本發(fā)明涉及白及培育技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及白及假鱗莖切割組培育苗用培養(yǎng)基及其組培育苗方法。
背景技術(shù)：
白及bletillastriata(thunb.exa.murray)reichb.f.為蘭科白及屬多年生地生蘭類植物，又名：連及草、白根、冰球子、羊角七。地下塊莖入藥?！吨袊?guó)藥典》記載：具有收斂止血，消腫生肌。用于咯血，吐血，外傷出血，瘡瘍腫毒，皮膚皸裂。藥理研究，白及具有對(duì)抗胃及十二指腸粘膜潰瘍及穿孔、抗結(jié)核桿菌、葡萄球菌、鏈球菌和抗腫瘤的作用；現(xiàn)代研究證明，白及的塊莖中含有豐富的粘液質(zhì)(白及膠)、淀粉、揮發(fā)油、葡萄糖等成分。白及粘液質(zhì)屬于植物根莖類天然高分子多糖，可代替西黃芪膠粉與阿拉伯膠粉作為乳化劑、懸浮劑用于食品及化工領(lǐng)域。還可用于絲綢棉紗和精表裝幀的漿料；白及經(jīng)過科學(xué)提純出的白及葡苷聚糖，能促進(jìn)和直接參與受損組織及細(xì)胞的修復(fù)和代謝過程，應(yīng)用于化妝品行業(yè)中具有較好的祛皺抗衰老作用。白及膠外用涂擦，可消除臉上痤瘡瘢下的痕跡，讓肌膚光滑無痕。用白及做成涂膜劑，涂于創(chuàng)面，用于治療水火燙傷；用白及膠漿配伍黃連浸膏、水楊酸等制成軟膏，可治療手足癬。此外，白及還是衛(wèi)生部指定的藥食兩用，可用于保健食品的原材料，塊莖可用于釀酒。白及又稱紫蘭、紫蕙，不僅株形優(yōu)美，且花色艷麗，所以又是園林綠化珍稀名貴的花卉資源。
白及用途廣泛，綜合利用和產(chǎn)業(yè)價(jià)值日益凸顯,長(zhǎng)期以來，由于缺乏有效保護(hù)措施，過度濫采濫挖，導(dǎo)致野生白及資源正面臨著滅絕的危險(xiǎn)。為了保護(hù)白及的野生資源，《中國(guó)植物紅皮書——稀有瀕危植物》（第1冊(cè)）和《瀕危野生動(dòng)植物國(guó)際貿(mào)易公約》(cites)，均將白及列入保護(hù)的瀕危動(dòng)植物的名單中。野生資源匱乏，市場(chǎng)供不應(yīng)求和價(jià)格持續(xù)上漲，已經(jīng)明顯影響到我國(guó)醫(yī)藥行業(yè)、食品行業(yè)、日用化工等方面生產(chǎn)。但由于白及的種子極其微小且無胚乳，因此在自然狀況下很難生長(zhǎng)成苗，實(shí)生苗的栽培成為瓶頸；傳統(tǒng)栽培主要靠地下塊莖繁殖，不僅繁殖系數(shù)低，耗種量大，且生產(chǎn)成本高，很難滿足大面積生產(chǎn)的需要。
因此，開展白及野生資源保護(hù)和野生變家種研究，通過組織培養(yǎng)加快白及的種苗繁育，已經(jīng)成為解決白及瀕危、資源緊缺、市場(chǎng)供不應(yīng)求的重要手段和途徑。
目前，關(guān)于誘導(dǎo)白及種子萌發(fā)和成苗的工作，國(guó)內(nèi)有不少學(xué)者做過研究，但種子萌發(fā)后所采用的程序卻各有不同，傳統(tǒng)的方法有：1）“原球莖→誘導(dǎo)原球莖增殖→誘導(dǎo)芽的分化→誘導(dǎo)生根”，增殖主要利用誘導(dǎo)原球莖增殖完成，繼代培養(yǎng)也采用原球莖；2)“原球莖→誘導(dǎo)叢生芽增殖→誘導(dǎo)芽的分化及生根”，繼代培養(yǎng)使用叢生芽；3)“原球莖→誘導(dǎo)芽的分化→誘導(dǎo)生根”,4)采用原球莖直接“生長(zhǎng)分化→誘導(dǎo)生根”等，這些方法雖然都能獲得生根苗，但在效果和投入比上差異很大，且大多仍停留在實(shí)驗(yàn)室階段，真正用于生產(chǎn)的甚少，并且存在著諸多不利因素：1）需要進(jìn)行的工序較多；2）成苗的周期時(shí)間較長(zhǎng)；3）成苗的質(zhì)量很差，不利于移栽成活，成活率低下，不便于廣泛推廣應(yīng)用。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明通過改革培養(yǎng)的方法和培養(yǎng)基，突破生產(chǎn)大量小苗的瓶頸，提供一種白及假鱗莖切割組培育苗的方法，采用“原球莖分化→壯苗→假鱗莖切割→分化培養(yǎng)→生產(chǎn)苗”或“假鱗莖切割→分化培養(yǎng)→生產(chǎn)苗”的培養(yǎng)程序。同時(shí)，提供適用于上述育苗方法的培養(yǎng)基，從而有效實(shí)現(xiàn)縮短周期，提高成苗量和成苗質(zhì)量，并且使白及成苗下地移栽馴化的成活率顯著提高。
