專利名稱：通過6－取代－△6孕烷的真菌氧化產(chǎn)生19－去甲－10β－羧酸的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是關(guān)于結(jié)構(gòu)式I所示的6-取代-Δ6孕烷通過真菌氧化生成結(jié)構(gòu)式II所示的19-去甲-10β羧酸，以及后續(xù)的生成結(jié)構(gòu)式III所示的19-去甲-6-取代-Δ6孕烷的化學(xué)脫羧步驟。
背景技術(shù)：
19-去甲-4，6-孕二烯-6-甲基-17α-醇-3，20-二酮(19-nor-4，6-pregnadien-6-methyl-17α-ol-3，20-dione)(諾美孕酮，nomegestrol)和結(jié)構(gòu)式III所示的相關(guān)分子是合成具有藥理活性的19-去甲-甾類化合物(19-nor steroids)時有用的甾類中間體。例如，19-去甲-4，6-孕二烯-6-甲基-17α-醇-3，20-二酮(諾美孕酮)可以用于合成婦女保健用的的甾類化合物-諾美孕酮乙酸酯(19-去甲-4，6-孕二烯-6-甲基-17α-醇-3，20-二酮17乙酸酯，19-nor-4，6-pregnadien-6-methyl-17α-ol-3，20-dione 17 acetate)。
美國專利4284720公開了，通過發(fā)酵培養(yǎng)黑孢菌屬(Nigrospora)的真菌，將雄烷或者孕烷系列的10-甲基甾類化合物轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的19羥基甾類化合物。
19-去甲甾類化合物已經(jīng)可以由19-羥基甾類化合物通過化學(xué)方法合成。
發(fā)明概述總的來說，本發(fā)明提供了用于將結(jié)構(gòu)式I所示的6-取代-Δ6孕烷通過真菌氧化生成結(jié)構(gòu)式II所示的19-去甲-10β羧酸，以及后續(xù)的化學(xué)脫羧步驟生成結(jié)構(gòu)式III所示的19-去甲-6-取代-Δ6孕烷的應(yīng)用方法。
本發(fā)明提供一種產(chǎn)生結(jié)構(gòu)式II所示19-去甲-10β羧酸的方法，
結(jié)構(gòu)式II其中R1選自H，OH，R-C(O)O-，-CH2OCH3或CH3CH(OR)O-基團(tuán)；R為C1-C8的烴基基團(tuán)，R2選自H，F(xiàn)，Cl，Br或CH3-；R3為H或CH2＝；R4為CH2OH或CH3，所述方法通過結(jié)構(gòu)式I所示6-取代-Δ6孕烷的真菌氧化來實(shí)現(xiàn)， 結(jié)構(gòu)式I其中R1選自H，OH，R-C(O)O-，-CH2OCH3或CH3CH(OR)O-基團(tuán)；R為C1-C8的烴基基團(tuán)，R2選自H，F(xiàn)，Cl，Br或CH3-；R3為H或CH2＝；
R4為-CH2OH或-CH3；R5為-CHO，-CH2OH或-CH3，所述方法包括將結(jié)構(gòu)式I所示的6-取代-Δ6孕烷與一種生物轉(zhuǎn)化培養(yǎng)物進(jìn)行接觸，該生物轉(zhuǎn)化培養(yǎng)物中含有一種黑孢菌屬菌株，它能夠氧化結(jié)構(gòu)式I所示的6-取代-Δ6孕烷中第19位的碳原子。
定義如下術(shù)語的定義和解釋應(yīng)用于整篇文檔，包括專利說明書和權(quán)利要求書。
所有溫度均為攝氏度。
r.p.m指每分鐘的轉(zhuǎn)數(shù)。
TLC指薄層層析。
HPLC指高壓液相層析。
psig指每平方英寸的磅數(shù)。
RO指反滲透。
在提及溶液混合物的時候，所用溶劑的配比為體積/體積(v/v)。
在提及固體物質(zhì)在溶劑中的溶解度的時候，固體與溶劑的配比為質(zhì)量/體積(wt/v)。
發(fā)明詳述總的來說，本發(fā)明涉及結(jié)構(gòu)式I所示的6-取代-Δ6孕烷的真菌氧化
