【技術(shù)領(lǐng)域】

本發(fā)明涉及植物培育繁殖技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種野生白芨組織培養(yǎng)快速繁殖方法。

背景技術(shù)：

白芨是多年生蘭科植物，莖塊根狀白色，大個(gè)開(kāi)紫色花。主要應(yīng)用于止血消炎，消腫生肌，外傷出血，補(bǔ)肺止血，燙傷，痔瘡，美容祛斑等，具有多種藥用價(jià)值以及觀賞價(jià)值，白芨是一種瀕危野生蘭科藥用植物，野生白芨日趨枯竭，

白芨的種子細(xì)小，似粉末狀，沒(méi)有胚乳，發(fā)育不完全的胚，種子萌芽的條件苛刻，不易發(fā)芽，很難進(jìn)行種子繁殖；而采用分株繁殖時(shí)，繁殖率低，繁殖速度慢，因此提供一種能夠?qū)总阜N子作為種源，縮短其育苗時(shí)間，提高出芽存活率以及植株移栽后的成活率的培育方法迫在眉睫。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

有鑒于此，本發(fā)明的目的在于，提供一種野生白芨組織培養(yǎng)快速繁殖方法，在種子培養(yǎng)過(guò)程中實(shí)現(xiàn)白芨種子的快速萌發(fā)，縮短白芨種子的培養(yǎng)時(shí)間，在短時(shí)間內(nèi)培育出大量健壯試管苗，在移栽大田后，從施肥到防蟲(chóng)，均考慮環(huán)保綠色，施肥過(guò)程中不添加化肥，而采用天然安全的有機(jī)肥料，防蟲(chóng)過(guò)程則進(jìn)行針對(duì)性的治療，同時(shí)以防御為主，各個(gè)步驟緊密結(jié)合，相互作用，提高了野生白芨的成活率。

為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用了如下的技術(shù)方案：

一種野生白芨組織培養(yǎng)快速繁殖方法，具體包括如下步驟：

(一)種子培養(yǎng)階段

1)外植體的消毒：首先用流水沖洗白芨蒴果26-32min，再用洗衣粉水刷洗蒴果表面，接著用蒸餾水沖洗2-3遍，然后置于超凈工作臺(tái)上先用75％酒精消毒2-3min，再用3％的新潔滅浸泡3-5min，期間不停的搖動(dòng)，使其消毒徹底，然后放在無(wú)菌接種盤(pán)自然風(fēng)干后用無(wú)菌手術(shù)刀切開(kāi)一頭備用；

2)培養(yǎng)基的準(zhǔn)備：以vw培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，在每升基質(zhì)中添加：土豆液55-65g、6-ba0.4-0.6mg、蔗糖15-25g、naa0.04-0.06mg、瓊脂3.5-4.0g以及8-12g純凈水，其制備方法是將上述原料混合攪拌均勻后，將ph值調(diào)節(jié)至5.6-5.8，裝入培養(yǎng)皿器，在120-123℃高溫下蒸汽滅菌15-20分鐘后進(jìn)行冷卻，得到培養(yǎng)基備用；

3)播種：取經(jīng)高溫滅菌的培養(yǎng)皿器，在超凈工作臺(tái)里按照無(wú)菌操作的要求打開(kāi)培養(yǎng)皿器口蓋，用鑷子夾取經(jīng)步驟1)處理的白芨蒴果，將切開(kāi)的一頭對(duì)準(zhǔn)培養(yǎng)皿器，將鑷子伸進(jìn)瓶口，用鑷子尖后部在皿器口壁輕輕敲擊，使種子均勻撒落培養(yǎng)基上，蓋好培養(yǎng)皿器口，拿出超凈工作臺(tái)備用；

4)培養(yǎng)室培養(yǎng)：對(duì)培養(yǎng)室內(nèi)進(jìn)行消毒后采用熒光燈進(jìn)行光照，控制培養(yǎng)室溫度為22-28℃，濕度為60-75％，光照度為1500-1800lux，25天開(kāi)始萌發(fā)，45天后小苗過(guò)密并且培養(yǎng)皿器內(nèi)營(yíng)養(yǎng)耗盡，45天后更換培養(yǎng)皿器進(jìn)行分瓶，每個(gè)培養(yǎng)皿器內(nèi)放30-35株小苗，分瓶后再經(jīng)過(guò)45-50天培養(yǎng)即可出瓶煉苗；

