專利名稱：蛹蟲草液體靜置培養(yǎng)技術(shù)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及蛹蟲草的培養(yǎng)技術(shù)。
背景技術(shù)：
蛹蟲草，俗稱北蟲草，屬子囊菌綱、肉座目、麥角菌科蟲草屬，廣泛分布世界各地，在我國主要分布于北方，以東北三省為主。蛹蟲草具有與冬蟲夏草相似的藥用價值，故藥典中又記載為“北冬蟲夏草”，具有滋肺補(bǔ)腎、止血化痰的功效，用于調(diào)補(bǔ)身體，治療貧血、肺結(jié)核、肺氣腫、腎功能衰竭，神經(jīng)衰弱等多種疾病，近年來通過大量藥理試驗證明，還有降壓、降脂的作用，臨床常用于心律失常，此外蛹蟲草中的有效成分蟲草素具有抗癌、抑菌、增強(qiáng)免疫力的功能，因此倍受國內(nèi)研究人員的關(guān)注。由于生態(tài)環(huán)境的破壞及人們無節(jié)制的采挖，野生資源越來越少，目前已瀕臨滅絕邊緣，為實現(xiàn)該物種的可持續(xù)利用，開展人工培育迫在眉睫。蛹蟲草菌為兼性寄生菌，其生長基質(zhì)及生態(tài)環(huán)境較一般食用菌特殊，在自然條件下是由蛹蟲草菌以子囊孢子或菌絲體侵染鱗翅目、鞘翅目或半翅目蛹或蟲體，借助蟲體內(nèi)營養(yǎng)萌發(fā)生長，在蛹或蟲體內(nèi)形成菌核，地下越冬，每年8-9月，氣溫穩(wěn)定，降水量充足，光照適宜時，在蟲體胸部發(fā)育長出棍棒狀桔紅色的子實體伸出地表，是一種蟲與菌的結(jié)合體。經(jīng)過多年研究，我國學(xué)者首先對蛹蟲草進(jìn)行分離，獲得了成功，并利用桑蠶、柞蠶及黃粉蟲為寄主，實現(xiàn)了人工繁育，以后又在米飯培養(yǎng)基上獲得人工繁育的成功。目前對蛹草蟲實行人工栽培的方式有二種，一種是從野外采集桑蠶、柞蠶的活蛹，經(jīng)表面消毒后進(jìn)行人為創(chuàng)傷，并立即將創(chuàng)傷的活蛹在無菌環(huán)境中移入長滿蛹蟲草菌絲體的瓶內(nèi)，在20℃左右條件下全黑暗培養(yǎng)28天，待感染菌絲的蛹長滿菌絲后進(jìn)行散射光刺激，菌絲轉(zhuǎn)色，60天后長出子座，整個生長過程近90天；另一種是應(yīng)用大米、蠶蛹粉、營養(yǎng)液進(jìn)行滅菌、接菌、黑暗培養(yǎng)25天，然后進(jìn)行散射光刺激，3-10天后菌絲體完成轉(zhuǎn)色，10-15天后形成原基長出子座，整個生長過程近60天。這兩種培育方法前者由于是使用活蛹作為培養(yǎng)基，蛹在培養(yǎng)過程中感染率比較低，30％左右，產(chǎn)量低下。后者采用米飯作為培養(yǎng)基質(zhì)進(jìn)行培養(yǎng)則需大量糧食，生產(chǎn)成本較高，且產(chǎn)量、質(zhì)量不穩(wěn)定。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種生產(chǎn)成本低，生工藝簡單，生產(chǎn)周期，產(chǎn)量、質(zhì)量穩(wěn)定的蛹蟲草液靜置培養(yǎng)技術(shù)。
本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)


附圖為本發(fā)明工藝流程方框圖。