結(jié)構(gòu)式I其中R1選自H，OH，R-C(O)O-，-CH2OCH3或CH3CH(OR)O-基團(tuán)；R為C1-C8的烴基基團(tuán)，R2選自H，F(xiàn)，Cl，Br或CH3-；R3為H或CH2＝；R4為-CH2OH或-CH3；R5為-CHO，-CH2OH或-CH3，用于產(chǎn)生結(jié)構(gòu)式II所示的19-去甲-10β-羧酸 結(jié)構(gòu)式II其中R，R1，R2，R3，R4與結(jié)構(gòu)式I中的R，R1，R2，R3，R4相同。
任何能夠氧化結(jié)構(gòu)式I所示的6-取代-Δ6孕烷中的19位碳原子的黑孢菌屬的絲狀真菌，均可用于產(chǎn)生結(jié)構(gòu)式II所示的19-去甲-10β-羧酸。實(shí)施例1的方法可以用于確定黑孢菌屬的具體絲狀真菌是否具有對結(jié)構(gòu)式I所示的6-取代-Δ6孕烷中的19位碳原子進(jìn)行氧化的能力。
然后就可以回收結(jié)構(gòu)式II所示的19-去甲-10β-羧酸，并以化學(xué)法脫去羧基，產(chǎn)生結(jié)構(gòu)式III所示的19-去甲-6-取代-Δ6孕烷
結(jié)構(gòu)式III其中R，R1，R2，R3，R4與結(jié)構(gòu)式I中的R，R1，R2，R3，R4相同。
我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，將黑孢菌屬一些菌株，如球形黑孢(Nigrosporasphaerica)ATCC 12772、Nigrospora gorlenkoanum ATCC 24718和稻黑孢菌(Nigrospora oryzae)ATCC 42775等，與結(jié)構(gòu)式I所示的6-取代-Δ6孕烷進(jìn)行接觸，可產(chǎn)生結(jié)構(gòu)式II所示的19-去甲-10β羧酸。
在本發(fā)明的方法中，生物轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基包含表面活性劑和高水平的碳源。表面活性劑選自非離子型去污劑，包括非離子酰胺、非離子酯類如乙氧化烷基酚和聚氧乙烯山梨糖醇酯、乳化石蠟、非離子乙氧化物、三苯乙烯基酚乙氧化物、醇乙氧化物如辛基苯氧基聚乙氧基乙醇、乙氧化硫醇、封端的乙氧化物、嵌段共聚物和反共聚物等等。優(yōu)選地，用乙氧化烷基酚、聚氧乙烯山梨糖醇酯或辛基苯氧基聚乙氧基乙醇作表面活性劑。非離子型去污劑采用的濃度可從大約0.1mL/L或0.1g/L到大約4mL/L或4g/L，但通常約1mL/L或1g/L到約2mL/L或2g/L。
碳源選自單糖、二糖、三糖、經(jīng)水解的多糖和糖醇，通常的碳源是葡萄糖。碳源濃度可從大約2g/L到大約100g/L，但通常大約5g/L到大約60g/L。
優(yōu)選用任何本領(lǐng)域已知方法，使真菌在浸沒的培養(yǎng)基中、在需氧條件下生長并在原位進(jìn)行氧化反應(yīng)。并對于所需的黑孢菌，用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的條件、方法、碳源和氮源培養(yǎng)真菌。一般地，在為了真菌19-氧化而進(jìn)行的制備中，采用一級(primary)和二級(secondary)營養(yǎng)種子方法(vegetativeseed procedure)，或者，也可直接將一級營養(yǎng)種子接種到適于真菌19-氧化的生物轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基中。
