦已經(jīng)洗滌了細(xì)胞，則將它們稀釋于5 ml的相同提取緩沖液 中，以獲得在波長(zhǎng)600 nm上具有0.5光密度的細(xì)菌混懸液。這種貯存液大
42約含有2.2xl(^個(gè)細(xì)菌/ml。該貯存混懸液于NucliSENS easyMAG 提取 緩沖液3中稀釋，以獲得具有不同濃度的混懸液， 一個(gè)濃度是103個(gè)細(xì)菌 /ml并且一個(gè)濃度是105個(gè)細(xì)菌/ml。
后續(xù)使用的方案對(duì)于每個(gè)稀釋混懸液如下
1. 將24pl稀釋的混懸液添加到150pl血液并混合；
2. 將125 pi的NucliSENS easyMAG 提取緩沖液l(參考號(hào) 280130)導(dǎo)入本發(fā)明的套筒中；
3. 將載有細(xì)菌的血樣導(dǎo)入該套筒中；
4. 通過使套筒與核酸回收工具接觸來進(jìn)行裂解步驟；該核酸回收 工具以2000轉(zhuǎn)/分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)2min;
5. 將100 nl裂解物抽吸到套筒中；
6. 使用NucliSENS easyMAGTM儀如實(shí)施例2的步驟3中所述， 進(jìn)行這種裂解物的純化，這使得能夠回收25 ^洗脫液。
7. 使用5 pl這種洗脫液來利用實(shí)時(shí)NASBA技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增和檢測(cè)。
結(jié)果在圖21中給出。在本圖中，對(duì)應(yīng)如下 a =含有53個(gè)芽孢桿斷10S個(gè)細(xì)菌/ml的稀釋混懸液)的全血樣品 b =含有5個(gè)芽孢桿斷103個(gè)細(xì)菌/1111的稀釋混懸液)的全血樣品 c=含有5個(gè)芽孢桿菌(103個(gè)細(xì)菌/1111的稀釋混懸液)的全血樣品 <1 =不含細(xì)菌的全血樣品。
給出的結(jié)果對(duì)應(yīng)于103和1()S個(gè)細(xì)菌/ml的稀釋混懸液。另外，分析 10S個(gè)細(xì)菌/ml的混懸液一式兩份。
從導(dǎo)入本發(fā)明套筒的稀釋混懸液的體積看，細(xì)菌的實(shí)際數(shù)量對(duì)于103 和10S個(gè)細(xì)菌/ml的混懸液分別是5個(gè)和530個(gè)細(xì)菌。
因而，應(yīng)當(dāng)指出，用本發(fā)明裝置對(duì)僅含有5個(gè)細(xì)菌的樣品的分析產(chǎn)生 了陽性檢測(cè)信號(hào)(曲線b和c)，它們可以與用不含細(xì)菌的樣品所獲得的結(jié)果 (曲線d)清晰地區(qū)分。還要指出即便用微小量的細(xì)菌，該結(jié)果仍是可重復(fù)的；這由曲線b和 c顯示o
應(yīng)當(dāng)指出僅使用純化步驟結(jié)束時(shí)所獲得的25pl中的5pl ，就獲得了這 種極好的靈敏度。這種靈敏度因而可以通過純化后進(jìn)行濃縮樣品的步驟進(jìn) 一步改進(jìn)。
因而從這些實(shí)施例中引出結(jié)論本發(fā)明裝置是用于收集空氣樣品中所 含細(xì)菌、裂解它們并導(dǎo)致從所述細(xì)菌回收核酸用以分析的有效工具。為 此，所用的裝置將首先由導(dǎo)入空氣收集工具的套筒構(gòu)成并且其次由含有所 收集細(xì)菌的套筒連同核酸回收工具構(gòu)成。
