專利名稱：：一種能深度脫除油品有機硫的脫硫菌及制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種能深度脫除油品有機硫的脫石危菌，名稱為煙曲霉hpe，'77zw/咖/g"Z7i1Fresen.T:L-1，屬生物工禾呈領(lǐng)域。本發(fā)明還涉及該脫硫菌的制備方法和用途。技術(shù)背景隨著世界經(jīng)濟的發(fā)展和多年的持續(xù)開發(fā)，現(xiàn)存低硫化石燃料日益枯竭，高硫燃料的開采成為必然。由于硫可使某些催化劑中毒，部分含硫化合物本身具有腐蝕性，以及石油產(chǎn)品中硫燃燒后均生成S02等硫氧化物而導致腐蝕設備和污染環(huán)境，所以硫含量是衡量油品質(zhì)量的主要標準之一。北京現(xiàn)擁有機動車280余萬輛且有繼續(xù)增多的趨勢，其燃料油中的硫化物燃燒生成、排放的硫氧化物嚴重影響北京的大氣環(huán)境。目前歐美等發(fā)達國家對汽、柴油的硫含量都進行了嚴格的限制，如對汽油中的硫含量限制目前已由300lag/g左右調(diào)至30jLig/g以下；對柴油的碌u含量限制已由150~350yg/g調(diào)至50jag/g左右。國內(nèi)汽油標準中要求辟^含量低于800ug/g,柴油標準規(guī)定的硫含量遠遠大于歐美標準中的規(guī)定值。我國規(guī)劃汽油質(zhì)量到2010年與國際標準接軌，故充分利用有限的石油資源，降低石油產(chǎn)品中的硫含量、獲得低硫清潔能源是目前烴加工工業(yè)所面臨的迫切問題。目前，油品的工業(yè)脫硫普遍使用的脫硫方法是加氫脫硫。加氫脫硫是指高溫高壓下吸附在催化劑上的H2與硫化物中的硫發(fā)生催化反應，生成H2S來脫除硫。但是加氳脫硫工藝難以滿足含硫量進一步降低的要求，而且當所達到的硫含量越低時，脫辟u費用越大，脫硫效率越低；現(xiàn)有的脫石克裝置，即通過加氳處理，把柴油中的硫含量降低到350yg/g已十分困難，所以尋找一種操作筒單、投資少、脫硫效率高的成品油脫硫方法，成為目前煉油科研工作者致力研究的主要課題。近年來，生物技術(shù)的快速發(fā)展為石油產(chǎn)品深度脫硫技術(shù)的發(fā)展和應用提供了廣闊的空間。生物脫石克，又稱生物4IM匕劑脫碌b,BiocatalyticDcsulfurizationBDS,主要是利用自然界存在的微生物脫除疏而不破壞有燃料價值的烴類。生物催化脫除石油及產(chǎn)品中有機硫的技術(shù)多數(shù)還處在實驗室研究階段，尚未投入工業(yè)化生產(chǎn)。二苯并p塞吩是公認的脫有機硫模式化合物，據(jù)此分離出來的菌種可有效脫有機硫，且不破壞C-C結(jié)構(gòu)從而保留了燃料的熱值。迄今為止，已分離出的菌種包括假單胞菌i^e^湖o/M^^,紅球菌v/w^co"w^/,棒桿菌C。/y/7e&"er/腳5^,短桿菌i9reF/6a"er/"邁Si,戈登氏菌Co/d,s/,諾卡氏菌^cartf/aM等，其中，1989年美國天然氣研究所分離得到的^o^coccww力o^c力ro^/.GTS8是研究最多的菌種。1998年，JeHwanChang等人分離得到戈登氏菌Gordinasp.CYKSl，除了二苯并噻吩外，該菌株還可以分解20種其他有機硫化合物，包括硫醇,.亞硫酸鹽及"塞吩等；實驗證明該菌林可以脫去柴油中60%硫(0.15°/到0.06。/。W/W)及汽油中15%硫。2000年，S.Maghsoudi等人從石油樣品中分離得到一林脫硫棒桿菌Cor/ae^Wer/fmsp.P32C1，該菌株在發(fā)酵罐中培養(yǎng)27h就可以將0.25mol/L二苯并噻吩全部轉(zhuǎn)化成2-羥基聯(lián)苯(2-HBP)，對數(shù)生長期后期的休止細胞可在30min內(nèi)完全轉(zhuǎn)化0.5mol/L二苯并瘞吩，最大的2-HBP比生產(chǎn)速率達到37畫l/KgDCW.h,與IGTS8相比，P32C1具有更強的脫硫能力。