5. -種創(chuàng) 建經(jīng)遺傳修飾的家畜生物體的方法，其包含改變家畜原代細(xì)胞、家畜原代體細(xì)胞，家畜干細(xì) 胞、家畜原生殖細(xì)胞，家畜合子、家畜胚泡，或家畜胚胎的天然有角等位基因，其中將所述有 角等位基因改變?yōu)闊o(wú)角等位基因。26.項(xiàng)25的方法，其中所述家畜選自下組：牛、山羊，和 綿羊。27.項(xiàng)25或26的方法，其包含將以下項(xiàng)引入家畜原代細(xì)胞、家畜原代體細(xì)胞、家畜干 細(xì)胞、家畜原生殖細(xì)胞、家畜合子、家畜胚泡，或家畜胚胎的天然有角等位基因中：編碼位點(diǎn) 特異性核酸酶的核酸，和含有無(wú)角等位基因的核酸同源依賴性重組模板，所述位點(diǎn)特異性 核酸酶特異性切割天然有角等位基因中的位點(diǎn)。28.項(xiàng)25-27任一項(xiàng)的方法，其中所述位點(diǎn) 特異性核酸酶選自下組：鋅指核酸酶（ZFN)、轉(zhuǎn)錄激活物樣效應(yīng)器核酸酶（TALEN)和成簇規(guī) 律間隔短回文重復(fù)序列（CRISPR)。29.項(xiàng)25-28任一項(xiàng)的方法，其中改變所述原代體細(xì)胞。 30.項(xiàng)25-28任一項(xiàng)的方法，其中改變胚胎。31.項(xiàng)25-28或30任一項(xiàng)的方法，進(jìn)一步包含 將合子、胚泡或胚胎放入妊娠期的動(dòng)物母體中。32.項(xiàng)25-29任一項(xiàng)的方法，進(jìn)一步包含克 隆所述原代細(xì)胞、原代體細(xì)胞，或合子，來(lái)產(chǎn)生完整的動(dòng)物。33.使用項(xiàng)25-32任一項(xiàng)的方法 產(chǎn)生的家畜動(dòng)物。34.項(xiàng)25-32任一項(xiàng)的方法用于產(chǎn)生帶有無(wú)角表型的家禽建立者動(dòng)物的 用途。
[0148] 參考文獻(xiàn)
[0149] 列于本說(shuō)明書(shū)中任何地方的專利申請(qǐng)、專利、出版物和期刊文章出于所有目的通 過(guò)提述并入本文；在沖突的情況下，以本說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。
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【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種經(jīng)遺傳修飾的家畜動(dòng)物，其包含從有角等位基因到無(wú)角等位基因的基因組修 飾。2. 權(quán)利要求1的動(dòng)物，其中所述動(dòng)物是具有所述有角等位基因的動(dòng)物的第一品種，而 所述無(wú)角等位基因存在于動(dòng)物的第二品種中。3. 權(quán)利要求1或2的動(dòng)物，其中所述無(wú)角等位基因選自下組：天然等位基因和合成等 位基因。4. 權(quán)利要求3的動(dòng)物，其中所述天然等位基因?qū)τ谒銎贩N是典型的，或是所述品種 中的突變體等位基因。5. 權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)的動(dòng)物，其中所述第一品種選自下組：赫里福德種牛 (Hereford)、安格斯牛（Angus)、短角牛（Shorthorn)、夏洛萊牛（Charolais)、利木贊牛 (Limousin)、西門塔爾牛（Simmental)、婆羅門牛（Brahman)、布蘭格斯萊牛（Brangus)、 和Wagyu、以及圣熱特魯?shù)纤古＃⊿anta Gertrudis)、愛(ài)爾夏牛（Ayrshire)、瑞士褐牛 (Brown Swiss)、Canadienne、荷蘭白帶牛（Dutch Belted)、根西乳牛（Guernsey)、荷爾斯 泰因牛（Holstein)(荷爾斯泰因-黑白花牛（Holstein-Friesian))、澤西牛（Jersey)、 克雷牛（Kerry)、德文乳牛（Milking Devon)、短角乳牛（Milking Shorthorn)、挪威紅 