為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)：
一種白及原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基，其處方包括以下組成分（無特別說明，單位為mg/l）：
1、大量元素：硝酸鉀2700-2900、硫酸銨461-465、磷酸二氫鉀390-415、硫酸鎂180-190、氯化鈣164-166；
2、微量元素：硫酸錳22.0-22.5、硫酸鋅8.2-8.8、硼酸6.0-6.4、碘化鉀0.80-0.83、鉬酸鈉0.22-0.26、硫酸銅0.021-0.025、氯化鈷0.023-0.025；
3、鐵鹽：硫酸亞鐵27.2-27.8、edta37.0-37.43；
4、有機(jī)物：肌醇100-105、硫酸硫胺素50-55、硫酸吡哆醇0.8-1.2、煙酸0.3-0.5、甘氨酸1.8-2.1、甜菜堿500-520、氯化膽堿280-315、5-硝基愈創(chuàng)木酚鈉0.9-1.2、對(duì)硝基苯酚鈉1.8-2.2、鄰硝基苯酚鈉1.8-2.2；
5、添加物：agno32.85-3.10、蔗糖28-33g/l。
一種白及分化壯苗培養(yǎng)基，其處方包括以下組成分（無特別說明，單位為mg/l）：
1、大量元素：硝酸鉀2700-2900、硫酸銨461-465、磷酸二氫鉀390-415、硫酸鎂180-190、氯化鈣164-166；
2、微量元素：硫酸錳22.0-22.5、硫酸鋅8.2-8.8、硼酸6.0-6.4、碘化鉀0.80-0.83、鉬酸鈉0.22-0.26、硫酸銅0.021-0.025、氯化鈷0.023-0.025；
3、鐵鹽：硫酸亞鐵27.2-27.8、edta37.0-37.43；
4、有機(jī)物：肌醇100-105、硫酸硫胺素50-55、硫酸吡哆醇0.8-1.2、煙酸0.3-0.5、甘氨酸1.8-2.1、甜菜堿500-520、氯化膽堿280-315、5-硝基愈創(chuàng)木酚鈉0.9-1.2、對(duì)硝基苯酚鈉1.8-2.2、鄰硝基苯酚鈉1.8-2.2；
5、激素naa0.15-0.22
6、添加物：agno32.85-3.10、蔗糖18-22g/l。
上述培養(yǎng)基的ph值均控制在：5.5—5.8。
一種白及假鱗莖切割組培育苗的方法，包括以下步驟：
1）白及原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)小苗：取成熟的白及蒴果在新潔爾滅溶液中刷洗去灰土，置于超凈工作臺(tái)上，用0.2%升汞消毒15-20min，再用無菌水沖洗3-5次，將其用滅菌的濾紙吸干水分后，切去果實(shí)頂部，再?gòu)墓麑?shí)中部縱向剖開，將種子均勻的撒播到配制好的白及原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；播種后的白及原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基置于28℃、光照強(qiáng)度1500-2000lux、每天光照時(shí)間12小時(shí)的環(huán)境條件下進(jìn)行培養(yǎng)50-65天,得基部膨大呈球形假鱗莖的健壯小苗；
播種時(shí)注意播種間隙，采用稀播方式，不要播得太多，留出讓小苗生長(zhǎng)的空間，播的太密，小苗生長(zhǎng)過于纖弱，不利于后期培養(yǎng)；白及種子在上述適宜的培養(yǎng)條件下培養(yǎng)1天時(shí)，胚吸水膨大成球形，第二天胚細(xì)胞開始分裂，球形胚逐步變綠，5天后種子便開始萌發(fā)，種子萌發(fā)時(shí)形成小原球莖，原球莖細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)葉綠體；繼續(xù)發(fā)育15-20天時(shí)，頂端分生組織的一側(cè)分化出一片子葉，并在原球莖下部四周呈放射狀的分化出若干條纖細(xì)的假根，20天后在子葉相對(duì)的一面開始形成第一片真葉，在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上培養(yǎng)50-65天，便可以長(zhǎng)出3-5枚小葉片、高度達(dá)到5-7cm、基部膨大呈球形假鱗莖的健壯小苗。