一級營養(yǎng)種子培養(yǎng)物在溫度為20度到37度(優(yōu)選約28度)、pH值為大約3.0到7.5的條件下溫育大約24-96小時(優(yōu)選約48-72小時)。在二級營養(yǎng)種子的培養(yǎng)基中，接種大約0.006％到0.25％[v/v](通常為0.012％到0.1％[v/v])的一級營養(yǎng)種子培養(yǎng)物，在溫度為20度到37度(優(yōu)選約28度)、二級種子培養(yǎng)基的pH值為大約3.0到7.5(優(yōu)選為大約5.0-7.0)的條件下溫育大約36-72小時(優(yōu)選約48-60小時)。生物轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基可以與二級營養(yǎng)種子培養(yǎng)基相同或者相似，在其中接種大約1％到大約10％[v/v](優(yōu)選為3％到5％[v/v])的二級營養(yǎng)種子培養(yǎng)物。在大約12到72小時(優(yōu)選為大約16-24小時)的初始培養(yǎng)過程之后，將結(jié)構(gòu)式I所示的甾類底物(優(yōu)選經(jīng)過微粉化(micronized)之后)加入生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)物中。經(jīng)過微粉化的結(jié)構(gòu)式I所示甾類底物可以以干粉或者漿液的形式一次性加入、多次加入或者連續(xù)加入。微粉化的結(jié)構(gòu)式I所示甾類底物優(yōu)選濃度高于1g/L，更優(yōu)選高于2g/L，還更優(yōu)選高于4g/L。結(jié)構(gòu)式I所示的甾類底物生成結(jié)構(gòu)式II所示的19-氧化產(chǎn)物的生物轉(zhuǎn)化過程可以進(jìn)行大約1天到9天，通常為大約2天到6天。轉(zhuǎn)化過程可以通過本領(lǐng)域已知的層析法如HPLC來監(jiān)控，實(shí)施例1提供了一種合適的HPLC方法。
當(dāng)結(jié)構(gòu)式I所示的甾類底物生成結(jié)構(gòu)式II所示的19-氧化產(chǎn)物的生物轉(zhuǎn)化結(jié)束時，結(jié)構(gòu)式II所示的化合物可應(yīng)用很多成熟方法中的任何一種加以回收。優(yōu)選將整個培養(yǎng)液(beer)或經(jīng)過濾后的培養(yǎng)液用水不溶性有機(jī)溶劑(如二氯甲烷)進(jìn)行提取，方法是下調(diào)pH直至結(jié)構(gòu)式II所示的產(chǎn)物呈酸性形式，然后將水不溶性有機(jī)溶劑通過蒸發(fā)進(jìn)行濃縮。上調(diào)pH至結(jié)構(gòu)式II所示的羧酸產(chǎn)物被離子化(pH8-9)，于是結(jié)構(gòu)式II所示的產(chǎn)物被提取到水中。該含水提取物用水溶性溶劑(如甲醇)進(jìn)行稀釋，下調(diào)pH直至結(jié)構(gòu)式II所示的產(chǎn)物再次呈酸性形式(pH3-4)。粗制的結(jié)構(gòu)式II所示產(chǎn)物通過使水溶性溶劑蒸發(fā)而緩慢地結(jié)晶。
結(jié)構(gòu)式II所示的甾類化合物可以經(jīng)化學(xué)法脫羧，生成結(jié)構(gòu)式III所示的甾類化合物。脫羧步驟所采用的條件和試劑為專業(yè)人員所熟知。通常地，結(jié)構(gòu)式II所示的化合物在有酸性催化劑存在的情況下可溶于極性溶劑，將該混合物加熱可產(chǎn)生所需要的脫羧化。通常地，在回流(reflux)狀態(tài)下將羧酸在甲醇水溶液中用催化劑量的氫氯酸處理30分鐘，以便進(jìn)行所需的脫羧反應(yīng)。然而，溶劑和酸并不是關(guān)鍵。任何既可以溶解羧酸底物、又可以溶解酸催化劑的溶劑都是適合的。優(yōu)選的溶劑包括吡啶、甲基吡啶、二甲基亞砜(DMSO)、六甲基磷酰胺(hexmethyphosphoramide，HMPA)、環(huán)丁砜(sulfolane)、二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯啉、乙腈、丙酮、甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇或者它們的含水混合物，其中甲醇是最理想的溶劑。結(jié)構(gòu)式II所示的化合物的溶液濃度為大約10mg/mL到大約500mg/mL(優(yōu)選約100-300mg/mL)。
