專利名稱：：自體血纖維蛋白溶解酶原的提取方法及裝置的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及血纖維蛋白溶解酶原的提取方法。更具體地說，涉及自體血纖維蛋白溶解酶原的提取方法，該方法不包括常規(guī)的對(duì)洗脫液進(jìn)行脫鹽和對(duì)洗脫的自體血纖維蛋白溶解酶原進(jìn)行濃縮的步驟。本發(fā)明還涉及血纖維蛋白溶解酶原的自動(dòng)提取裝置。
背景技術(shù)：
：纖維蛋白溶解酶原存在于血液中，在激活物作用下轉(zhuǎn)變?yōu)槔w維蛋白溶解酶，后者具有酶的作用，可使纖維蛋白凝塊溶解，故能溶解血栓。纖維蛋白溶解酶作為酶療法也被用于誘導(dǎo)眼科玻璃體后脫離(PVD)的產(chǎn)生，其對(duì)于許多玻璃體視網(wǎng)膜疾病，例如孔源性視網(wǎng)膜脫離、糖尿病視網(wǎng)膜病變、黃斑裂孔、黃斑前膜、視網(wǎng)膜分枝靜脈阻塞等的發(fā)展及預(yù)后有良好的作用。通常，現(xiàn)有技術(shù)中使用的自體血纖維蛋白溶解酶原的提取方法包括以下步驟(1)吸附步驟從患者處抽血后，通過連結(jié)部分的切換將血液或分離后的血漿灌流到吸附器內(nèi)；流過吸附器后的廢液流入廢液回收部；(2)清洗步驟通過連結(jié)部分的切換將清洗液(含有0.5M氯化鈉的50mM磷酸緩沖液，pH值為7.2)灌流到吸附器內(nèi)；流過吸附器后的廢液流入廢液回收部；(3)洗脫步驟通過連結(jié)部分的切換將洗脫液(含有0.1M氯化鈉和0.2M￡-氨基己酸的50mM磷酸緩沖液，pH值為7.2)灌流到吸附器內(nèi)；流過吸附器后的洗脫液回收到血液成分回收器；(4)濃縮步驟通過血液成分回收器(溶媒吸收型濃縮器)靜置30分鐘進(jìn)行濃縮；(5)脫鹽和濃縮通過連結(jié)部分的切換將脫鹽液(生理鹽水)灌流到血液成分回收器內(nèi)進(jìn)行脫鹽和濃縮；(6)提取步驟提取血液成分回收器中的所有溶液。在實(shí)現(xiàn)上述提取順序時(shí)，整個(gè)系統(tǒng)由血液射出部、清洗液射出部、洗脫液射出部、吸附器、廢液回收部、血液成分回收器(溶媒吸收型濃縮器)、脫鹽液射出部、以及將上述部分進(jìn)行切換連通的4個(gè)連通部分和連結(jié)各部間的管路構(gòu)成。參看JP2006-160731和JP2006-136802，上述專利申請(qǐng)?jiān)诒疚闹腥囊米鳛閰⒖?。但是，上述現(xiàn)有技術(shù)的方法由于需要在濃縮器中進(jìn)行濃縮，對(duì)于操作工藝和操作系統(tǒng)的要求很高，同時(shí)多個(gè)轉(zhuǎn)換部件的連結(jié)，對(duì)于整體系統(tǒng)的氣密性要求增高，從而導(dǎo)致工藝的復(fù)雜性增加，操作時(shí)間增加、生產(chǎn)成本增加。因此，要求操作更為簡便的、提取時(shí)間更短、成本更低的自體血纖維蛋白溶解酶原的提取方法。因此，本領(lǐng)域迫切需要開發(fā)出操作簡便、省時(shí)、高效、低成本的自體血纖維蛋白溶解酶原的提取方法。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的就是提供一種操作簡便、省時(shí)、高效、低成本的自體血纖維蛋白溶解酶原的提取方法。一方面，本發(fā)明提供了一種自體血纖維蛋白溶解酶原的提取方法，它包括(a)吸附步驟，用于吸附從患者自體抽出的血液中的纖維蛋白溶解酶原；(b)清除步驟，用于清除上述步驟(a)中吸附的自體血纖維蛋白溶解酶原以外的其他血液成分；(c)洗脫步驟，用于洗脫經(jīng)上述步驟(b)中已清除了不純部分后且吸附在吸附材料上的自體血纖維蛋白溶解酶原；其中，用于洗脫的洗脫液根據(jù)所采用的吸附材料進(jìn)行選擇，例如使用氨甲環(huán)酸時(shí)，其濃度為0.004-0.04M，洗脫時(shí)間(即，洗脫液流過吸附器的時(shí)間)通?！?-7分鐘；以及(d)提取步驟，用于收集上述步驟(c)中洗脫的自體血纖維蛋白溶解酶原；其中，該方法不包括對(duì)洗脫液進(jìn)行脫鹽和對(duì)洗脫的自體血纖維蛋白溶解酶原進(jìn)行濃縮的步驟。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述洗脫液是含有氨甲環(huán)酸的生理鹽水。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述用于清除步驟(b)中吸附的自體血纖維6蛋白溶解酶以外的其他血液成分的清洗液為生理鹽水。