2）壯苗培養(yǎng)：將步驟1）誘導(dǎo)培養(yǎng)的白及小苗及時(shí)的轉(zhuǎn)移到分化壯苗培養(yǎng)基上，在室溫28℃、光照強(qiáng)度2000-2500lux、每天光照12小時(shí)的條件下，培養(yǎng)50-55天，假鱗莖成熟，得帶有假鱗莖的白及小植株；可作為生產(chǎn)苗移栽馴化或作為增殖繁殖材料進(jìn)行假鱗莖增殖、再分化培養(yǎng)；
壯苗培養(yǎng)3天后可見白及小苗開始生長(zhǎng)，7天后葉片和莖迅速生長(zhǎng)，15天后，假鱗莖明顯增大，30-40天假鱗莖停止增大，植株體逐步趨向成熟，50-55天后少部分葉片開始發(fā)黃枯萎，此時(shí)的組培苗可作為生產(chǎn)苗下地移栽馴化或作為增殖培養(yǎng)的繁殖材料進(jìn)行假鱗莖增殖、再分化培養(yǎng)。
3）假鱗莖增殖培養(yǎng)：將已經(jīng)成熟的白及植株在無菌臺(tái)上剝?nèi)デo葉，切去根須，把假鱗莖轉(zhuǎn)移到新鮮的分化壯苗培養(yǎng)基上，在室溫28℃、光照強(qiáng)度2000-2500lux、每天光照12小時(shí)的條件下培養(yǎng)20-25天；
增殖培養(yǎng)過程中，假鱗莖在葉痕處分化出數(shù)個(gè)粗壯的不定芽，并迅速生長(zhǎng)，20-25天，分化的小苗可長(zhǎng)至3-5cm高，葉片4-5片。
4）再分化培養(yǎng)：在無菌臺(tái)上將長(zhǎng)有數(shù)個(gè)不定芽的假鱗莖進(jìn)行分割，每個(gè)不定芽帶一小塊假鱗莖母塊，然后植入新的分化壯苗培養(yǎng)基上，在室溫28℃、光照強(qiáng)度2000-2500lux、每天光照12小時(shí)的條件下培養(yǎng)45-50天后，假鱗莖成熟，得帶有假鱗莖的白及小植株，可作為生產(chǎn)苗移栽馴化或作為增殖繁殖材料進(jìn)行假鱗莖增殖、再分化培養(yǎng)。
本申請(qǐng)采用白及假鱗莖切割分化組培育苗，極大地提高了組培育苗的繁育效率，通過對(duì)長(zhǎng)有數(shù)個(gè)不定芽的假鱗莖進(jìn)行分割，繁育系數(shù)有效提高數(shù)倍，同時(shí)，后期可以直接采用成熟假鱗莖進(jìn)行增殖再分化培養(yǎng)，育苗周期得以極大縮短，有效突破生產(chǎn)大量白及小苗的瓶頸，使人工繁育成本極大降低，實(shí)現(xiàn)白及的大規(guī)模廣泛種植。
本申請(qǐng)的培養(yǎng)基，通過添加白及組培苗各發(fā)育時(shí)期所需要的有機(jī)物質(zhì)和不利于生長(zhǎng)發(fā)育有害物質(zhì)的抑制劑，有效促使了氨離子被植物體更加迅速的吸收利用，并減輕了培養(yǎng)基中氮濃度過高對(duì)白及組培苗產(chǎn)生的毒害作用。申請(qǐng)人之前采用傳統(tǒng)培養(yǎng)基，白及再分化培養(yǎng)時(shí)，切割后的小苗轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)基中，葉片很快變黃，申請(qǐng)人經(jīng)過研究分析，通過在培養(yǎng)基中加入一定量的agno3，從而有效改變?nèi)~片變黃衰老的問題，并有效促進(jìn)器官發(fā)生和體細(xì)胞胚胎發(fā)生。在原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基、分化壯苗培養(yǎng)基中分別加入適量的agno3能有效抑制原球莖增殖和壯苗培養(yǎng)過程中產(chǎn)生的乙烯，提高和改善了原球莖出苗的質(zhì)量，也提高了分化苗生長(zhǎng)效率，防止切割苗轉(zhuǎn)移后死亡的現(xiàn)象，成苗質(zhì)量也大為改善，同時(shí)還更進(jìn)一步地提高了組培苗出瓶移栽的成活率。
