專利名稱：一種生物催化合成阿魏酰低聚糖的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
一種生物催化合成阿魏酰低聚糖的方法，屬于阿魏酸衍生物合成技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
我國是小麥?zhǔn)秤么髧←溨品酆螽a(chǎn)生的麥麩量非常大，約在2000萬噸左 右。麥麩中含有很多有益的物質(zhì)，如阿魏酰低聚糖，可以發(fā)揮阿魏酸和低聚糖 的生理作用，但麥麩中阿魏酰低聚糖的含量很低，提取率不高，分離較為困難， 難以得到較純的產(chǎn)品，不利于產(chǎn)品開發(fā)。
以分離后的低聚糖和阿魏酸為原料，采用脂肪酶法催化合成阿魏酰低聚糖， 可以得到不同的阿魏酰低聚糖的產(chǎn)品，可以方便的對其功能作用進(jìn)行研究、比 較，使其得到更有效的利用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種生物催化合成阿魏酰低聚糖的方法，為其下一步 研究提供技術(shù)支持。
本發(fā)明的技術(shù)方案 一種生物催化合成阿魏酰低聚糖的方法，先將麥麩進(jìn) 行酶解處理，分離得到不同的低聚糖，即側(cè)鏈連有阿拉伯糖的組成個數(shù)不同的 低聚木糖，加入阿魏酸和脂肪酶，在叔丁醇中進(jìn)行合成反應(yīng)，對產(chǎn)物進(jìn)行分離 得到阿魏酰低聚糖；
(1) 低聚糖的制取麥麩通過常規(guī)處理得到側(cè)鏈連有阿拉伯糖的組成個數(shù) 不同的低聚糖木糖，木二糖，木三糖或木四糖；
(2) 催化合成加入分離后的低聚糖和阿魏酸，兩者的摩爾比為l:l，介質(zhì) 為叔丁醇，添加阿魏酸重量10-12%的脂肪酶，溫度控制在50-70°C，反應(yīng)時間 為10-14h;
(3) 混合物的分離反應(yīng)結(jié)束后，加入蒸餾水過濾回收脂肪酶，供重復(fù)使 用；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收得到叔丁醇，剩余液冷卻至室溫，過濾去除未反應(yīng)的部分阿 魏酸和低聚糖；濾液為粗產(chǎn)物；
(4)產(chǎn)物的分離濾液粗產(chǎn)物過0.45pm的微孔濾膜，濾液濃縮，濃縮液 上AmberliteXAD-2(80x2.5cm)柱，柱預(yù)先用體積分?jǐn)?shù)95%乙醇洗滌，再用蒸餾 水平衡，依次用2倍柱體積的蒸餾水、3倍柱體積的體積分?jǐn)?shù)50%甲醇水溶液和 2倍柱體積的體積分?jǐn)?shù)100%甲醇進(jìn)行洗脫，將體積分?jǐn)?shù)50%甲醇水溶液洗脫組 分濃縮，并進(jìn)行冷凍干燥，再將固形物配成50mg/mL的水溶液，用SephadexLH20 作進(jìn)一步分離，SephadexLH20(40x2.5cm)柱預(yù)先用體積分?jǐn)?shù)25。/。乙醇平衡，并
用體積分?jǐn)?shù)25%乙醇做洗脫液，上樣量10mL，洗脫液流速0.5mL/min，每管收 集8mL。
所用的脂肪酶是諾維信脂肪酶435，酶活是10000PLU/g。 本發(fā)明的有益效果本發(fā)明以阿魏酸和麥麩中分離的低聚糖為原料，通過諾
維信脂肪酶435的催化作用，合成阿魏酰低聚糖。由于分離的低聚糖的不同，
可以得到不同的阿魏酰低聚糖，有利于對其進(jìn)行理化性質(zhì)及其他特性的分析，
得到更好的利用。
具體實施方式
實施例1
對麥麩進(jìn)行水解處理，得到不同的低聚木糖，分離純化，然后于叔丁醇介 質(zhì)中在諾維信脂肪酶435的催化下與阿魏酸合成阿魏酰低聚糖。
(1) 不同的低聚糖的制取麥麩處理得到不溶性膳食纖維，再用木聚糖酶 水解得到低聚糖混合物，然后分離純化得到組成個數(shù)不同的低聚木糖，包括木 糖，木二糖，木三糖，木四糖，低聚木糖的側(cè)鏈連有阿拉伯糖。
(2) 阿魏酰低聚糖的催化合成稱取等摩爾的阿魏酸和低聚糖，加入叔丁
醇，然后按照阿魏酸質(zhì)量的10%添加諾維信脂肪酶435， 6(TC反應(yīng)10-12h，搖床 震動速率為100轉(zhuǎn)/min。