另一方面，本發(fā)明提供了一種自體血纖維蛋白溶解酶原的提取裝置，它包括用于吸附從患者自體抽出的血液中的纖維蛋白溶解酶原的吸附器；與吸附器連接的，用于向其中分別導(dǎo)入從患者自體抽出的血液、用于清除經(jīng)吸附的自體血纖維蛋白溶解酶原以外的其他血液成分的清洗液、以及用于洗脫經(jīng)清洗的自體血纖維蛋白溶解酶原的洗脫液的導(dǎo)入部分，該導(dǎo)入部分包括注射器、三通(也可以是連接注射器和延長管路的魯爾接頭)、以及延長管路；以及與吸附器連接的，用于收集經(jīng)洗脫的自體血纖維蛋白溶解酶原的收集部分，該收集部分包括切換流路部分、裝配在切換流路部分上的除菌過濾器、以及體積《10ml的注射器或滅菌瓶；該裝置不包括用于對(duì)洗脫液進(jìn)行脫鹽和對(duì)洗脫的自體血纖維蛋白溶解酶原進(jìn)行濃縮的濃縮器。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，該裝置還包括與切換流路部分連接的，用于回收廢液的回路以及體積》30ml的回收袋或容器。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，該裝置還包括位于清洗液注射器與吸附器之間的，用于控制清洗液導(dǎo)入的電動(dòng)夾子如電磁閥或轉(zhuǎn)動(dòng)夾子；位于血液注射器與吸附器之間的，用于控制血液導(dǎo)入的電動(dòng)夾子如電磁閥或轉(zhuǎn)動(dòng)夾子；位于洗脫液注射器與吸附器之間的，用于控制洗脫液導(dǎo)入的電動(dòng)夾子如電磁閥或轉(zhuǎn)動(dòng)夾子；位于回收袋或容器與吸附器之間的，用于控制廢液回收的電動(dòng)夾子如電磁閥或轉(zhuǎn)動(dòng)夾子；以及位于收集部分與吸附器之間的，用于控制經(jīng)洗脫的自體血纖維蛋白溶解酶原的收集的電動(dòng)夾子如電磁閥或轉(zhuǎn)動(dòng)夾子，其中，所述清洗液注射器、血液注射器和洗脫液注射器分別由獨(dú)立的注射泵推動(dòng)。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，該裝置還包括位于清洗液注射器與吸附器之間的，用于控制清洗液導(dǎo)入的電動(dòng)夾子如電磁閥或轉(zhuǎn)動(dòng)夾子；位于血液注射器與吸附器之間的，用于控制血液導(dǎo)入的電動(dòng)夾子如電磁閥或轉(zhuǎn)動(dòng)夾子；位于洗脫液注射器與吸附器之間的，用于控制洗脫液導(dǎo)入的電動(dòng)夾子如電磁閥或轉(zhuǎn)動(dòng)夾子；位于回收袋或容器與吸附器之間的，用于控制廢液回收的電動(dòng)夾子如電磁閥或轉(zhuǎn)動(dòng)夾子；以及位于收集部分與吸附器之間的，用于控制經(jīng)洗脫的自7體血纖維蛋白溶解酶原的收集的電動(dòng)夾子如電磁閥或轉(zhuǎn)動(dòng)夾子，其中，所述清洗液注射器、血液注射器和洗脫液注射器由一個(gè)注射泵控制，并且所述注射泵與上述三個(gè)注射器之間連接的切換通過支架移動(dòng)器來控制。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，該裝置還包括位于回收袋或容器與吸附器之間的，用于控制廢液回收的電動(dòng)夾子如電磁閥或轉(zhuǎn)動(dòng)夾子；以及位于收集部分與吸附器之間的，用于控制經(jīng)洗脫的自體血纖維蛋白溶解酶原的收集的電動(dòng)夾子如電磁閥或轉(zhuǎn)動(dòng)夾子，其中，清洗液注射器、血液注射器和洗脫液注射器(也可以是在注射器前段的管路裝有單向閥)由一個(gè)注射泵控制，并且所述注射泵與上述三個(gè)注射器之間連接的切換通過可移動(dòng)托架來控制。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，該裝置還包括密閉的單向可推注容器(也可以是可推注容器及前段管路加單向閥)，使得注射泵將容器內(nèi)的液體推注到需要量時(shí)，不用電動(dòng)夾子如電磁闊或轉(zhuǎn)動(dòng)夾子夾閉，自動(dòng)保持容量固定，從而省去了電動(dòng)夾子如電磁閥或轉(zhuǎn)動(dòng)夾子。圖1是根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的自體血纖維蛋白溶解酶原的提取流程的示意圖。圖2示出了根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式隨時(shí)間改變洗脫出的自體血纖維蛋白溶解酶原的濃度與用于洗脫的氨甲環(huán)酸的濃度之間的洗脫關(guān)系。