本申請(qǐng)中氯化膽堿（學(xué)名：2-羥乙基-三甲基氫氧化膽堿），維生素b族的一種，是一種植物光合作用促進(jìn)劑，較為廣譜的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑。氯化膽堿可以經(jīng)由植物的莖、葉、根吸收，然后較快的傳導(dǎo)到起作用的部位，其生理作用可促進(jìn)植物的光合作用，促進(jìn)根系發(fā)育，可使光合產(chǎn)物盡可能多的積累到塊莖、塊根和鱗莖中去。此外，它與激動(dòng)素、類生長(zhǎng)素混用，可加快其移動(dòng)，更有效地發(fā)揮激動(dòng)素、類生長(zhǎng)素的作用。在不同氣候、生態(tài)環(huán)境條件下效果穩(wěn)定，對(duì)塊根、塊莖、鱗莖、假鱗莖有明顯的膨大作用。
在誘導(dǎo)白及原球莖時(shí)加入所述配比的氯化膽堿，極大地提高了小苗基部圓球形假鱗莖的膨大生長(zhǎng)速度；壯苗培養(yǎng)時(shí)，加入適量的氯化膽堿，培養(yǎng)15天后，假鱗莖明顯增大，30-40天假鱗莖逐步趨向成熟，氯化膽堿有效使白及組織培養(yǎng)中假鱗莖迅速增大、增重。
硫胺素是白及組培苗發(fā)育生長(zhǎng)過程中極為敏感的物質(zhì)之一，研究中發(fā)現(xiàn)，野生狀態(tài)下的白及根有自我合成硫胺素的作用，相應(yīng)提高培養(yǎng)基中硫胺素的含量有利于白及組培苗的生長(zhǎng)。
本申請(qǐng)培養(yǎng)基中的甜菜堿是一種生物堿，其分子結(jié)構(gòu)、應(yīng)用效果與天然甜菜堿無明顯差別，屬于化學(xué)合成的天然物等同物（學(xué)名：三甲銨乙內(nèi)酯）。甜菜堿可有效維持細(xì)胞滲透壓，避免細(xì)胞質(zhì)高濃度無機(jī)離子對(duì)酶和代謝的毒害；有效降低膜脂過氧化程度，顯著降低根系中的na水比，將ca2+截留在根系，可有效提高根系抵抗鹽害的能力，同時(shí)，甜菜堿對(duì)逆境條件下對(duì)氣孔運(yùn)動(dòng)、呼吸作用及相關(guān)基因表達(dá)都有一定的調(diào)控作用。
本申請(qǐng)中通過一定量的鄰硝基苯酚鈉（分子式：c6h4no3na，相對(duì)分子量：161）、對(duì)硝基苯酚鈉（分子式：c6h4no3na，相對(duì)分子量：161）和5-硝基愈創(chuàng)木酚鈉（分子式：c7h6no4na，相對(duì)分子量：191）組成有機(jī)復(fù)合體復(fù)硝酚鈉，促進(jìn)植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)，它是一種強(qiáng)力細(xì)胞賦活劑，能夠增加原生質(zhì)膜的透性，與植物接觸后能迅速滲透到植物體內(nèi)，促進(jìn)細(xì)胞的原生質(zhì)流動(dòng)，提高細(xì)胞活力，加快植物的新存代謝作用，增強(qiáng)atp酶的活性，產(chǎn)生大量atp能量子，供給植物對(duì)營(yíng)養(yǎng)元素的可收能量，補(bǔ)充植物主動(dòng)可收所需要消耗的atp能量，促進(jìn)植物葉片變寬、變大、變厚，增加葉面對(duì)營(yíng)養(yǎng)元素的接觸面，提高葉片對(duì)營(yíng)養(yǎng)元素的可收率。通過在培養(yǎng)基中加入所述重量的復(fù)硝酚鈉，各時(shí)期的白及小苗轉(zhuǎn)移后，都能迅速生長(zhǎng)，縮短了緩苗的時(shí)間，促使植株快速健壯生長(zhǎng)。
實(shí)驗(yàn)證實(shí)：經(jīng)過改造的培養(yǎng)基對(duì)白及種子的萌發(fā)和小苗生長(zhǎng)以及假鱗莖的快速形成具有很好的促進(jìn)作用，種子的發(fā)芽率和胚狀體的生長(zhǎng)速度以及小苗假鱗莖形成和質(zhì)量都明顯高于其他常規(guī)培養(yǎng)基。
附圖說明
下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的說明：
圖1為本發(fā)明的培養(yǎng)工藝流程示意圖。
具體實(shí)施方式
參看圖1，以下結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明技術(shù)方案進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)闡述。
