本發(fā)明屬于植物栽培領(lǐng)域,具體涉及一種生長(zhǎng)基質(zhì)及用其無(wú)性繁殖藥用植物重樓的方法。
背景技術(shù):
:重樓是百合科(Liliaceae)重樓屬(ParisL.)植物的統(tǒng)稱,是多年生草本植物,多生于海拔600-3600m的林下陰濕處、溝谷邊或草叢中,在我國(guó)主要分布于云南、四川等地。重樓味苦,性微寒,有小毒,以根莖入藥,其活性成分為總皂苷。常用于瘡瘍腫毒、毒蛇咬傷、乳腺炎、扁桃體炎、小兒驚風(fēng)抽搐等病癥的治療,是奪命丹、總皂苷片、云南白藥、宮血寧以及其他制劑等中成藥的重要原料。從20世紀(jì)80年代開(kāi)始,科研工作者便展開(kāi)重樓有性和無(wú)性繁殖的研究,而“二次休眠”(第1年10月份至第3年5月份前后)的生理特性決定了重樓有性繁殖的局限性,自然條件下種子繁殖需經(jīng)過(guò)兩冬一夏才能出土成苗,且從種植到收獲需要8-10年的時(shí)間,加之近年來(lái)重樓需求量的逐年增加導(dǎo)致了重樓野生種質(zhì)資源的掠奪性破壞,因此,重樓的有性繁殖已無(wú)法滿足市場(chǎng)的需求。為了加強(qiáng)重樓資源的保護(hù)力度和解決重樓的供需矛盾,無(wú)性繁殖技術(shù)再次成為重樓資源可持續(xù)發(fā)展的焦點(diǎn),且無(wú)性繁殖技術(shù)的研究主要集中在根莖切塊繁殖和組織培養(yǎng)兩個(gè)方面。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素:本發(fā)明的目的在于提供一種生長(zhǎng)基質(zhì)及用其無(wú)性繁殖藥用植物重樓的方法。本發(fā)明的上述目的是通過(guò)下面的技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的:一種生長(zhǎng)基質(zhì),由如下重量份的成分制備而成:園土,120-160份;高鈣粉煤灰,30-50份;鐵礬土,20-30份;凹凸棒石黏土,10-20份;腐植酸鈉,8-12份;水溶性鋅鹽,2-4份;水溶性鎂鹽,1-3份;水溶性鉀鹽,1-3份;水溶性銨鹽,1.5-2.5份;水,30-50份;番瀉葉提取物,6-10份;所述番瀉葉提取物的制備方法為:將番瀉葉用體積百分含量為70%-90%的乙醇溶液熱回流提取2-4次,合并提取液,減壓濃縮后噴霧干燥即得。優(yōu)選地,所述水溶性鋅鹽選用硫酸鋅、硝酸鋅中的一種或多種,所述水溶性鎂鹽選用硫酸鎂、硝酸鎂、氯化鎂中的一種或多種。優(yōu)選地,所述水溶性鉀鹽選用硫酸鉀、硝酸鉀、氯化鉀中的一種或多種,水溶性銨鹽選用硫酸銨、硝酸銨、碳酸銨中的一種或多種。上述生長(zhǎng)基質(zhì)的制備方法,包括如下步驟:步驟A,將高鈣粉煤灰、鐵礬土和凹凸棒石黏土混合研磨至80-120目;步驟B,將步驟A所得混合粉末與園土拌勻;步驟C,用水溶解腐植酸鈉、水溶性鋅鹽、水溶性鎂鹽、水溶性鉀鹽、水溶性銨鹽和番瀉葉提取物,攪拌均勻;步驟D,將步驟C所得水溶液均勻噴灑在步驟B所得混合固體上,邊翻動(dòng)邊噴灑。一種使用上述生長(zhǎng)基質(zhì)無(wú)性繁殖藥用植物重樓的方法,包括外植體的選取、外植體的消毒、叢生芽的誘導(dǎo)、叢生芽的增殖、生根培養(yǎng)、煉苗移栽,煉苗移栽使用上述生長(zhǎng)基質(zhì)。優(yōu)選地,外植體選取重樓根莖帶頂芽的切段;消毒方法為:將外植體表面清洗干凈,先用75%酒精消毒,再用0.1%氯化汞消毒兩次,吸干即可。