專利名稱：一種中溫型蝦青素產(chǎn)生菌及其培養(yǎng)方法
技術領域：
本發(fā)明涉及蝦青素生產(chǎn)領域，具體地涉及一種中溫型蝦青索產(chǎn)生菌及其培養(yǎng)方法。
背景技術：
法夫酵母于1967年初被分離，1976年被命名為Phaffia rhodozyma。1995年部分菌株被發(fā)現(xiàn)其有性循環(huán)，重新定位于擔子菌門(Xanthophyllomycesdendrorhous)。其生物學特性主要有枯紅色菌落，在細胞單個位點反復出芽，細胞壁含有木糖，重氮B染色陽性，特有的18S rRNA序列，產(chǎn)生3R、3′R′構型的蝦青素。
蝦青素是一種類胡蘿卜素，化學名稱為3，3’-二羥基-B，B-胡蘿卜素-4，4’二酮。蝦青素是一種脂溶性色素，不溶于水，易溶于四氫呋喃、二氯甲烷、氯仿、甲醇、乙醇等有機溶劑。天然蝦青素具有特殊的分子結構，體外實驗發(fā)現(xiàn)它是單線態(tài)氧的強大淬滅劑，具有清除氧自由基的強大能力，是一種極有效的抗氧化劑。近年來的研究表明，蝦青素具有抗癌、增強免疫系統(tǒng)功能、抗感染等活性。蝦青素不但可以作為人類的保健品，還可作為蛋禽業(yè)的飼料添加劑，目前主要作為著色劑廣泛用于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)。
蝦青素的生產(chǎn)具有人工合成和生物獲取兩種方式。美國食品與藥物管理局(FDA)已禁止化學合成的蝦青素進入保健食品市場。天然蝦青索的米源主要是雨生紅球藻(Haematococcus pluvialis)和法夫酵母(Phaffia rhodozyma)。利用法夫酵母(P.rhodozyma)發(fā)酵生產(chǎn)蝦青素，具有細胞生長速度快、發(fā)酵周期短、易于工業(yè)化等優(yōu)點。且酵母中含有豐富的蛋白質、脂類和維生素，可直接作為飼料添加劑使用。但由于法夫酵母原始菌株的蝦青素細胞含量很低，而且要求培養(yǎng)溫度偏低，導致生產(chǎn)工藝復雜，目前只有少數(shù)國外大公司能夠生產(chǎn)。法夫酵母合成蝦青素一般需要低溫培養(yǎng)(20-22℃)，發(fā)酵培養(yǎng)過程必須冷卻降溫，消耗能源較多。這些缺點限制了蝦青素生產(chǎn)工業(yè)的發(fā)展，中溫型蝦青素產(chǎn)生菌的獲得及其培養(yǎng)方法的建立必將為該領域的發(fā)展帶來新的契機。

發(fā)明內容
(一)要解決的技術問題本發(fā)明的目的是提供一種中溫型蝦青素產(chǎn)生菌，本發(fā)明的另一目的是提供該中溫型蝦青素產(chǎn)生菌的培養(yǎng)方法。
(二)技術方案定義在本發(fā)明的意義上，中溫型蝦青素產(chǎn)生菌特指最適生長溫度為23-26℃的蝦青素產(chǎn)生菌，低溫型蝦青素產(chǎn)生菌特指最適生長溫度為20-22℃的蝦青素產(chǎn)生菌。
本發(fā)明的發(fā)明人通過化學、物理誘變技術，配合添加抑制劑的篩選策略，選育出一種中溫型蝦青素產(chǎn)生菌法夫酵母(Phaffia rhodozyma)A-1，該菌株已于2006年10月13日被保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，簡稱CGMCC，保藏編號為CGMCC No.1837。
