專利名稱：篩選轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞陽性單克隆方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及基因工程技術(shù)領(lǐng)域，是一種篩選轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞陽性單克隆方法。
背景技術(shù)：
目前國內(nèi)外轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞陽性單克隆的篩選與培養(yǎng)，多選用抗新霉素基因?yàn)楹Y選標(biāo)志，實(shí)驗(yàn)過程中，由于被基因轉(zhuǎn)染的細(xì)胞數(shù)較少，能在培養(yǎng)過程中穩(wěn)定遺傳的細(xì)胞數(shù)更少，因此轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞陽性單克隆的篩選十分重要。但是，用新霉素篩選轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞陽性單克隆時(shí)，一般先進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)，然后在進(jìn)行正常細(xì)胞新霉素濃度敏感性檢測(cè)，得到正常細(xì)胞致死新霉素濃度范圍后，將正常細(xì)胞進(jìn)行基因轉(zhuǎn)染，將轉(zhuǎn)染后細(xì)胞用致死范圍內(nèi)的新霉素濃度處理，存留下來細(xì)胞低濃度稀釋，進(jìn)行96孔板單細(xì)胞克隆篩選；有關(guān)細(xì)胞計(jì)數(shù)、活細(xì)胞檢測(cè)、新霉素濃度敏感性檢測(cè)及轉(zhuǎn)染方法和步驟詳見薛慶善主編的2001年由科學(xué)出版社出版的“體外培養(yǎng)的原理與技術(shù)”一書；由于該實(shí)驗(yàn)方法工作量大，消耗大量的培養(yǎng)基和培養(yǎng)耗材，同時(shí)由于單細(xì)胞篩選，細(xì)胞間失去接觸、聯(lián)系，在新霉素的作用下細(xì)胞極易老化、死亡，因此上述轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞陽性單克隆的篩選與培養(yǎng)方法效率較低、成本較高、費(fèi)工費(fèi)時(shí)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種篩選轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞陽性單克隆方法，克服了現(xiàn)有技術(shù)之不足，其效率較高、成本較低、省時(shí)省工。
本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣來實(shí)現(xiàn)的一種篩選轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞陽性單克隆方法，其按下述步驟進(jìn)行第一步，在培養(yǎng)液中對(duì)需要克隆的動(dòng)物細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，待其動(dòng)物細(xì)胞聚合至40％至80％后，進(jìn)行基因轉(zhuǎn)染；第二步，在基因轉(zhuǎn)染后進(jìn)行1天至7天的動(dòng)物細(xì)胞生長恢復(fù)，然后用能致死非基因轉(zhuǎn)染動(dòng)物細(xì)胞的濃度的新霉素進(jìn)行5天至20天篩選；第三步，在第二步致死性篩選后，在陽性轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞維持生長的濃度的新霉素下，再加入離心收集的該動(dòng)物細(xì)胞對(duì)數(shù)生長期含有生長因子培養(yǎng)液的條件下，在培養(yǎng)液中進(jìn)行2天至14天的動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)擴(kuò)增；第四步，當(dāng)?shù)谌街械年栃赞D(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞生長形成克隆后，用細(xì)胞刮刀刮除正常細(xì)胞，保留轉(zhuǎn)基因陽性動(dòng)物細(xì)胞克隆；第五步，挑選和標(biāo)記選定的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞陽性單克隆，用0.125％至0.25％胰酶或EDTA-胰酶定點(diǎn)消化該單克隆細(xì)胞并將消化后的陽性單克隆細(xì)胞迅速置入新的培養(yǎng)器皿中培養(yǎng)擴(kuò)增，培養(yǎng)擴(kuò)增至50％--80％的細(xì)胞聚合，用0.125％至0.25％濃度的胰酶或EDTA-胰酶消化和懸浮上述所培養(yǎng)擴(kuò)增的陽性轉(zhuǎn)基因單克隆動(dòng)物細(xì)胞，加入培養(yǎng)液和致死非基因轉(zhuǎn)染動(dòng)物細(xì)胞的濃度的新霉素，繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞，在致死非基因轉(zhuǎn)染動(dòng)物細(xì)胞的濃度的新霉素和胰酶或EDTA-胰酶作用下，在培養(yǎng)液中致死殘留的非基因轉(zhuǎn)染動(dòng)物細(xì)胞；第六步，將第五步所得到陽性單克隆動(dòng)物細(xì)胞再植入新的培養(yǎng)器皿中培養(yǎng)，在陽性轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞維持生長的濃度的新霉素條件下，再加入離心收集的該細(xì)胞對(duì)數(shù)生長期含有生長因子培養(yǎng)液的條件下，即可得到大量的純化的轉(zhuǎn)基因陽性單克隆動(dòng)物細(xì)胞。