優(yōu)選地,叢生芽的誘導(dǎo)方法為:將消毒后的外植體切成0.5cm大接入芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基,芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,附加5%蔗糖和1.2%瓊脂,調(diào)節(jié)pH至6.3;基礎(chǔ)培養(yǎng)基中還添加有激素2mg/LBA和0.4mg/LNAA;當(dāng)無(wú)菌苗長(zhǎng)至5-6厘米后,切取上部2-2.5厘米長(zhǎng)頂芽莖段進(jìn)行叢生芽的增殖。優(yōu)選地,叢生芽的增殖方法為:將頂芽莖段接入芽增殖培養(yǎng)基,芽增殖培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,附加5%蔗糖和1.2%瓊脂,調(diào)節(jié)pH至6.3;基礎(chǔ)培養(yǎng)基中還添加有激素1mg/LBA和0.05mg/LNAA;當(dāng)增殖的叢生芽長(zhǎng)至3-4厘米后,將健壯的芽單切,并進(jìn)行生根培養(yǎng)。優(yōu)選地,生根培養(yǎng)方法為:將健壯的芽單切后接入生根培養(yǎng)基,生根培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,附加5%蔗糖和1.2%瓊脂,調(diào)節(jié)pH至6.3;基礎(chǔ)培養(yǎng)基中還添加有激素0.8mg/LNAA和75mg/L肌醇。優(yōu)選地,煉苗移栽方法為:經(jīng)生根培養(yǎng)基培養(yǎng)后,將發(fā)育良好,具有2-3片展開(kāi)葉片的試管苗瓶蓋打開(kāi),置于室溫下煉苗3-4天后取出小苗,用清水洗去根部培養(yǎng)基,在有70%-80%遮蔭度的大棚內(nèi),移栽到所述生長(zhǎng)基質(zhì)中,澆透水,并用塑料薄膜覆蓋,每天揭開(kāi)薄膜換氣30分鐘,噴水霧保持空氣濕度80%以上,10天后揭去薄膜,按常規(guī)管理。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn):本發(fā)明提供的生長(zhǎng)基質(zhì)及無(wú)性繁殖重樓的方法穩(wěn)定高效,成活率高,且種苗的基礎(chǔ)總皂苷含量明顯升高,有利于生長(zhǎng)出總皂苷含量豐富的藥用重樓。具體實(shí)施方式下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解,對(duì)本發(fā)明技術(shù)方案的簡(jiǎn)單修改或者等同替換不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和保護(hù)范圍。實(shí)施例1:藥用重樓的無(wú)性繁殖生長(zhǎng)基質(zhì)的制備:由如下重量份的成分制備而成:園土,140份;高鈣粉煤灰,40份;鐵礬土,25份;凹凸棒石黏土,15份;腐植酸鈉,10份;水溶性鋅鹽,3份;水溶性鎂鹽,2份;水溶性鉀鹽,2份;水溶性銨鹽,2份;水,40份;番瀉葉提取物,8份.所述番瀉葉提取物的制備方法為:將番瀉葉用體積百分含量為80%的乙醇溶液熱回流提取3次,合并提取液,減壓濃縮后噴霧干燥即得。其中,所述水溶性鋅鹽選用硫酸鋅,也可以選用硝酸鋅,所述水溶性鎂鹽選用硫酸鎂,也可以選用硝酸鎂或氯化鎂;所述水溶性鉀鹽選用硫酸鉀,也可以選用硝酸鉀或氯化鉀,水溶性銨鹽選用硫酸銨,也可以選用硝酸銨或碳酸銨。