實(shí)施例一
本實(shí)施例的白及原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基，其處方包括以下組成分（無特別說明，單位為mg/l）：
1、大量元素：硝酸鉀2800、硫酸銨463、磷酸二氫鉀400、硫酸鎂185、氯化鈣166；
2、微量元素：硫酸錳22.3、硫酸鋅8.6、硼酸6.2、碘化鉀0.83、鉬酸鈉0.25、硫酸銅0.025、氯化鈷0.025；
3、鐵鹽：硫酸亞鐵27.8、edta37.3；
4、有機(jī)物：肌醇100、硫酸硫胺素50、硫酸吡哆醇1.0、煙酸0.5、甘氨酸2.0、甜菜堿500、氯化膽堿300、5-硝基愈創(chuàng)木酚鈉1.0、對(duì)硝基苯酚鈉2.0、鄰硝基苯酚鈉2.0；
5、添加物：agno33.0、蔗糖30g/l。
本實(shí)施例的白及分化壯苗培養(yǎng)基，其處方包括以下組成分（無特別說明，單位為mg/l）：
1、大量元素：硝酸鉀2800、硫酸銨463、磷酸二氫鉀400、硫酸鎂185、氯化鈣166；
2、微量元素：硫酸錳22.3、硫酸鋅8.6、硼酸6.2、碘化鉀0.83、鉬酸鈉0.25、硫酸銅0.025、氯化鈷0.025；
3、鐵鹽：硫酸亞鐵27.8、edta37.3；
4、有機(jī)物：肌醇100、硫酸硫胺素50、硫酸吡哆醇1.0、煙酸0.5、甘氨酸2.0、甜菜堿500、氯化膽堿300、5-硝基愈創(chuàng)木酚鈉1.0、對(duì)硝基苯酚鈉2.0、鄰硝基苯酚鈉2.0；
5、激素naa0.2；
6、添加物：agno33.0、蔗糖20g/l。
上述兩種培養(yǎng)基的ph值均為5.5。
本實(shí)施例的白及假鱗莖切割組培育苗的方法，包括以下步驟：
1）白及原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)小苗：取成熟的白及蒴果在新潔爾滅溶液中刷洗去灰土，置于超凈工作臺(tái)上，用0.2%升汞消毒15-20min，再用無菌水沖洗3-5次，將其用滅菌的濾紙吸干水分后，切去果實(shí)頂部，再?gòu)墓麑?shí)中部縱向剖開，將種子均勻的撒播到配制好的白及原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；播種后的白及原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基置于28℃、光照強(qiáng)度1800lux、每天光照時(shí)間12小時(shí)的環(huán)境條件下進(jìn)行培養(yǎng)55天,得基部膨大呈球形假鱗莖的健壯小苗；
白及種子培養(yǎng)5天后種子開始萌發(fā)，形成小原球莖，原球莖細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)葉綠體；繼續(xù)發(fā)育15天時(shí)，頂端分化出子葉，原球莖下部四周分化出若干假根，20天后在子葉相對(duì)的一面形成第一片真葉，培養(yǎng)55天時(shí)，長(zhǎng)出3-5枚小葉片、高度達(dá)到5-7cm、基部膨大呈球形假鱗莖的健壯小苗。
2）壯苗培養(yǎng)：將步驟1）誘導(dǎo)培養(yǎng)的白及小苗及時(shí)的轉(zhuǎn)移到分化壯苗培養(yǎng)基上，在室溫28℃、光照強(qiáng)度2200lux、每天光照12小時(shí)的條件下，培養(yǎng)50天，假鱗莖成熟，得帶有假鱗莖的白及小植株；
壯苗培養(yǎng)3天后白及小苗開始生長(zhǎng)，7天后葉片和莖迅速生長(zhǎng)，15天后，假鱗莖明顯增大36天假鱗莖停止增大，植株體逐步趨向成熟，50天后少部分葉片開始發(fā)黃枯萎。
3）假鱗莖增殖培養(yǎng)：將步驟2所得成熟白及植株在無菌臺(tái)上剝?nèi)デo葉，切去根須，把假鱗莖轉(zhuǎn)移到新鮮的分化壯苗培養(yǎng)基上，在室溫28℃，光照強(qiáng)度2200lux，每天光照12小時(shí)條件下培養(yǎng)20天，假鱗莖在葉痕處分化出4-8個(gè)不等的粗壯不定芽，并迅速生長(zhǎng)，20天時(shí)，分化的不定芽長(zhǎng)至3-5cm高的小苗，葉片4-5片。