本發(fā)明特別適用于牛、羊和豬等哺乳類轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞陽性單克隆的篩選與培養(yǎng)。依照此方法可獲得眾多不同轉(zhuǎn)基因陽性單克隆動(dòng)物細(xì)胞。
下面是對(duì)本發(fā)明技術(shù)方案的進(jìn)一步優(yōu)化上述需要篩選的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞可為成年荷斯坦奶牛成纖維細(xì)胞。
上述成年荷斯坦奶牛成纖維細(xì)胞被致死的新霉素濃度可為300μg/ml至1000μg/ml。
上述成年荷斯坦奶牛成纖維細(xì)胞能維持生長的新霉素濃度可為50μg/ml至250μg/ml。
上述需要篩選的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞可為成年莎能奶山羊成纖維細(xì)胞。
上述成年莎能奶山羊成纖維細(xì)胞被致死的新霉素濃度可為250μg/ml至800μg/ml。
上述成年莎能奶山羊成纖維細(xì)胞能維持生長的新霉素濃度可為20μg/ml至200μg/ml。
上述需要篩選的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞可為豬成纖維細(xì)胞。
上述豬成纖維細(xì)胞被致死的新霉素濃度可為400μg/ml至1000μg/ml。
上述豬成纖維細(xì)胞能維持生長的新霉素濃度可為100μg/ml至300μg/ml。
上述培養(yǎng)液可為含有10％至20％牛血清或小牛血清或類胎牛血清或胎牛血清和100u/ml雙抗的RPMI1640或MEM或DMEM或DMEM/F12或F12或F10或199培養(yǎng)基的培養(yǎng)液。
上述基因轉(zhuǎn)染可以脂質(zhì)體包埋或電穿孔方法進(jìn)行。
本發(fā)明的特點(diǎn)本發(fā)明的特點(diǎn)省時(shí)省工，效率高，并且大大降低了篩選轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞陽性單克隆的成本。同時(shí)該方法適用于商業(yè)上具有經(jīng)濟(jì)價(jià)值的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞陽性單克隆的篩選，是制作轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的必要手段之一。


附圖1為激發(fā)光照射下含有綠色熒光蛋白、新霉素抗性基因的牛耳成纖維細(xì)胞陽性單克隆。
附圖2為已將乳腺特異表達(dá)啟動(dòng)子、綠色熒光蛋白及新霉素抗性三種基因同時(shí)導(dǎo)入的牛耳成纖維細(xì)胞陽性單克隆。
圖3、圖4激發(fā)光照射下正在生長的同時(shí)含有乳腺特異表達(dá)啟動(dòng)子、綠色熒光白及新霉抗性三種基因的莎能奶山羊成纖維細(xì)胞陽性單克隆。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明不受下述實(shí)施例的限制，可根據(jù)上述本發(fā)明的技術(shù)方案和實(shí)際情況來確定具體的實(shí)施方式。
實(shí)施例1，用含有10％或15％或20％的牛血清或小牛血清或類胎牛血清或胎牛血清和100u/ml雙抗的RPMI1640或MEM或DMEM或DMEM/F12或F12或F10或199培養(yǎng)基的培養(yǎng)液，純化培養(yǎng)成年荷斯坦奶牛成纖維細(xì)胞，待細(xì)胞聚合至40％或50％或60％或70％或80％，以脂質(zhì)體包埋或電穿孔方法進(jìn)行基因轉(zhuǎn)染，24小時(shí)或36小時(shí)或48小時(shí)的細(xì)胞生長恢復(fù)，然后用300μg/ml或500μg/ml或750μg/ml或1000μg/ml濃度新霉素篩選培養(yǎng)5天或10天或14天，再用含20％的牛血清或小牛血清或類胎牛血清或胎牛血清、100u/ml雙抗和50μg/ml或100μg/ml或150μg/ml或200μg/ml或250μg/ml新霉素的RPMI1640或MEM或DMEM或DMEM/F12或F12或F10或199培養(yǎng)基的培養(yǎng)液并加入離心收集的該細(xì)胞對(duì)數(shù)生長期含有生長因子培養(yǎng)液，使陽性轉(zhuǎn)基因細(xì)胞生長、擴(kuò)增2天或6天或10天。待陽性轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞生長形成克隆后并長到接觸抑制，用細(xì)胞刮刀盡可能刮除正常細(xì)胞，保留陽性克隆。