制備方法包括如下步驟:步驟A,將高鈣粉煤灰、鐵礬土和凹凸棒石黏土混合研磨至80-120目;步驟B,將步驟A所得混合粉末與園土拌勻;步驟C,用水溶解腐植酸鈉、水溶性鋅鹽、水溶性鎂鹽、水溶性鉀鹽、水溶性銨鹽和番瀉葉提取物,攪拌均勻;步驟D,將步驟C所得水溶液均勻噴灑在步驟B所得混合固體上,邊翻動(dòng)邊噴灑。無(wú)性繁殖方法:包括外植體的選取、外植體的消毒、叢生芽的誘導(dǎo)、叢生芽的增殖、生根培養(yǎng)、煉苗移栽,煉苗移栽使用上述生長(zhǎng)基質(zhì)。其中,外植體選取重樓根莖帶頂芽的切段;消毒方法為:將外植體表面清洗干凈,先用75%酒精消毒,再用0.1%氯化汞消毒兩次,吸干即可。其中,叢生芽的誘導(dǎo)方法為:將消毒后的外植體切成0.5cm大接入芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基,芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,附加5%蔗糖和1.2%瓊脂,調(diào)節(jié)pH至6.3;基礎(chǔ)培養(yǎng)基中還添加有激素2mg/LBA和0.4mg/LNAA;當(dāng)無(wú)菌苗長(zhǎng)至5-6厘米后,切取上部2-2.5厘米長(zhǎng)頂芽莖段進(jìn)行叢生芽的增殖。其中,叢生芽的增殖方法為:將頂芽莖段接入芽增殖培養(yǎng)基,芽增殖培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,附加5%蔗糖和1.2%瓊脂,調(diào)節(jié)pH至6.3;基礎(chǔ)培養(yǎng)基中還添加有激素1mg/LBA和0.05mg/LNAA;當(dāng)增殖的叢生芽長(zhǎng)至3-4厘米后,將健壯的芽單切,并進(jìn)行生根培養(yǎng)。其中,生根培養(yǎng)方法為:將健壯的芽單切后接入生根培養(yǎng)基,生根培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,附加5%蔗糖和1.2%瓊脂,調(diào)節(jié)pH至6.3;基礎(chǔ)培養(yǎng)基中還添加有激素0.8mg/LNAA和75mg/L肌醇。其中,煉苗移栽方法為:經(jīng)生根培養(yǎng)基培養(yǎng)后,將發(fā)育良好,具有2-3片展開(kāi)葉片的試管苗瓶蓋打開(kāi),置于室溫下煉苗3-4天后取出小苗,用清水洗去根部培養(yǎng)基,在有70%-80%遮蔭度的大棚內(nèi),移栽到所述生長(zhǎng)基質(zhì)中,澆透水,并用塑料薄膜覆蓋,每天揭開(kāi)薄膜換氣30分鐘,噴水霧保持空氣濕度80%以上,10天后揭去薄膜,按常規(guī)管理。實(shí)施例2:藥用重樓的無(wú)性繁殖生長(zhǎng)基質(zhì)的制備:由如下重量份的成分制備而成:園土,120份;高鈣粉煤灰,30份;鐵礬土,20份;凹凸棒石黏土,10份;腐植酸鈉,8份;水溶性鋅鹽,2份;水溶性鎂鹽,1份;水溶性鉀鹽,1份;水溶性銨鹽,1.5份;水,30份;番瀉葉提取物,6份。所述番瀉葉提取物的制備方法為:將番瀉葉用體積百分含量為70%的乙醇溶液熱回流提取4次,合并提取液,減壓濃縮后噴霧干燥即得。其中,所述水溶性鋅鹽選用硫酸鋅,也可以選用硝酸鋅,所述水溶性鎂鹽選用硫酸鎂,也可以選用硝酸鎂或氯化鎂;所述水溶性鉀鹽選用硫酸鉀,也可以選用硝酸鉀或氯化鉀,水溶性銨鹽選用硫酸銨,也可以選用硝酸銨或碳酸銨。