本發(fā)明裝置也完全適用于分析臨床樣品，如全血樣品。在這種情況 下，使用無空氣收集工具的套筒。將液體樣品置于套筒中并且隨后套筒與 核酸回收工具組合，以裂解細(xì)菌并且回收核酸。
權(quán)利要求
1.一種可以置于空氣收集工具內(nèi)部并容納核酸回收工具的套筒，所述的套筒基本上是圓柱形的并且包含微生物滯留區(qū)，所述的滯留區(qū)包含微生物裂解工具。
2. 如前述權(quán)利要求中所述的套筒，其中所述微生物滯留區(qū)包含能夠滯留微生物、保持裂解工具就位和在液體存在下溶解的材料。
3. 如前述權(quán)利要求中所述的套筒，其中材料是膠化材料。
4. 如前述權(quán)利要求中所述的套筒，其中膠化材料是微生物培養(yǎng)基。
5. 如前述權(quán)利要求之一中所述的套筒，還包含用于連接分析裝置的工具。
6. 如前述權(quán)利要求中所述的套筒，其中所述裂解工具由珠子構(gòu)成。
7. 如前述權(quán)利要求之一中所述的套筒，其中所述珠子的直徑在200和600Pm之間。
8. —種用于收集空氣中所含微生物的裝置，所述裝置包含空氣收集工具，包含含有空氣輸入導(dǎo)管的上部單元和具有空氣輸出導(dǎo)管的下部單元，所述上部單元和下部單元可互相聯(lián)鎖，從而可以在所述的空氣收集工具內(nèi)部產(chǎn)生空氣流；如權(quán)利要求1至7之一中所述的套筒，其置于所述空氣收集工具內(nèi)部。
9. 如前述權(quán)利要求中所述的裝置，其中空氣收集工具能夠與空氣再循環(huán)回路連接。
10. —種用于微生物裂解的裝置，目的是從所述的微生物分離核酸，所述裝置包含如權(quán)利要求1至6之一所述的套筒，所述的套筒包含位于微生物滯留 區(qū)中的微生物；可以置于所述套筒中的基本上呈圓柱形的核酸回收工具，所述的回收 工具與微生物裂解工具協(xié)作以裂解所述的微生物并且使得能夠釋放核酸。
11. 如前述權(quán)利要求中所述的裝置，其中所述核酸回收工具包含用于 抽吸/送遞液體的工具。
12. 如權(quán)利要求10和11之一所述的裝置，其中所述核酸回收工具也 包含液體貯存區(qū)。
13. 如權(quán)利要求10至12之一所述的裝置，其中所述套筒的內(nèi)徑大于 核酸回收工具的外徑，從而當(dāng)所述核酸回收工具安裝到該套筒中時(shí)，該套 筒內(nèi)壁與核酸回收工具外壁分隔的距離是足夠大的，以容許裂解工具存在 于這個(gè)間隙空間中，并且所述分隔的距離也是足夠小的，以使該裂解工具 與所述壁中的一個(gè)或另一個(gè)接觸。
14. 一種用于濃縮空氣中所含微生物的方法，所述的方法包括以下步驟a) 將如權(quán)利要求1至7之一所述的套筒安置在空氣收集工具內(nèi)部，使 得在所述套筒內(nèi)部的滯留區(qū)與空氣收集工具的空氣輸入導(dǎo)管連通，b) 通過任意適宜的手段使空氣進(jìn)入所述的空氣收集工具，c) 在套筒滯留區(qū)中濃縮空氣中所含的微生物。
15. 如前述權(quán)利要求中所述的濃縮方法，其也包括使滯留區(qū)中的微生 物生長(zhǎng)的步驟d)。
16. 如權(quán)利要求14和15之一所述的濃縮方法，其中所述微生物滯留 于存在于滯留區(qū)內(nèi)的裂解工具上。