牛（Norwegian Red)、布薩牛（Busa)、Canadienne、艾爾沙尼亞紅牛（Estonian Red)、 Fleckveih、弗里塞牛（Frieian)、Girolando、伊拉瓦拉短角乳牛（Illawarra)、愛(ài)爾蘭耕 牛（Irish Moiled)、萊恩巴克牛（Lineback)、Meuse Rhine Issel、Montbeliarede、諾曼底 牛（Normande)、蘭德?tīng)柵＃≧andall)、薩希瓦爾牛（Sahhiwal)、澳洲乳用瘤牛（Australian Milking Zebu)、西門塔爾牛（Si_ental)、Chianina Marchigiana、羅馬諾拉肉牛 (Romagnola) 〇6. 權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)的動(dòng)物，其中所述第二品種選自下組：安格斯牛、紅安格斯 牛（Red Angus)、無(wú)角紅牛（Red Poll)、蓋勒韋牛（Galloway)、白帶蓋勒韋牛（Belted Galloway)、American White Park、英國(guó)白牛（British White)、Amerifax、牙買加黑牛 (Jamaica Black)、牙買加紅牛（Jamaica Red)、莫瑞灰牛（Murray Grey)、布蘭格斯萊牛 (Brangus)、布蘭格斯紅牛（Red Brangus)、Senopol、布爾山羊（Boer goats)。7. 權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)的動(dòng)物，其中所述無(wú)角等位基因選自下組：Pc Celtic來(lái)源和PF Friesian 來(lái)源。8. 權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)的動(dòng)物，其是建立者動(dòng)物或建立者動(dòng)物的后代。9. 權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)的動(dòng)物，其沒(méi)有標(biāo)志物和/或沒(méi)有報(bào)告物。10. 權(quán)利要求1-9任一項(xiàng)的動(dòng)物，其中所述基因組修飾僅已經(jīng)在所述無(wú)角等位基因處 產(chǎn)生。11. 權(quán)利要求10的方法，其中所述經(jīng)遺傳修飾的生物體選自下組：牛、山羊、綿羊，和偶 蹄動(dòng)物。12. 權(quán)利要求1-11任一項(xiàng)的動(dòng)物或所述動(dòng)物的后代作為家畜的用途。13. -種體外的細(xì)胞，其包含對(duì)所述細(xì)胞的有角等位基因的基因組修飾。14. 權(quán)利要求13的細(xì)胞，其中在有角基因座處的所述修飾是從有角等位基因到無(wú)角等 位基因的修飾。15. 權(quán)利要求13或14的細(xì)胞，其中所述細(xì)胞是家畜細(xì)胞。16. 權(quán)利要求13-15任一項(xiàng)的細(xì)胞，其中所述細(xì)胞選自下組：牛、山羊、綿羊，和偶蹄動(dòng) 物。17. 權(quán)利要求13-15任一項(xiàng)的細(xì)胞，其中所述細(xì)胞是選自下組的家畜細(xì)胞：赫里福德 種牛、安格斯牛、短角牛、夏洛萊牛、利木贊牛、西門塔爾牛、婆羅門牛、布蘭格斯萊牛、和 Wagyu，以及圣熱特魯?shù)纤古?、?ài)爾夏牛、瑞士褐牛、Canadienne、荷蘭白帶牛、根西乳牛、荷 爾斯泰因牛（荷爾斯泰因-黑白花牛）、澤西牛、克雷牛、德文乳牛、短角乳牛、挪威紅牛、布 薩牛、Canadienne、艾爾沙尼亞紅牛、Fleckveih、弗里塞牛、Girolando、伊拉瓦拉短角乳牛、 愛(ài)爾蘭耕牛、萊恩巴克牛、Meuse Rhine Issel、Montbeliarede、諾曼底牛、蘭德?tīng)柵?、薩希 瓦爾牛、澳洲乳用瘤牛、西門塔爾牛、Chianina Marchigiana、和羅馬諾拉肉牛。18. 權(quán)利要求13-17任一項(xiàng)的細(xì)胞，其中所述細(xì)胞是原代細(xì)胞，原代體細(xì)胞，或合子。