5)大棚煉苗：用鑷子將小苗從培養(yǎng)皿器中取出，用自來(lái)水將小苗根部的培養(yǎng)基洗凈，然后種植到培養(yǎng)土苗盤(pán)里并噴淋定根水，待葉面干后，噴施800-1000倍液的農(nóng)用鏈霉毒，7-15天后噴施20-30倍的沼氣液，在大棚內(nèi)培育3-5個(gè)月后進(jìn)行移栽；

(二)移栽大田階段

(1)播種：經(jīng)大棚煉苗后，棄去黃化和發(fā)育不良的種苗，整理出健康種苗放入事先挖好的穴中，每穴放苗一株，放苗時(shí)使其根自然展開(kāi)，覆土過(guò)根莖，同時(shí)保證枝干與主根的結(jié)合部分露出土外，覆土完成后將土壓實(shí)，并澆灌定根水；

(2)施肥管理：移栽大田2個(gè)月后進(jìn)行初次施肥，初次施肥7-10天后對(duì)葉面噴施營(yíng)養(yǎng)液進(jìn)行追肥；所用肥料為農(nóng)家肥與生態(tài)肥按照比例為1-3:2-5混合，施肥時(shí)間為每年4-8月份，每年施肥4-6次，施肥結(jié)合中耕除草進(jìn)行；每1-2月用營(yíng)養(yǎng)液進(jìn)行葉面噴施一次；所述營(yíng)養(yǎng)液是將20-30重量份的腐殖土與10-18重量份的草木灰混合后浸泡在60-80重量份的水中，浸泡2天后將其過(guò)濾，取液體加入10-15重量份的沼液混合攪拌均勻即可；

所述農(nóng)家肥為家禽糞便；所述生態(tài)肥通過(guò)將20-40重量份的茶渣置于容器中，摻拌10-20重量份的花生餅、10-15重量份的稻殼和10-20重量份的新鮮土質(zhì)，再澆入10-30重量份的水，然后進(jìn)行堆漚，待茶渣、稻殼和花生餅腐爛后變成腐爛質(zhì)土后得到的。

優(yōu)選地，所述移栽大田階段還包括整地的步驟，具體為：在種植前1-2個(gè)月經(jīng)深翻耕后添加土壤調(diào)節(jié)劑將土壤ph值調(diào)節(jié)為5.7-6.6，將碎土耙平，施埋基底肥，按畦面寬40-60cm，挖溝面高20-30cm，寬25-30cm起畦，整平畦面；按行距20-30cm、株距20-25cm挖穴，穴長(zhǎng)×深×寬等于10cm×15cm×10cm，并在每個(gè)穴內(nèi)施埋基底肥。

優(yōu)選地，所述移栽大田階段還包括病蟲(chóng)害防治的步驟，具體為：在病穴施用生物農(nóng)藥，或者將病株拔出，每隔1-2周?chē)娛┫疽阂淮危?/p>

所述消毒液由砂仁汁、番茄葉汁、桂皮汁、生姜汁、大蒜汁與水按照質(zhì)量比(1-2.5)：(2-3.5)：(1.5-2.5)：(3-4)：(2-3.5)：(30-55)配制而成；所述消毒液的噴施量為：每次每畝噴灑150-200kg。

優(yōu)選地，所述病蟲(chóng)害防治過(guò)程中，當(dāng)發(fā)現(xiàn)黑斑病時(shí)，向患病植株噴灑70％甲基托布津濕性粉劑900-1100倍液。

優(yōu)選地，所述基底肥是由30-50重量份的廄肥、16-32重量份的麩皮、40-50重量份的農(nóng)作物秸稈和21-33重量份的人畜糞便混合均勻后在溫度為30-40℃，濕度為60-70％的條件下發(fā)酵8-12天得到基底肥的具體施加方式為：在穴底部施加一層2-3cm厚的基底肥，然后在基底肥上面覆蓋一層2-3cm厚的泥土，依次交替2-3次；基底肥的用量為每畝施加350-550kg。