挑選和標(biāo)記選定的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞陽性單克隆，用0.125％至0.25％胰酶或EDTA-胰酶定點(diǎn)消化該單克隆細(xì)胞并將消化后的陽性單克隆細(xì)胞迅速置入新的培養(yǎng)器皿中培養(yǎng)擴(kuò)增，培養(yǎng)擴(kuò)增至50％--80％的細(xì)胞聚合，用胰酶或EDTA-胰酶消化和懸浮上述培養(yǎng)放大的陽性轉(zhuǎn)基因單克隆動(dòng)物細(xì)胞，并在培養(yǎng)液中保留原消化胰酶和加入300μg/ml或500μg/ml或750μg/ml或1000μg/ml篩選濃度的新霉素，殘留下來的正常細(xì)胞由于受胰酶或EDTA-胰酶和新霉素雙重負(fù)作用因子影響，將很難再貼壁并很快死亡。將上述細(xì)胞植入各種培養(yǎng)器皿，再次聯(lián)合使用離心收集到的該細(xì)胞對(duì)數(shù)生長期含有生長因子培養(yǎng)液，保持50μg/ml或100μg/ml、150μg/ml或200μg/ml或250μg/ml陽性轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞維持生長的濃度的新霉素，即可得到大量的轉(zhuǎn)基因陽性單克隆動(dòng)物細(xì)胞。
實(shí)施例2，用含有10％或15％或20％牛血清或小牛血清或類胎牛血清或胎牛血清和100u/ml雙抗的RPMI1640或MEM或DMEM或DMEM/F12或F12或F10或199培養(yǎng)基的培養(yǎng)液，純化培養(yǎng)成年莎能奶山羊成纖維細(xì)胞，待細(xì)胞聚合至40％或50％或60％或70％或80％，以脂質(zhì)體包埋或電穿孔方法進(jìn)行基因轉(zhuǎn)染，24小時(shí)或36小時(shí)或48小時(shí)的細(xì)胞生長恢復(fù)，然后用250μg/ml或600μg/ml或800μg/ml濃度新霉素篩選培養(yǎng)5天或10天或14天，再用含有20％牛血清或小牛血清或類胎牛血清或胎牛血清、100u/ml雙抗和20μg/ml或60μg/ml或100μg/ml或140μg/ml或180μg/ml或200μg/ml新霉素的RPMI1640或MEM或DMEM或DMEM/F12或F12或F10或199培養(yǎng)基的培養(yǎng)液并加入離心收集的該細(xì)胞對(duì)數(shù)生長期含有生長因子培養(yǎng)液，使陽性轉(zhuǎn)基因細(xì)胞生長、擴(kuò)增2天或6天或10天。待陽性轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞生長形成克隆后并長到接觸抑制，用細(xì)胞刮刀盡可能刮除正常細(xì)胞，保留陽性克隆。挑選和標(biāo)記選定的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞陽性單克隆，用0.125％至0.25％胰酶或EDTA-胰酶定點(diǎn)消化該單克隆細(xì)胞并將消化后的陽性單克隆細(xì)胞迅速置入新的培養(yǎng)器皿中培養(yǎng)擴(kuò)增，培養(yǎng)擴(kuò)增至50％--80％的細(xì)胞聚合，用胰酶或EDTA-胰酶消化和懸浮上述培養(yǎng)放大的陽性轉(zhuǎn)基因單克隆動(dòng)物細(xì)胞，并在培養(yǎng)液中保留原消化胰酶和加入250μg/ml或600μg/ml或800μg/ml篩選濃度的新霉素，殘留下來的正常細(xì)胞由于受胰酶或EDTA-胰酶和新霉素雙重負(fù)作用因子影響，將很難再貼壁并很快死亡。將上述細(xì)胞植入各種培養(yǎng)器皿，再次聯(lián)合使用離心收集到的該細(xì)胞對(duì)數(shù)生長期含有生長因子培養(yǎng)液，保持50μg/ml或100μg/ml或150μg/ml或200μg/ml陽性轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞維持生長的濃度的新霉素，即可得到大量的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物陽性單克隆細(xì)胞。
實(shí)施例3，用含有10％或15％或20％牛血清或小牛血清或類胎牛血清或胎牛血清和100u/ml雙抗的RPMI1640或MEM或DMEM或DMEM/F12或F12或F10或199培養(yǎng)基的培養(yǎng)液，純化培養(yǎng)豬成纖維細(xì)胞，待細(xì)胞聚合至40％或50％或60％或70％或80％，以脂質(zhì)體包埋或電穿孔方法進(jìn)行基因轉(zhuǎn)染，24小時(shí)或36小時(shí)或48小時(shí)的細(xì)胞生長恢復(fù)，然后用400μg/ml或600μg/ml或800μg/ml或1000μg/ml濃度新霉素篩選培養(yǎng)5天或10天或14天，再用20％牛血清或小牛血清或類胎牛血清或胎牛血清、100u/ml雙抗和100μg/ml或200μg/ml或300μg/ml新霉素的RPMI1640或MEM或DMEM或DMEM/F12或F12或F10或199培養(yǎng)基的培養(yǎng)液并加入離心收集的該細(xì)胞對(duì)數(shù)生長期含有生長因子培養(yǎng)基，使陽性轉(zhuǎn)基因細(xì)胞生長、擴(kuò)增2天或6天或10天。待陽性轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞生長形成克隆后并長到接觸抑制，用細(xì)胞刮刀盡可能刮除正常細(xì)胞，保留陽性克隆。