其工藝流程如下1、液體培養(yǎng)基配制去皮馬鈴薯190～220g切片，加入10～15g蠶蛹粉、800～1000毫升水，沸騰后煮20～30分鐘，用紗布過濾取汁，然后加入蔗糖20g、蛋白胨5g、磷酸二氫鉀3g、硫酸鎂1.5g，再加水至1000毫升，pH7；2、液體培養(yǎng)基的分裝、滅菌、接菌選擇透明的玻璃瓶或塑料瓶(250毫升)，每瓶放入100～120毫升的培養(yǎng)基，用牛皮紙或聚丙烯膜封口，在高壓滅菌器中，壓力1.2～1.3kg/cm2，溫度121～122℃下滅菌30分，待菌瓶冷卻后，在無菌條件下接入蛹蟲草菌，每瓶接入量1～2毫升。
3、菌絲體培養(yǎng)菌瓶接菌后，放入遮光、18～20℃養(yǎng)菌室內(nèi)靜置培養(yǎng)，室內(nèi)濕度保持在55～60％，7～10天菌絲長滿液面，即得蛹蟲草菌。
4、菌絲體轉(zhuǎn)色、原基分化提高溫度20～22℃，加強(qiáng)光照，光照強(qiáng)度在500～600lux，每天光照10h，8～10天后菌絲由白色轉(zhuǎn)為桔黃色，菌絲扭結(jié)形成瘤突起物，分化形成原基。
5、子實體生長、采收形成原基后，在封口膜上開透氣小孔，增大透氣量，室內(nèi)濕度80～85％，光照強(qiáng)度控制在800～1000lux，溫度在20～22℃，蛹蟲草子實體逐漸伸長，長至6～8cm時，頂部膨大，少量子囊孢子開始出，開始采收。采收時，用剪刀從子實體根部剪取，清除雜質(zhì)，并在1小時內(nèi)及時放入恒溫箱中，溫度控制在30～45℃，6～8小時，烘干即可。
本發(fā)明的的技術(shù)效果是蛹蟲草菌為兼性寄生菌，其生長發(fā)育對光照、溫度、水分、通氣等自然條件要求較為嚴(yán)格，若獲得優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)的蛹蟲草，首先應(yīng)滿足其生長發(fā)育所需的營養(yǎng)條件及環(huán)境，此項發(fā)明是根據(jù)蛹蟲草菌絲生長發(fā)育所需的環(huán)境及營養(yǎng)條件進(jìn)行培養(yǎng)，即在液體培養(yǎng)基中加入蛹蟲草生長時所需的氮源、碳源和微量元素，并在不同的生長階段進(jìn)行溫度、光照的控制，促進(jìn)蛹蟲草菌絲扭結(jié)，子座的形成，有利于子實體生長。該方法簡便易行，在菌絲體培養(yǎng)及子實體形成過程中，采用靜置培養(yǎng)的方式，具有以下幾個優(yōu)點(1)節(jié)約大量糧食，降低生產(chǎn)成本近1/5；(2)省去常規(guī)液體菌種培養(yǎng)過程中，利用搖床進(jìn)行搖動，促進(jìn)菌絲發(fā)酵的過程，生產(chǎn)工藝簡單，有利于工廠化生產(chǎn)；(3)從接種到采收為40天，生產(chǎn)周期縮短1/3～1/2。
本發(fā)明具體實施例1、液體培養(yǎng)基配制去皮馬鈴薯200g切片，加入10g蠶蛹粉、800～1000毫升水，沸騰后煮30分鐘，用四層紗布過濾取汁，然后加入蔗糖20g、蛋白胨5g、磷酸二氫鉀3g、硫酸鎂1.5g，再加水至1000毫升，pH7；2、液體培養(yǎng)基的分裝、滅菌、接菌選擇透明的玻璃瓶(250毫升)，每瓶放入100毫升的培養(yǎng)基，用聚丙烯膜封口，在高壓滅菌器中，壓力1.2kg/cm2，溫度121℃下滅菌30分，待菌瓶冷卻后，在無菌條件下接入蛹蟲草菌，每瓶接入量1毫升。
3、菌絲體培養(yǎng)菌瓶接菌后，放入遮光、18～20℃養(yǎng)菌室內(nèi)靜置培養(yǎng)，室內(nèi)濕度保持在55～60％，7～10天菌絲長滿液面，即得蛹蟲草菌。
4、菌絲體轉(zhuǎn)色、原基分化提高溫度20～22℃，加強(qiáng)光照，光照強(qiáng)度在500～600lux，每天光照10h，10天后菌絲由白色轉(zhuǎn)為桔黃色，菌絲扭結(jié)形成瘤突起物，分化形成原基。