適合的酸催化劑為pKa值低于4.9的酸，如氫氯酸、氫溴酸、硫酸、冰醋酸、磷酸、苯磺酸、溴代乙酸、氯代乙酸、檸檬酸、二氯乙酸、草酸、三氟乙酸和三氯乙酸。甲醇中酸的終濃度為0.001N(pH3)到0.1N(pH1)，優(yōu)選約0.01N(pH2)。將反應(yīng)混合物加熱到40度到80度(優(yōu)選約50-60度)維持大約1到24小時(優(yōu)選4-12小時)?？蓱?yīng)用很多成熟方法中的任何一種方法從反應(yīng)混合物中回收結(jié)構(gòu)式III所示的化合物，優(yōu)選的回收方法是通過蒸發(fā)濃縮和/或冷卻的方法進(jìn)行結(jié)晶。
脫羧過程也可有兩步法實(shí)現(xiàn)首先脫羧得到3-酮-Δ5(10)中間產(chǎn)物，然后異構(gòu)化形成結(jié)構(gòu)式III所示的化合物。脫羧生成3-酮-Δ5(10)中間產(chǎn)物可以通過在室溫(15-25℃)，在DMSO中攪拌16小時來實(shí)現(xiàn)。然后，3-酮-Δ5(10)中間產(chǎn)物可通過上述pKa值小于4.9的酸處理而異構(gòu)化形成結(jié)構(gòu)式III所示的化合物。
實(shí)施例即使沒有進(jìn)一步的詳盡細(xì)節(jié)，根據(jù)上述的描述，我們相信熟練技術(shù)人員可以最大程度地實(shí)施本發(fā)明。下面詳述的實(shí)例中描述了怎樣制備本發(fā)明中各種不同的化合物和/或?qū)崿F(xiàn)本發(fā)明中各種不同的方法，它們僅僅作為舉例，無論如何都不是對上述公開內(nèi)容以任何方式進(jìn)行限制。熟練技術(shù)人員可以很容易地發(fā)現(xiàn)本發(fā)明方法中反應(yīng)物、反應(yīng)條件以及技術(shù)方面的多種適當(dāng)變動。
實(shí)施例1
應(yīng)用球黑孢菌ATCC12772的浸沒培養(yǎng)物將4，6-孕二烯-6-甲基-17α-醇-3，20-二酮轉(zhuǎn)化為19-去甲-4，6-孕二烯-6-甲基-17α-醇-3，20-二酮10β-羧酸，然后脫羧變?yōu)?9-去甲-4，6-孕二烯-6-甲基-17α-醇-3，20-二酮。
(A)一級種子階段凍存的球黑孢菌ATCC12772營養(yǎng)細(xì)胞解凍后，轉(zhuǎn)入馬鈴薯-葡聚糖-瓊脂平板(PDA)，在28℃溫育72小時。用單菌落(single mycelial-plugs，直徑6-7mm)接種經(jīng)過硅烷化并含100mL一級種子培養(yǎng)基的500mL搖瓶(strippledshake flask)。一級種子培養(yǎng)基中組成如下(每升反滲透水)糊精，50g；大豆粉，35g；葡萄糖，5g；六水合氯化鈷，2mg；硅氧烷消泡劑(SAG 471)，0.5mL；預(yù)滅菌pH7.0-7.2，用氫氧化鈉(2N)調(diào)節(jié)。含有一級種子培養(yǎng)基的搖瓶在高壓滅菌器中，121℃滅菌30分鐘。球黑孢菌ATCC12772采用環(huán)境可控轉(zhuǎn)速設(shè)定為270rpm(2”軌道沖程(2”orbital stroke))的溫育搖床，在28℃溫育48小時。
(B)二級種子階段在經(jīng)過硅烷化的500mL搖瓶中注入100毫升二級種子培養(yǎng)基，用0.2mL的一級營養(yǎng)種子培養(yǎng)物以0.2％[v/v]的接種量接種。二級種子培養(yǎng)基組成如下(每升反滲透水)葡萄糖，30g；粗大豆粉，12.5g；固體玉米漿，10g；辛基苯氧基聚乙氧基乙醇，0.25mL；硅氧烷消泡劑(SAG 471)，0.5mL；預(yù)滅菌pH6.5-6.6，用氫氧化鈉(2N)調(diào)節(jié)。含有二級種子培養(yǎng)基的搖瓶在高壓滅菌器中，121℃滅菌30分鐘。球黑孢菌ATCC12772采用環(huán)境可控轉(zhuǎn)速設(shè)定為270rpm(2”軌道沖程(2”orbital stroke))的溫育搖床，在28℃溫育約52小時。