優(yōu)選地，所述土豆液主要經(jīng)過(guò)如下處理得到：a.將土豆切絲放入鍋中，加入土豆質(zhì)量3-4倍的水，加熱至沸騰后維持20-30分鐘；b.加入土豆和水總質(zhì)量0.2-0.4倍的離子液體，在90-120℃、80-120r/min的條件下，攪拌處理60-120min，去渣留液，即可得到土豆液。

優(yōu)選地，所述離子液體為胍鹽類(lèi)離子液體、咪唑類(lèi)離子液體、季銨鹽類(lèi)離子液體和噻唑類(lèi)離子液體中的一種。

本發(fā)明的野生白芨在移栽大田3-5年后可進(jìn)行采收。

綜上所述，由于采用了上述技術(shù)方案，本發(fā)明的有益效果是：

1、本發(fā)明的一種野生白芨組織培養(yǎng)快速繁殖方法在種子培養(yǎng)過(guò)程中，在傳統(tǒng)的培養(yǎng)基的配方上改進(jìn)，添加一些能夠在野生白芨在生根壯苗期間所需的因子，以vw培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加土豆液、6-ba、蔗糖、naa和瓊脂等母液配方，為白芨生長(zhǎng)所需能量供給得到滿(mǎn)足，提供生根的良好條件，調(diào)節(jié)體內(nèi)養(yǎng)分的平衡，快速促進(jìn)壯苗生根，使得生根率達(dá)到98％以上，且壯苗生根后的植株平均根數(shù)達(dá)到4-5條。

2、本發(fā)明的野生白芨組織培養(yǎng)快速繁殖方法在移栽大田階段，在種苗定植前先對(duì)種植地進(jìn)行預(yù)處理，通過(guò)對(duì)地塊進(jìn)行深松處理，然后開(kāi)設(shè)種植穴，由于土壤養(yǎng)分含量低，直接播種肥效遲緩，因此在種植穴中加入基底肥，基底肥具有改良土壤肥效的作用，為種子生長(zhǎng)提高提出養(yǎng)分，基底肥的施加方式為埋在種植穴內(nèi)，并在其表面覆蓋營(yíng)養(yǎng)土，能夠使養(yǎng)分更集中，施肥效果更佳；定植后采用農(nóng)家肥與生態(tài)肥進(jìn)行配合施肥，對(duì)環(huán)境無(wú)污染，同時(shí)向植株葉面噴灑營(yíng)養(yǎng)液，促進(jìn)生長(zhǎng)，另外，病蟲(chóng)害的防治采用消毒液進(jìn)行定期噴施，預(yù)防蟲(chóng)害的發(fā)生，消毒液均由綠色安全的原料配制得到，對(duì)白芨的成品性狀無(wú)影響。

本發(fā)明野生白芨組織培養(yǎng)快速繁殖方法從種子的培養(yǎng)到移栽大田后的培育，都進(jìn)行嚴(yán)格把關(guān)，在種子培養(yǎng)過(guò)程中實(shí)現(xiàn)白芨種子的快速萌發(fā)，縮短白芨種子的培養(yǎng)時(shí)間，在短時(shí)間內(nèi)培育出大量健壯試管苗，在移栽大田后，從施肥到防蟲(chóng)，均考慮環(huán)保綠色，施肥過(guò)程中不添加化肥，而采用天然安全的有機(jī)肥料，防蟲(chóng)過(guò)程則進(jìn)行針對(duì)性的治療，同時(shí)以防御為主，各個(gè)步驟緊密結(jié)合，相互作用，提高了野生白芨的成活率，適用于大規(guī)模種植，值得推廣。