目前生物脫硫的研究主要集中在新菌種的開發(fā)；生物催化劑制備、性能的改善；脫硫代謝途徑、機理的研究；傳質(zhì)過程的研究；脫硫工藝研究；脫硫生物反應器的設計以及生物脫硫派生產(chǎn)品的開發(fā)利用等方面。目前能用于生物脫硫的菌種很多為遺傳穩(wěn)定性較差的原核微生物，且都是以二苯并噻吩為模型化合物來進行脫硫過程研究，由于酶催化反應的專一性，這些菌種普遍對二苯并噻吩的脫除效果較好，但成品油中還含其它有機硫化合物，包括二苯并瘞吩衍生物(二苯并參汾s)、BT及其苯并瘞吩衍生物(BTs)等，菌種對這些有機疏化合物脫除較困難。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的正是為了克服上述已有技術(shù)存在的缺點與不足而提供一林選擇性寬、高活性、遺傳穩(wěn)定、以"4S，，氧化方式脫硫，且能深度脫除油品中多種復雜有機石克的脫碌u菌，為實現(xiàn)油品生物脫硫技術(shù)工業(yè)化提供生物催化劑。本發(fā)明的目的是通過下列技術(shù)方案實現(xiàn)的一種能深度脫除油品有機硫的脫硫菌，其特征在于該脫硫菌名稱為煙曲霉，拉丁文為^/ergi77^/〃邁/^s^;Fresen.TL-l，于2006年11月1日保藏在"中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物保藏中心，，，保藏號為CGMCCNO.1855。該脫-克菌的菌落在麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基上，25°C7天直徑7080mm，質(zhì)地絲絨狀，分生孢子結(jié)構(gòu)大量，暗灰綠色，無滲出液，菌落反面黃褐色，分生孢子頭球形，孢梗莖直徑400~850x3.78.1jLim，表面光滑，頂嚢燒瓶形，直徑18~52pm,表面1/2或3/4可育，產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)單層，瓶救7.6~8.5x2.0~2.9pm，分生孢子球形或近球形，淺褐色，表面粗糙，直徑2.3~3.0jum，由圖1所示。該脫辟u菌以F63-R635為引物，擴增此菌LSUrRNA基因的Dl/D2區(qū)域，序列如下CrCG(::丁('C'A(;(;CAGGCC'GCATTGCAC'CX'TCGC;CTATAAC:AC:A(:CCCOACJAC'C('CAC(Xi(KiAAGTAC.'A('CGGCACGA八TGCCCKiC:TGAAC;CX'C;(J(;(JG(K:c;AGK'TG(;TC'(;('AAACGCTTCC('TTTCAACAATTTCAC(:;丁GCTOT.rrAACTC:'J.CTInCAAA(;T('.;rT(TTCATCTTTCGA丁CACTCTACTTG丁G('GCTA丁CG(;T('T(;t'C_i(jC(V、(''TATTTA(K:TrrAGA.rC}AAATTTAC(:ACX'CAm-ACJAUC"IC;CA'rC(—(.C(:('.'