19. 權(quán)利要求13-17任一項(xiàng)的細(xì)胞，其為家畜干細(xì)胞或原生殖細(xì)胞。20. 權(quán)利要求13-19任一項(xiàng)的細(xì)胞，在所述細(xì)胞經(jīng)歷所述修飾時(shí)所述細(xì)胞包含編碼無(wú) 角等位基因的同源依賴性重組模板。21. 權(quán)利要求20的細(xì)胞，其進(jìn)一步包含定點(diǎn)內(nèi)切核酸酶以在所述細(xì)胞的有角等位基因 處切割染色體DNA。22. 權(quán)利要求12-21任一項(xiàng)的細(xì)胞用于克隆動(dòng)物的用途。23. -種分離的核酸，其編碼無(wú)角等位基因并包含與天然有角等位基因重疊的序列。24. -種質(zhì)粒，其表達(dá)權(quán)利要求23的分離的核酸。25. -種創(chuàng)建經(jīng)遺傳修飾的家畜生物體的方法，其包括改變家畜原代細(xì)胞、家畜原代 體細(xì)胞，家畜干細(xì)胞、家畜原生殖細(xì)胞，家畜合子、家畜胚泡，或家畜胚胎的天然有角等位基 因，其中將所述有角等位基因改變?yōu)闊o(wú)角等位基因。26. 權(quán)利要求25的方法，其中所述家畜選自下組：牛、山羊、和綿羊。27. 權(quán)利要求25或26的方法，其包含對(duì)所述家畜原代細(xì)胞、家畜原代體細(xì)胞、家畜干細(xì) 胞、家畜原生殖細(xì)胞、家畜合子、家畜胚泡，或家畜胚胎的天然有角等位基因引入： a. 編碼位點(diǎn)特異性核酸酶的核酸，所述位點(diǎn)特異性核酸酶特異性切割所述天然有角等 位基因中的位點(diǎn)，和 b. 包含所述無(wú)角等位基因的核酸同源依賴性重組模板。28. 權(quán)利要求25-27任一項(xiàng)的方法，其中所述位點(diǎn)特異性核酸酶選自下組：鋅指核酸酶 (ZFN)、轉(zhuǎn)錄激活物樣效應(yīng)器核酸酶（TALEN)和成簇規(guī)律間隔短回文重復(fù)序列（CRISPR)。29. 權(quán)利要求25-28任一項(xiàng)的方法，其中改變所述原代體細(xì)胞。30. 權(quán)利要求25-28任一項(xiàng)的方法，其中改變所述胚胎。31. 權(quán)利要求25-28或30任一項(xiàng)的方法，其進(jìn)一步包括將所述合子、胚泡或胚胎放入妊 娠期母體動(dòng)物中。32. 權(quán)利要求25-29任一項(xiàng)的方法，其進(jìn)一步包括克隆所述原代細(xì)胞、原代體細(xì)胞，或 合子，來(lái)產(chǎn)生完整的動(dòng)物。33. 使用權(quán)利要求25-32任一項(xiàng)的方法產(chǎn)生的家畜動(dòng)物。34. 權(quán)利要求25-32任一項(xiàng)的方法用于產(chǎn)生帶有無(wú)角表型的家畜建立者動(dòng)物的用途。
【專利摘要】提出了用于產(chǎn)生帶有無(wú)角等位基因的家畜的組合物和方法，其包括將無(wú)角等位基因遷移到牛種中而不改變其它基因或染色體部分。動(dòng)物可以經(jīng)遺傳修飾而使得其不具有角。一種此類方法涉及牛無(wú)角等位基因的漸滲。因此，產(chǎn)生家畜品種來(lái)接收無(wú)角等位基因而不改變它們的其它性狀。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案是經(jīng)遺傳修飾的家畜動(dòng)物，其包含從有角等位基因到無(wú)角等位基因的基因組修飾。
【IPC分類】A01K67/027, C12N15/85, C12N15/63, C12N5/07
【公開(kāi)號(hào)】CN105142396
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201480013546
【發(fā)明人】S.C.法倫克魯格, D.F.卡爾森
【申請(qǐng)人】重組股份有限公司
【公開(kāi)日】2015年12月9日
【申請(qǐng)日】2014年1月14日
【公告號(hào)】CA2897932A1, EP2943060A1, US20140201857, WO2014110552A1