5、子實體生長、采收形成原基后，在封口膜上開7～10個透氣小孔，增大透氣量，室內(nèi)濕度80～85％，光照強(qiáng)度控制在800～1000lux，溫度在20～22℃，蛹蟲草子實體逐漸伸長，長至6～8cm時，頂部膨大，少量子囊孢子開始出，開始采收。采收時，用剪刀從子實體根部剪取，清除雜質(zhì)，并在1小時內(nèi)及時放入恒溫箱中，溫度控制在30～45℃，6～8小時，烘干即可。
權(quán)利要求
1.蛹蟲草液體靜置培養(yǎng)技術(shù)，其工藝流程包括液體培養(yǎng)基配制，培養(yǎng)基的分裝、滅菌、接菌，菌絲體培養(yǎng)，菌絲體轉(zhuǎn)色、原基分化，子實體生長、采收、干制，其特征在于，(a)液體培養(yǎng)基的分裝、滅菌、接菌選擇透明的玻璃瓶或塑料瓶(250毫升)，每瓶放入100～120毫升的培養(yǎng)基，用牛皮紙或聚丙烯膜封口，在高壓滅菌器中，壓力1.2～1.3kg/cm2，溫度121～122℃下滅菌30分，待菌瓶冷卻后，在無菌條件下接入蛹蟲草菌，每瓶接入量1～2毫升；(b)菌絲體培養(yǎng)菌瓶接菌后，放入遮光、18～20℃養(yǎng)菌室內(nèi)靜置培養(yǎng)，室內(nèi)濕度保持在55～60％，7～10天菌絲長滿液面，即得蛹蟲草菌；(c)菌絲體轉(zhuǎn)色、原基分化提高溫度20～22℃，加強(qiáng)光照，光照強(qiáng)度在500～600lux，每天光照10h，8～10天后菌絲由白色轉(zhuǎn)為桔黃色，菌絲扭結(jié)形成瘤突起物，分化形成原基；(d)子實體生長、采收形成原基后，在封口膜上開透氣小孔，增大透氣量，室內(nèi)濕度80～85％，光照強(qiáng)度控制在800～1000lux，溫度在20～22℃，蛹蟲草子實體逐漸伸長，長至6～8cm時，頂部膨大，少量子囊孢子開始出，開始采收；采收時，用剪刀從子實體根部剪取，清除雜質(zhì)，并在1小時內(nèi)及時放入恒溫箱中，溫度控制在30～45℃，6～8小時，烘干即可。
2.如權(quán)利要求1所述的蛹蟲草液體靜置培養(yǎng)技術(shù)，其特征在于所述的液體培養(yǎng)基配制配制1000毫升的液體培養(yǎng)基，用去皮馬鈴薯190～220g切片，加入10～15g蠶蛹粉、800～1000毫升水，沸騰后煮20～30分鐘，用紗布過濾取汁，然后加入蔗糖20g、蛋白胨5g、磷酸二氫鉀3g、硫酸鎂1.5g，再加水至1000毫升，pH7。
全文摘要
蛹蟲草液體靜置培養(yǎng)技術(shù)，其工藝流程包括液體培養(yǎng)基配制，培養(yǎng)基的分裝、滅菌、接菌，菌絲體培養(yǎng)，菌絲體轉(zhuǎn)色、原基分化，子實體生長、采收、干制。裝有液體培養(yǎng)基的菌瓶接菌后，放入遮光、18～20℃養(yǎng)菌室內(nèi)靜置培養(yǎng)，7～10天菌絲長滿液面，即得蛹蟲草菌；提高溫度20～22℃，加強(qiáng)光照，8～10天后菌絲由白色轉(zhuǎn)為桔黃色，菌絲扭結(jié)形成瘤突起物，分化形成原基；在封口膜上開透氣小孔，增大透氣量，蛹蟲草子實體逐漸伸長，頂部膨大，少量子囊孢子開始出，開始采收；及時放入恒溫箱中，烘干即可。具有節(jié)約大量糧食，降低生產(chǎn)成本，生產(chǎn)工藝簡單，有利于工廠化生產(chǎn)；生產(chǎn)周期短的優(yōu)點。
文檔編號C12N1/14GK1923998SQ20061001048
公開日2007年3月7日 申請日期2006年9月1日 優(yōu)先權(quán)日2006年9月1日
發(fā)明者孟黎明 申請人:孟黎明