挑選和標(biāo)記選定的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞陽性單克隆，用0.125％至0.25％胰酶或EDTA-胰酶定點(diǎn)消化該單克隆細(xì)胞并將消化后的陽性單克隆細(xì)胞迅速置入新的培養(yǎng)器皿中培養(yǎng)擴(kuò)增，培養(yǎng)擴(kuò)增至50％--80％的細(xì)胞聚合，用胰酶或EDTA-胰酶消化和懸浮上述培養(yǎng)放大的陽性轉(zhuǎn)基因單克隆動(dòng)物細(xì)胞，并在培養(yǎng)液中保留原消化胰酶和加入400μg/ml或600μg/ml或800μg/ml或1000μg/ml篩選濃度的新霉素，殘留下來的正常細(xì)胞由于受胰酶或EDTA-胰酶和新霉素雙重負(fù)作用因子影響，將很難再貼壁并很快死亡。將上述細(xì)胞植入各種培養(yǎng)器皿，再次聯(lián)合使用離心收集到的該細(xì)胞對(duì)數(shù)生長期含有生長因子培養(yǎng)基，保持100μg/ml或200μg/ml或300μg/ml陽性轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞維持生長的濃度的新霉素，即可得到大量的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物陽性單克隆細(xì)胞。
從實(shí)施例1、實(shí)施例2和實(shí)施例3來看，本發(fā)明不僅適用于牛、羊和豬的轉(zhuǎn)基因成纖維細(xì)胞陽性克隆的篩選，還適用于其它哺乳類轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞陽性克隆的篩選與培養(yǎng)。
權(quán)利要求
1.一種篩選轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞陽性單克隆方法，其特征在于按下述步驟進(jìn)行第一步，在培養(yǎng)液中對(duì)需要轉(zhuǎn)基因的動(dòng)物細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，待其動(dòng)物細(xì)胞聚合至40％至80％后，進(jìn)行基因轉(zhuǎn)染；第二步，在基因轉(zhuǎn)染后進(jìn)行1天至7天的動(dòng)物細(xì)胞生長恢復(fù)，然后用能致死非基因轉(zhuǎn)染動(dòng)物細(xì)胞的濃度的新霉素進(jìn)行5天至20天篩選；第三步，在第二步致死性篩選后，使用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞維持生長濃度的新霉素，再加入離心收集的該動(dòng)物細(xì)胞對(duì)數(shù)生長期含有生長因子培養(yǎng)液，在此條件下，在培養(yǎng)液中進(jìn)行2天至14天的動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)擴(kuò)增；第四步，當(dāng)?shù)谌街械年栃赞D(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞生長形成克隆后，用細(xì)胞刮刀刮除正常細(xì)胞，保留轉(zhuǎn)基因陽性動(dòng)物細(xì)胞克??；第五步，挑選和標(biāo)記選定的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞陽性單克隆，用0.125％至0.25％胰酶或EDTA-胰酶定點(diǎn)消化該單克隆細(xì)胞并將消化后的陽性單克隆細(xì)胞迅速置入新的培養(yǎng)器皿中培養(yǎng)擴(kuò)增，培養(yǎng)擴(kuò)增至50％--80％的細(xì)胞聚合，用0.125％至0.25％濃度的胰酶或EDTA-胰酶消化和懸浮上述所培養(yǎng)擴(kuò)增的陽性轉(zhuǎn)基因單克隆動(dòng)物細(xì)胞，加入培養(yǎng)液和致死非基因轉(zhuǎn)染動(dòng)物細(xì)胞的濃度的新霉素，繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞，在致死非基因轉(zhuǎn)染動(dòng)物細(xì)胞的濃度的新霉素和胰酶或EDTA-胰酶作用下，在培養(yǎng)液中致死殘留的非基因轉(zhuǎn)染動(dòng)物細(xì)胞；第六步，將第五步所得到陽性單克隆動(dòng)物細(xì)胞再植入新的培養(yǎng)器皿中培養(yǎng)，在陽性轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞維持生長的濃度的新霉素條件下，再加入離心收集的該細(xì)胞對(duì)數(shù)生長期含有生長因子培養(yǎng)液的條件下，即可得到大量的純化的轉(zhuǎn)基因陽性單克隆動(dòng)物細(xì)胞。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的篩選轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞陽性單克隆方法，其特征在于需要篩選的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞為成年荷斯坦奶牛成纖維細(xì)胞。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的篩選轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞陽性單克隆方法，其特征在于成年荷斯坦奶牛成纖維細(xì)胞被致死的新霉素濃度為300μg/ml至1000μg/ml；或/和，成年荷斯坦奶牛成纖維細(xì)胞能維持生長的新霉素濃度為50μg/ml至250μg/ml。