專利名稱：灰白鏈霉菌的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及微生物技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種具有殺蟲作用的微生物。
背景技術(shù)：
蚜蟲(Aphis medicaginis)、螨蟲(Tetranychus cinnabarius)、黏蟲(Leneaniaseparata)等害蟲是農(nóng)作物的主要害蟲。因此，抑制上述害蟲是非常重要的。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種其發(fā)酵液具有殺蟲作用的微生物—灰白鏈霉菌。
其發(fā)酵液還對白色念珠菌，枯草芽孢桿菌有抗菌活性。
本發(fā)明所述的灰白鏈霉菌命名為灰白鏈霉菌Streptomyces griseoalbus YIM30823，保藏編號為CCTCC NOM203014。
本發(fā)明所述的灰白鏈霉菌系從我國云南中甸采集的土壤樣品中分離得到?，F(xiàn)保藏在國家知識產(chǎn)權(quán)局指定的保藏單位保藏，保藏單位名稱中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏日期為2003年2月14日，保藏編號為CCTCC NOM203014。
本發(fā)明所述的鏈霉菌在大多數(shù)培養(yǎng)基上生長良好，氣生菌絲灰白，白色，基內(nèi)菌絲橙黃色至黃褐色。孢子鏈螺旋狀。孢子短桿狀，孢子表面有皺折。明膠液化、牛奶凝固、胨化呈陽性，淀粉水解、硝酸還原呈陰性，不產(chǎn)生硫化氫，形成黑色素。能利用葡萄糖、半乳糖、果糖木糖、棉子糖、鼠李糖、蜜二糖、甜醇、甘油、甘露醇、山梨醇、醋酸鈉。細(xì)胞壁含有L-二氨基庚二酸和甘氨酸，全細(xì)胞水解物無特征性糖。
培養(yǎng)條件(一)斜面培養(yǎng)條件培養(yǎng)基葡萄糖4g；酵母膏4g；麥芽膏5g；復(fù)合維生素3.75mg/L；瓊脂15g；蒸餾水水1000ml，pH7.2；培養(yǎng)溫度為28℃，培養(yǎng)時間為1周。
(二)種子培養(yǎng)條件從斜面挑取部分菌絲體接入種子液中，搖瓶培養(yǎng)36小時。種子培養(yǎng)基糊精120g；大豆粉40g；酵母膏2g；色氨酸0.5g；β-丙氨酸5g；硫酸鎂0.5g；磷酸銨0.2g；蒸餾水1000ml，pH7.2，培養(yǎng)溫度為28℃。
(三)發(fā)酵培養(yǎng)條件按10％的接種量接到種子培養(yǎng)基中，搖瓶培養(yǎng)6天。培養(yǎng)基大豆粉10g；葡萄糖10g；蛋白胨3g；氯化鈉2.5g；碳酸鈣2g；蒸餾水1000ml，pH7.2，培養(yǎng)溫度為28℃。得到發(fā)酵液。
本發(fā)酵液殺蟲活性篩選流程圖20ml發(fā)酵液→1∶1的乙醇抽提4hr→離心→濃縮→用水分別稀釋20，200，2000倍。
選用不同的害蟲活體，直接噴灑后于12，24，36，48hr觀察死亡情況。
本發(fā)酵液殺蟲活性篩選結(jié)果菌株YIM30823的發(fā)酵液對蚜蟲(Aphis medicaginis)、螨蟲(Tetranychuscinnabarius)、黏蟲(Leneania separata)等三種害蟲的殺蟲率均為100％。
本菌株的發(fā)酵液具有殺滅蚜蟲(Aphis medicaginis)、螨蟲(Tetranychuscinnabarius)、黏蟲(Leneania separata)等害蟲的作用，具有從中開發(fā)出新型、高效、無毒的天然藥物的巨大潛力。
本發(fā)明所述的鏈霉菌命名為灰白鏈霉菌，已于2003年2月14日在中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，保藏單位簡稱；CCTCC，保藏編號為M203014，保藏單位地址武漢，珞珈山，武漢大學(xué)內(nèi)，郵政編碼430072。


圖1為本發(fā)明所述的灰白鏈霉菌在酵母膏-麥芽膏培養(yǎng)基上的電鏡照片。
圖2為本發(fā)明所述的灰白鏈霉菌的培養(yǎng)特征。
圖3為本發(fā)明所述的灰白鏈霉菌的生理生化特征。
圖4為本發(fā)明所述的灰白鏈霉菌的碳氮源利用情況。
圖5為本發(fā)明所述的灰白鏈霉菌和部分相關(guān)菌在GenBank數(shù)據(jù)庫的16SrDNA序列及登錄號。
圖6為本發(fā)明所述的灰白鏈霉菌及部分相關(guān)菌株依據(jù)16S rDNA序列構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹。
具體實施例方式
實施例從我國云南中甸采集的土壤樣品，在實驗室中按下列條件培養(yǎng)，即可獲得本發(fā)明所述的灰白鏈霉菌。
