1.一種快速誘導(dǎo)繁殖偏穗鵝觀(guān)草下胚軸愈傷組織的方法,其特征在于步驟如下:
(1)無(wú)毒條件下無(wú)菌外植體的獲得:將偏穗鵝觀(guān)草種子置于50%~55%的濃硫酸中,在條件為28℃~30℃,210r/min~220r/min的搖床里振蕩0.9~1.2小時(shí)做脫皮催芽處理,之后用蒸餾水洗去濃硫酸并置于超凈工作臺(tái),首先用無(wú)菌水清洗種子,然后用75%的酒精振蕩沖洗2.5~3.5min,緊接著用無(wú)菌水將種子表面的酒精清洗干凈,再用20%~25%的次氯酸鈉振蕩沖洗14~16min,最后用無(wú)菌水將種子表面的次氯酸鈉清洗干凈,獲得偏穗鵝觀(guān)草無(wú)菌種子,將滅菌后的種子放置于培養(yǎng)無(wú)菌實(shí)生苗的培養(yǎng)基中培養(yǎng)10-15d,獲得無(wú)菌實(shí)生苗的下胚軸幼嫩部分作為誘導(dǎo)愈傷的外植體;
(2)愈傷組織誘導(dǎo):將步驟(1)獲得的無(wú)菌實(shí)生苗下胚軸橫切為約0.3-0.5cm長(zhǎng)的小段作為誘導(dǎo)愈傷的材料,接種于誘導(dǎo)愈傷組織培養(yǎng)基上培養(yǎng)25-30d,誘導(dǎo)愈傷發(fā)生;
(3)愈傷組織增殖培養(yǎng):將步驟(2)獲得的顏色黃綠,質(zhì)地疏松的愈傷組織切割成直徑為0.1-0.2cm的小塊,然后轉(zhuǎn)接到誘導(dǎo)愈傷組織增殖培養(yǎng)基中,培養(yǎng)25-30d后繼續(xù)轉(zhuǎn)接到新的誘導(dǎo)愈傷組織增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代增殖,最終獲得顏色黃綠,結(jié)構(gòu)致密的優(yōu)良愈傷組織材料。
2.如權(quán)利要求1所述的快速誘導(dǎo)繁殖偏穗鵝觀(guān)草下胚軸愈傷組織的方法,其特征在于:步驟(1)中所述的培養(yǎng)無(wú)菌實(shí)生苗的培養(yǎng)基為MS營(yíng)養(yǎng)液、5-7g/L瓊脂、20-30g/L蔗糖、0.05-0.1g肌醇組成,PH=5.7-5.8;步驟(2)中所述的誘導(dǎo)愈傷組織培養(yǎng)基、步驟(3)中所述的誘導(dǎo)愈傷組織增殖培養(yǎng)基均為MS誘導(dǎo)培養(yǎng)基,其配比為:3.0-5.0mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸,5-7g/L瓊脂,20-30g/L蔗糖,0.05-0.1g肌醇組成,PH=5.7-5.8。
3.如權(quán)利要求1所述的快速誘導(dǎo)繁殖偏穗鵝觀(guān)草下胚軸愈傷組織的方法,其特征在于:所述的步驟(1)中偏穗鵝觀(guān)草發(fā)芽階段需暗培養(yǎng),發(fā)芽以后階段及步驟(2)、(3)的下胚軸愈傷誘導(dǎo)和愈傷增殖均在連續(xù)光照培養(yǎng),光照強(qiáng)度在1500-2000lx之間,濕度60-70%的環(huán)境下進(jìn)行。
4.如權(quán)利要求1所述的快速誘導(dǎo)繁殖偏穗鵝觀(guān)草下胚軸愈傷組織的方法,其特征在于還包括有步驟(3)所述的產(chǎn)生的愈傷組織材料,通過(guò)稱(chēng)量法測(cè)定愈傷組織的生長(zhǎng)量,其具體步驟為:
1)將盛有MS誘導(dǎo)培養(yǎng)基的錐形瓶放在天平上進(jìn)行稱(chēng)量,得到數(shù)值a;
2)將1)中稱(chēng)量過(guò)的錐形瓶放入超凈工作臺(tái)中進(jìn)行愈傷組織的轉(zhuǎn)接,轉(zhuǎn)接結(jié)束后對(duì)錐形瓶進(jìn)行稱(chēng)量,得到數(shù)值b;
3)將轉(zhuǎn)接后的愈傷組織培養(yǎng)30天后再次對(duì)錐形瓶進(jìn)行稱(chēng)量,得到數(shù)值c;
4)愈傷組織的生長(zhǎng)量為:c-(b-a)。