17. —種用于裂解空氣中所含微生物的方法，所述的方法包括以下步驟a) 將如權(quán)利要求1至7之一所述的套筒安置在空氣收集工具內(nèi)部，使 得在所述套筒內(nèi)部的滯留區(qū)與空氣收集工具的空氣輸入導(dǎo)管連通，b) 通過任意適宜的手段使空氣進(jìn)入所述的空氣收集工具，c) 在套筒滯留區(qū)中濃縮空氣中所含的微生物，d) 從所述空氣收集工具取出套筒，e) 將核酸回收工具安置在該套筒中，f) 將目的液體導(dǎo)入該套筒中，這導(dǎo)致位于此套筒的微生物滯留區(qū)內(nèi)的 裂解工具處于懸浮狀態(tài)，和g) 通過轉(zhuǎn)動(dòng)套筒內(nèi)部的核酸回收工具以機(jī)械方式裂解所述微生物，所 述的核酸回收工具轉(zhuǎn)動(dòng)其上滯留有微生物的裂解工具。
18. —種用于裂解空氣中所含微生物的方法，所述的方法包括以下步驟a) 將如權(quán)利要求1至7之一所述的套筒安置在空氣收集工具內(nèi)部，使 得在所述套筒內(nèi)部的滯留區(qū)與空氣收集工具的空氣輸入導(dǎo)管連通，b) 通過任意適宜的手段使空氣進(jìn)入所述的空氣收集工具，c) 在套筒滯留區(qū)中濃縮空氣中所含的微生物，d) 從所述空氣收集工具取出套筒，e) 將核酸回收工具裝配到套筒中，f) 引起事先位于核酸回收工具貯存區(qū)內(nèi)的目的液體的送遞，所述的送 遞通過核酸回收工具的抽吸/送遞工具獲得，如此送遞的液體充滿位于核酸 回收工具與套筒之間的間隙空間，這導(dǎo)致位于套筒的微生物滯留區(qū)中的裂 解工具處于懸浮狀態(tài)，所述的裂解工具位于套筒的垂直內(nèi)壁與核酸回收工 具的垂直外壁之間，和g) 通過轉(zhuǎn)動(dòng)套筒內(nèi)部的核酸回收工具以機(jī)械方式裂解所述微生物，所 述的核酸回收工具轉(zhuǎn)動(dòng)其上滯留有微生物的裂解工具。
19. 一種用于從空氣中所含微生物中提取核酸的方法，所述的方法包括以下步驟a) 將如權(quán)利要求1至7之一所述的套筒安置在空氣收集工具內(nèi)部，使 得在所述套筒內(nèi)部的滯留區(qū)與空氣收集工具的空氣輸入導(dǎo)管連通，b) 通過任意適宜的手段使空氣進(jìn)入所述的空氣收集工具，c) 在套筒滯留區(qū)中濃縮空氣中所含的微生物，d) 從所述空氣收集工具取出套筒，e) 將核酸回收工具安置在該套筒中，f) 將目的液體導(dǎo)入該套筒中，這導(dǎo)致位于此套筒的微生物滯留區(qū)內(nèi)的 裂解工具處于懸浮狀態(tài)，和g) 通過轉(zhuǎn)動(dòng)套筒內(nèi)部的核酸回收工具以機(jī)械方式裂解所述微生物，所 述的核酸回收工具轉(zhuǎn)動(dòng)其上滯留有微生物的裂解工具，和h) 抽吸含有在裂解期間所釋放的所述微生物的核酸的目的液體。
20. —種用于從空氣中所含微生物中提取核酸的方法，所述的方法包 括以下步驟a) 將如權(quán)利要求1至7之一所述的套筒安置在空氣收集工具內(nèi)部，使 得在所述套筒內(nèi)部的滯留區(qū)與空氣收集工具的空氣輸入導(dǎo)管連通，b) 通過任意適宜的手段使空氣進(jìn)入所述的空氣收集工具，c) 在套筒滯留區(qū)中濃縮空氣中所含的微生物，d) 從所述空氣收集工具取出套筒，e) 將核酸回收工具裝配到套筒中，f) 引起事先位于核酸回收工具貯存區(qū)內(nèi)的目的液體的送遞，所述的送 遞通過核酸回收工具的抽吸/送遞工具獲得，如此送遞的液體充滿位于核酸 回收工具與套筒之間的間隙空間，這導(dǎo)致位于套筒的微生物滯留區(qū)中的裂 解工具處于懸浮狀態(tài)，所述的裂解工具位于套筒的垂直內(nèi)壁與核酸回收工 具的垂直外壁之間，g) 通過轉(zhuǎn)動(dòng)套筒內(nèi)部的核酸回收工具以機(jī)械方式裂解所述微生物，所 述的核酸回收工具轉(zhuǎn)動(dòng)其上滯留有微生物的裂解工具，由此釋放來自所述 微生物的核酸，和h) 引起核酸回收工具的貯存區(qū)內(nèi)的目的液體抽吸，所述的抽吸通過核 酸回收工具的抽吸送遞工具獲得，如此抽吸的目的液體含有在裂解期間所釋放的所述微生物的核酸。
