本發(fā)明屬于生物領(lǐng)域，具體涉及一種珍稀瀕危植物蒙古沙冬青離體快繁的方法。

背景技術(shù)：

蒙古沙冬青，又稱大沙冬青，屬豆科沙冬青屬。主要分布于內(nèi)蒙古、甘肅、寧夏等地的荒漠地區(qū)。它對環(huán)境條件適應(yīng)能力極強，是我國北方荒漠地區(qū)唯一一種強旱生常綠闊葉灌木，也是阿拉善荒漠區(qū)特有的建群植物，對防沙固沙、防止水土流失、維持當?shù)厣鷳B(tài)平衡起著重要的作用，具有重要的經(jīng)濟意義和資源價值。但蒙古沙冬青狹小的分布范圍和近年來人類活動的破壞，其數(shù)量正在不斷減少，現(xiàn)已瀕臨滅絕，被列為國家三級保護植物。蒙古沙冬青自然更新力弱，實生苗移植生根困難，因此采用組織培養(yǎng)的方式進行離體快速繁殖是保護蒙古沙冬青這種珍稀瀕危種質(zhì)資源、解決該物種自然更新能力弱、繁殖困難等問題的有效手段之一。

蒙古沙冬青的離體培養(yǎng)技術(shù)始于上世紀80年代。一般采用無菌育苗的方式獲得子葉、胚軸或小莖段，選用不同的培養(yǎng)基進行愈傷組織與芽的誘導(dǎo)分化。最早是在1988年，丁曉莉誘導(dǎo)出了愈傷和芽點。慈忠玲等在1994年對愈傷組織和體細胞胚發(fā)生過程做過研究，但體細胞胚中途退化，未能發(fā)育為完整的植株。1997年蔣志榮等選用無菌苗莖段進行試驗,得到了比較合適的誘導(dǎo)芽和根的激素配比。2000年，何麗君等通過對沙冬青無菌實生苗不同部位的外植體進行愈傷組織誘導(dǎo)，直接得到了再生植株，轉(zhuǎn)入到生根培養(yǎng)基中形成完整植株。

近年，有王方琳等在2016年以蒙古沙冬青無菌苗的子葉、莖段為外植體材料，研究了不同激素配比的培養(yǎng)基對不同外植體愈傷組織培養(yǎng)、叢生芽增殖及生根培養(yǎng)的影響，篩選出了適宜各階段培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基配方。通過部分組織如將子葉切成小片進行愈傷組織培養(yǎng)，再進行芽的誘導(dǎo)與生根以體細胞胚胎發(fā)生的方式進行的再生植株誘導(dǎo)，在培養(yǎng)過程中存在許多問題如愈傷組織不易分化且褐化嚴重，不能多次繼代，分化的芽有玻璃化現(xiàn)象，有的雖然也能壯苗生根，卻達不到快速繁育等問題。迄今，針對蒙古沙冬青沒有經(jīng)過器官培養(yǎng)途徑進行離體快速繁殖的研究報道。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種珍稀瀕危植物蒙古沙冬青離體快繁的方法，以解決現(xiàn)有方法存在愈傷組織誘導(dǎo)中褐化嚴重、不易分化的問題。

為了使蒙古沙冬青這種生態(tài)意義巨大的樹種在野外繁殖資源缺少的情況下，能夠成功進行繁殖使之能夠保存和可持續(xù)利用，并能夠避免傳統(tǒng)的離體培養(yǎng)中存在的諸多問題，縮短培養(yǎng)周期，研發(fā)了本發(fā)明珍稀瀕危植物蒙古沙冬青離體快繁的方法。

本發(fā)明技術(shù)方案如下：一種珍稀瀕危植物蒙古沙冬青離體快繁的方法，包括如下步驟：

a、蒙古沙冬青外植體的獲得：

取消毒的蒙古沙冬青種子，在無菌條件下接種到含2.0mg/l6-ba的ms培養(yǎng)基中，黑暗培養(yǎng)7-11d后，切取萌發(fā)幼苗的兩片子葉節(jié)作為外植體；

b、叢生芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)：將所述步驟a中得到的外植體近軸面朝上，傾斜插入b5培養(yǎng)基中，黑暗培養(yǎng)，然后用輔助光誘導(dǎo)15—20d；