制備方法包括如下步驟:步驟A,將高鈣粉煤灰、鐵礬土和凹凸棒石黏土混合研磨至80-120目;步驟B,將步驟A所得混合粉末與園土拌勻;步驟C,用水溶解腐植酸鈉、水溶性鋅鹽、水溶性鎂鹽、水溶性鉀鹽、水溶性銨鹽和番瀉葉提取物,攪拌均勻;步驟D,將步驟C所得水溶液均勻噴灑在步驟B所得混合固體上,邊翻動(dòng)邊噴灑。無(wú)性繁殖方法:包括外植體的選取、外植體的消毒、叢生芽的誘導(dǎo)、叢生芽的增殖、生根培養(yǎng)、煉苗移栽,煉苗移栽使用上述生長(zhǎng)基質(zhì)。其中,外植體選取重樓根莖帶頂芽的切段;消毒方法為:將外植體表面清洗干凈,先用75%酒精消毒,再用0.1%氯化汞消毒兩次,吸干即可。其中,叢生芽的誘導(dǎo)方法為:將消毒后的外植體切成0.5cm大接入芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基,芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,附加5%蔗糖和1.2%瓊脂,調(diào)節(jié)pH至6.3;基礎(chǔ)培養(yǎng)基中還添加有激素2mg/LBA和0.4mg/LNAA;當(dāng)無(wú)菌苗長(zhǎng)至5-6厘米后,切取上部2-2.5厘米長(zhǎng)頂芽莖段進(jìn)行叢生芽的增殖。其中,叢生芽的增殖方法為:將頂芽莖段接入芽增殖培養(yǎng)基,芽增殖培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,附加5%蔗糖和1.2%瓊脂,調(diào)節(jié)pH至6.3;基礎(chǔ)培養(yǎng)基中還添加有激素1mg/LBA和0.05mg/LNAA;當(dāng)增殖的叢生芽長(zhǎng)至3-4厘米后,將健壯的芽單切,并進(jìn)行生根培養(yǎng)。其中,生根培養(yǎng)方法為:將健壯的芽單切后接入生根培養(yǎng)基,生根培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,附加5%蔗糖和1.2%瓊脂,調(diào)節(jié)pH至6.3;基礎(chǔ)培養(yǎng)基中還添加有激素0.8mg/LNAA和75mg/L肌醇。其中,煉苗移栽方法為:經(jīng)生根培養(yǎng)基培養(yǎng)后,將發(fā)育良好,具有2-3片展開(kāi)葉片的試管苗瓶蓋打開(kāi),置于室溫下煉苗3-4天后取出小苗,用清水洗去根部培養(yǎng)基,在有70%-80%遮蔭度的大棚內(nèi),移栽到所述生長(zhǎng)基質(zhì)中,澆透水,并用塑料薄膜覆蓋,每天揭開(kāi)薄膜換氣30分鐘,噴水霧保持空氣濕度80%以上,10天后揭去薄膜,按常規(guī)管理。實(shí)施例3:藥用重樓的無(wú)性繁殖生長(zhǎng)基質(zhì)的制備:由如下重量份的成分制備而成:園土,160份;高鈣粉煤灰,50份;鐵礬土,30份;凹凸棒石黏土,20份;腐植酸鈉,12份;水溶性鋅鹽,4份;水溶性鎂鹽,3份;水溶性鉀鹽,3份;水溶性銨鹽,2.5份;水,50份;番瀉葉提取物,10份。所述番瀉葉提取物的制備方法為:將番瀉葉用體積百分含量為90%的乙醇溶液熱回流提取2次,合并提取液,減壓濃縮后噴霧干燥即得。其中,所述水溶性鋅鹽選用硫酸鋅,也可以選用硝酸鋅,所述水溶性鎂鹽選用硫酸鎂,也可以選用硝酸鎂或氯化鎂;所述水溶性鉀鹽選用硫酸鉀,也可以選用硝酸鉀或氯化鉀,水溶性銨鹽選用硫酸銨,也可以選用硝酸銨或碳酸銨。