(C)甾類生物轉(zhuǎn)化在經(jīng)過硅烷化的500mL搖瓶中注入100毫升甾類生物轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基，用5mL的二級營養(yǎng)種子培養(yǎng)物以5％[v/v]的接種量接種。除了將辛基苯氧基聚乙氧基乙醇的量從0.25mL/L升到2mL/L之外，甾類生物轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基與二級種子培養(yǎng)基基本相同。在接種后的大約22小時，0.5g微粉化的4，6-孕二烯-6-甲基-17α-醇-3，20-二酮以最小體積為0.2％[v/v]的辛基苯氧基聚乙氧基乙醇調(diào)成漿狀，并加入100mL的發(fā)酵液中。
生物轉(zhuǎn)化培養(yǎng)物每天用HPLC檢測19-去甲-4，6-孕二烯-6-甲基-17α-醇-3，20-二酮10β羧酸。1毫升整體培養(yǎng)液用3毫升經(jīng)保溫的乙腈提取。細(xì)胞通過離心(3,000×g，10分鐘)從水-乙腈混合液中分離，將5μL提取物注入HPLC層析柱。HPLC條件如下Spectra-Physics層析儀配置C18反相柱(150×4.6mm)；柱溫為30℃；流動相(無梯度)為乙腈/0.25％磷酸(55/45[v/v])；流速為0.5mL/分鐘；檢測波長為287納米；檢測時間為20分鐘；4，6-孕二烯-6-甲基-17α-醇-3，20-二酮變?yōu)?9-去甲-4，6-孕二烯-6-甲基-17α-醇-3，20-二酮10β-羧酸的生物轉(zhuǎn)化過程在大約兩天內(nèi)完成。
(D)回收和脫羧過程從五個100mL發(fā)酵體系收獲的整體發(fā)酵液，用250mL二氯甲烷通過下調(diào)pH至4進(jìn)行提取。然后將該發(fā)酵液用另外200mL二氯甲烷再次提取。富集的二氯甲烷提取液通過離心回收然后合并、洗滌并蒸發(fā)濃縮至大約50mL。產(chǎn)物19-去甲-4，6-孕二烯-6-甲基-17α-醇-3，20-二酮10β-羧酸通過上調(diào)pH至9而提取到50mL水中。將該富集的水溶液用50mL甲醇稀釋，將pH下調(diào)至4。粗制產(chǎn)物通過蒸發(fā)甲醇進(jìn)行結(jié)晶。將含水漿體過濾，從中回收固體，以15mL水洗滌，干燥后，得到1.22g粗制的19-去甲-4，6-孕二烯-6-甲基-17α-醇-3，20-二酮10β-羧酸結(jié)晶。
將1.22g粗制產(chǎn)物19-去甲-4，6-孕二烯-6-甲基-17α-醇-3，20-二酮10β-羧酸，溶于含有0.1mL 85％磷酸的4mL甲醇中，并將反應(yīng)混合物加熱至55℃。反應(yīng)混合物每小時用HPLC檢測19-去甲-4，6-孕二烯-6-甲基-17α-醇-3，20-二酮。將5微升的反應(yīng)混合液稀釋到1mL乙腈中，取5微升注入HPLC柱。HPLC條件如上文所示。19-去甲-4，6-孕二烯-6-甲基-17α-醇-3，20-二酮10β-羧酸變?yōu)?9-去甲-4，6-孕二烯-6-甲基-17α-醇-3，20-二酮的脫羧反應(yīng)在大約4小時內(nèi)完成。將反應(yīng)混合物冷卻到-10℃，晶體過濾后用1mL-10℃的甲醇洗滌，得到0.72g純度為99.4％的19-去甲-4，6-孕二烯-6-甲基-17α-醇-3，20-二酮。
實(shí)施例2應(yīng)用Nigrospora gorlenkoanum ATCC 24718的浸沒培養(yǎng)液，將4，6-孕二烯-6-甲基-17α-醇-3，20-二酮轉(zhuǎn)化為19-去甲-4，6-孕二烯-6-甲基-17α-醇-3，20-二酮10β-羧酸，然后脫羧變?yōu)?9-去甲-4，6-孕二烯-6-甲基-17α-醇-3，20-二酮。
在實(shí)施例1描述的情況下，可獲得1.18g粗制的19-去甲-4，6-孕二烯-6-甲基-17α-醇-3，20-二酮10β-羧酸結(jié)晶。該物質(zhì)然后轉(zhuǎn)化為0.75g純度為99.7％的19-去甲-4，6-孕二烯-6-甲基-17α-醇-3，20-二酮。