c、叢生芽的伸長培養(yǎng)：

從子葉節(jié)處誘導(dǎo)出叢生芽后，剔除剩余子葉，轉(zhuǎn)接于b5培養(yǎng)基中，黑暗培養(yǎng)，然后用輔助光下伸長培養(yǎng)20—25d；

d、生根培養(yǎng)：

將所述步驟c中長度為2-3cm的叢生芽單株切下轉(zhuǎn)接到b5培養(yǎng)基中培養(yǎng)7-10d后，轉(zhuǎn)接入b5培養(yǎng)基生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)20—30d；

e、擴大繁殖：

切割所述步驟d中獲得的完整植株的帶腋芽的莖段，轉(zhuǎn)入到含1.0mg/l6-ba和0.2-0.3mg/liaa的b5培養(yǎng)基，黑暗培養(yǎng)，然后用輔助光下伸長培養(yǎng)20—25d；待植株生長到2-3cm，轉(zhuǎn)接入含1.0-2.0mg/liba的1/2b5培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根30—40d。

進一步的，所述步驟a蒙古沙冬青外植體的獲得具體步驟為，取萌發(fā)的幼苗，上胚軸粗度為3-5mm，保留子葉近胚軸的分生組織部分2-5mm和上胚軸2-4mm，切去了其余部分，然后在兩片子葉中間沿胚軸縱向切開，去掉了腋芽，在子葉與胚軸交接處切開2—4個傷口，得到兩個子葉節(jié)外植體。

進一步的，所述步驟a、步驟b和步驟c中黑暗培養(yǎng)溫度為，白天22-26℃，夜間17-21℃。

進一步的，所述步驟b、步驟c、步驟d、步驟e中黑暗培養(yǎng)時間為5-7d。

進一步的，所述步驟b中叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為含1.0mg/l6-ba的b5培養(yǎng)基。

進一步的，所述步驟b和c中輔助光的光周期為14h/d，光強為1000-1500lux。

進一步的，所述步驟c中叢生芽特征為，芽叢生，芽數(shù)清晰，芽平均長約0.3-0.5mm。

進一步的，所述步驟c中伸長培養(yǎng)基為含1.0mg/l6-ba和0.2-0.3mg/liaa的b5培養(yǎng)基。

進一步的，所述步驟d中叢生芽的特征為：叢生芽的平均長度為2-3cm。

進一步的，所述步驟d中生根培養(yǎng)基為含1.0-2.0mg/liba的1/2b5培養(yǎng)基。

本發(fā)明的優(yōu)點如下：

（1）本發(fā)明與現(xiàn)有的蒙古沙冬青離體培養(yǎng)相比，取子葉節(jié)這個部位直接進行叢生芽的誘導(dǎo)，再生根。這個過程不發(fā)生愈傷組織從而減少了愈傷組織誘導(dǎo)的步驟，通過子葉節(jié)直接培育成不定芽，極大地縮短了離體培養(yǎng)的時間，整個過程從種子萌發(fā)、子葉節(jié)的獲得、叢生芽的誘導(dǎo)與伸長到生根僅需79d。

（2）、在蒙古沙冬青種子萌發(fā)初期，施加外源激素6-ba，可以有效地刺激子葉節(jié)處潛在的分生細胞不斷分裂并打破頂端優(yōu)勢，使子葉節(jié)膨大增粗而有利于叢生芽的形成。

（3)、選取萌發(fā)7-11d的種子，胚軸較粗壯，很容易從中軸線分離，組織分裂能力最強更有利于叢生芽的形成。

（4）、叢生芽誘導(dǎo)、伸長培養(yǎng)步驟選用了b5培養(yǎng)基，可以極大地減輕蒙古沙冬青離體快繁過程中出現(xiàn)的褐化現(xiàn)象。

（5)、叢生芽誘導(dǎo)、伸長培養(yǎng)、生根培養(yǎng)步驟均采用黑暗培養(yǎng)5-7d后人工輔助光培養(yǎng)，可以極大地減輕每次轉(zhuǎn)換培養(yǎng)基所引起的褐化現(xiàn)象。

（6）、經(jīng)過叢生芽誘導(dǎo)、伸長、生根獲得的蒙古沙冬青完整植株長出的新的帶腋芽的莖段，可再次伸長培養(yǎng)并誘導(dǎo)生根形成完整植株，從而達到了快速擴大繁殖的目的。