(3) 反應(yīng)結(jié)束后混合物的分離反應(yīng)結(jié)束后，加入蒸餾水過濾回收諾維信 脂肪酶435，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收得到叔丁醇。剩余液冷卻至室溫，過濾去除未反應(yīng)的 部分阿魏酸和低聚糖。再對產(chǎn)物進(jìn)行下一步的分離。
(4) 產(chǎn)物的分離產(chǎn)物過0.45pm的微孔濾膜，濾液濃縮。濃縮液上Amberlite XAD-2柱(80x2.5cm)，柱預(yù)先用體積分?jǐn)?shù)95%乙醇洗滌，再用蒸餾水平衡。依 次用2倍柱體積的蒸餾水、3倍柱體積的體積分?jǐn)?shù)50%甲醇水溶液和2倍柱體積 的體積分?jǐn)?shù)100%甲醇進(jìn)行洗脫。將體積分?jǐn)?shù)50%甲醇水溶液洗脫組分濃縮，并 進(jìn)行冷凍干燥。再將固形物配成50mg/ml的水溶液，用SephadexLH20作進(jìn)一步 分離。SephadexLH20(40x2.5cm)柱預(yù)先用體積分?jǐn)?shù)25。/。乙醇平衡，并用體積分 數(shù)25%乙醇做洗脫液，上樣量10mL，洗脫液流速0.5mL/min，每管收集8mL。
權(quán)利要求
1、一種生物催化合成阿魏酰低聚糖的方法，其特征是先將麥麩進(jìn)行酶解處理，分離得到不同的低聚糖，即側(cè)鏈連有阿拉伯糖的組成個數(shù)不同的低聚木糖，加入阿魏酸和脂肪酶，在叔丁醇中進(jìn)行合成反應(yīng)，對產(chǎn)物進(jìn)行分離得到阿魏酰低聚糖；(1)低聚糖的制取麥麩通過常規(guī)處理得到側(cè)鏈連有阿拉伯糖的組成個數(shù)不同的低聚糖木糖，木二糖，木三糖或木四糖；(2)催化合成加入分離后的低聚糖和阿魏酸，兩者的摩爾比為1∶1，介質(zhì)為叔丁醇，添加阿魏酸重量10-12％的脂肪酶，溫度控制在50-70℃，反應(yīng)時間為10-14h；(3)混合物的分離反應(yīng)結(jié)束后，加入蒸餾水過濾回收脂肪酶，供重復(fù)使用；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收得到叔丁醇，剩余液冷卻至室溫，過濾去除未反應(yīng)的部分阿魏酸和低聚糖；濾液為粗產(chǎn)物；(4)產(chǎn)物的分離濾液粗產(chǎn)物過0.45μm的微孔濾膜，濾液濃縮，濃縮液上Amberlite XAD-2柱，柱預(yù)先用體積分?jǐn)?shù)95％乙醇洗滌，再用蒸餾水平衡，依次用2倍柱體積的蒸餾水、3倍柱體積的體積分?jǐn)?shù)50％甲醇水溶液和2倍柱體積的體積分?jǐn)?shù)100％甲醇進(jìn)行洗脫，將體積分?jǐn)?shù)50％甲醇水溶液洗脫組分濃縮，并進(jìn)行冷凍干燥，再將固形物配成50mg/mL的水溶液，用SephadexLH20作進(jìn)一步分離，Sephadex LH20柱預(yù)先用體積分?jǐn)?shù)25％乙醇平衡，并用體積分?jǐn)?shù)25％乙醇做洗脫液，上樣量10mL，洗脫液流速0.5mL/min，每管收集8mL。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是所用的脂肪酶為諾維信脂肪酶435。
全文摘要
一種生物催化合成阿魏酰低聚糖的方法，屬于阿魏酸衍生物合成技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明以阿魏酸和麥麩中分離的低聚糖為原料，通過諾維信脂肪酶435的催化作用，合成阿魏酰低聚糖。由于分離的低聚糖的不同，可以得到不同的阿魏酰低聚糖，有利于對其進(jìn)行理化性質(zhì)及其他特性的分析，得到更好的利用。
文檔編號C12P19/00GK101191137SQ20071030244
公開日2008年6月4日 申請日期2007年12月26日 優(yōu)先權(quán)日2007年12月26日
發(fā)明者姚惠源, 暉 張, 立 王, 郭曉娜, 坤 馬 申請人:江南大學(xué)