4）再分化培養(yǎng)：在無菌臺(tái)上將長(zhǎng)有數(shù)個(gè)不定芽的假鱗莖進(jìn)行分割，每個(gè)不定芽帶部分假鱗莖母塊，然后植入新的分化壯苗培養(yǎng)基上，在室溫28℃，光照強(qiáng)度2200lux，每天光照12小時(shí)條件下培養(yǎng)50天后，假鱗莖成熟，得帶有假鱗莖的白及小植株，此時(shí)，作為生產(chǎn)苗移栽馴化。
本實(shí)施例從種子到培養(yǎng)到帶有假鱗莖的白及小植株用時(shí)105天，增殖培養(yǎng)和再分化培養(yǎng)用時(shí)70天，最終作為生產(chǎn)苗移栽馴化總共用時(shí)175天，誘導(dǎo)培養(yǎng)的小苗較傳統(tǒng)培養(yǎng)基培育的小苗平均重1.4倍，生產(chǎn)苗較傳統(tǒng)培養(yǎng)基培育的生產(chǎn)苗平均重1.5倍，移栽馴化成活率達(dá)98.2%。
實(shí)施例二
本實(shí)施例的白及原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基，其處方包括以下組成分（無特別說明，單位為mg/l）：
1、大量元素：硝酸鉀2700、硫酸銨461、磷酸二氫鉀390、硫酸鎂180、氯化鈣164；
2、微量元素：硫酸錳22.0、硫酸鋅8.2、硼酸6.0、碘化鉀0.80、鉬酸鈉0.22、硫酸銅0.021、氯化鈷0.023；
3、鐵鹽：硫酸亞鐵27.2、edta37.0；
4、有機(jī)物：肌醇100、硫酸硫胺素50、硫酸吡哆醇0.80、煙酸0.3、甘氨酸1.8、甜菜堿500、氯化膽堿280、5-硝基愈創(chuàng)木酚鈉0.9、對(duì)硝基苯酚鈉1.8、鄰硝基苯酚鈉1.8；
5、添加物：agno32.85、蔗糖28g/l。
本實(shí)施例的白及分化壯苗培養(yǎng)基，其處方包括以下組成分（無特別說明，單位為mg/l）：
1、大量元素：硝酸鉀2700、硫酸銨461、磷酸二氫鉀390、硫酸鎂180、氯化鈣164；
2、微量元素：硫酸錳22.0、硫酸鋅8.2、硼酸6.0、碘化鉀0.80、鉬酸鈉0.22、硫酸銅0.021、氯化鈷0.023；
3、鐵鹽：硫酸亞鐵27.2、edta37.0；
4、有機(jī)物：肌醇100、硫酸硫胺素50、硫酸吡哆醇0.80、煙酸0.3、甘氨酸1.8、甜菜堿500、氯化膽堿280、5-硝基愈創(chuàng)木酚鈉0.9、對(duì)硝基苯酚鈉1.8、鄰硝基苯酚鈉1.8；
5、激素naa0.15；
6、添加物：agno33.0、蔗糖20g/l。
上述兩種培養(yǎng)基的ph值均為5.8。
本實(shí)施例的白及假鱗莖切割組培育苗的方法，包括以下步驟：
1）白及原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)小苗：取成熟的白及蒴果在新潔爾滅溶液中刷洗去灰土，置于超凈工作臺(tái)上，用0.2%升汞消毒15-20min，再用無菌水沖洗3-5次，將其用滅菌的濾紙吸干水分后，切去果實(shí)頂部，再?gòu)墓麑?shí)中部縱向剖開，將種子均勻的撒播到配制好的白及原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；播種后的白及原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基置于28℃、光照強(qiáng)度1500lux、每天光照時(shí)間12小時(shí)的環(huán)境條件下進(jìn)行培養(yǎng)65天,得基部膨大呈球形假鱗莖的健壯小苗，葉片3-5枚、高度達(dá)到5-7cm。
2）壯苗培養(yǎng)：將步驟1）誘導(dǎo)培養(yǎng)的白及小苗及時(shí)的轉(zhuǎn)移到分化壯苗培養(yǎng)基上，在室溫28℃、光照強(qiáng)度2000lux、每天光照12小時(shí)的條件下，培養(yǎng)45天，假鱗莖成熟，得帶有假鱗莖的白及小植株，此時(shí)，作為生產(chǎn)苗移栽馴化。
本實(shí)施例從種子到培養(yǎng)到帶有假鱗莖的白及小植作為生產(chǎn)苗移栽馴化株用時(shí)110天，誘導(dǎo)培養(yǎng)的小苗較傳統(tǒng)培養(yǎng)基培育的小苗平均重1.1倍，移栽馴化成活率達(dá)97.9%。