圖3是根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的自體血纖維蛋白溶解酶原的自動(dòng)提取裝置的示意圖。圖4是根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式的自體血纖維蛋白溶解酶原的自動(dòng)提取裝置的示意圖。圖5是根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式的自體血纖維蛋白溶解酶原的自動(dòng)提取裝置的示意圖。具體實(shí)施例方式本發(fā)明的發(fā)明人在經(jīng)過了廣泛而深入的研究之后發(fā)現(xiàn)，通過對(duì)現(xiàn)有的提取血纖維蛋白溶解酶原的六步驟方法進(jìn)行改進(jìn)，即，選擇洗脫液的種類，降低洗脫液的濃度，并設(shè)定最事宜的洗脫時(shí)間，可以將現(xiàn)有技術(shù)方法中的除鹽和濃縮步驟省去，從而實(shí)現(xiàn)了操作工藝的簡化，誤操作的防止，降低了成本，因而也減少了相應(yīng)的組合部件，可以更好地保持整體的氣密性。作為醫(yī)療器械，實(shí)現(xiàn)了既對(duì)外界污染的隔離，又提高了安全性，可以很好地對(duì)患者進(jìn)行自體血纖維蛋白溶解酶原的提取工序。并且，自體血纖維蛋白溶解酶原可收集在體積較小(《10ml)的容器中，從而消除了對(duì)大體積收集容器的需求，使操作簡便，顯著地縮短了自體血纖維蛋白溶解酶原的提取時(shí)間，又降低了成本。基于上述發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明得以完成。在本發(fā)明的第一方面，提供了一種自體血纖維蛋白溶解酶原的提取方法，它包括(a)吸附步驟使從患者自體抽出的血液(在本文中，全血、血漿、血清等統(tǒng)稱為血液)流入吸附器內(nèi)，用于吸附血液中的纖維蛋白溶解酶原；流過吸附器的液體回收到廢液回收部分中；(b)清除步驟用清洗液清除步驟(a)中吸附在吸附材料上的自體血纖維蛋白溶解酶原以外的其他血液成分；流過吸附器的清洗液回收到廢液回收部分中；切換廢液回收部分和自體血纖維蛋白溶解酶原收集部分的回路；(C)洗脫步驟用洗脫液洗脫步驟(b)中經(jīng)清洗的自體血纖維蛋白溶解酶原。其中，洗脫液的濃度，例如使用氨甲環(huán)酸時(shí)，約為0.004-0.04M，洗脫時(shí)間通?！?0分鐘；(d)提取步驟收集通過除菌濾過器的經(jīng)洗脫的自體血纖維蛋白溶解酶原；其中，該方法不包括對(duì)洗脫液進(jìn)行脫鹽和對(duì)洗脫的自體血纖維蛋白溶解酶原進(jìn)行濃縮的步驟。在本發(fā)明中，用于清洗所述步驟(a)中吸附的血液的清洗液沒有特別的限制，可以是本領(lǐng)域常規(guī)的清洗液，其代表性的例子包括，但不限于生理鹽水、含有氯化鈉的磷酸緩沖液等。優(yōu)選的是生理鹽水。在本發(fā)明中，用于洗脫所述步驟(b)中經(jīng)清洗的自體血纖維蛋白溶解酶原的洗脫液包括含有氨甲環(huán)酸的生理鹽水、含有S-氨基己酸的磷酸緩沖液。優(yōu)選的是含有氨甲環(huán)酸的生理鹽水。氨甲環(huán)酸被用于洗脫時(shí)，其濃度約為0.004-0.04M，優(yōu)選的是0.004M。洗脫時(shí)間通?！?0分鐘，較好的是3-7分鐘，優(yōu)選的是《7分鐘。在本發(fā)明的第二方面，提供了一種自體血纖維蛋白溶解酶原的提取裝置，它包括用于吸附從患者自體抽出的血液中的纖維蛋白溶解酶原的吸附器；與所述吸附器連接的，用于向其中分別導(dǎo)入從患者自體抽出的血液或血漿、清洗液、以及洗脫液的導(dǎo)入部分，該導(dǎo)入部分包括注射器、三通(也可以是連接注射器和延長管路的魯爾接頭)和延長管路；以及與所述吸附器連接的，用于收集經(jīng)洗脫的自體血纖維蛋白溶解酶原的收集部分，該收集部分包括切換流路部分、裝配在切換流路部分上的除菌過濾器、以及無菌注射器或滅菌瓶；其中，該裝置不包括用于對(duì)洗脫液進(jìn)行脫鹽和對(duì)洗脫的自體血纖維蛋白溶解酶原進(jìn)行濃縮的濃縮器。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，該裝置還包括與切換流路部分連接的，用于回收廢液的回路以及體積^30ml的回收袋或容器。