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的篩選轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞陽性單克隆方法，其特征在于需要篩選的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞為成年莎能奶山羊成纖維細(xì)胞。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的篩選轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞陽性單克隆方法，其特征在于成年莎能奶山羊成纖維細(xì)胞被致死的新霉素濃度為250μg/ml至800μg/ml；或/和，成年莎能奶山羊成纖維細(xì)胞能維持生長的新霉素濃度為20μg/ml至200μg/ml。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的篩選轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞陽性單克隆方法，其特征在于需要篩選的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞為豬成纖維細(xì)胞。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的篩選轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞陽性單克隆方法，其特征在于豬成纖維細(xì)胞被致死的新霉素濃度為400μg/ml至1000μg/ml；或/和，豬成纖維細(xì)胞能維持生長的新霉素濃度為100μg/ml至300μg/ml。
8.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3或4或5或6或7所述的篩選轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞陽性單克隆方法，其特征在于培養(yǎng)液為含有10％至20％牛血清或小牛血清或類胎牛血清或胎牛血清和100u/ml雙抗的RPMI1640或MEM或DMEM或DMEM/F12或F12或F10或199培養(yǎng)基的培養(yǎng)液。
9.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3或4或5或6或7所述的篩選轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞陽性單克隆方法，其特征在于基因轉(zhuǎn)染以脂質(zhì)體包埋或電穿孔方法進(jìn)行。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的篩選轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞陽性單克隆方法，其特征在于基因轉(zhuǎn)染以脂質(zhì)體包埋或電穿孔方法進(jìn)行。
全文摘要
一種篩選轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞陽性單克隆方法，其按下述步驟進(jìn)行第一步，對(duì)需要轉(zhuǎn)基因的動(dòng)物細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，并進(jìn)行基因轉(zhuǎn)染；第二步，用能致死非基因轉(zhuǎn)染動(dòng)物細(xì)胞的濃度的新霉素進(jìn)行篩選；第三步，轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞陽性克隆的培養(yǎng)擴(kuò)增；第四步，刮除非基因轉(zhuǎn)染動(dòng)物細(xì)胞，保留轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞陽性克??；第五步，挑選轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞陽性單克隆并培養(yǎng)擴(kuò)增，致死殘留的非基因轉(zhuǎn)染動(dòng)物細(xì)胞；第六步，進(jìn)一步培養(yǎng)擴(kuò)增得到大量的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物陽性單克隆細(xì)胞。本發(fā)明的特點(diǎn)省時(shí)省工，效率高，并且大大降低了篩選轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞陽性單克隆的成本。同時(shí)該方法適用于商業(yè)上具有經(jīng)濟(jì)價(jià)值的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞陽性單克隆的篩選，是制作轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的必要手段之一。
文檔編號(hào)C12N5/10GK1616653SQ20041009283
公開日2005年5月18日 申請(qǐng)日期2004年11月12日 優(yōu)先權(quán)日2004年9月20日
發(fā)明者王亮, 朱海, 呂自力, 劉婷婷, 帥志強(qiáng), 彭濤 申請(qǐng)人:新疆金牛生物股份有限公司