【具體實(shí)施方式】

下面的實(shí)施例可以幫助本領(lǐng)域的技術(shù)人員更全面地理解本發(fā)明，但不可以以任何方式限制本發(fā)明。

實(shí)施例1

本實(shí)施例提供一種野生白芨組織培養(yǎng)快速繁殖方法，具體包括如下步驟：

(一)種子培養(yǎng)階段

1)外植體的消毒：首先用流水沖洗白芨蒴果26min，再用洗衣粉水刷洗蒴果表面，接著用蒸餾水沖洗2遍，然后置于超凈工作臺(tái)上先用75％酒精消毒2min，再用3％的新潔滅浸泡3min，期間不停的搖動(dòng)，使其消毒徹底，然后放在無(wú)菌接種盤(pán)自然風(fēng)干后用無(wú)菌手術(shù)刀切開(kāi)一頭備用；

2)培養(yǎng)基的準(zhǔn)備：以vw培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，在每升基質(zhì)中添加：土豆液55g、6-ba0.4mg、蔗糖15g、naa0.04mg、瓊脂3.5g以及8g純凈水，其制備方法是將上述原料混合攪拌均勻后，將ph值調(diào)節(jié)至5.6，裝入培養(yǎng)皿器，在120℃高溫下蒸汽滅菌15分鐘后進(jìn)行冷卻，得到培養(yǎng)基備用；其中，土豆液主要經(jīng)過(guò)如下處理得到：a.將土豆切絲放入鍋中，加入土豆質(zhì)量3倍的水，加熱至沸騰后維持20分鐘；b.加入土豆和水總質(zhì)量0.2倍的離子液體，在90℃、80r/min的條件下，攪拌處理60min，去渣留液，即可得到土豆液；離子液體為胍鹽類(lèi)離子液體；

3)播種：取經(jīng)高溫滅菌的培養(yǎng)皿器，在超凈工作臺(tái)里按照無(wú)菌操作的要求打開(kāi)培養(yǎng)皿器口蓋，用鑷子夾取經(jīng)步驟1)處理的白芨蒴果，將切開(kāi)的一頭對(duì)準(zhǔn)培養(yǎng)皿器，將鑷子伸進(jìn)瓶口，用鑷子尖后部在皿器口壁輕輕敲擊，使種子均勻撒落培養(yǎng)基上，蓋好培養(yǎng)皿器口，拿出超凈工作臺(tái)備用；

4)培養(yǎng)室培養(yǎng)：對(duì)培養(yǎng)室內(nèi)進(jìn)行消毒后采用熒光燈進(jìn)行光照，控制培養(yǎng)室溫度為22℃，濕度為60％，光照度為1500lux，25天開(kāi)始萌發(fā)，45天后小苗過(guò)密并且培養(yǎng)皿器內(nèi)營(yíng)養(yǎng)耗盡，45天后更換培養(yǎng)皿器進(jìn)行分瓶，每個(gè)培養(yǎng)皿器內(nèi)放30株小苗，分瓶后再經(jīng)過(guò)45天培養(yǎng)即可出瓶煉苗；

5)大棚煉苗：用鑷子將小苗從培養(yǎng)皿器中取出，用自來(lái)水將小苗根部的培養(yǎng)基洗凈，然后種植到培養(yǎng)土苗盤(pán)里并噴淋定根水，待葉面干后，噴施800倍液的農(nóng)用鏈霉毒，7天后噴施20倍的沼氣液，在大棚內(nèi)培育3個(gè)月后進(jìn)行移栽；

(二)移栽大田階段

(1)整地：在種植前1個(gè)月經(jīng)深翻耕后添加土壤調(diào)節(jié)劑將土壤ph值調(diào)節(jié)為5.7，將碎土耙平，施埋基底肥，按畦面寬40cm，挖溝面高20cm，寬25cm起畦，整平畦面；按行距20cm、株距20cm挖穴，穴長(zhǎng)×深×寬等于10cm×15cm×10cm，并在每個(gè)穴內(nèi)施埋基底肥；其中，基底肥是由30重量份的廄肥、16重量份的麩皮、40重量份的農(nóng)作物秸稈和21重量份的人畜糞便混合均勻后在溫度為30℃，濕度為60％的條件下發(fā)酵8天得到基底肥的具體施加方式為：在穴底部施加一層2cm厚的基底肥，然后在基底肥上面覆蓋一層2cm厚的泥土，依次交替2次；基底肥的用量為每畝施加350kg；