具體實施方式

以下的實施例可以進一步說明本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。

實施例中ms、b5培養(yǎng)基為現(xiàn)有產(chǎn)品。

實施例1

（1）蒙古沙冬青外植體的獲得：將經(jīng)過常規(guī)方法消毒過的蒙古沙冬青種子接種到含有2.0mg/l6-ba的ms培養(yǎng)基中，黑暗培養(yǎng)7-11d后，取萌發(fā)的幼苗，上胚軸粗度為3-5mm，保留子葉近胚軸的分生組織部分2-5mm和上胚軸2-4mm，切去其余部分，然后在兩片子葉中間沿胚軸縱向切開，去掉腋芽，用解剖刀在子葉與胚軸交接處切開2—4個傷口，得到兩個子葉節(jié)外植體。

（2）叢生芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)：將子葉節(jié)的近軸面朝上，傾斜45℃斜插入含1.0mg/l6-ba的b5培養(yǎng)基中，黑暗誘導(dǎo)5-7d，培養(yǎng)溫度白天22-26℃，夜間17-21℃，然后人工輔助光誘導(dǎo)15d，叢生芽誘導(dǎo)率78.3%，平均芽數(shù)2.6個。

（3)叢生芽的伸長培養(yǎng)：待子葉節(jié)出叢生芽長度為0.3-0.5mm時，剔除剩余子葉，轉(zhuǎn)接于含1.0mg/l6-ba和0.2-0.3mg/liaa的b5培養(yǎng)基中，黑暗誘導(dǎo)5-7d，培養(yǎng)溫度白天22-26℃，夜間17-21℃，然后人工輔助光誘導(dǎo)20d，叢生芽伸長率60.7%。

（4)生根培養(yǎng)：待叢生芽伸長至2-3cm時，單株切下轉(zhuǎn)接到b5培養(yǎng)基中培養(yǎng)7-10d后，轉(zhuǎn)接入含1.0-2.0mg/liba的1/2b5培養(yǎng)基中誘導(dǎo)20d，生根率達53.1%，平均生根數(shù)2.3條。

（5）擴大繁殖：切割獲得的完整植株的帶腋芽的莖段，轉(zhuǎn)入到含1.0mg/l6-ba和0.2-0.3mg/liaa的b5培養(yǎng)基，黑暗培養(yǎng)5-7d后，人工輔助光下伸長培養(yǎng)20d，伸長率89.8%。待植株生長到2-3cm，轉(zhuǎn)接入含1.0-2.0mg/liba的1/2b5培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根30d，生根率88.2%。

實施例2

與實施例1不同之處在于,步驟（2）叢生芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)中輔助光誘導(dǎo)20d。

實施例3

與實施例1不同之處在于,步驟（3)叢生芽的伸長培養(yǎng)中輔助光誘導(dǎo)20d。

將子葉節(jié)的近軸面朝上，傾斜45℃斜插入含1.0mg/l6-ba的b5培養(yǎng)基中，黑暗誘導(dǎo)5-7d，培養(yǎng)溫度白天22-26℃，夜間17-21℃，然后人工叢生芽誘導(dǎo)率78.3%，平均芽數(shù)2.6個。

實施例4

與實施例1不同之處在于,步驟（4)生根培養(yǎng)中轉(zhuǎn)接入b5培養(yǎng)基中誘導(dǎo)30d。

實施例5

與實施例1不同之處在于,步驟（5）擴大繁殖中黑暗培養(yǎng)后用輔助光下伸長培養(yǎng)25d，轉(zhuǎn)接入b5培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根40d。

為證明本發(fā)明效果，特作出以下16個對比例：

對比例1：將經(jīng)過常規(guī)方法消毒過的蒙古沙冬青種子接種到ms培養(yǎng)基中，黑暗培養(yǎng)7-11d后取萌發(fā)的幼苗，獲得子葉節(jié)外植體的方法與實施例1相同。將子葉節(jié)的近軸面朝上，傾斜45℃斜插入含1.0mg/l6-ba的b5培養(yǎng)基中，黑暗誘導(dǎo)5-7d后人工輔助光誘導(dǎo)15d，叢生芽誘導(dǎo)率18.5%，平均芽數(shù)0.4個。

對比例2

將經(jīng)過常規(guī)方法消毒過的蒙古沙冬青種子接種到含有1.0mg/l6-ba的ms培養(yǎng)基中，黑暗培養(yǎng)7-11d后取萌發(fā)的幼苗，獲得子葉節(jié)外植體的方法與實施例1相同。將子葉節(jié)的近軸面朝上，傾斜45℃斜插入含1.0mg/l6-ba的b5培養(yǎng)基中，黑暗誘導(dǎo)5-7d后人工輔助光誘導(dǎo)15d，叢生芽誘導(dǎo)率36.7%，平均芽數(shù)1.48個。