實(shí)施例三
本實(shí)施例的白及分化壯苗培養(yǎng)基，其處方包括以下組成分（無特別說明，單位為mg/l）：
1、大量元素：硝酸鉀2900、硫酸銨465、磷酸二氫鉀415、硫酸鎂190、氯化鈣166；
2、微量元素：硫酸錳22.5、硫酸鋅8.8、硼酸6.4、碘化鉀0.83、鉬酸鈉0.26、硫酸銅0.025、氯化鈷0.025；
3、鐵鹽：硫酸亞鐵27.8、edta37.43；
4、有機(jī)物：肌醇105、硫酸硫胺素55、硫酸吡哆醇1.2、煙酸0.5、甘氨酸2.1、甜菜堿520、氯化膽堿315、5-硝基愈創(chuàng)木酚鈉1.2、對(duì)硝基苯酚鈉2.2、鄰硝基苯酚鈉2.2；
5、激素naa0.22；
6、添加物：agno33.1、蔗糖22g/l。
上述兩種培養(yǎng)基的ph值均為5.7。
本實(shí)施例的白及假鱗莖切割組培育苗的方法，包括以下步驟：
1）假鱗莖增殖培養(yǎng)：將已經(jīng)成熟的白及植株在無菌臺(tái)上剝?nèi)デo葉，切去根須，把假鱗莖轉(zhuǎn)移到新鮮的分化壯苗培養(yǎng)基上，在室溫28℃，光照強(qiáng)度2000lux，每天光照12小時(shí)條件下培養(yǎng)25天，假鱗莖在葉痕處分化出4-8個(gè)不等的粗壯不定芽，并迅速生長(zhǎng)，25天時(shí)，分化的不定芽長(zhǎng)至3-5cm高的小苗，葉片4-5片；
2）再分化培養(yǎng)：在無菌臺(tái)上將長(zhǎng)有數(shù)個(gè)不定芽的假鱗莖進(jìn)行分割，每個(gè)不定芽帶一小塊假鱗莖母塊，然后植入新的分化壯苗培養(yǎng)基上，在室溫28℃，光照強(qiáng)度2000lux，每天光照時(shí)間12小時(shí)條件下培養(yǎng)50天后，假鱗莖成熟，得帶有假鱗莖的白及小植株，作為生產(chǎn)苗移栽馴化。
本實(shí)施例利用成熟的白及植株的假鱗莖，通過增殖培養(yǎng)和再分化培養(yǎng)，獲得作為生產(chǎn)苗移栽馴化白及苗，用時(shí)75天，生產(chǎn)苗較傳統(tǒng)培養(yǎng)基培育的生產(chǎn)苗平均重1.3倍，移栽馴化成活率達(dá)98.3%。
實(shí)施例四
本實(shí)施例的白及原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基，其處方包括以下組成分（無特別說明，單位為mg/l）：
1、大量元素：硝酸鉀2850、硫酸銨462、磷酸二氫鉀405、硫酸鎂188、氯化鈣165；
2、微量元素：硫酸錳22.2、硫酸鋅8.5、硼酸6.3、碘化鉀0.82、鉬酸鈉0.24、硫酸銅0.024、氯化鈷0.024；
3、鐵鹽：硫酸亞鐵27.4、edta37.26；
4、有機(jī)物：肌醇102、硫酸硫胺素53、硫酸吡哆醇1.1、煙酸0.4、甘氨酸2.0、甜菜堿510、氯化膽堿305、5-硝基愈創(chuàng)木酚鈉1.1、對(duì)硝基苯酚鈉2.2、鄰硝基苯酚鈉2.2；
5、添加物：agno32.95、蔗糖31g/l。
本實(shí)施例的白及分化壯苗培養(yǎng)基，其處方包括以下組成分（無特別說明，單位為mg/l）：
1、大量元素：硝酸鉀2850、硫酸銨462、磷酸二氫鉀405、硫酸鎂188、氯化鈣165；
2、微量元素：硫酸錳22.2、硫酸鋅8.5、硼酸6.3、碘化鉀0.82、鉬酸鈉0.24、硫酸銅0.024、氯化鈷0.024；
3、鐵鹽：硫酸亞鐵27.4、edta37.26；
4、有機(jī)物：肌醇102、硫酸硫胺素53、硫酸吡哆醇1.1、煙酸0.4、甘氨酸2.0、甜菜堿510、氯化膽堿305、5-硝基愈創(chuàng)木酚鈉1.1、對(duì)硝基苯酚鈉2.2、鄰硝基苯酚鈉2.2；
5、激素naa0.17；
6、添加物：agno32.85、蔗糖18g/l。
上述兩種培養(yǎng)基的ph值均為5.6。
本實(shí)施例的白及假鱗莖切割組培育苗的方法，包括以下步驟：