在本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，該裝置還包括位于清洗液注射器與吸附器之間的，用于控制清洗液導(dǎo)入的電動(dòng)夾子如電磁閥或轉(zhuǎn)動(dòng)夾子；位于血液注射器與吸附器之間的，用于控制血液導(dǎo)入的電動(dòng)夾子如電磁閥或轉(zhuǎn)動(dòng)夾子；位于洗脫液注射器與吸附器之間的，用于控制洗脫液導(dǎo)入的電動(dòng)夾子如電磁閥或轉(zhuǎn)動(dòng)夾子；位于回收袋或容器與吸附器之間的，用于控制廢液回收的電動(dòng)夾子如電磁閥或轉(zhuǎn)動(dòng)夾子；以及位于收集部分與吸附器之間的，用于控制經(jīng)洗脫的自體血纖維蛋白溶解酶原的收集的電動(dòng)夾子如電磁閥或轉(zhuǎn)動(dòng)夾子，其中，所述清洗液注射器、血液注射器和洗脫液注射器分別由獨(dú)立的注射泵推動(dòng)。在本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，該裝置還包括位于清洗液注射器與吸附器之間的，用于控制清洗液導(dǎo)入的電動(dòng)夾子如電磁閥或轉(zhuǎn)動(dòng)夾子；位于血液注射器與吸附器之間的，用于控制血液導(dǎo)入的電動(dòng)夾子如電磁閥或轉(zhuǎn)動(dòng)夾子；位于洗脫液注射器與吸附器之間的，用于控制洗脫液導(dǎo)入的電動(dòng)夾子如電磁閥或轉(zhuǎn)動(dòng)夾子；位于回收袋或容器與吸附器之間的，用于控制廢液回收的電動(dòng)夾子如電磁閥或轉(zhuǎn)動(dòng)夾子；以及位于收集部分與吸附器之間的，用于控制經(jīng)洗脫的自體血纖維蛋白溶解酶原的收集的電動(dòng)夾子如電磁閥或轉(zhuǎn)動(dòng)夾子，其中，所述清洗液注射器、血液注射器和洗脫液注射器由一個(gè)注射泵控制，并且所述注射泵與上述三個(gè)注射器之間連接的切換通過支架移動(dòng)器來控制。在本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，該裝置還包括位于回收袋或容器與吸附器之間的，用于控制廢液回收的電動(dòng)夾子如電磁閥或轉(zhuǎn)動(dòng)夾子；以及位于收集部分與吸附器之間的，用于控制經(jīng)洗脫的自體血纖維蛋白溶解酶原的收集的電動(dòng)夾子如電磁閥或轉(zhuǎn)動(dòng)夾子，其中，清洗液注射器、血液注射器和洗脫液注射器(也可以是在注射器前段的管路裝有單向閥)由一個(gè)注射泵控制，并且所述注射泵與上述三個(gè)注射器之間連接的切換通過可移動(dòng)托架來控制。在本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，該裝置還包括密閉的單向可推注容器(也可以是可推注容器及前段管路加單向閥)，使得注射泵將容器內(nèi)的液體推注到需要量時(shí)，不用電動(dòng)夾子如電磁閥或轉(zhuǎn)動(dòng)夾子夾閉，自動(dòng)保持容量固定，從而省去了電動(dòng)夾子如電磁閥或轉(zhuǎn)動(dòng)夾子。以下參看附圖。圖1是根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的自體血纖維蛋白溶解酶原的提取流程的示意圖。如圖1所示，首先，切換三通31，使吸附器1和廢液袋4之間的通路連通。然后，將用于預(yù)沖的預(yù)沖液噴輸部分的液體灌流整個(gè)裝置，灌流后的廢液收集到回收袋或容器4中；關(guān)閉導(dǎo)入部分2中的三通22，換上血液注射器21，打開三通22，使從患者自體抽出的血液或血漿經(jīng)延長管路23注入吸附器1內(nèi)，流經(jīng)吸附器1的廢液流入回收袋或容器4中；接著，關(guān)閉三通22，換上清洗液注射器21，打開三通22，使清洗液經(jīng)延長管路23注入吸附器1內(nèi)，以清除吸附的患者自體血纖維蛋白溶解酶原以外的其他血液成分，流經(jīng)吸附器1的廢液流入回收袋或容器4中；接著，關(guān)閉三通22，切換流路切換部分5連結(jié)上纖維蛋白溶解酶原回收部后，換上洗脫液注射器21，打開三通22，使洗脫液經(jīng)延長管路23注入吸附器1中以洗脫經(jīng)清洗的自體血纖維蛋白溶解酶原；洗脫液經(jīng)除菌過濾器32被回收到自體血纖維蛋白溶解酶原的收集部分3的體積《10ml的注射器或滅菌瓶33中。此時(shí)，調(diào)節(jié)注射泵流量以獲得最佳洗脫曲線。當(dāng)使用氨甲環(huán)酸時(shí)，吸附器內(nèi)洗脫液的曲線速度通?！?cm/分，《4cm/分較好，《lcm/分更佳。