本發(fā)明所述的蝦青素產(chǎn)生菌的形態(tài)學特征為個體形態(tài)特征以卵圓形單細胞為主，大小3～6μm×5～12μm。有時幾個細胞連在一起的，有時細胞呈假菌絲狀，長×寬為3～5μm×10～17μm。
平板培養(yǎng)特征該菌在YM(酵母粉和麥芽糖)培養(yǎng)基上的菌落直徑為1.0～5.0mm，橘紅色至深紅色，菌落紅色色度越深越有光澤，其所含蝦青素的量越多。
本發(fā)明所述的蝦青素產(chǎn)生菌的生理生化特征為好氧菌，需在有氧環(huán)境中才能生長。最適生長pH為6.0，色素形成的最適pH為5.0。屬于兼性嗜冷的低溫型微生物。最適生長溫度為23～26℃。當葡萄糖或蔗糖濃度大于8％以上時，生物量、色素量均明顯下降。酵母膏既利于菌體的生長也利于色素形成。以(NH4)2SO4為唯一氮源，色素含量較高，但菌體量不高。尿素作為唯一氮源既有利于該菌生長又有利于色素的積累。
本發(fā)明所述的蝦青素產(chǎn)生菌的營養(yǎng)學特征為葡萄糖、酵母粉、尿素，再加適量的磷酸鹽和鎂鹽即可滿足該菌株色素積累和細胞生長的需要。
本發(fā)明所述的蝦青素產(chǎn)生菌的選育技術路線為新鮮活化30h的細胞經(jīng)離心棄去上清，用生理鹽水懸浮，加入亞硝基胍(NTG)生理鹽水飽和溶液，充分混合，作用0-20分鐘。誘變結束后，反應液充分離心并洗滌，適當稀釋后涂布于PDA培養(yǎng)基平板，平板內含有適當濃度的抑制色素積累或細胞生長的篩選劑(辛伐他汀或牦牛兒基牦牛兒醇)。平板在23～26℃避光倒置培養(yǎng)7天。選擇深紅色細胞繼續(xù)培養(yǎng)稀釋進行物理誘變，采取60Co照射，照射劑量為4kGy。將誘變后的菌液涂布于上述含有抑制劑的平板，23～26℃避光倒置培養(yǎng)7天，挑選肉眼觀察明顯紅于出發(fā)菌株的單菌落，進入搖瓶復篩。
初篩平板長出的菌落，接種于裝有5ml液體培養(yǎng)基(葡萄糖40g/L，酵母粉4g/L，尿素3.6g/L，磷酸二氫鉀2g/L，硫酸鎂0.5g/L，pH6.0)試管?；罨囵B(yǎng)30h后直接轉入裝有50ml液體培養(yǎng)基的500ml的三角瓶中培養(yǎng)。培養(yǎng)120h后，收集細胞，破壁提取色素，液譜測定純蝦青素的含量。選取復篩后表現(xiàn)最優(yōu)的突變子3-5株，進入下一輪誘變。
本發(fā)明所述的蝦青素產(chǎn)生菌的培養(yǎng)方法，包括以下步驟(1)發(fā)酵罐種子培養(yǎng)挑取該蝦青素產(chǎn)生菌的單菌落，接入到50mL液體種子培養(yǎng)基中，在23-26℃，200-260r/min下培養(yǎng)36-40h，培養(yǎng)液OD600＝7.5-8.5；再按照5％接種量將上述種子培養(yǎng)液接入到所述的液體種子培養(yǎng)基中，在23-26℃，200-260r/min下培養(yǎng)36-60h，培養(yǎng)液OD600＝7.5-8.5；然后按照5％接種量將得到的種子培養(yǎng)液轉入到所述的液體種子培養(yǎng)基中，在23-26℃，200-260r/min下培養(yǎng)36-60h，培養(yǎng)液OD600＝7.5-8.5；(2)補料發(fā)酵按照5％接種量將所述步驟(1)得到的種子液接入到裝有液體分批基礎培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中進行分批培養(yǎng)；用體積比為10％的HCl和10mol/L的NaOH將所述基礎培養(yǎng)基的pH控制在4.8-5.2，通氣量為0.7-0.9L/L/min；通過調節(jié)轉速將溶氧控制在20-70％；當所述基礎培養(yǎng)基的葡萄糖濃度降至20g/L時第一次補料，使葡萄糖濃度恢復到40g/L，始終控制所述基礎培養(yǎng)基的葡萄糖濃度在20-40g/L，總葡萄糖用量達到100g/L；培養(yǎng)時間為60-80h。