制備方法包括如下步驟:步驟A,將高鈣粉煤灰、鐵礬土和凹凸棒石黏土混合研磨至80-120目;步驟B,將步驟A所得混合粉末與園土拌勻;步驟C,用水溶解腐植酸鈉、水溶性鋅鹽、水溶性鎂鹽、水溶性鉀鹽、水溶性銨鹽和番瀉葉提取物,攪拌均勻;步驟D,將步驟C所得水溶液均勻噴灑在步驟B所得混合固體上,邊翻動(dòng)邊噴灑。無(wú)性繁殖方法:包括外植體的選取、外植體的消毒、叢生芽的誘導(dǎo)、叢生芽的增殖、生根培養(yǎng)、煉苗移栽,煉苗移栽使用上述生長(zhǎng)基質(zhì)。其中,外植體選取重樓根莖帶頂芽的切段;消毒方法為:將外植體表面清洗干凈,先用75%酒精消毒,再用0.1%氯化汞消毒兩次,吸干即可。其中,叢生芽的誘導(dǎo)方法為:將消毒后的外植體切成0.5cm大接入芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基,芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,附加5%蔗糖和1.2%瓊脂,調(diào)節(jié)pH至6.3;基礎(chǔ)培養(yǎng)基中還添加有激素2mg/LBA和0.4mg/LNAA;當(dāng)無(wú)菌苗長(zhǎng)至5-6厘米后,切取上部2-2.5厘米長(zhǎng)頂芽莖段進(jìn)行叢生芽的增殖。其中,叢生芽的增殖方法為:將頂芽莖段接入芽增殖培養(yǎng)基,芽增殖培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,附加5%蔗糖和1.2%瓊脂,調(diào)節(jié)pH至6.3;基礎(chǔ)培養(yǎng)基中還添加有激素1mg/LBA和0.05mg/LNAA;當(dāng)增殖的叢生芽長(zhǎng)至3-4厘米后,將健壯的芽單切,并進(jìn)行生根培養(yǎng)。其中,生根培養(yǎng)方法為:將健壯的芽單切后接入生根培養(yǎng)基,生根培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,附加5%蔗糖和1.2%瓊脂,調(diào)節(jié)pH至6.3;基礎(chǔ)培養(yǎng)基中還添加有激素0.8mg/LNAA和75mg/L肌醇。其中,煉苗移栽方法為:經(jīng)生根培養(yǎng)基培養(yǎng)后,將發(fā)育良好,具有2-3片展開(kāi)葉片的試管苗瓶蓋打開(kāi),置于室溫下煉苗3-4天后取出小苗,用清水洗去根部培養(yǎng)基,在有70%-80%遮蔭度的大棚內(nèi),移栽到所述生長(zhǎng)基質(zhì)中,澆透水,并用塑料薄膜覆蓋,每天揭開(kāi)薄膜換氣30分鐘,噴水霧保持空氣濕度80%以上,10天后揭去薄膜,按常規(guī)管理。對(duì)比實(shí)施例:生長(zhǎng)基質(zhì)的制備:由如下重量份的成分制備而成:園土,140份;高鈣粉煤灰,40份;鐵礬土,25份;凹凸棒石黏土,15份;腐植酸鈉,10份;水溶性鋅鹽,3份;水溶性鎂鹽,2份;水溶性鉀鹽,2份;水溶性銨鹽,2份;水,40份。其中,所述水溶性鋅鹽選用硫酸鋅,也可以選用硝酸鋅,所述水溶性鎂鹽選用硫酸鎂,也可以選用硝酸鎂或氯化鎂;所述水溶性鉀鹽選用硫酸鉀,也可以選用硝酸鉀或氯化鉀,水溶性銨鹽選用硫酸銨,也可以選用硝酸銨或碳酸銨。制備方法包括如下步驟:步驟A,將高鈣粉煤灰、鐵礬土和凹凸棒石黏土混合研磨至80-120目;步驟B,將步驟A所得混合粉末與園土拌勻;步驟C,用水溶解腐植酸鈉、水溶性鋅鹽、水溶性鎂鹽、水溶性鉀鹽和水溶性銨鹽,攪拌均勻;步驟D,將步驟C所得水溶液均勻噴灑在步驟B所得混合固體上,邊翻動(dòng)邊噴灑。