1.一種蘋果砧木組培初代培養(yǎng)防褐變的方法,其特征在于具體步驟如下:
a、初代培養(yǎng)材料的剪?。?-6月份,選連續(xù)晴天的第3或第4天的早晨,選取蘋果砧木1-2年生、健壯的春梢頂芽和頂芽下面的第一側(cè)芽,切取1.2-1.5 cm長(zhǎng)的帶芽莖段,剪去葉子,放入盛有無菌水的密閉培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),備用;
b、材料的清洗和殺菌:將帶芽莖段在2‰的84消毒液中浸泡5-10分鐘后在流水下沖洗2-5 min,放入洗潔精稀釋液中清洗5-10 min,后放入脫脂紗布在流水中沖洗下沖洗1.5-2 h,控干水分后裝入干凈的燒杯,在超凈工作臺(tái)上用酒精浸泡20-22ms后無菌水沖洗2-3次,然后在汞溶液中處理4-5min,處理時(shí)不斷攪動(dòng)使藥液均勻浸到處理材料表面,處理完成后移到無菌水中沖洗4-5次,然后切0.4-0.5cm帶芽莖段,將做好的培養(yǎng)基分裝到培養(yǎng)瓶中,每瓶25-30ml,滅菌,每瓶接2個(gè)芽,移入培養(yǎng)室培養(yǎng);
c、培養(yǎng)室溫濕度管理:移入培養(yǎng)室的初代培養(yǎng)瓶苗先進(jìn)行暗培養(yǎng),用遮光布遮光,溫度21-23℃,濕度70%-75%,暗培養(yǎng)5-7天后去掉遮光布,在1500-1800Lx的光照下培養(yǎng),溫度21-23℃,新芽萌發(fā)長(zhǎng)到0.5-0.8cm時(shí)剪取新芽0.4-0.6cm轉(zhuǎn)接,每瓶接2個(gè)芽,轉(zhuǎn)接后光照增加到2200-2500Lx,溫度21-23℃,20-25天后等新芽基部長(zhǎng)出從生芽時(shí)進(jìn)行常規(guī)擴(kuò)繁轉(zhuǎn)接培養(yǎng)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種蘋果砧木組培初代培養(yǎng)防褐變的方法,其特征在于:所述步驟b中防褐變培養(yǎng)基的配方為:MS+BA0.3mg/L+NAA0.05mg/L+VC80mg/L+白砂糖30g/L+瓊脂4.5g/L,pH為5.8。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種蘋果砧木組培初代培養(yǎng)防褐變的方法,其特征在于:所述步驟b中滅菌為將做好的培養(yǎng)基放置高壓鍋中在137-140MPa大氣壓下滅菌20-25分鐘,取出放置2-3天接種。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種蘋果砧木組培初代培養(yǎng)防褐變的方法,其特征在于:所述步驟b中每個(gè)培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基為每瓶25-30ml。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種蘋果砧木組培初代培養(yǎng)防褐變的方法,其特征在于:所述步驟a中用消過毒的手術(shù)刀片切取1.2-1.5 cm長(zhǎng)的帶芽莖段。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種蘋果砧木組培初代培養(yǎng)防褐變的方法,其特征在于:所述步驟b中洗潔精稀釋液為1L水加入2-3ml洗潔精。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或5所述的一種蘋果砧木組培初代培養(yǎng)防褐變的方法,其特征在于:所述步驟b中流水的流速均為0.66-0.7米/秒。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種蘋果砧木組培初代培養(yǎng)防褐變的方法,其特征在于:所述步驟b中酒精的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為75%。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種蘋果砧木組培初代培養(yǎng)防褐變的方法,其特征在于:所述步驟b中汞溶液質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%。