實(shí)施例3應(yīng)用稻黑孢菌ATCC 42775的浸沒培養(yǎng)液，將4，6-孕二烯-6-甲基-17α-醇-3，20-二酮轉(zhuǎn)化為19-去甲-4，6-孕二烯-6-甲基-17α-醇-3，20-二酮10β-羧酸，然后脫羧變?yōu)?9-去甲-4，6-孕二烯-6-甲基-17α-醇-3，20-二酮。
在實(shí)施例1描述的情況下，可獲得1.20g粗制的19-去甲-4，6-孕二烯-6-甲基-17α-醇-3，20-二酮10β-羧酸結(jié)晶。該物質(zhì)然后轉(zhuǎn)化為0.65g純度為99.2％的19-去甲-4，6-孕二烯-6-甲基-17α-醇-3，20-二酮。
權(quán)利要求
1.產(chǎn)生結(jié)構(gòu)式II所示的19-去甲-10β-羧酸的方法， 結(jié)構(gòu)式II其中R1選自H，OH，R-C(O)O-，-CH2OCH3或CH3CH(OR)O-基團(tuán)；R為C1-C8的烴基基團(tuán)，R2選自H，F(xiàn)，Cl，Br或CH3-；R3為H或CH2＝；R4為-CH2OH或-CH3；所述方法通過結(jié)構(gòu)式I所示6-取代-Δ6-孕烷的真菌氧化實(shí)現(xiàn) 結(jié)構(gòu)式I其中R1選自H，OH，R-C(O)O-，-CH2OCH3或CH3CH(OR)O-基團(tuán)；R為C1-C8的烴基基團(tuán)，R2選自H，F(xiàn)，Cl，Br或CH3-；R3為H或CH2＝；R4為-CH2OH或-CH3；R5為-CHO，-CH2OH或-CH3，該方法包括，使結(jié)構(gòu)式I所示的6-取代-Δ6孕烷與生物轉(zhuǎn)化培養(yǎng)物進(jìn)行接觸，該生物轉(zhuǎn)化培養(yǎng)物中含有能氧化結(jié)構(gòu)式I所示6-取代-Δ6孕烷中第19位碳原子的黑孢菌屬菌株。
2.權(quán)利要求1的方法，其中黑孢菌屬菌株選自球黑孢菌ATCC12772、Nigrospora gorlenkoanum ATCC 24718或稻黑孢菌ATCC42775。
3.權(quán)利要求2的方法，其中黑孢菌屬菌株為球黑孢菌ATCC 12772。
4.權(quán)利要求2的方法，其中黑孢菌屬菌株為Nigrospora gorlenkoanumATCC 24718。
5.權(quán)利要求2的方法，其中黑孢菌屬菌株為稻黑孢菌ATCC 42775。
6.權(quán)利要求1的方法，其中R5為-CHO。
7.權(quán)利要求1的方法，其中R5為-CH2OH。
8.權(quán)利要求1的方法，其中R5為-CH3。
9.權(quán)利要求1的方法，進(jìn)一步包括，使結(jié)構(gòu)式II所示化合物脫羧形成結(jié)構(gòu)式III所示19-去甲-6-取代-Δ6-孕烷的反應(yīng)， 結(jié)構(gòu)式III其中R1選自H，OH，R-C(O)O-，-CH2OCH3或CH3CH(OR)O-基團(tuán)；R為C1-C8的烴基基團(tuán)，R2選自H，F(xiàn)，Cl，Br或CH3-；R3為H或CH2＝；R4為-CH2OH或-CH3；R5為-CHO，-CH2OH或-CH3，所述方法包括，用pKa值小于4.9的酸在合適的溶劑中處理結(jié)構(gòu)式II所示化合物的步驟。
10.權(quán)利要求9的方法，其中pKa值小于4.9的酸是氫氯酸，且適合的溶劑是甲醇。
全文摘要
本發(fā)明公開了通過6－取代－Δ6孕烷的真菌氧化產(chǎn)生19－去甲－10β－羧酸的方法。
文檔編號C12R1/645GK1742090SQ200480002555
公開日2006年3月1日 申請日期2004年1月9日 優(yōu)先權(quán)日2003年1月21日
發(fā)明者邁克爾·J·懷特, 伊凡·G·吉爾伯特, 布魯斯·A·珀?duì)柭?申請人:法馬西亞和厄普喬恩公司