本發(fā)明所述的蝦青素產(chǎn)生菌的培養(yǎng)方法，所用到的培養(yǎng)基的組成為所述的種子培養(yǎng)基葡萄糖40g/L，酵母粉4g/L，尿素3.6g/L，磷酸二氫鉀2g/L，硫酸鎂0.5g/L，pH6.0；所述的基礎培養(yǎng)基葡萄糖40g/L，酵母粉10g/L，尿素3.6g/L，硫酸銨5.0g/L，磷酸二氫鉀2g/L，硫酸鎂0.5g/L，pH6.0；所述的補料培養(yǎng)基40％葡萄糖(W/V)補料液。
采用本發(fā)明所述的方法培養(yǎng)60-80h小時，蝦青素的產(chǎn)量達到30-35mg/L。而以上述方法采用20-22℃培養(yǎng)，則細胞生長和色素合成都比在23-26℃培養(yǎng)慢，且色素合成量未見增多。
(三)有益效果本發(fā)明提供的中溫型蝦青素生產(chǎn)菌法夫酵母(Phaffia rhodozyma)A-1營養(yǎng)要求簡單，在23-26℃下培養(yǎng)細胞生長迅速，且蝦青素大量積累，相對于目前工業(yè)上普遍應用的低溫型(20-22℃)蝦青素生產(chǎn)菌而言，有效降低了生產(chǎn)能耗，從而達到降低生產(chǎn)成本的目的。
本發(fā)明提供的中溫型蝦青素生產(chǎn)菌的培養(yǎng)方法與目前的工業(yè)生產(chǎn)方法相比，工藝簡便，培養(yǎng)周期短，蝦青素產(chǎn)量高，培養(yǎng)60-80h小時蝦青素的產(chǎn)量達到30-35mg/L，對工業(yè)化生產(chǎn)極為有利。
本發(fā)明所述的中溫型蝦青素產(chǎn)生菌法夫酵母(Phaffia rhodozyma)A-1，該菌株已于2006年10月13日被保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，簡稱CGMCC，保藏編號為CGMCC No1837。
具體實施例方式
以下實施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。
實施例1中溫型蝦青素產(chǎn)生菌的誘變篩選一、化學誘變(1)取活化30h的新鮮菌體(出發(fā)菌株為Phaffia rhodozyma JMC9042，購于日本理化所)，離心，棄去上清，用0.5ml生理鹽水懸浮，加入0.1ml的NTG生理鹽水飽和溶液，作用10分鐘；(2)反應液經(jīng)離心，生理鹽水洗滌三次；(3)脫毒后的菌體用1ml的生理鹽水懸浮，稀釋適當濃度(稀釋度為106-108)后涂布于PDA平板(部分PDA培養(yǎng)基含有適當濃度的篩選劑辛伐他汀4-8mg/L)，pH＝6.0。平板避光，24℃，倒置培養(yǎng)7-10天；(4)誘變后的細胞經(jīng)平板倒置培養(yǎng)7-10天后，挑選肉眼觀察明顯紅于出發(fā)菌株的單菌落重新接種于新的平板(不加篩選劑)。在經(jīng)過5-7天的倒置培養(yǎng)，新長出的菌落如果依然紅于出發(fā)菌株，則進入搖瓶復篩；(5)初篩平板長出的優(yōu)秀菌落，接種于裝有5ml液體培養(yǎng)基試管?；罨囵B(yǎng)48h后直接轉入裝有50ml液體培養(yǎng)基的500ml的三角瓶中培養(yǎng)(培養(yǎng)基組成為葡萄糖40g/L，酵母粉4g/L，尿素3.6g/L，磷酸二氫鉀2g/L，硫酸鎂0.5g/L，pH6.0)。培養(yǎng)120h后，收集細胞，破壁提取色素，液譜測定純蝦青素的含量。選取復篩后表現(xiàn)最優(yōu)的突變子3-5株，進入下一輪誘變。