(2)播種：經(jīng)大棚煉苗后，棄去黃化和發(fā)育不良的種苗，整理出健康種苗放入事先挖好的穴中，每穴放苗一株，放苗時(shí)使其根自然展開(kāi)，覆土過(guò)根莖，同時(shí)保證枝干與主根的結(jié)合部分露出土外，覆土完成后將土壓實(shí)，并澆灌定根水；

(3)施肥管理：移栽大田2個(gè)月后進(jìn)行初次施肥，初次施肥7天后對(duì)葉面噴施營(yíng)養(yǎng)液進(jìn)行追肥；所用肥料為農(nóng)家肥與生態(tài)肥按照比例為1:2混合，施肥時(shí)間為每年4-8月份，每年施肥4次，施肥結(jié)合中耕除草進(jìn)行；每月用營(yíng)養(yǎng)液進(jìn)行葉面噴施一次；所述營(yíng)養(yǎng)液是將20-30重量份的腐殖土與10重量份的草木灰混合后浸泡在60重量份的水中，浸泡2天后將其過(guò)濾，取液體加入10重量份的沼液混合攪拌均勻即可；

所述農(nóng)家肥為家禽糞便；所述生態(tài)肥通過(guò)將20重量份的茶渣置于容器中，摻拌10重量份的花生餅、10重量份的稻殼和10重量份的新鮮土質(zhì)，再澆入10重量份的水，然后進(jìn)行堆漚，待茶渣、稻殼和花生餅腐爛后變成腐爛質(zhì)土后得到的；

(4)病蟲(chóng)害防治：在病穴施用生物農(nóng)藥，或者將病株拔出，每隔1周?chē)娛┫疽阂淮?；其中，消毒液由砂仁汁、番茄葉汁、桂皮汁、生姜汁、大蒜汁與水按照質(zhì)量比1：2：1.5：3：2：30配制而成；所述消毒液的噴施量為：每次每畝噴灑150kg。

本實(shí)施例所培養(yǎng)的野生白芨在移栽大田3年后可進(jìn)行采收。

實(shí)施例2

本實(shí)施例提供一種野生白芨組織培養(yǎng)快速繁殖方法，具體包括如下步驟：

(一)種子培養(yǎng)階段

1)外植體的消毒：首先用流水沖洗白芨蒴果29min，再用洗衣粉水刷洗蒴果表面，接著用蒸餾水沖洗3遍，然后置于超凈工作臺(tái)上先用75％酒精消毒3min，再用3％的新潔滅浸泡4min，期間不停的搖動(dòng)，使其消毒徹底，然后放在無(wú)菌接種盤(pán)自然風(fēng)干后用無(wú)菌手術(shù)刀切開(kāi)一頭備用；

2)培養(yǎng)基的準(zhǔn)備：以vw培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，在每升基質(zhì)中添加：土豆液60g、6-ba0.5mg、蔗糖20g、naa0.05mg、瓊脂3.8g以及10g純凈水，其制備方法是將上述原料混合攪拌均勻后，將ph值調(diào)節(jié)至5.7，裝入培養(yǎng)皿器，在122℃高溫下蒸汽滅菌17分鐘后進(jìn)行冷卻，得到培養(yǎng)基備用；其中，土豆液主要經(jīng)過(guò)如下處理得到：a.將土豆切絲放入鍋中，加入土豆質(zhì)量4倍的水，加熱至沸騰后維持25分鐘；b.加入土豆和水總質(zhì)量0.3倍的離子液體，在115℃、100r/min的條件下，攪拌處理95min，去渣留液，即可得到土豆液；離子液體為胍鹽類(lèi)離子液體；

3)播種：取經(jīng)高溫滅菌的培養(yǎng)皿器，在超凈工作臺(tái)里按照無(wú)菌操作的要求打開(kāi)培養(yǎng)皿器口蓋，用鑷子夾取經(jīng)步驟1)處理的白芨蒴果，將切開(kāi)的一頭對(duì)準(zhǔn)培養(yǎng)皿器，將鑷子伸進(jìn)瓶口，用鑷子尖后部在皿器口壁輕輕敲擊，使種子均勻撒落培養(yǎng)基上，蓋好培養(yǎng)皿器口，拿出超凈工作臺(tái)備用；