、GAC'(;(;riATTrTCA('CCTCTATGACGGCCCG]TCCAGGGCAC.rrA(iACGGGCiOCTCK'ACCC'GAAGCATCCTCTGCAAATTACAACGCGGACmGAAGGC;(;C(:'A(.;CTTTCAAA'ITTGAGCTCTTGCCGCTTCA(國'TCCiCCGT'lACT(iAG(;C.VAR'r('TCrnTK—nTTC'ITTTCCTCCGCTTATTGATATGCTTAACrrTCAGCA有機硫的脫硫菌的制備方法，其特征在于它按下述步驟進行(a)菌種馴化將凈皮原油污染的土i裏5g溶于200tnL生理鹽水中，取上清液lOmL接種于80mL含400u/mL青霉素和2mg/mL鏈霉素的無機鹽培養(yǎng)基和lOmL含苯并噻吩0.lmmol/L、二苯并噻吩0.lmmol/L、4，6-二甲基二苯并噢吩0.lmmol/L和苯硫醚0.l鵬ol/L10mL的原油混合液中，混合液置于恒溫振蕩器中，在U0r/min、30。C條件下，振蕩培養(yǎng)48h為1個周期，取振蕩培養(yǎng)后水相液體10mL,重新接種于80mL上述的無才幾鹽i告養(yǎng)液和lOmL原油混合液中，在120r/rain、30。C條件下，振蕩培養(yǎng)48h;如此重復10個周期480h馴化，馴化10個周期結(jié)束后，以無菌操作在內(nèi)含400u/mL青霉素、2mg/mL鏈霉素和二苯并噻吩1000ng/g的瓊脂平板上畫線分離后，置于30。C恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，待瓊脂平板長出孤立菌落后接種于內(nèi)含400u/mL青霉素，2mg/nL鏈霉素和二苯并參吩1000jig/g斜面培養(yǎng)基上，置于3(TC恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，待斜面2/3長滿菌落后，4"C冰箱保存待篩選；(b)菌抹的篩選(1)以無菌操作將保存在斜面培養(yǎng)基上的菌落接種于lOOmL含"0u/mL青霉素和2mg/mL鏈霉素富集培養(yǎng)基中，置于恒溫振蕩器內(nèi)，在120r/min、30。C條件下，振蕩培養(yǎng)24h后；使用離心機，在6000r/min,15"C條件下離心分離收集菌體，0.5g濕菌體懸于lmL無機鹽培養(yǎng)基中，制備O.5g/mL菌懸液備用；(2)分別取濃度為2.72mmol/L和5.44mmol/L的二苯并噻吩正十六烷溶液lOmL,與90mL0.5g/mL菌懸液混合，置于恒溫振蕩器內(nèi)，在120r/tnin、3(TC條件下，振蕩培養(yǎng)12h和24h后，測定有機相中二苯并瘞吩的含量。測得的二苯并噻吩濃度最小時，即為初步獲得的脫硫菌種；(3)初步獲得的脫硫菌種接種于80mL含400u/mL青霉素和2mg/mL鏈霉素的無機鹽培養(yǎng)基和10mL含苯并嚷吩0.lranol/L、二苯并p塞吩0.lmmol/L、4，6-二曱基二苯并p塞卩分0.lmmol/L和苯硫醚0.lmmol/L10mL的催化裂化柴油混合液中，混合液置于恒溫振蕩器中，在120r/min、30。C條件下，振蕩培養(yǎng)2他后；取振蕩培養(yǎng)后水相液體10mL，重新接種于80mL無機鹽培養(yǎng)液和lOmL催化裂化柴油混合液中，在120r/min、30C條件下，振蕩培養(yǎng)24h;如此重復7個周期168h的再次馴化，再次馴化結(jié)束后，重復初步獲得脫辟u菌種過程，最終獲得了具有脫石克能力的菌種。有機硫的脫辟u菌的用途，其特征在于該脫硫菌用于深度脫除油品中有積J充化合物，其方法是將煙曲霉菌林接種于內(nèi)含400u/mL青霉素和2mg/mL鏈霉素的富集培養(yǎng)基中，在30C，120r/min條件下振蕩培養(yǎng)24h后，15°C、6000r/min離心收集菌體，制備0.5g/mL菌懸液，取此菌懸液與被脫石危油品混合，菌懸液與被脫硫油品混合體積比為80-85:15~20,將混合液置于恒溫振蕩器內(nèi)，在120r/min、30C條件下振蕩培養(yǎng)12h后，分離油相；將分離獲得的油相，與新制備的0.5g/mL菌懸液按上述的體積比混合后，置于恒溫振蕩器內(nèi)，在120r/min，，30t:條件下振蕩培養(yǎng)12h;如此三個周期，同時進行以24h為一個周期的平行實驗。