二、物理誘變(60Co)物理誘變的過程與化學誘變相似，不同之處在于誘變劑由NTG改為60Co照射，照射劑量為4kGy。
經(jīng)多次篩選，得到中溫型蝦青素產(chǎn)生菌法夫酵母(Phaffia rhodozyma)A-1。
實施例2中溫型蝦青素產(chǎn)生菌的培養(yǎng)及蝦青素含量測定
1.中溫型蝦青素產(chǎn)生菌的培養(yǎng)(1)發(fā)酵罐種子培養(yǎng)挑取該蝦青素產(chǎn)生菌的單菌落，接入到50mL液體種子培養(yǎng)基中，在23℃，200r/min下培養(yǎng)36h，培養(yǎng)液OD600＝7.5；再按照5％接種量將上述種子培養(yǎng)液接入到50mL所述的液體種子培養(yǎng)基中，在23℃，200r/min下培養(yǎng)36h，培養(yǎng)液OD600＝7.5；然后按照5％接種量將得到的種子培養(yǎng)液轉入到100mL所述的液體種子培養(yǎng)基中，在23℃，200r/min下培養(yǎng)36h，培養(yǎng)液OD600＝7.5；(2)補料發(fā)酵按照5％接種量將所述步驟(1)得到的種子液接入到裝有4.0L液體分批基礎培養(yǎng)基的7.5L發(fā)酵罐中進行分批培養(yǎng)；用體積比為10％的HCl和10mol/L的NaOH將所述基礎培養(yǎng)基的pH控制在4.8，通氣量為0.7L/L/min；通過調節(jié)轉速將溶氧控制在20％；當所述基礎培養(yǎng)基的葡萄糖濃度降至20g/L時第一次補料，使葡萄糖濃度恢復到40g/L，始終控制所述基礎培養(yǎng)基的葡萄糖濃度在20-40g/L，總葡萄糖用量達到100g/L；培養(yǎng)時間為60h。
2.蝦青素含量測定(1)蝦青素的提取取1.0ml上述培養(yǎng)60h的菌液，離心，棄去上清，加入70℃的二甲亞砜0.2ml，旋渦振蕩30秒，加入1ml甲醇-二氯甲烷(3∶1)混合有機溶劑來提取色素。離心，收集上清(含有色素)。如果沉淀還有顏色，重復上述過程，直到沉淀無色，合并上清，離心(120,000r/min，10分鐘)，-20℃避光保存，待測(樣品可直接檢測)。
(2)高壓液相色譜法測定蝦青素Waters 600E高壓液相色譜儀；ZY1104型液相色譜柱(填料C-18，dp10μm)，柱長25cm，內徑4mm；2487雙光束紫外檢測器。流動相為甲醇-二氯甲烷(9∶1)；流速1.0mL/min；檢測波長476nm。
測定結果為蝦青素的產(chǎn)量達30mg/L。測定結果表明采用本發(fā)明所述的中溫型蝦青素生產(chǎn)菌的培養(yǎng)方法，培養(yǎng)周期短，蝦青素產(chǎn)量高。