無(wú)性繁殖方法:包括外植體的選取、外植體的消毒、叢生芽的誘導(dǎo)、叢生芽的增殖、生根培養(yǎng)、煉苗移栽,煉苗移栽使用上述生長(zhǎng)基質(zhì)。其中,外植體選取重樓根莖帶頂芽的切段;消毒方法為:將外植體表面清洗干凈,先用75%酒精消毒,再用0.1%氯化汞消毒兩次,吸干即可。其中,叢生芽的誘導(dǎo)方法為:將消毒后的外植體切成0.5cm大接入芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基,芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,附加5%蔗糖和1.2%瓊脂,調(diào)節(jié)pH至6.3;基礎(chǔ)培養(yǎng)基中還添加有激素2mg/LBA和0.4mg/LNAA;當(dāng)無(wú)菌苗長(zhǎng)至5-6厘米后,切取上部2-2.5厘米長(zhǎng)頂芽莖段進(jìn)行叢生芽的增殖。其中,叢生芽的增殖方法為:將頂芽莖段接入芽增殖培養(yǎng)基,芽增殖培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,附加5%蔗糖和1.2%瓊脂,調(diào)節(jié)pH至6.3;基礎(chǔ)培養(yǎng)基中還添加有激素1mg/LBA和0.05mg/LNAA;當(dāng)增殖的叢生芽長(zhǎng)至3-4厘米后,將健壯的芽單切,并進(jìn)行生根培養(yǎng)。其中,生根培養(yǎng)方法為:將健壯的芽單切后接入生根培養(yǎng)基,生根培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,附加5%蔗糖和1.2%瓊脂,調(diào)節(jié)pH至6.3;基礎(chǔ)培養(yǎng)基中還添加有激素0.8mg/LNAA和75mg/L肌醇。其中,煉苗移栽方法為:經(jīng)生根培養(yǎng)基培養(yǎng)后,將發(fā)育良好,具有2-3片展開(kāi)葉片的試管苗瓶蓋打開(kāi),置于室溫下煉苗3-4天后取出小苗,用清水洗去根部培養(yǎng)基,在有70%-80%遮蔭度的大棚內(nèi),移栽到所述生長(zhǎng)基質(zhì)中,澆透水,并用塑料薄膜覆蓋,每天揭開(kāi)薄膜換氣30分鐘,噴水霧保持空氣濕度80%以上,10天后揭去薄膜,按常規(guī)管理。效果實(shí)施例:統(tǒng)計(jì)煉苗移栽10天后種苗成活率及總皂苷含量(地上部分,以薯蕷皂苷元對(duì)照品)。結(jié)果如下表:成活率總皂苷含量實(shí)施例1100%15.1%實(shí)施例2100%12.8%實(shí)施例3100%13.6%對(duì)比實(shí)施例91%3.9%上述結(jié)果表明,本發(fā)明提供的生長(zhǎng)基質(zhì)及無(wú)性繁殖重樓的方法穩(wěn)定高效,成活率高,且種苗的基礎(chǔ)總皂苷含量明顯升高,有利于生長(zhǎng)出總皂苷含量豐富的藥用重樓。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解,對(duì)本發(fā)明技術(shù)方案的簡(jiǎn)單修改或者等同替換不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和保護(hù)范圍。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3