三個周期結(jié)束后，完成對油品中有機硫的深度脫硫。本發(fā)明提供的煙曲霉J"erg/77^尸w邁/卵fzwFresen.TL-1是以天津大港油田被原油污染土壤為菌源，采用苯并噻吩、二苯并噢吩、4,6-二甲基二苯并噢吩和苯硫醚的混合物為限制性底物，進行的微生物馴化，初次馴化用原油和無機鹽混合液，再次馴化用催化裂化柴油和無機鹽混合液，再篩選出的具有脫硫能力的菌林。本發(fā)明提供的煙曲霉A/e/^/7/w/"咖/'^/"irFresen,TL-1，通過選取溫度，pH值、鹽濃度為主要影響因素試驗可知，其在30匸，pH值為7，NaCl濃度為10g/L的條件下，生長狀況較好，菌株耐受pH值的范圍是3~11，可以耐受27g/L以下的滲透壓，該菌抹在環(huán)境pH值和滲透壓改變較大時，仍能維持正常的生命活動，對環(huán)境的適應能力較強。本發(fā)明提供的煙曲霉h/7e/^7/zw尸湖/卵"sFresen.TL-1,利用高效液相色語儀和氣相色謙儀確定了該菌林在代謝二苯并嚷吩過程中有二苯并噻吩砜和2-羥基聯(lián)苯生成，是循"4S"氧化途徑脫石克的菌株。本發(fā)明提供的煙曲霉菌抹接種內(nèi)含400u/mL青霉素和2mg/mL鏈霉素富集培養(yǎng)基，在30。C，120r/min條件下振蕩培養(yǎng)24h后，15°C、6000r/min離心收集菌體，菌體接種于二苯并嚷吩濃度為1000pg/g的無機鹽培養(yǎng)液lOOmL中，其中十六烷占10%，30t:,120r/min，振蕩培養(yǎng)24h后，使用高效液相色諳儀和氣相色i普儀確定有才M目中物質(zhì)的保留時間，對比正十六烷溶解二苯并嚷吩砜標準品的高效液相色i普圖和正十六烷溶解二苯并噢吩、2-羥基聯(lián)苯標準品的氣相色譜圖，分析觀察確定了本發(fā)明提供的煙曲霉菌林，代謝二苯并噻吩的主要中間產(chǎn)物和終產(chǎn)物是二苯并瘞吩砜和2-羥基聯(lián)苯。同時向上述振蕩24h后培養(yǎng)液中加入BaCl2溶液，看到有不溶于稀硝酸的白色沉淀出現(xiàn)，確定有SO、存在。通過此實驗確定了本發(fā)明提供的煙曲霉菌株代謝二苯并嚷吩循"4S"氧化途徑。二苯并嚷吩的定量采用高效液相色i普法。高效液相色鐠儀的使用條件及方法調(diào)節(jié)高效液相色傳檢測波長為254nm，流動相為90%的甲醇水溶液，流速為lmL/min,柱溫為25X:的C18色i普柱，進才羊量20inL。在4吏用條件下，測定各標準二笨并噻吩溶液濃度對應的峰面積，由色i昝工作站繪制成二苯并噻吩濃度與對應峰面積的標準曲線，通過測定各樣品中二苯并汆吩的峰面積即可確定二笨并噻吩的量。有斜目中硫含量采用微庫侖法測定。微庫侖儀操作條件汽化段溫度為600C燃燒段溫度為800t:，穩(wěn)定段溫度700t:，氮氣流量為150mL/min，氯氣流量為150mL/min，偏壓E為130mV,增益K為1000，電阻R為2KQ。通過分析硫標準溶液，計算總硫的轉(zhuǎn)化率，消除了三氧化硫未參加反應帶來的誤差；對未知試樣進行測定，并進行計算后，可求得未知樣品中硫的含量。由于采取上述技術(shù)方案使本發(fā)明技術(shù)與己有技術(shù)相比具有如下優(yōu)點及效果(a)本發(fā)明提供煙曲霉，選擇性寬、高活性、遺傳穩(wěn)定、以"4S"氧化方式可脫除復雜有才幾硫化合物中的硫，且可直接應用于油品的深度脫vf危，具有廣泛的實際應用和理論研究價值；(b)本發(fā)明提供的煙曲霉，通過成品油的深度脫硫?qū)嶒灒_定了菌株可以直接應用于油品的脫硫，有較高的脫J危效率，脫硫率可達47.99~85.61%;(c)在富集培養(yǎng)基接種的煙曲霉菌抹，在30。