實施例3中溫型蝦青素產(chǎn)生菌的培養(yǎng)及蝦青素含量測定1.中溫型蝦青素產(chǎn)生菌的培養(yǎng)(1)發(fā)酵罐種子培養(yǎng)挑取該蝦青素產(chǎn)生菌的單菌落，接入到50mL液體種子培養(yǎng)基中，在24℃，220r/min下培養(yǎng)40h，培養(yǎng)液OD600＝8.0；再按照5％接種量將上述種子培養(yǎng)液接入到50mL所述的液體種子培養(yǎng)基中，在24℃，220r/min下培養(yǎng)36h，培養(yǎng)液OD600＝8.0；然后按照5％接種量將得到的種子培養(yǎng)液轉入到100mL所述的液體種子培養(yǎng)基中，在24℃，220r/min下培養(yǎng)36h，培養(yǎng)液OD600＝8.0；(2)補料發(fā)酵按照5％接種量將所述步驟(1)得到的種子液接入到裝有4.0L液體分批基礎培養(yǎng)基的7.5L發(fā)酵罐中進行分批培養(yǎng)；用體積比為10％的HCl和10mol/L的NaOH將所述基礎培養(yǎng)基的pH控制在5.0，通氣量為0.8L/L/min；通過調節(jié)轉速將溶氧控制在40％；當所述基礎培養(yǎng)基的葡萄糖濃度降至20g/L時第一次補料，使葡萄糖濃度恢復到40g/L，始終控制所述基礎培養(yǎng)基的葡萄糖濃度在20-40g/L，總葡萄糖用量達到100g/L；培養(yǎng)時間為70h。
2.蝦青素含量測定(1)蝦青素的提取取1.0ml上述培養(yǎng)70h的菌液，離心，棄去上清，加入70℃的二甲亞砜0.2ml，旋渦振蕩30秒，加入1ml甲醇-二氯甲烷(3∶1)混合有機溶劑來提取色素。離心，收集上清(含有色素)。如果沉淀還有顏色，重復上述過程，直到沉淀無色，合并上清，離心(120,000r/min，10分鐘)，-20℃避光保存，待測(樣品可直接檢測)。
(2)高壓液相色譜法測定蝦青素Waters 600E高壓液相色譜儀；ZY1104型液相色譜柱(填料C-18，dp10μm)，柱長25cm，內徑4mm；2487雙光束紫外檢測器。流動相為甲醇-二氯甲烷(9∶1)；流速1.0mL/min；檢測波長476nm。
測定結果為蝦青素的產(chǎn)量達32mg/L。測定結果表明采用本發(fā)明所述的中溫型蝦青素生產(chǎn)菌的培養(yǎng)方法，培養(yǎng)周期短，蝦青素產(chǎn)量高。
實施例4中溫型蝦青素產(chǎn)生菌的培養(yǎng)及蝦青素含量測定1.中溫型蝦青素產(chǎn)生菌的培養(yǎng)(1)發(fā)酵罐種子培養(yǎng)挑取該蝦青素產(chǎn)生菌的單菌落，接入到50mL液體種子培養(yǎng)基中，在25℃，200r/min下培養(yǎng)40h，培養(yǎng)液OD600＝8.0；再按照5％接種量將上述種子培養(yǎng)液接入到50mL所述的液體種子培養(yǎng)基中，在25℃，200r/min下培養(yǎng)48h，培養(yǎng)液OD600＝8.0；然后按照5％接種量將得到的種子培養(yǎng)液轉入到100mL所述的液體種子培養(yǎng)基中，在25℃，200r/min下培養(yǎng)48h，培養(yǎng)液OD600＝8.0；(2)補料發(fā)酵按照5％接種量將所述步驟(1)得到的種子液接入到裝有4.0L液體分批基礎培養(yǎng)基的7.5L發(fā)酵罐中進行分批培養(yǎng)；用體積比為10％的HCl和10mol/L的NaOH將所述基礎培養(yǎng)基的pH控制在5.2，通氣量為0.9L/L/min；通過調節(jié)轉速將溶氧控制在50％；當所述基礎培養(yǎng)基的葡萄糖濃度降至20g/L時第一次補料，使葡萄糖濃度恢復到40g/L，始終控制所述基礎培養(yǎng)基的葡萄糖濃度在20-40g/L，總葡萄糖用量達到100g/L；培養(yǎng)時間為72h。