4)培養(yǎng)室培養(yǎng)：對(duì)培養(yǎng)室內(nèi)進(jìn)行消毒后采用熒光燈進(jìn)行光照，控制培養(yǎng)室溫度為25℃，濕度為68％，光照度為1650lux，25天開(kāi)始萌發(fā)，45天后小苗過(guò)密并且培養(yǎng)皿器內(nèi)營(yíng)養(yǎng)耗盡，45天后更換培養(yǎng)皿器進(jìn)行分瓶，每個(gè)培養(yǎng)皿器內(nèi)放32株小苗，分瓶后再經(jīng)過(guò)48天培養(yǎng)即可出瓶煉苗；

5)大棚煉苗：用鑷子將小苗從培養(yǎng)皿器中取出，用自來(lái)水將小苗根部的培養(yǎng)基洗凈，然后種植到培養(yǎng)土苗盤(pán)里并噴淋定根水，待葉面干后，噴施900倍液的農(nóng)用鏈霉毒，12天后噴施25倍的沼氣液，在大棚內(nèi)培育4個(gè)月后進(jìn)行移栽；

(二)移栽大田階段

(1)整地：在種植前1個(gè)月經(jīng)深翻耕后添加土壤調(diào)節(jié)劑將土壤ph值調(diào)節(jié)為6.2，將碎土耙平，施埋基底肥，按畦面寬50cm，挖溝面高25cm，寬28cm起畦，整平畦面；按行距25cm、株距22cm挖穴，穴長(zhǎng)×深×寬等于10cm×15cm×10cm，并在每個(gè)穴內(nèi)施埋基底肥；其中，基底肥是由40重量份的廄肥、25重量份的麩皮、45重量份的農(nóng)作物秸稈和28重量份的人畜糞便混合均勻后在溫度為35℃，濕度為65％的條件下發(fā)酵10天得到基底肥的具體施加方式為：在穴底部施加一層2cm厚的基底肥，然后在基底肥上面覆蓋一層3cm厚的泥土，依次交替3次；基底肥的用量為每畝施加400kg；

(2)播種：經(jīng)大棚煉苗后，棄去黃化和發(fā)育不良的種苗，整理出健康種苗放入事先挖好的穴中，每穴放苗一株，放苗時(shí)使其根自然展開(kāi)，覆土過(guò)根莖，同時(shí)保證枝干與主根的結(jié)合部分露出土外，覆土完成后將土壓實(shí)，并澆灌定根水；

(3)施肥管理：移栽大田2個(gè)月后進(jìn)行初次施肥，初次施肥9天后對(duì)葉面噴施營(yíng)養(yǎng)液進(jìn)行追肥；所用肥料為農(nóng)家肥與生態(tài)肥按照比例為2:3混合，施肥時(shí)間為每年4-8月份，每年施肥5次，施肥結(jié)合中耕除草進(jìn)行；每1月用營(yíng)養(yǎng)液進(jìn)行葉面噴施一次；所述營(yíng)養(yǎng)液是將25重量份的腐殖土與15重量份的草木灰混合后浸泡在70重量份的水中，浸泡2天后將其過(guò)濾，取液體加入12重量份的沼液混合攪拌均勻即可；

所述農(nóng)家肥為家禽糞便；所述生態(tài)肥通過(guò)將30重量份的茶渣置于容器中，摻拌15重量份的花生餅、12重量份的稻殼和15重量份的新鮮土質(zhì)，再澆入20重量份的水，然后進(jìn)行堆漚，待茶渣、稻殼和花生餅腐爛后變成腐爛質(zhì)土后得到的；

(4)病蟲(chóng)害防治：在病穴施用生物農(nóng)藥，或者將病株拔出，每隔1周?chē)娛┫疽阂淮?；其中，消毒液由砂仁汁、番茄葉汁、桂皮汁、生姜汁、大蒜汁與水按照質(zhì)量比1.8：2.8：2：3.5：2.8：42配制而成；所述消毒液的噴施量為：每次每畝噴灑170kg。