更高的曲線速度使纖維蛋白溶解酶原的回收率更為低下，為了獲得必要量就需要更多的11血液或血漿，從而大大的增加了患者的負(fù)擔(dān)。雖然更低的曲線速度能提高回收率，但是卻延長了洗脫時(shí)間，不方便。另外，在回收經(jīng)洗脫的自體血纖維蛋白溶解酶原時(shí)，自洗脫液注入開始，將等同于從三通22至延長管路23、吸附器1、三通31及除菌過濾器32之間填充量的洗脫體流入廢液回收袋中。暫時(shí)停止推注，待液體全部流入廢液回收袋后，切換三通31，使與自體血纖維蛋白溶解酶原的收集部分3之間的通路連通，從而能夠獲得必要量的自體血纖維蛋白溶解酶原。通過此方法，廢除最初的洗脫液，從而能夠回收到更高濃度的纖維蛋白溶解酶原。最后，再次進(jìn)行流路切換，連通吸附器1和回收袋或容器之間的通路，使回路內(nèi)剩余的洗脫液通過三通31和回收袋或容器4之間的通路收集到廢液袋中。圖2示出了根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式氨甲環(huán)酸濃度和自體血纖維蛋白溶解酶原洗脫時(shí)間的關(guān)系。如圖2所示，本發(fā)明的自體血纖維蛋白溶解酶原的提取方法可對(duì)圖2所示最大濃度部分的酶原進(jìn)行回收，不進(jìn)行濃縮也能有效地獲得高濃度足夠量的纖維蛋白溶解酶原。另外，當(dāng)使用氨甲環(huán)酸時(shí)，由于極低濃度(0.004-0.04M)也能夠洗脫纖維蛋白溶解酶原，氨甲環(huán)酸即使進(jìn)入玻璃體也是安全的，因此可以省略原先所必須的清洗，脫鹽步驟。圖3是根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的自體血纖維蛋白溶解酶原的自動(dòng)提取裝置的示意圖。如圖3所示，預(yù)沖液(使用與清洗液相同的液體)注射器、血液(或血漿)注射器、洗脫液注射器21分別安裝于預(yù)先平行排列的相對(duì)應(yīng)的推注裝置(注射泵等)上，根據(jù)控制線路板的程序進(jìn)行流路切換、注射泵的推動(dòng)，由于無需前面所提到的更換注射器的步驟，因此誤操作的可能性降低，從而操作方便。圖中，電動(dòng)夾子61—65由控制線路板控制，是進(jìn)行流路開關(guān)以及流路切換的部件，例如可使用電磁閥或氣動(dòng)或轉(zhuǎn)動(dòng)夾子等。圖4是根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式的自體血纖維蛋白溶解酶原的自動(dòng)提取裝置的示意圖。如圖4所示，具備一臺(tái)專用的推注裝置(注射泵等)，預(yù)沖液(使用與清洗液相同的液體)注射器、血液(或血漿)注射器、洗脫液注射器21預(yù)先并列和吸附器1處于連通狀態(tài)后安裝于支架移動(dòng)器7上。推注裝置、支架移動(dòng)器7、電動(dòng)夾子61—65由控制線路板程序控制，并進(jìn)行與上述相同的自體血纖維蛋白溶解酶原提取操作。該裝置是根據(jù)進(jìn)行提取操作步驟，通過支架移動(dòng)器的移動(dòng)使預(yù)沖液注射器、血液注射器、洗脫液注射器按順序移轉(zhuǎn)至推注裝置位置，進(jìn)行各液體的推注。因而推注裝置(注射泵等)的臺(tái)數(shù)可減少，降低了裝置的成本。艮P，控制線路板控制支架移動(dòng)器7移動(dòng)至預(yù)沖/清洗液注射器21，通過支架移動(dòng)器7將其卡在注射泵上，注射泵推動(dòng)預(yù)沖/清洗液注射器21，同時(shí)打開該注射器前端的電動(dòng)夾子如電磁閥或轉(zhuǎn)動(dòng)夾子61以及廢液袋前端的電動(dòng)夾子如電磁閥或轉(zhuǎn)動(dòng)夾子64，用預(yù)沖液(例如生理鹽水)沖洗回路；完成后，根據(jù)控制線路板的程序，移動(dòng)支架移動(dòng)器7，將替換了預(yù)沖液的血液(或血漿)注射器21移動(dòng)至注射泵推注位置，推動(dòng)裝置根據(jù)所設(shè)定的速度和流量推注血液(或血漿)，從而使血液中的纖維蛋白溶解酶原吸附于吸附材料上。以下順序是通過支架移動(dòng)器7，使清洗液注射器、洗脫液注射器21移動(dòng)至推注裝置的位置后的裝卸，從而進(jìn)行與上述纖維蛋白溶解酶原提取步驟相同的自體血纖維蛋白溶解酶原提取。圖5是根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式的自體血纖維蛋白溶解酶原的自動(dòng)提取裝置的示意圖。