2.蝦青素含量測定(1)蝦青素的提取取1.0ml上述培養(yǎng)72h的菌液，離心，棄去上清，加入70℃的二甲亞砜0.2ml，旋渦振蕩30秒，加入1ml甲醇-二氯甲烷(3∶1)混合有機溶劑來提取色素。離心，收集上清(含有色素)。如果沉淀還有顏色，重復上述過程，直到沉淀無色，合并上清，離心(120,000r/min，10分鐘)，-20℃避光保存，待測(樣品可直接檢測)。
(2)高壓液相色譜法測定蝦青素Waters 600E高壓液相色譜儀；ZY1104型液相色譜柱(填料C-18，dp10μm)，柱長25cm，內徑4mm；2487雙光束紫外檢測器。流動相為甲醇-二氯甲烷(9∶1)；流速1.0mL/min；檢測波長476nm。
測定結果為蝦青素的產(chǎn)量達33mg/L。測定結果表明采用本發(fā)明所述的中溫型蝦青素生產(chǎn)菌的培養(yǎng)方法，培養(yǎng)周期短，蝦青素產(chǎn)量高。
實施例5中溫型蝦青素產(chǎn)生菌的培養(yǎng)及蝦青素含量測定1.中溫型蝦青素產(chǎn)生菌的培養(yǎng)(1)發(fā)酵罐種子培養(yǎng)挑取該蝦青素產(chǎn)生菌的單菌落，接入到50mL液體種子培養(yǎng)基中，在26℃，260r/min下培養(yǎng)40h，培養(yǎng)液OD600＝8.5；再按照5％接種量將上述種子培養(yǎng)液接入到50mL所述的液體種子培養(yǎng)基中，在26℃，260r/min下培養(yǎng)60h，培養(yǎng)液OD600＝8.5；然后按照5％接種量將得到的種子培養(yǎng)液轉入到100mL所述的液體種子培養(yǎng)基中，在26℃，260r/min下培養(yǎng)60h，培養(yǎng)液OD600＝8.5；(2)補料發(fā)酵按照5％接種量將所述步驟(1)得到的種子液接入到裝有4.0L液體分批基礎培養(yǎng)基的7.5L發(fā)酵罐中進行分批培養(yǎng)；用體積比為10％的HCl和10mol/L的NaOH將所述基礎培養(yǎng)基的pH控制在5.2，通氣量為0.9L/L/min；通過調節(jié)轉速將溶氧控制在70％；當所述基礎培養(yǎng)基的葡萄糖濃度降至20g/L時第一次補料，使葡萄糖濃度恢復到40g/L，始終控制所述基礎培養(yǎng)基的葡萄糖濃度在20-40g/L，總葡萄糖用量達到100g/L；培養(yǎng)時間為80h。
2.蝦青素含量測定(1)蝦青素的提取取1.0ml上述培養(yǎng)80h的菌液，離心，棄去上清，加入70℃的二甲亞砜0.2ml，旋渦振蕩30秒，加入1ml甲醇-二氯甲烷(3∶1)混合有機溶劑來提取色素。離心，收集上清(含有色素)。如果沉淀還有顏色，重復上述過程，直到沉淀無色，合并上清，離心(120,000r/min，10分鐘)，-20℃避光保存，待測(樣品可直接檢測)。
(2)高壓液相色譜法測定蝦青素
Waters 600E高壓液相色譜儀；ZY1104型液相色譜柱(填料C-18，dp10μm)，柱長25cm，內徑4mm；2487雙光束紫外檢測器。流動相為甲醇-二氯甲烷(9∶1)；流速1.0mL/min；檢測波長476nm。
測定結果為蝦青素的產(chǎn)量達35mg/L。測定結果表明采用本發(fā)明所述的中溫型蝦青素生產(chǎn)菌的培養(yǎng)方法，培養(yǎng)周期短，蝦青素產(chǎn)量高。
權利要求
1.一種中溫型蝦青素產(chǎn)生菌法夫酵母(Phaffia rhodozyma)A-1 CGMCCNo.1837。