對比例3

將經(jīng)過常規(guī)方法消毒過的蒙古沙冬青種子接種到含有3.0mg/l6-ba的ms培養(yǎng)基中，黑暗培養(yǎng)7-11d后取萌發(fā)的幼苗，獲得子葉節(jié)外植體的方法與實施例1相同。將子葉節(jié)的近軸面朝上，傾斜45℃斜插入含1.0mg/l6-ba的b5培養(yǎng)基中，黑暗誘導(dǎo)5-7d后人工輔助光誘導(dǎo)15d，叢生芽誘導(dǎo)率79.6%，平均芽數(shù)2.8個。

對比例4

將經(jīng)過常規(guī)方法消毒過的蒙古沙冬青種子接種到含有5.0mg/l6-ba的ms培養(yǎng)基中，黑暗培養(yǎng)7-11d后取萌發(fā)的幼苗，獲得子葉節(jié)外植體的方法與實施例1相同。將子葉節(jié)的近軸面朝上，傾斜45℃斜插入含1.0mg/l6-ba的b5培養(yǎng)基中，黑暗誘導(dǎo)5-7d后人工輔助光誘導(dǎo)15d，叢生芽誘導(dǎo)率79.3%，平均芽數(shù)5.2個。

對比例5

將經(jīng)過常規(guī)方法消毒過的蒙古沙冬青種子接種到含有2.0mg/l6-ba的ms培養(yǎng)基中，黑暗培養(yǎng)1-5d后取萌發(fā)的幼苗，獲得子葉節(jié)外植體的方法與實施例1相同。將子葉節(jié)的近軸面朝上，傾斜45℃斜插入含1.0mg/l6-ba的b5培養(yǎng)基中，黑暗誘導(dǎo)5-7d后人工輔助光誘導(dǎo)15d，叢生芽誘導(dǎo)率26.9%，平均芽數(shù)2個。

對比例6

將經(jīng)過常規(guī)方法消毒過的蒙古沙冬青種子接種到含有2.0mg/l6-ba的ms培養(yǎng)基中，黑暗培養(yǎng)13-15d后取萌發(fā)的幼苗，獲得子葉節(jié)外植體的方法與實施例1相同。將子葉節(jié)的近軸面朝上，傾斜45℃斜插入含1.0mg/l6-ba的b5培養(yǎng)基中，黑暗誘導(dǎo)5-7d后人工輔助光誘導(dǎo)15d，叢生芽誘導(dǎo)率39.3%，平均芽數(shù)1.72個。

對比例7

將經(jīng)過常規(guī)方法消毒過的蒙古沙冬青種子接種到含有2.0mg/l6-ba的ms培養(yǎng)基中，黑暗培養(yǎng)7-11d后取萌發(fā)的幼苗，獲得子葉節(jié)外植體的方法與實施例1相同。將子葉節(jié)的近軸面朝上，傾斜45℃斜插入含1.0mg/l6-ba的ms培養(yǎng)基中，黑暗誘導(dǎo)5-7d后人工輔助光誘導(dǎo)15d，叢生芽誘導(dǎo)率76.6%，平均芽數(shù)2.5個。

對比例8

將經(jīng)過常規(guī)方法消毒過的蒙古沙冬青種子接種到含有2.0mg/l6-ba的ms培養(yǎng)基中，黑暗培養(yǎng)7-11d后取萌發(fā)的幼苗，獲得子葉節(jié)外植體的方法與實施例1相同。將子葉節(jié)的近軸面朝上，傾斜45℃斜插入含0.5mg/l6-ba的b5培養(yǎng)基中，黑暗誘導(dǎo)5-7d后人工輔助光誘導(dǎo)15d，叢生芽誘導(dǎo)率73.9%，平均芽數(shù)1.45個。

對比例9

將經(jīng)過常規(guī)方法消毒過的蒙古沙冬青種子接種到含有2.0mg/l6-ba的ms培養(yǎng)基中，黑暗培養(yǎng)7-11d后取萌發(fā)的幼苗，獲得子葉節(jié)外植體的方法與實施例1相同。將子葉節(jié)的近軸面朝上，傾斜45℃斜插入含1.5mg/l6-ba的b5培養(yǎng)基中，黑暗誘導(dǎo)5-7d后人工輔助光誘導(dǎo)15d，叢生芽誘導(dǎo)率78.9%，平均芽數(shù)3.4個。