本實(shí)施例所培養(yǎng)的野生白芨在移栽大田4年后可進(jìn)行采收。

實(shí)施例3

本實(shí)施例提供一種野生白芨組織培養(yǎng)快速繁殖方法，具體包括如下步驟：

(一)種子培養(yǎng)階段

1)外植體的消毒：首先用流水沖洗白芨蒴果32min，再用洗衣粉水刷洗蒴果表面，接著用蒸餾水沖洗3遍，然后置于超凈工作臺(tái)上先用75％酒精消毒3min，再用3％的新潔滅浸泡5min，期間不停的搖動(dòng)，使其消毒徹底，然后放在無(wú)菌接種盤(pán)自然風(fēng)干后用無(wú)菌手術(shù)刀切開(kāi)一頭備用；

2)培養(yǎng)基的準(zhǔn)備：以vw培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，在每升基質(zhì)中添加：土豆液65g、6-ba0.6mg、蔗糖25g、naa0.06mg、瓊脂4.0g以及12g純凈水，其制備方法是將上述原料混合攪拌均勻后，將ph值調(diào)節(jié)至5.8，裝入培養(yǎng)皿器，在123℃高溫下蒸汽滅菌20分鐘后進(jìn)行冷卻，得到培養(yǎng)基備用；其中，土豆液主要經(jīng)過(guò)如下處理得到：a.將土豆切絲放入鍋中，加入土豆質(zhì)量4倍的水，加熱至沸騰后維持30分鐘；b.加入土豆和水總質(zhì)量0.4倍的離子液體，在120℃、120r/min的條件下，攪拌處理120min，去渣留液，即可得到土豆液；離子液體為胍鹽類(lèi)離子液體；

3)播種：取經(jīng)高溫滅菌的培養(yǎng)皿器，在超凈工作臺(tái)里按照無(wú)菌操作的要求打開(kāi)培養(yǎng)皿器口蓋，用鑷子夾取經(jīng)步驟1)處理的白芨蒴果，將切開(kāi)的一頭對(duì)準(zhǔn)培養(yǎng)皿器，將鑷子伸進(jìn)瓶口，用鑷子尖后部在皿器口壁輕輕敲擊，使種子均勻撒落培養(yǎng)基上，蓋好培養(yǎng)皿器口，拿出超凈工作臺(tái)備用；

4)培養(yǎng)室培養(yǎng)：對(duì)培養(yǎng)室內(nèi)進(jìn)行消毒后采用熒光燈進(jìn)行光照，控制培養(yǎng)室溫度為28℃，濕度為75％，光照度為1800lux，25天開(kāi)始萌發(fā)，45天后小苗過(guò)密并且培養(yǎng)皿器內(nèi)營(yíng)養(yǎng)耗盡，45天后更換培養(yǎng)皿器進(jìn)行分瓶，每個(gè)培養(yǎng)皿器內(nèi)放35株小苗，分瓶后再經(jīng)過(guò)50天培養(yǎng)即可出瓶煉苗；

5)大棚煉苗：用鑷子將小苗從培養(yǎng)皿器中取出，用自來(lái)水將小苗根部的培養(yǎng)基洗凈，然后種植到培養(yǎng)土苗盤(pán)里并噴淋定根水，待葉面干后，噴施1000倍液的農(nóng)用鏈霉毒，15天后噴施30倍的沼氣液，在大棚內(nèi)培育5個(gè)月后進(jìn)行移栽；

(二)移栽大田階段

(1)整地：在種植前2個(gè)月經(jīng)深翻耕后添加土壤調(diào)節(jié)劑將土壤ph值調(diào)節(jié)為6.6，將碎土耙平，施埋基底肥，按畦面寬60cm，挖溝面高30cm，寬30cm起畦，整平畦面；按行距30cm、株距25cm挖穴，穴長(zhǎng)×深×寬等于10cm×15cm×10cm，并在每個(gè)穴內(nèi)施埋基底肥；其中，基底肥是由50重量份的廄肥、32重量份的麩皮、50重量份的農(nóng)作物秸稈和33重量份的人畜糞便混合均勻后在溫度為40℃，濕度為70％的條件下發(fā)酵12天得到基底肥的具體施加方式為：在穴底部施加一層3cm厚的基底肥，然后在基底肥上面覆蓋一層3cm厚的泥土，依次交替3次；基底肥的用量為每畝施加550kg；