2.一種根據(jù)權利要求1所述的蝦青素產(chǎn)生菌的培養(yǎng)方法，其特征在于它包括下述步驟(1)發(fā)酵罐種子培養(yǎng)挑取該蝦青素產(chǎn)生菌的單菌落，接入到50mL液體種子培養(yǎng)基中，在23-26℃，200-260r/min下培養(yǎng)36-40h，培養(yǎng)液OD600＝7.5-8.5；再按照5％接種量將上述種子培養(yǎng)液接入到所述的液體種子培養(yǎng)基中，在23-26℃，200-260r/min下培養(yǎng)36-60h，培養(yǎng)液OD600＝7.5-8.5；然后按照5％接種量將得到的種子培養(yǎng)液轉入到所述的液體種子培養(yǎng)基中，在23-26℃，200-260r/min下培養(yǎng)36-60h，培養(yǎng)液OD600＝7.5-8.5；(2)補料發(fā)酵按照5％接種量將所述步驟(1)得到的種子液接入到裝有液體分批基礎培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中進行分批培養(yǎng)；用體積比為10％的HCl和10mol/L的NaOH將所述基礎培養(yǎng)基的pH控制在4.8-5.2，通氣量為0.7-0.9L/L/min；通過調節(jié)轉速將溶氧控制在20-70％；當所述基礎培養(yǎng)基的葡萄糖濃度降至20g/L時第一次補料，使葡萄糖濃度恢復到40g/L，始終控制所述基礎培養(yǎng)基的葡萄糖濃度在20-40g/L；培養(yǎng)時間為60-80h。
3.根據(jù)權利要求2所述的培養(yǎng)方法，其特征在于培養(yǎng)過程中所用到的培養(yǎng)基組成為所述的種子培養(yǎng)基葡萄糖40g/L，酵母粉4g/L，尿素3.6g/L，磷酸二氫鉀2g/L，硫酸鎂0.5g/L，pH6.0；所述的基礎培養(yǎng)基葡萄糖40g/L，酵母粉10g/L，尿素3.6g/L，硫酸銨5.0g/L，磷酸二氫鉀2g/L，硫酸鎂0.5g/L，pH6.0；所述的補料培養(yǎng)基質量體積比為40％的葡萄糖補料液。
4.根據(jù)權利要求2或3所述的蝦青素產(chǎn)生菌的培養(yǎng)方法，其特征在于培養(yǎng)60-80h小時，蝦青素的產(chǎn)量達到30-35mg/L。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種中溫型蝦青素產(chǎn)生菌法夫酵母(Phaffia rhodozyma)A－1 CGMCC No.1837。本發(fā)明還提供了該中溫型蝦青素產(chǎn)生菌的培養(yǎng)方法。本發(fā)明提供的中溫型蝦青素生產(chǎn)菌營養(yǎng)要求簡單，工業(yè)生產(chǎn)的能耗相對低溫型生產(chǎn)菌大為降低。本發(fā)明所述的蝦青素生產(chǎn)菌的培養(yǎng)方法，工藝簡便，培養(yǎng)周期短，蝦青素產(chǎn)量高，有利于工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號C12P23/00GK1986773SQ20061014088
公開日2007年6月27日 申請日期2006年10月13日 優(yōu)先權日2006年10月13日
發(fā)明者李穎, 王永星, 孟永宏, 徐志文 申請人:秦皇島領先科技發(fā)展有限公司