如圖5所示，預(yù)沖液、血液(或血漿)、清洗液、洗脫液分別充填于單向可推注容器(也可以是可推注容器及前段管路加單向閥)24，與吸附器l并列相連，固定于可移動(dòng)托架8上。根據(jù)控制線路板的程序，移動(dòng)可移動(dòng)托架8，使預(yù)沖液、血液(或血漿)、清洗液、洗脫液按順序移動(dòng)至推注裝置的位置，分別按所設(shè)定的流速和流量推注，從而進(jìn)行與上述纖維蛋白溶解酶原提取步驟相同的自體血纖維蛋白溶解酶原提取。艮P，根據(jù)控制線路板的程序，移動(dòng)可移動(dòng)托架8上的裝有預(yù)沖液的單向可推注容器(也可以是可推注容器及前段管路加單向閥)24，將其卡在推注裝置(注射泵等)上，推注裝置按所設(shè)定的流速和流量運(yùn)行，同時(shí)打開廢液袋前端的電動(dòng)夾子如電磁閥或轉(zhuǎn)動(dòng)夾子64，用預(yù)沖液沖洗回路；完成后，控制線路板控制可移動(dòng)托架8移動(dòng)至血液單向可推注容器(也可以是可推注容器及前段管路加單向閥)24，將其卡在推注裝置(注射泵等)上，推注裝置(注射泵等)推動(dòng)裝有血液的血液單向可推注容器(也可以是可推注容器及前段管路加單向閥)24，將血液灌注，使纖維蛋白溶解酶原吸附在吸附材料上；之后，通過可移動(dòng)托架8，移動(dòng)清洗液單向可推注容器(也可以是可推注容器及前段管路加單向閥)24，將其卡在推注裝置(注射泵)上，推注裝置(注射泵)推動(dòng)裝有清洗液(生理鹽水)的單向可推注容器(也可以是可推注容器及前段管路加單向閥)24，用清洗液沖洗回路；再后，通過可移動(dòng)托架8，移動(dòng)洗脫液單向可推注容器(也可以是可推注容器及前段管路加單向閥)24，將其卡在推注裝置(注射泵)上，推注裝置(注射泵)推動(dòng)裝有洗脫液的單向可推注容器(也可以是可推注容器及前段管路加單向閥)24，按所設(shè)定的流速和流量推注洗脫液，從吸附器洗脫纖維蛋白溶解酶原，此時(shí)關(guān)閉電動(dòng)夾子如電磁閥或轉(zhuǎn)動(dòng)夾子64，同時(shí)打開電動(dòng)夾子如電磁閥或轉(zhuǎn)動(dòng)夾子65，將纖維蛋白溶解酶原提取到收集部分中。由于本裝置使用了單向可推注容器(也可以是可推注容器及前段管路加單向閥)，因此可以省略電動(dòng)夾子如電磁閥或轉(zhuǎn)動(dòng)夾子61—65，從而進(jìn)一步降低了裝置的成本。本發(fā)明的主要優(yōu)點(diǎn)在于本發(fā)明的方法操作簡便，能夠高效地、省時(shí)、安全、低成本地提取自體血纖維蛋白溶解酶原。下面結(jié)合具體的實(shí)施例進(jìn)一步闡述本發(fā)明。但是，應(yīng)該明白，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明范圍的限制。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，或按照制造廠商所建議的條件。除非另有說明，所有的百分比和份數(shù)按重量計(jì)。實(shí)施例實(shí)驗(yàn)步驟準(zhǔn)備準(zhǔn)備回路和注射泵或提取裝置。根據(jù)下表內(nèi)容在各注射器內(nèi)采取必要的各溶液。14<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>作為提取裝置，如圖l所示形狀，采用經(jīng)Y射線滅菌的吸附器，容量為1.5ml，以及內(nèi)徑為lmm，外徑為2mm的回路，作為吸附材料，充填了平均粒徑為100ym經(jīng)表面親水處理的結(jié)合賴氨酸的聚甲基丙烯酸甲酯顆粒。預(yù)沖將裝有40ml生理鹽水的注射器A裝在三通22上后，安裝于注射泵上。設(shè)定注射泵的流速為5ml/分鐘，流量為10ml。打開三通22，切換三通31，使注射器A與吸附器及廢液袋之間的通路連通，開始轉(zhuǎn)動(dòng)注射泵。灌流生理鹽水lOrnl，進(jìn)行回路內(nèi)充填液的置換、清洗和排氣。吸附將三通22的方向切換至關(guān)閉狀態(tài)，將注射器A從注射泵上取下，裝上裝有10ml以上血漿的注射器B。設(shè)定注射泵的流速為0.5ml/分鐘，流量為10ml。打開三通22，開始轉(zhuǎn)動(dòng)注射泵，灌流血漿10ml。清洗將三通22的方向切換至關(guān)閉狀態(tài)。將注射器B從注射泵上取下，再次將注射器A裝在三通22上后，安裝于注射泵上。確認(rèn)注射泵的流速設(shè)定為0.5ml/分鐘，流量為10ml。開始轉(zhuǎn)動(dòng)注射泵。