C,pH值為7,NaCl濃度為10g/L條件下，生長狀況較好；菌林耐受pH值的范圍是311，可以耐受27g/L以下的滲透壓；該菌株在環(huán)境pH值和滲透壓改變較大時，仍能維持正常的生命活動，對環(huán)境的適應能力較強；(d)能脫除多種含疏化合物中的硫，且有較大范圍的環(huán)境耐受能力。圖1本發(fā)明的煙曲霉的顯微形態(tài)圖具體實施方式實施例1將4皮原油污染的土壤5g溶于200mL生理鹽水中，取上清液10mL接種于80mL含400u/mL青霉素和2mg/mL鏈霉素的無機鹽培養(yǎng)基和10mL含苯并噻吩0.lramol/L、二苯并嚷吩0.lmmol/L、4，6-二甲基二苯并噢汾0.l咖ol/L和苯硫瞇0.l咖ol/L10mL的原油混合液中，混合液置于恒溫振蕩器中，在120r/min、3(TC條件下，振蕩培養(yǎng)48h為1個周期，取振蕩培養(yǎng)后水相液體10mL,重新接種于80mL上迷的無機鹽培養(yǎng)液和10mL原油混合液中，在120r/min、30"C條件下，振蕩培養(yǎng)48h;如此重復10個周期480h馴化，馴化10個周期結(jié)束后，以無菌操作在內(nèi)含400u/mL音霉素、2mg/mL鏈霉素和二苯并噢喻1000ng/g的瓊脂平板上畫線分離后，置于30X:恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，待瓊脂平板長出孤立菌落后接種于內(nèi)舍400u/mL青霉素，2mg/mL鏈霉素和二苯并嚷喻1000Mg/g斜面培養(yǎng)基上，置于30'C恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，待斜面2/3長滿菌落后，4'C冰箱保存待篩選；以無菌操作將保存在斜面培養(yǎng)基上的菌落接種子100mL舍400u/mL青霉素和2mg/mL鏈霉素富集培養(yǎng)基中，置于恒溫振蕩器內(nèi)，在120r/min、30"C條件下，,振蕩培養(yǎng)24h后；使用離心機，在6000r/min，15X:條件下離心分離收集菌體，0.5g濕菌體懸于lmL無機鹽培養(yǎng)基中，制備0.5g/mL菌懸液備用；分別取濃度為2.72咖ol/L和5.44咖ol/L的二苯并漆哈正十六烷溶液10mL，與90mL0.5g/邁L菌懸液混合，置于恒溫振蕩器內(nèi)，在120r/min、30"C條件下，振蕩培養(yǎng)12h和24h后，測定有機相中二苯并噢吩的含量。測得的二笨并噻吩濃度最小時，說明微生物脫減效果越好，即為初步獲得的脫硫菌種初步獲得的脫硫菌種接種于80mL含400u/mL青霉素和2mg/mL鏈霉素無機鹽培養(yǎng)基和10mL含苯并噢吩0.2mmol/L、二苯并漆吩0.2咖ol/L、4，6-二甲差-二苯并噻吩0.2mmol/L和苯硫醚().2mmol/L的催化裂化柴油混合液中，混合液置于恒溫振蕩器中，在120r/min、30t:條件下，振蕩培養(yǎng)24h為1個周期；取振蕩培養(yǎng)后水相液體lOmL,重新接種于80mL無機鹽培養(yǎng)液和10mL催化裂化柴油混合液中，在120r/min、30X:條件下，振蕩培養(yǎng)24h;如此重復7個周期168h再次馴化。再次馴化結(jié)束后，重復初步獲得脫石克菌種過程，最終獲得了具有脫疏能力的菌種。菌種經(jīng)中國科學院微生物研究所鑒定為"/7er^r7勿s/^zw>WmFresen.TL-l;該菌株于2006年11月1日保藏在"中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物保藏中心"，保藏號為CGMCCNO.1855。