21. 如權(quán)利要求17至20之一所述的方法，包括使套筒滯留區(qū)中的濃 縮微生物生長(zhǎng)的額外步驟d')。
22. 如前述權(quán)利要求中所述的方法，其中通過在培養(yǎng)箱中保溫套筒2 至24小時(shí)的一段時(shí)間獲得所述生長(zhǎng)。
23. —種用于裂解微生物的方法，所述的方法包括以下步驟a) 獲得如權(quán)利要求1至7之一所述的套筒，其中微生物在滯留區(qū)中濃縮，b) 將核酸回收工具裝配到套筒中，c) 引起事先位于核酸回收工具貯存區(qū)內(nèi)的目的液體的送遞，所述的送 遞通過核酸回收工具的抽吸/送遞工具獲得，如此送遞的液體充滿位于核酸 回收工具與套筒之間的間隙空間，這導(dǎo)致位于套筒的微生物滯留區(qū)中的裂 解工具處于懸浮狀態(tài)，所述的裂解工具位于套筒的垂直內(nèi)壁與核酸回收工 具的垂直外壁之間，和d) 通過轉(zhuǎn)動(dòng)套筒內(nèi)部的核酸回收工具以機(jī)械方式裂解所述微生物，所 述的核酸回收工具轉(zhuǎn)動(dòng)其上滯留有微生物的裂解工具。
24. —種用于裂解微生物的方法，所述的方法包括以下步驟a) 獲得如權(quán)利要求1至7之一所述的套筒，其中微生物在滯留區(qū)中 濃縮，b) 將核酸回收工具安置在該套筒中，c) 將目的液體導(dǎo)入該套筒中，這導(dǎo)致位于此套筒的微生物滯留區(qū)內(nèi) 的裂解工具處于懸浮狀態(tài)，和d) 通過轉(zhuǎn)動(dòng)套筒內(nèi)部的核酸回收工具以機(jī)械方式裂解所述微生物， 所述的核酸回收工具轉(zhuǎn)動(dòng)其上滯留有微生物的裂解工具。
25. —種用于從微生物提取核酸的方法，所述的方法包括以下步驟a)獲得如權(quán)利要求1至7之一所述的套筒，其中微生物在滯留區(qū)中濃縮，b) 將核酸回收工具裝配到套筒中，c) 引起事先位于核酸回收工具貯存區(qū)內(nèi)的目的液體的送遞，所述的送遞通過核酸回收工具的抽吸/送遞工具獲得，如此送遞的液體充滿位于核 酸回收工具與套筒之間的間隙空間，這導(dǎo)致位于套筒的微生物滯留區(qū)中的裂解工具處于懸浮狀態(tài)，所述的裂解工具位于套筒的垂直內(nèi)壁與核酸回收 工具的垂直外壁之間，d) 通過轉(zhuǎn)動(dòng)套筒內(nèi)部的核酸回收工具以機(jī)械方式裂解所述微生物， 所述的核酸回收工具轉(zhuǎn)動(dòng)其上滯留有微生物的裂解工具，由此釋放來自所 述微生物的核酸，和e) 引起核酸回收工具的貯存區(qū)內(nèi)的目的液體抽吸，所述的抽吸通過 核酸回收工具的抽吸/送遞工具獲得，如此抽吸的目的液體含有在裂解期間 所釋放的所述微生物的核酸。