(2)播種：經(jīng)大棚煉苗后，棄去黃化和發(fā)育不良的種苗，整理出健康種苗放入事先挖好的穴中，每穴放苗一株，放苗時(shí)使其根自然展開(kāi)，覆土過(guò)根莖，同時(shí)保證枝干與主根的結(jié)合部分露出土外，覆土完成后將土壓實(shí)，并澆灌定根水；

(3)施肥管理：移栽大田2個(gè)月后進(jìn)行初次施肥，初次施肥10天后對(duì)葉面噴施營(yíng)養(yǎng)液進(jìn)行追肥；所用肥料為農(nóng)家肥與生態(tài)肥按照比例為3:5混合，施肥時(shí)間為每年4-8月份，每年施肥6次，施肥結(jié)合中耕除草進(jìn)行；每2月用營(yíng)養(yǎng)液進(jìn)行葉面噴施一次；所述營(yíng)養(yǎng)液是將30重量份的腐殖土與18重量份的草木灰混合后浸泡在80重量份的水中，浸泡2天后將其過(guò)濾，取液體加入15重量份的沼液混合攪拌均勻即可；

所述農(nóng)家肥為家禽糞便；所述生態(tài)肥通過(guò)將40重量份的茶渣置于容器中，摻拌20重量份的花生餅、15重量份的稻殼和20重量份的新鮮土質(zhì)，再澆入30重量份的水，然后進(jìn)行堆漚，待茶渣、稻殼和花生餅腐爛后變成腐爛質(zhì)土后得到的；

(4)病蟲(chóng)害防治：在病穴施用生物農(nóng)藥，或者將病株拔出，每隔2周?chē)娛┫疽阂淮危黄渲?，消毒液由砂仁汁、番茄葉汁、桂皮汁、生姜汁、大蒜汁與水按照質(zhì)量比2.5：3.5：2.5：4：3.5：55配制而成；所述消毒液的噴施量為：每次每畝噴灑200kg。

本實(shí)施例所培養(yǎng)的野生白芨在移栽大田5年后可進(jìn)行采收。

效果驗(yàn)證

為了進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明野生白芨組織培養(yǎng)快速繁殖方法的應(yīng)用價(jià)值，實(shí)施人選擇無(wú)病害，無(wú)殘缺，大小相近的白芨蒴果，分為以下四組做對(duì)比試驗(yàn)：

第一組：實(shí)施例1所述的培養(yǎng)繁殖方法；

第二組：實(shí)施例2所述的培養(yǎng)繁殖方法；

第三組：實(shí)施例3所述的培養(yǎng)繁殖方法；

第四組：常規(guī)種植法。

s1：觀察上述四組在種子培養(yǎng)階段的組培苗情況，記錄各組的生根率、生根數(shù)、球莖大小、葉長(zhǎng)、葉寬及出甁綜合狀態(tài)，結(jié)果見(jiàn)表1；

表1四組白芨組培苗情況表

s2：進(jìn)行移栽大田階段的觀察，在移栽大田兩個(gè)月后統(tǒng)計(jì)移栽成活率，并將結(jié)果記錄如表2所示：

表2四組白芨移栽苗生長(zhǎng)情況表

由上述兩表得知：采用本發(fā)明的培育法培育得到的白芨，不僅在種子培養(yǎng)階段得到高品質(zhì)的種苗，且在移栽大田階段具有良好的長(zhǎng)勢(shì)，各個(gè)步驟緊密結(jié)合，相互作用，提高了野生白芨的成活率，適用于大規(guī)模種植，值得推廣。

雖然，上文中已經(jīng)用一般性說(shuō)明及具體實(shí)施方案對(duì)本發(fā)明作了詳盡的描述，但在本發(fā)明基礎(chǔ)上，可以對(duì)之作一些修改或改進(jìn)，這對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見(jiàn)的。因此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改或改進(jìn)，均屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。