該菌林培養(yǎng)及顯微形態(tài)為菌落在麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基上，25X:7天直徑70-80咖，質(zhì)地絲絨狀，分生孢子結(jié)構(gòu)大量，暗灰綠色，無滲出液菌落反面黃褐色。分生孢子頭球形；孢梗莖直徑400850x3.78.1jam，表面光滑；頂嚢燒瓶形，直徑1852ym，表面l/2或3/4可育；產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)單層，瓶梗7.6~8.5x2.0~2.9jim;分生孢子球形或近球形，淺褐色，表面粗糙，直徑2.3-3.0jam,由圖1所示，該菌株以F63-R635為引物，擴增此菌LSUrRNA基因的Dl/D2區(qū)域，序列進行Blast比較，與^/er^7/w;尸咖/卵&s相似性分別達100%，基因的Dl/D2區(qū)域序列為CiGCCACiTATTTACiCTTTAGATGAAATTTACCACCCATTTAGAGCTGCATU'CCAAT('('('T(iTTGGTTTC'rTTTCCTCCGCTTATTGATA'rGCTTAAGTTCAGCA實施例2將煙曲霉菌抹接種于內(nèi)含400u/mL青霉素和2mg/mL鏈霉素的富集培養(yǎng)基.中，在30。C，120r/min條件下振蕩培養(yǎng)24h后，15。C、6000r/min離心收集菌體，制備0.5g/fflL菌懸液，取此菌懸液80niL與93#汽油20mL混合，將混合液置于恒溫振蕩器內(nèi)，在120r/min、30t:條件下振蕩培養(yǎng)12h后，分離油相；將分離獲得的油相，與新制備的0.5g/mL菌懸液80mL混合，置于恒溫振蕩器內(nèi)，在120r/rain、30"C條件下振蕩培養(yǎng)12h;如此三個周期，同時進行以2化為一個周期的平行實驗。三個周期結(jié)束后，完成對汽油中有機硫的深度脫疏，其結(jié)果見表l表l93*汽油脫硫結(jié)杲<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>實施例3將煙曲霉菌株接種于內(nèi)含400u/mL青霉素和2mg/mL鏈霉素的富集培養(yǎng)基.中，在3(TC，120r/min條件下振蕩培養(yǎng)24h后，15"C、6000r/min離心收集菌體，制備0.5g/mL菌懸液，取此菌懸液85mL與柴油15mL混合，將混合液置于恒溫振蕩器內(nèi)，在120r/min、30。C條件下振蕩培養(yǎng)12h后，分離油相；將分離獲得的油相，與新制備的0.5g/mL菌懸液80mL混合，置于恒溫振蕩器內(nèi)，在120r/min、30t:條件下振蕩培養(yǎng)12,h;如此三個周期，同時進行以2仆為一個周期的平行實驗。三個周期結(jié)束后，完成對柴油中有機硫的深度脫疏，其結(jié)果見表2。表2柴油脫硫結(jié)杲試驗編號12h三周期后脫硫率(W24h三周期后脫硫率(%)176.0182.72279.7185.61377.4383.54實施例4按實施例3條件對催化裂化柴油深度脫辟u，其結(jié)果見表3表3催化裂化柴油脫硫結(jié)果試驗編號12h三周期后脫石危率(0/。)2仆三周期后脫碌u率(％)174.1980.09274.5481.33376.3282.1權(quán)利要求1.一種能深度脫除油品有機硫的脫硫菌，其特征在于該脫硫菌名稱為煙曲霉，拉丁文為AspergillusfumigatusFresen.TL-1，2006年11月1日保藏在“中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物保藏中心”，保藏號為CGMCCNo.1855。