1）白及原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)小苗：取成熟的白及蒴果在新潔爾滅溶液中刷洗去灰土，置于超凈工作臺(tái)上，用0.2%升汞消毒15-20min，再用無菌水沖洗3-5次，將其用滅菌的濾紙吸干水分后，切去果實(shí)頂部，再?gòu)墓麑?shí)中部縱向剖開，將種子均勻的撒播到配制好的白及原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；播種后的白及原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基置于28℃、光照強(qiáng)度2000lux、每天光照時(shí)間12小時(shí)的環(huán)境條件下進(jìn)行培養(yǎng)58天,得基部膨大呈球形假鱗莖的健壯小苗；白及種子培養(yǎng)5天后種子開始萌發(fā)，形成小原球莖，原球莖細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)葉綠體；繼續(xù)發(fā)育15天時(shí)，頂端分化出子葉，原球莖下部四周分化出若干假根，20天后在子葉相對(duì)的一面形成第一片真葉，培養(yǎng)58天時(shí)，長(zhǎng)成3-5枚小葉片、高度達(dá)到5-7cm、基部膨大呈球形假鱗莖的健壯小苗。
2）壯苗培養(yǎng)：將步驟1）誘導(dǎo)培養(yǎng)的白及小苗及時(shí)的轉(zhuǎn)移到分化壯苗培養(yǎng)基上，在室溫28℃、光照強(qiáng)度2500lux、每天光照12小時(shí)的條件下，培養(yǎng)55天，假鱗莖成熟，得帶有假鱗莖的白及小植株，壯苗培養(yǎng)3天后白及小苗開始生長(zhǎng)，7天后葉片和莖迅速生長(zhǎng)，15天后，假鱗莖明顯增大36天假鱗莖停止增大，植株體逐步趨向成熟，50天后少部分葉片開始發(fā)黃枯萎，一半白及小植株用于生產(chǎn)苗移栽馴化，另一半作為增殖培養(yǎng)的繁殖材料進(jìn)行假鱗莖增殖、再分化培養(yǎng)。
3）假鱗莖增殖培養(yǎng)：將步驟2所得用作增殖培養(yǎng)的繁殖材料的成熟白及植株在無菌臺(tái)上剝?nèi)デo葉，切去根須，把假鱗莖轉(zhuǎn)移到新鮮的分化壯苗培養(yǎng)基上，在室溫28℃，光照強(qiáng)度2500lux，每天光照時(shí)間12小時(shí)條件下培養(yǎng)22天，假鱗莖在葉痕處分化出4-8個(gè)不等的粗壯不定芽，并迅速生長(zhǎng)，22天時(shí)，分化的不定芽長(zhǎng)至3-5cm高的小苗，葉片4-5片。
4）再分化培養(yǎng)：在無菌臺(tái)上將長(zhǎng)有數(shù)個(gè)不定芽的假鱗莖進(jìn)行分割，每個(gè)不定芽帶部分假鱗莖母塊，然后植入新的分化壯苗培養(yǎng)基上，在室溫28℃，光照強(qiáng)度2500lux，每天光照時(shí)間12小時(shí)條件下培養(yǎng)45天后，假鱗莖成熟，得帶有假鱗莖的白及小植株，此時(shí)，作為生產(chǎn)苗移栽馴化。
本實(shí)施例從種子到培養(yǎng)到帶有假鱗莖的白及小植株用時(shí)108天，增殖培養(yǎng)和再分化培養(yǎng)用時(shí)67天，誘導(dǎo)培養(yǎng)的小苗較傳統(tǒng)培養(yǎng)基培育的小苗平均重1.2倍，生產(chǎn)苗較傳統(tǒng)培養(yǎng)基培育的生產(chǎn)苗平均重1.5倍，壯苗培養(yǎng)后移栽馴化的白及小植株成活率達(dá)98.5%，通過增殖培養(yǎng)和再分化培養(yǎng)后移栽馴化的白及小植株成活率達(dá)98.6%。
本發(fā)明的白及假鱗莖切割組培育苗的方法成苗周期短，從種子到培養(yǎng)到帶有假鱗莖的白及小植株用時(shí)較采用傳統(tǒng)培養(yǎng)基縮短10-20天，增殖培養(yǎng)和再分化培養(yǎng)較采用傳統(tǒng)培養(yǎng)基縮短15-25天，若直接采用成熟白及假鱗莖進(jìn)行增殖培養(yǎng)和再分化培養(yǎng)，可極大縮短育苗周期。成苗質(zhì)量高，植株健壯，誘導(dǎo)培養(yǎng)的小苗較傳統(tǒng)培養(yǎng)基培育的小苗平均重1.2倍，生產(chǎn)苗較傳統(tǒng)培養(yǎng)基培育的生產(chǎn)苗平均重1.4倍，下地移栽馴化的成活率普遍在98-98.5%。