對比例10

將經(jīng)過常規(guī)方法消毒過的蒙古沙冬青種子接種到含有2.0mg/l6-ba的ms培養(yǎng)基中，黑暗培養(yǎng)7-11d后取萌發(fā)的幼苗，獲得子葉節(jié)外植體的方法與實施例1相同。將子葉節(jié)的近軸面朝上，傾斜45℃斜插入含2.5mg/l6-ba的b5培養(yǎng)基中，黑暗誘導(dǎo)5-7d后人工輔助光誘導(dǎo)15d，叢生芽誘導(dǎo)率79.6%，平均芽數(shù)4.3個。

對比例11

經(jīng)過種子萌發(fā)、叢生芽誘導(dǎo)的蒙古沙冬青叢生芽（方法和條件與實施例1相同），與實施例1的區(qū)別在于待子葉節(jié)出叢生芽長度為0.3-0.5mm時，剔除剩余子葉，轉(zhuǎn)接于含1.0mg/l6-ba和0.1-0.3mg/lga3的b5培養(yǎng)基中，黑暗誘導(dǎo)5-7d后人工輔助光誘導(dǎo)20d，叢生芽伸長率18.5%。

對比例12

經(jīng)過種子萌發(fā)、叢生芽誘導(dǎo)的蒙古沙冬青叢生芽（方法和條件與實施例1相同），與實施例1的區(qū)別在于待子葉節(jié)出叢生芽長度為0.3-0.5mm時，剔除剩余子葉，轉(zhuǎn)接于含1.0mg/l6-ba和0.5mg/lga3的b5培養(yǎng)基中，黑暗誘導(dǎo)5-7d后人工輔助光誘導(dǎo)20d，叢生芽伸長率5.0%。

對比例13

經(jīng)過種子萌發(fā)、叢生芽誘導(dǎo)與伸長后的蒙古沙冬青叢生芽（方法和條件與實施例1相同），與實施例1的區(qū)別在于待叢生芽伸長至2-3cm時，單株切下轉(zhuǎn)接到b5培養(yǎng)基中培養(yǎng)7-10d后，轉(zhuǎn)接入含0.5mg/liba的1/2b5培養(yǎng)基中誘導(dǎo)20d，生根率達40.7%，平均生根數(shù)1條。

對比例14

經(jīng)過種子萌發(fā)、叢生芽誘導(dǎo)與伸長后的蒙古沙冬青叢生芽（方法和條件與實施例1相同），與實施例1的區(qū)別在于待叢生芽伸長至2-3cm時，單株切下轉(zhuǎn)接到b5培養(yǎng)基中培養(yǎng)7-10d后，轉(zhuǎn)接入含1.0-2.0mg/liaa的1/2b5培養(yǎng)基中誘導(dǎo)20d，生根率達28.9%，平均生根數(shù)1條。

對比例15

經(jīng)過種子萌發(fā)、叢生芽誘導(dǎo)與伸長后的蒙古沙冬青叢生芽（方法和條件與實施例1相同），與實施例1的區(qū)別在于待叢生芽伸長至2-3cm時，單株切下轉(zhuǎn)接到b5培養(yǎng)基中培養(yǎng)7-10d后，轉(zhuǎn)接入含1.0-2.0mg/lnaa的1/2b5培養(yǎng)基中誘導(dǎo)20d，生根率達30.63%，平均生根數(shù)1.2條。

對比例16

經(jīng)過種子萌發(fā)、叢生芽誘導(dǎo)與伸長后的蒙古沙冬青叢生芽（方法和條件與實施例1相同），與實施例1的區(qū)別在于待叢生芽伸長至2-3cm時，單株切下轉(zhuǎn)接到b5培養(yǎng)基中培養(yǎng)7-10d后，轉(zhuǎn)接入含1.5-2.0mg/liaa和0.5mg/lnaa的1/2b5培養(yǎng)基中誘導(dǎo)20d，生根率達42.6%，平均生根數(shù)1.8條。