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的有機硫的脫硫菌，其特征在于該脫硫菌的菌落在麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基上，25°C7天直徑為70~80鵬，質(zhì)地絲絨狀，分生孢子結(jié)構(gòu)大量，暗灰綠色，無滲出液，菌落反面黃褐色，分生孢子頭球形，孢梗莖直徑400-850x3.7-8.lpm，表面光滑，頂嚢燒瓶形，直徑1852)am，表面1/2或3/4可育；產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)單層，瓶梗7.6~8.5x2.0~2.9jam，分生孢子球形或近球形，淺褐色，表面粗糙，直徑2.3~3.0jura。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的有機硫的脫硫菌，其特征在于該脫硫菌以F63-R635為引物,擴增此菌LSUrRNA基因的Dl/D2區(qū)域，序列如下(、t'CACG(X;(;AAGTAC'ACCGGCACC3AATG'CCCitiCTGAACC(X'(JCXKKK:'GA(Jl'CT(;(.-'TCC5('AAACGCTTC('('TTTCAA(，A,VrTTCACXn—GCT(TITI.AACTCTC'rIII<_.■AAA(;TrirTn'丁CATCTTTCGATCACTC'rACTTG丁GCGtTA丁CGC;T('TCCCi(」CC,、C;TATTTAGCT.n—AGA丁GAAAT丁丁ACCACCC.ATT.JAUA(JCI(」CAir(乂CAAA('AAC.rCG八C'rCGTCGA八GGAGCTT(:.AC'AC:(;GACGCA(iACACC('C(i'r(-「CAC;A(-(國i(iGATTrTf:AC(.'CTCTATGACGGCCCG—JTCCAGGGCAC丁TAGACGGG(i(iC'r(JCACCCGAAGCATCCTCTGCAAATTACAACGCG(iA(:(:(X'C3」、A(,GG(;('CA(;(、Ti~r('AAA.r-TGAGCTC.nx;ccGcrrcAC'rcciCcxiTTACr(iA(iG('AAr(:r("l(;—「TG(Trn(、TTTTCCTCCGCT丁,VTTGAT八T(;(TT八AGTTCA(畫;CA4、如根據(jù)要求l、2或3所述的有機硫的脫疏菌的制備方法，其特征在于它按下述步驟進行(a)菌種馴化將4皮原油污染的土i裒5g溶于200mL生理鹽水中，取上清液10mL接種于80mL含40Gu/mL青霉素和2tng/tnL鏈霉素的無機鹽培養(yǎng)基和10mL含苯并瘞吩0,lmmol/L、二苯并"塞吩0.l咖ol/L、4，6-二甲基二苯并p塞吩0.lmraol/L和^5克醚0.l咖ol/L10mL的原油混合液中，混合液置于恒溫振蕩器中，在120r/min、30。C條件下，振蕩培養(yǎng)48h,l個周期，取振蕩培養(yǎng)后7jc相液體10mL，重新接種于80mL上述的無機鹽培養(yǎng)液和lOmL原油混合液中，在120r/min、3(TC條件下，振蕩培養(yǎng)48h;如此重復10個周期，4隱馴化，馴化10個周期結(jié)束后，以無菌操作在內(nèi)含400u/mL青霉素、2mg/mL鏈霉素和二苯并嚷吩1000jagg^的瓊脂平板上畫線分離后，置于30。C恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，待瓊脂平板長出孤立菌落后接種于內(nèi)含400u/mL青霉素，2mg/mL鏈霉素和二苯并瘞吩1000jig/g斜面培養(yǎng)基上，置于3(TC恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，待斜面2/3長滿菌落后，4。