灌流生理鹽水10ml，清洗回路內(nèi)的血漿。洗脫、回收將三通22的方向切換至關(guān)閉狀態(tài)，將注射器A從注射泵上取下。將裝有含有濃度為0.01M氨甲環(huán)酸的生理鹽水10ml的注射器C裝在三通22上后，安裝于注射泵上。打開三通22，重新將注射泵的流量設(shè)定為1.5ml，并確認(rèn)注射泵的流速為0.5ml/分鐘。開始轉(zhuǎn)動(dòng)注射泵，灌流洗脫液1.5ml。其后，注射泵流速保持不變，重新設(shè)定流量為2.0ml。三通31提取口上裝上插有空氣針(帶滅菌過濾器)的滅菌瓶(3ml)，三通31的方向切換，使吸附器和用于提取的滅菌瓶之間的通路連通，開始轉(zhuǎn)動(dòng)注射泵，洗脫液用滅菌瓶回收(纖維蛋白溶解酶原的回收)。得到的纖維蛋白溶解酶原約為2ml，回收率(相對(duì)于10ml血漿中所含有纖維蛋白溶解酶原的量而言，真正回收得到的纖維蛋白溶解酶原的量)約為40%，具有與血漿中相同程度的纖維蛋白溶解活性。另外通過電泳分析純度高達(dá)約70%，殘余的物質(zhì)為白蛋白、纖維蛋白原。下表為本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)的比較?，F(xiàn)有技術(shù)本發(fā)明清洗液含有0.5M氯化鈉的50mM磷酸緩沖液生理鹽水洗脫液0.2Ms-氨基己酸0.004M氨甲環(huán)酸回收率40.4%40%整體裝置部件數(shù)1410連結(jié)切換部件數(shù)量42從洗脫到提取所要時(shí)間12小時(shí)以上IO分鐘以下經(jīng)比較，本發(fā)明有以下優(yōu)點(diǎn)1.無需脫鹽、濃縮步驟。2.回路與吸附器的小型化設(shè)計(jì)，使操作時(shí)間顯著縮短。3.不易出現(xiàn)誤操作。4.部件少，成本低。5.能提供經(jīng)滅菌的回路及吸附器。6.使用滅菌及除菌過濾器，污染的可能性低。7.能夠獲得質(zhì)與量俱佳的纖維蛋白溶解酶原。本發(fā)明通過選擇洗脫液種類和濃度，以及適宜的洗脫時(shí)間，實(shí)現(xiàn)了脫鹽和濃縮步驟的省略；減少了連結(jié)部件數(shù)，使整體系統(tǒng)的氣密性得到了提高，降低了纖維蛋白溶解酶原被污染的可能性，增加了作為醫(yī)療器械使用的安全性。提取過程的所需時(shí)間也極大程度地得以減少，采用臨床現(xiàn)場易獲取的生理鹽水為清洗液，從而提高了臨床實(shí)用性，同時(shí)較高的自體血纖維蛋白溶解酶原的回收率及活性也明確了本技術(shù)的有效性。雖然為了清楚和理解的目的，已對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的描述，但是在閱讀了本申請(qǐng)說明書之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員將會(huì)明白，在不偏離本發(fā)明的精神和實(shí)質(zhì)的前提下，可以對(duì)本發(fā)明進(jìn)行各種修改和改變，這些修改和改變均落入所附權(quán)利要求書及其等價(jià)內(nèi)容所包括的范圍之內(nèi)。權(quán)利要求1.一種自體血纖維蛋白溶解酶原的提取方法，它包括(a)吸附步驟，用于吸附從患者自體抽出的血液中的纖維蛋白溶解酶原；(b)清除步驟，用于清除上述步驟(a)中吸附的自體血纖維蛋白溶解酶原以外的其他血液成分；(c)洗脫步驟，用于洗脫上述步驟(b)中清洗的自體血纖維蛋白溶解酶原，其中，用于洗脫的洗脫液的濃度為0.004-0.04M，洗脫的時(shí)間為3-7分鐘；以及(d)提取步驟，用于收集上述步驟(c)中洗脫的自體血纖維蛋白溶解酶原；其中，該方法不包括對(duì)洗脫液進(jìn)行脫鹽和對(duì)洗脫的自體血纖維蛋白溶解酶原進(jìn)行濃縮的步驟。2.如權(quán)利要求l所述的方法，其特征在于，所述洗脫液是含有氨甲環(huán)酸的生理鹽水。3.如權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述用于清除步驟(a)中吸附的自體血纖維蛋白溶解酶以外的其他血液成分的清洗液為生理鹽水。4.