26. —種用于從微生物提取核酸的方法，所述的方法包括以下步驟a) 獲得如權(quán)利要求1至7之一所述的套筒，其中微生物在滯留區(qū)中 濃縮，b) 將核酸回收工具安置在該套筒中，c) 將目的液體導(dǎo)入該套筒中，這導(dǎo)致位于此套筒的微生物滯留區(qū)內(nèi) 的裂解工具處于懸浮狀態(tài)，和d) 通過轉(zhuǎn)動(dòng)套筒內(nèi)部的核酸回收工具以機(jī)械方式裂解所述微生物， 所述的核酸回收工具轉(zhuǎn)動(dòng)其上滯留有微生物的裂解工具，和e) 抽吸含有在裂解期間所釋放的所述微生物的核酸的目的液體。
27. —種用于裂解微生物的方法，所述的方法包括以下步驟a) 將含有所述微生物的液體樣品導(dǎo)入如權(quán)利要求1至7之一所述的套 筒中，靠近滯留區(qū)，從而所述的液體樣品導(dǎo)致位于套筒的所述微生物滯留 區(qū)內(nèi)的裂解工具處于懸浮狀態(tài)，b) 將核酸回收工具安置在該套筒中，c) 通過轉(zhuǎn)動(dòng)套筒內(nèi)部的核酸回收工具以機(jī)械方式裂解所述微生物，所 述的核酸回收工具轉(zhuǎn)動(dòng)其上滯留有微生物的裂解工具。
28. —種用于從微生物提取核酸的方法，所述的方法包括以下步驟a) 將含有所述微生物的液體樣品導(dǎo)入如權(quán)利要求1至7之一所述的套 筒中，靠近滯留區(qū)，從而所述的液體樣品導(dǎo)致位于套筒的所述微生物滯留 區(qū)內(nèi)的裂解工具處于懸浮狀態(tài)，b) 將核酸回收工具安置在該套筒中，c) 通過轉(zhuǎn)動(dòng)套筒內(nèi)部的核酸回收工具以機(jī)械方式裂解所述微生物，所 述的核酸回收工具轉(zhuǎn)動(dòng)其上滯留有微生物的裂解工具，d) 抽吸含有在裂解期間所釋放的所述微生物的核酸的目的液體。
29. —種用于鑒定樣品中所含一種或多種微生物的方法，包括以下步驟-通過如權(quán)利要求8至13之一所述的裝置分離來自所述樣品中所含微 生物的核酸，-鑒定如此分離的微生物。
30. 如前述權(quán)利要求中所述的鑒定方法，也包括純化核酸的中間步驟。
31. 如權(quán)利要求29和30之一所述的鑒定方法，其中鑒定步驟包括以 下分步驟-特異性地?cái)U(kuò)增分離的核酸， -檢測(cè)如此擴(kuò)增的核酸。
32. 如權(quán)利要求29至31之一所述的鑒定方法，其中所述鑒定步驟在 與如權(quán)利要求10至13之一中所述裝置的套筒處于流體連通(fluid communication)的鑒定裝置內(nèi)進(jìn)行。
33. 如前述權(quán)利要求中所述的鑒定方法，其中將所述分離的核酸從如 權(quán)利要求10至13之一中所述的裝置的核酸回收工具轉(zhuǎn)移到鑒定裝置。
34.如前述權(quán)利要求中所述的鑒定方法，其中通過利用核酸回收工具的抽吸/送遞工具送遞含有所述核酸的目的液體而獲得所述核酸的轉(zhuǎn)移，所 述目的液體包含在所述核酸回收工具的貯存區(qū)中。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種可以置于空氣收集工具內(nèi)部并容納核酸回收工具的套筒，所述的套筒基本上是圓柱形的并且包含微生物滯留區(qū)，所述的滯留區(qū)包含微生物裂解工具。本發(fā)明也涉及一種用于收集空氣中所含微生物的裝置和一種用于微生物裂解的裝置。
文檔編號(hào)C12M1/26GK101688169SQ200880019069
公開日2010年3月31日 申請(qǐng)日期2008年6月6日 優(yōu)先權(quán)日2007年6月7日
發(fā)明者E·G·M·維爾溫普, H·J·M·克羅韋 申請(qǐng)人:生物梅里埃公司