對比例1-4說明，與實施例1將蒙古沙冬青種子接種到含有2.0mg/l6-ba的ms培養(yǎng)基中不同，將種子接種到不含有6-ba或含有1.0mg/l6-ba的ms培養(yǎng)基中，獲得的子葉節(jié)胚軸細弱，用于叢生芽誘導(dǎo)時，誘導(dǎo)率低，芽數(shù)少。將種子接種到含有3.0mg/l6-ba的ms培養(yǎng)基中，獲得的子葉節(jié)用于叢生芽誘導(dǎo)時，誘導(dǎo)率與實施例1相差僅1.3%，平均芽數(shù)僅相差0.2個，但是叢生芽中部分葉片出現(xiàn)畸形，不利于后期生長發(fā)育。將種子接種到含有5.0mg/l6-ba的ms培養(yǎng)基中，獲得的子葉節(jié)用于叢生芽誘導(dǎo)時，誘導(dǎo)率與實施例1相差僅1.0%，平均芽數(shù)雖比實施例1多1倍，但是6-ba濃度也相應(yīng)的增加到了2.5倍，生產(chǎn)成本增加，且叢生芽多細密呈簇狀，后期生長無有效芽。

對比例5-6說明，與實施例1種子黑暗培養(yǎng)7-11d不同，種子黑暗培養(yǎng)時間為1-5d，培養(yǎng)1d時，由于萌發(fā)時間短，種皮未自然脫落，胚軸未伸出，兩片子葉較難分離。3d-5d時，子葉黃色，胚軸有伸長但較短且細弱，獲取子葉節(jié)外植體時容易斷裂，用于叢生芽誘導(dǎo)時，誘導(dǎo)率低。種子黑暗培養(yǎng)13-15d，子葉節(jié)處分生組織的分生能力減弱，使得叢生芽誘導(dǎo)降低，平均芽數(shù)降低。

對比例7說明，與實施例1將子葉節(jié)接種于含1.0mg/l6-ba的b5培養(yǎng)基中不同，將子葉節(jié)接種于含有相同濃度6-ba的ms培養(yǎng)基中，叢生芽誘導(dǎo)率與實施例1僅相差1.7%，平均芽數(shù)僅相差0.1個，但是使用ms培養(yǎng)基，生長20d時葉緣、芽有褐化現(xiàn)象，轉(zhuǎn)入伸長培養(yǎng)基易褐化死亡。

對比例8-10說明，與實施例1將子葉節(jié)接含1.0mg/l6-ba的b5培養(yǎng)基中不同，將子葉節(jié)接種于含有0.5mg/l6-ba的b5培養(yǎng)基中，平均芽數(shù)較少。將子葉節(jié)接種于含有1.5mg/l6-ba的b5培養(yǎng)基中，叢生芽誘導(dǎo)率與實施例1相差僅0.6%，平均芽數(shù)雖多0.8個，但是叢生芽多成簇狀，后期生長發(fā)育中雖有莖葉，但部分為畸形葉。對比例10將子葉節(jié)接種于含有2.5mg/l6-ba的b5培養(yǎng)基中，叢生芽誘導(dǎo)率與實施例1相差僅1.3%，平均芽數(shù)雖比實施例1增加了約1.6倍，但是6-ba濃度也相應(yīng)的增加到了2.5倍，生產(chǎn)成本增加，且叢生芽多細密呈簇狀，后期生長無有效芽。

對比例11-12說明，與實施例1將誘導(dǎo)出的叢生芽轉(zhuǎn)接于含1.0mg/l6-ba和0.2-0.3mg/liaa的b5培養(yǎng)基中不同，將誘導(dǎo)出的叢生芽轉(zhuǎn)接于含1.0mg/l6-ba和0.1-0.3mg/l的ga3的b5培養(yǎng)基中，葉片細長，莖葉呈黃綠略帶透明，呈玻璃化，莖伸長率低。將誘導(dǎo)出的叢生芽轉(zhuǎn)接于含1.0mg/l的6-ba和0.5mg/l的ga3的b5培養(yǎng)基中，葉片增長增寬，葉片黃綠透明呈玻璃化，莖伸長率低。

對比例13-16說明，與實施例1將單株叢生芽轉(zhuǎn)接入含1.0-2.0mg/l的iba的1/2b5培養(yǎng)基不同，將將單株叢生芽轉(zhuǎn)接入含0.5mg/l的iba、1.0-2.0mg/l的iaa、1.0-2.0mg/l的naa、1.5-2.0mg/liaa和0.5mg/lnaa的1/2b5培養(yǎng)基均不利于單株芽生根，生根率較低且生根數(shù)較少。