(一)培養(yǎng)條件1.斜面培養(yǎng)條件培養(yǎng)基葡萄糖4g；酵母膏4g；麥芽膏5g；復(fù)合維生素3.75mg/L；瓊脂15g；蒸餾水水1000ml，pH7.2；培養(yǎng)溫度為28℃，培養(yǎng)時間為1周。
2.種子培養(yǎng)條件從斜面挑取部分菌絲體接入種子液中，搖瓶培養(yǎng)36小時。種子培養(yǎng)基糊精120g；大豆粉40g；酵母膏2g；色氨酸0.5g；β-丙氨酸5g；硫酸鎂0.5g；磷酸銨0.2g；蒸餾水1000ml，pH7.2，培養(yǎng)溫度為28℃。
按以下發(fā)酵培養(yǎng)條件培養(yǎng)，即可獲得發(fā)酵液按10％的接種量接到種子培養(yǎng)基中，搖瓶培養(yǎng)6天。培養(yǎng)基大豆粉10g；葡萄糖10g；蛋白胨3g；氯化鈉2.5g；碳酸鈣2g；蒸餾水1000ml，pH7.2，培養(yǎng)溫度為28℃。
本發(fā)明所述鏈霉菌的16S rDNA部分序列分析如下
GAACGCTGGCGGCGTGCTTAACACATGCAAGTCGAACGTGAACCGGCTTCGGCTGGGGATTAGTGGCGAACGGGTGAGTAACACGTGGGCAATCTGCCCTGCACTCTGGGACAAGCCCTGGAAACGGGGTCTAATACCGGATATTACCTGGTGAGGCATCTTACTGGGTGGAAAGCTCCGGCGGTGCAGGATGAGCCCGCGGCCTATCAGCTTGTTGGTGGGGTGATGGCCTACCAAGGCGACGACGGGTAGCCGGCCTGAGAGGGCGACCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGAAAGCCTGATGCAGCGACGCCGCGTGAGGGATGACGGCCTTCGGGTTGTAAACCTCTTTCAGCAGGGAAGAAGCGAGAGTGACGGTACCTGCAGAAGAAGCGCCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGCGCGAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGAGCTCGTAGGCGGCTTGTCACGTCGGATGTGAAAGCCCGGGGCTTAACCCCGGGTCTGCATTCGATACGGGCAGGCTAGAGTTCGGTAGGGGAGATCGGAATTCCTGGTGTAGCGGTGAAATGCGCAGATATCAGGAGGAACACCGGTGGCGAAGGCGGATCTCTGGGCCGATACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGTTGGGAACTAGGTGTGGGCGACATTCCACGTTGTCCGTGCCGCAGCTAACGCATTAAGTTCCCCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGCTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGCGGAGCATGTGGCTTAATTCGACGCAACGCGAAGAACCTTACCAAGGCTTGACATACACCGGAAACATCCAGAGATGGGTGCCCCCTTGTGGTCGGTGTACAGGTGGTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGTTCTGTGTTGCCAGCATGCCCTTCGGGGTGATGGGGACTCACAGGAGACTGCCGGGGTCAACTCGGAGGAAGGTGGGGACGACGTCAAGTCATCATGCCCCTTATGTCTTGGGCTGCACACGTGCTACAATGGCCGGTACAATGAGCTGCGATACCGCGAGGTGGAGCGAATCTCAAAAAGCCGGTCTCAGTTCGGATTGGGGTCTGCAACTCGACCCCATGAAGTCGGAGTCGCTAGTAATCGCAGATCAGCATTGCTGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACGTCACGAAAGTCGGTAACACCCGAAGCCGGTGGCCCAACCCCTTGTGGGAGGGAGTCGTCGAAGGTGGGACTGGCGATTGGGACGAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTACGGAAGGA
權(quán)利要求