一種自體血纖維蛋白溶解酶原的提取裝置，它包括用于吸附從患者自體抽出的血液中的纖維蛋白溶解酶原的吸附器(1);與吸附器(1)連接的，用于向其中分別導(dǎo)入從患者自體抽出的血液、用于清洗經(jīng)吸附的自體血纖維蛋白溶解酶原的清洗液、以及用于洗脫經(jīng)清洗的自體血纖維蛋白溶解酶原的洗脫液的導(dǎo)入部分(2)，該導(dǎo)入部分(2)包括注射器(21)、三通或魯爾接頭(22)、以及延長管路(23);以及與吸附器(1)連接的，用于收集經(jīng)洗脫的自體血纖維蛋白溶解酶原的收集部分(3)，該收集部分(3)包括切換流路部分(5)、裝配在切換流路部分(5)上的除菌過濾器(32)、以及體積《10ml的注射器或滅菌瓶(33);其中，所述洗脫液的濃度為0.004-0.04M，洗脫的時(shí)間為3-7分鐘；該裝置不包括用于對(duì)洗脫液進(jìn)行脫鹽和對(duì)洗脫的自體血纖維蛋白溶解酶原進(jìn)行濃縮的濃縮器。5.如權(quán)利要求4所述的裝置，其特征在于，所述洗脫液是含有氨甲環(huán)酸的生理鹽水。6.如權(quán)利要求4或5所述的裝置，其特征在于，它還包括與切換流路部分(5)連接的，用于回收廢液的回路以及體積》30ml的回收袋或容器(4)。7.如權(quán)利要求6所述的裝置，其特征在于，它還包括位于清洗液注射器(21)與吸附器(1)之間的，用于控制清洗液導(dǎo)入的電動(dòng)夾子(61);位于血液注射器(21)與吸附器(1)之間的，用于控制血液導(dǎo)入的電動(dòng)夾子(62);位于洗脫液注射器(21)與吸附器(1)之間的，用于控制洗脫液導(dǎo)入的電動(dòng)夾子(63);位于回收袋或容器(4)與切換流路部分(5)之間的，用于控制廢液回收的電動(dòng)夾子(64);以及位于收集部分(3)與切換流路部分(5)之間的，用于控制經(jīng)洗脫的自體血纖維蛋白溶解酶原的收集的電動(dòng)夾子(65)，其中，所述清洗液注射器(21)、血液注射器(21)和洗脫液注射器(21)分別由獨(dú)立的注射泵推動(dòng)。8.如權(quán)利要求6所述的裝置，其特征在于，它還包括位于清洗液注射器(21)與吸附器(1)之間的，用于控制清洗液導(dǎo)入的電動(dòng)夾子(61);位于血液注射器(21)與吸附器(1)之間的，用于控制血液導(dǎo)入的電動(dòng)夾子(62);位于洗脫液注射器(21)與吸附器(1)之間的，用于控制洗脫液導(dǎo)入的電動(dòng)夾子(63);位于回收袋或容器(4)與切換流路部分(5)之間的，用于控制廢液回收的電動(dòng)夾子(64);以及位于收集部分(3)與切換流路部分(5)之間的，用于控制經(jīng)洗脫的自體血纖維蛋白溶解酶原的收集的電動(dòng)夾子(65)，其中，所述清洗液注射器(21)、血液注射器(21)和洗脫液注射器(21)由一個(gè)注射泵控制，并且所述注射泵與上述三個(gè)注射器(21)之間連接的切換通過支架移動(dòng)器(7)來控制。9.如權(quán)利要求6所述的裝置，其特征在于，它還包括位于回收袋或容器(4)與切換流路部分(5)之間的，用于控制廢液回收的電動(dòng)夾子(64);以及位于收集部分(3)與切換流路部分(5)之間的，用于控制經(jīng)洗脫的自體血纖維蛋白溶解酶原的收集的電動(dòng)夾子(65)，其中，清洗液單向可推注容器或可推注容器及前段管路加單向閥(24)、血液單向可推注容器或可推注容器及前段管路加單向閥(24)、以及洗脫液單向可推注容器或可推注容器及前段管路加單向閥(24)由一個(gè)注射泵控制，并且所述注射泵與上述三個(gè)單向可推注容器或可推注容器及前段管路加單向閥(24)之間連接的切換通過可移動(dòng)托架(8)來控制。10.如權(quán)利要求6所述的裝置，其特征在于，它還包括密閉的單向可推注容器或可推注容器及前段管路加單向閥(24)，使得注射泵將容器內(nèi)的液體推注到需要量時(shí)，不用電動(dòng)夾子夾閉，自動(dòng)保持容量固定，從而省去了電動(dòng)夾子。全文摘要提供了自體血纖維蛋白溶解酶原的提取方法，它包括(a)吸附步驟，用于吸附從患者自體抽出的血液中的纖維蛋白溶解酶原；(b)清除步驟，用于清除上述步驟(a)中吸附的自體血纖維蛋白溶解酶原以外的其他血液成分；(c)洗脫步驟，用于洗脫上述步驟(b)中清洗的自體血纖維蛋白溶解酶原，其中，用于洗脫的洗脫液的濃度為0.004-0.04M，洗脫的時(shí)間為3-7分鐘；以及(d)提取步驟，用于收集上述步驟(c)中洗脫的自體血纖維蛋白溶解酶原；其中，該方法不包括對(duì)洗脫液進(jìn)行脫鹽和對(duì)洗脫的自體血纖維蛋白溶解酶原進(jìn)行濃縮的步驟。還提供了自體血纖維蛋白溶解酶原的提取裝置。文檔編號(hào)C12M1/36GK101586098SQ20081003765公開日2009年11月25日申請(qǐng)日期2008年5月20日優(yōu)先權(quán)日2008年5月20日發(fā)明者長谷川冰申請(qǐng)人:博傲西騰醫(yī)療科技(上海)有限公司;長谷川冰