C冰箱保存待篩選；(b)菌株的篩選(1)以無菌操作將保存在斜面培養(yǎng)基上的菌落接種于100mL含400u/mL青霉素和2mg/mL鏈霉素富集培養(yǎng)基中，置于恒溫振蕩器內(nèi)，在120r/min、3(TC條件下，振蕩培養(yǎng)24h后；使用離心機，在6000r/min，15。C條件下離心分離收集菌體，0.5g濕菌體懸于lmL無機鹽培養(yǎng)基中，制備O.5g/tnL菌懸液備用；(2)分別取濃度為1"mmol/L和5."mmol/L的二苯并噢吩正十六烷溶液10mL,與90mL0.5g/mL菌懸液混合，置于恒溫振蕩器內(nèi)，在120r/min、30。C條件下，振蕩培養(yǎng)12h和2化后，測定混合液油相中二苯并噢吩的含量，測得的二苯并瘞吩濃度最小時，即為初步獲得的脫硫菌種；(3)初步獲得的脫硫菌種接種于80mL含400u/mL青霉素和2mg/mL鏈霉素的無才幾鹽培養(yǎng)基和lOmL含苯并瘞吩0.lmmol/L、二苯并噢p分0.lmmol/L、4，6-二甲基二苯并p塞吩0.lmmol/L和苯錄u醚0.lmmol/L10mL的催化裂化柴油混合液中，混合液置于恒溫振蕩器中，在120r/fflin、30。C條件下，振蕩培養(yǎng)24h后；取振蕩培養(yǎng)后水相液體lOmL，重新接種亍80mL無機鹽培養(yǎng)液和10mL催化裂化柴油混合液中，在120r/min、30。C條件下，振蕩培養(yǎng)24h;如此重復7個周期168h的再次馴化，再次馴化結(jié)束后，重復初步獲得脫硫菌種過程，最終獲得了具有脫石克能力的菌種。5、如權(quán)利要求4所述的有機硫的脫疏菌的用途，其特征在于該脫硫菌用于深度脫除油品中有機疏化合物。6、根據(jù)權(quán)利要求5所述的有機硫的脫硫菌的用途，其特征在于將煙曲霉菌抹接種于內(nèi)含400u/mL青霉素和2mg/mL鏈霉素的富集培養(yǎng)基中，在30°C,120r/min條件下振蕩培養(yǎng)24h后，15°C、6000r/min離心收集菌體，制備0.5g/mL菌懸液，取此菌懸液與被脫疏油品混合，菌懸液與被脫硫油品混合體積比為15~20:80~85,將混合液置于恒溫振蕩器內(nèi)，在120r/min、30。C條件下振蕩培養(yǎng)12h后，分離油相；將分離獲得的油相，與新制備的0.5g/mL菌懸液按上述的體積比混合后，置于恒溫振蕩器內(nèi)，在120r/min、30。C條件下振蕩培養(yǎng)12h;如此三個周期，同時進行以24h為一個周期的平行實驗。三個周期結(jié)束后，完成對油品中有機碌u的深度脫碌u。全文摘要本發(fā)明涉及一種能深度脫除油品有機硫的脫硫菌，其特征在于該脫硫菌名稱為煙曲霉，拉丁文為AspergillusfumigatusFresen.TL-1，于2006年11月1日保藏在“中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物保藏中心”，保藏號為CGMCCNo.1855，煙曲霉具有選擇性寬、高活性、遺傳穩(wěn)定、以“4S”氧化方式可脫除復雜有機硫化合物中的硫，且可直接應用于油品的深度脫硫，有較高的脫硫效率，脫硫率可達47.99～85.61％，對環(huán)境的適應能力較強，能脫除多種含硫化合物中的硫，且有較大范圍的環(huán)境耐受能力的優(yōu)點及效果。文檔編號C12N15/31GK101240245SQ200710003499公開日2008年8月13日申請日期2007年2月9日優(yōu)先權(quán)日2007年2月9日發(fā)明者錄劉,沈齊英申請人:北京石油化工學院