1.一種灰白鏈霉菌，其特征在于命名為灰白鏈霉菌Streptomycesgriseoalbus YIM 30823，現(xiàn)在國家知識產(chǎn)權(quán)局指定的保藏單位保藏，保藏日期為2003年2月14日，保藏單位名稱中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號CCTCCNOM203014。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的灰白鏈霉菌，其特征在于該菌種的16S rDNA部分序列如下GAACGCTGGCGGCGTGCTTAACACATGCAAGTCGAACGATGAACCGGCTTCGGCTGGGGATTAGTGGCGAACGGGTGAGTAACACGTGGGCAATCTGCCCTGCACTCTGGGACAAGCCCTGGAAACGGGGTCTAATACCGGATATTACCTGGTGAGGCATCTTACTGGGTGGAAAGCTCCGGCGGTGCAGGATGAGCCCGCGGCCTATCAGCTTGTTGGTGGGGTGATGGCCTACCAAGGCGACGACGGGTAGCCGGCCTGAGAGGGCGACCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGAAAGCCTGATGCAGCGACGCCGCGTGAGGGATGACGGCCTTCGGGTTGTAAACCTCTTTCAGCAGGGAAGAAGCGAGAGTGACGGTACCTGCAGAAGAAGCGCCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGCGCGAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGAGCTCGTAGGCGGCTTGTCACGTCGGATGTGAAAGCCCGGGGCTTAACCCCGGGTCTGCATTCGATACGGGCAGGCTAGAGTTCGGTAGGGGAGATCGGAATTCCTGGTGTAGCGGTGAAATGCGCAGATATCAGGAGGAACACCGGTGGCGAAGGCGGATCTCTGGGCCGATACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGTTGGGAACTAGGTGTGGGCGACATTCCACGTTGTCCGTGCCGCAGCTAACGCATTAAGTTCCCCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGCTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGCGGAGCATGTGGCTTAATTCGACGCAACGCGAAGAACCTTACCAAGGCTTGACATACACCGGAAACATCCAGAGATGGGTGCCCCCTTGTGGTCGGTGTACAGGTGGTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGTTCTGTGTTGCCAGCATCCCCTTCGGGGTGATGGGGACTCACAGGAGACTGCCGGGGTCAACTCGGAGGAAGGTGGGGACGACGTCAAGTCATCATGCCCCTTATGTCTTGGGCTGCACACGTGCTACAATGGCCGGTACAATGAGCTGCGATACCGCGAGGTGGAGCGAATCTCAAAAAGCCGGTCTCAGTTCGGATTGGGGTCTGCAACTCGACCCCATGAAGTCGGAGTCGCTAGTAATCGCAGATCAGCATTGCTGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACGTCACGAAAGTCGGTAACACCCGAAGCCGGTGGCCCAACCCCTTGTGGGAGGGAGTCGTCGAAGGTGGGACTGGCGATTGGGACGAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTACGGAAGGA
全文摘要
本發(fā)明涉及微生物領(lǐng)域，特別是涉及一種具有殺蟲作用的微生物，本發(fā)明特征在于命名為灰白鏈霉菌Streptomyces griseoalbus YIM 30823，現(xiàn)保存在國家知識產(chǎn)權(quán)局指定的保藏單位保藏，保藏日期為2003年2月14日，保藏單位名稱中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號CCTCC NOM203014。本發(fā)明活性菌種具有殺蟲活性，其發(fā)酵液對蚜蟲(Aphis medicaginis)、螨蟲(Tetranychus cinnabarius)、黏蟲(Leneania separata)等害蟲有殺滅作用，效果穩(wěn)定而持久，具有從中開發(fā)出新型、高效、無毒天然殺蟲劑的巨大潛力。
文檔編號C12N15/31GK1542130SQ03124240
公開日2004年11月3日 申請日期2003年4月29日 優(yōu)先權(quán)日2003年4月29日
發(fā)明者姜成林, 姜怡, 李文均, 文孟良, 李銘剛, 徐麗華 申請人:云南省微生物研究所