本發(fā)明涉及一種植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及能源植物甜高粱的組織培養(yǎng)技術(shù)。

背景技術(shù)：
甜高粱(英文名SweetSorghum，拉丁名SorghumbicolorL.Moench)是起源于非洲熱帶大陸的高桿一年生C4草本植物，，因其生長迅速、抗逆性強(qiáng)、糖分積累快、生物學(xué)產(chǎn)量高、乙醇產(chǎn)量高、乙醇轉(zhuǎn)化率高等特點(diǎn)，成為一種優(yōu)良的飼料作物、糖料作物和可再生的能源作物，有著“沙漠中的駱駝”的美譽(yù)，被認(rèn)為是最具開發(fā)潛力的能源植物之一。在石油資源面臨枯竭的嚴(yán)峻形勢下，甜高粱作為能源作物已受到全世界的廣泛重視，近些年投入大量的人力和物力進(jìn)行研究開發(fā)?，F(xiàn)代基因工程技術(shù)尤其是轉(zhuǎn)基因技術(shù)在農(nóng)業(yè)上的應(yīng)用取得了新突破。甜高粱作為世界上第五大農(nóng)作物，同時(shí)又是適應(yīng)性較強(qiáng)的能源作物，逐漸成為現(xiàn)代農(nóng)業(yè)基因轉(zhuǎn)化的目標(biāo)能源植物之一。其中，采用轉(zhuǎn)基因技術(shù)對甜高粱品種進(jìn)行營養(yǎng)改良、抗病蟲、低木質(zhì)素含量及高乙醇產(chǎn)率等，這些研究已成為目前的研究熱點(diǎn)并展示出良好的應(yīng)用前景。然而，與大多數(shù)禾本科植物的組織培養(yǎng)不同，甜高粱在人工誘導(dǎo)愈傷組織方面存在著很多困難，被認(rèn)為是最難進(jìn)行組織培養(yǎng)的品種之一。因而，加強(qiáng)對甜高粱愈傷組織誘導(dǎo)及再生植株的體外繁殖的研究就很有必要，這將對甜高粱新品種的培育起到很大的推動(dòng)作用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于，針對上述現(xiàn)有甜高粱體外繁殖技術(shù)存在的缺陷和不足，提供一種甜高粱的體外繁殖方法，以拓寬甜高粱組織培養(yǎng)和遺傳轉(zhuǎn)化的基因型范圍，以實(shí)現(xiàn)利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)對能源植物進(jìn)行遺傳改良，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)現(xiàn)代基因工程技術(shù)在農(nóng)業(yè)領(lǐng)域應(yīng)用的新突破。一種采用甜高粱種子組織培養(yǎng)快速育苗方法，按照下述步驟進(jìn)行：(1)種子處理a、將甜高粱種子在10％(v/v)NaClO中浸泡2h，期間不停攪拌；b、用蒸餾水清洗3遍后，于暗處靜置過夜；c、用10％(v/v)NaClO浸泡20min；d、在超凈工作臺(tái)中，用無菌水清洗3～5遍，將其接種在愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上進(jìn)行愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)。(2)愈傷組織誘導(dǎo)將接種的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)箱，每天光照16h，光照強(qiáng)度1400-1500lux(勒克斯)，溫度25℃±1℃，無菌條件下培養(yǎng)3～5d后，種子開始萌動(dòng)，1周后開始有愈傷形成，并伴隨有新芽或者新葉的形成，誘導(dǎo)愈傷選用培養(yǎng)基為MS基礎(chǔ)培養(yǎng)基，補(bǔ)充2,4-D1～3mg/L，6-BA1～3mg/L，蔗糖30g/L，脯氨酸0.7～1g/L,KH2PO41～2g/L,CuSO41～3μM,pH為5.8。(3)生芽生根培養(yǎng)4周后，在無菌條件下將新長成的愈傷組織轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基上，溫度25℃±1℃，光照16h，光強(qiáng)1500～2000lux，7～10d后開始生根，且速度較快，2周后，可將生根的甜高粱苗進(jìn)行過渡栽培。其中，步驟(3)生根培養(yǎng)基選用MS基礎(chǔ)培養(yǎng)基，補(bǔ)充IAA1～3mg/L，蔗糖30g/L，脯氨酸0.7～1g/L,KH2PO41～2g/L,CuSO41～3μM,pH為5.8。通過具體的實(shí)驗(yàn)對本發(fā)明的研究方法進(jìn)行了描述，與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下的優(yōu)點(diǎn)及結(jié)果：本發(fā)明采用甜高粱種子組織培育方法，既可繁殖優(yōu)良品種，又可從種子實(shí)生苗中選取優(yōu)異的株苗用作遺傳轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)，避免花費(fèi)大量金錢和精力。本發(fā)明方法可行，操作簡單，可以為人們進(jìn)行雜交育種及遺傳轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)，提供了一種有效的途徑?？s短了甜高粱的培養(yǎng)周期，利用正交實(shí)驗(yàn)，摸索出能誘導(dǎo)甜高粱愈傷組織形成的最適激素配比，能在較大程度上促進(jìn)愈傷及生芽、生根的形成，縮短甜高粱的培養(yǎng)周期。附圖說明附圖1-7為實(shí)施例一中的實(shí)驗(yàn)效果圖。圖1培養(yǎng)3d后種子萌動(dòng)；圖2培養(yǎng)2周后愈傷組織；圖3愈傷組織切塊2周后；圖4愈傷增殖3周后；圖5叢生芽的產(chǎn)生；圖6根的產(chǎn)生；圖7成苗；其中A為無菌苗轉(zhuǎn)移至營養(yǎng)土中培養(yǎng)1周，B為大花盆中培養(yǎng)2周。具體實(shí)施方式：下面結(jié)合實(shí)例和附圖詳細(xì)說明6-BA6-b芐氨基嘌吟(6-BenzylaminoPurine)NAAα-萘乙酸(1-NaPhthylaceticacid)2,4-D2，4-二氯苯氧乙酸(2,4-Dichlorophenoxyaceticacid)MS基礎(chǔ)培養(yǎng)基配方如下:實(shí)施例一：本發(fā)明選擇甜高粱種子為外植體，在MS培養(yǎng)基上添加不同的激素配比，誘導(dǎo)愈傷組織，分化及生根誘導(dǎo)。具體操作過程為：選取外植體選取成熟飽滿的甜高粱種子100顆。愈傷誘導(dǎo)及芽分化將種子置于培養(yǎng)皿中，采用10ml10％進(jìn)行表面消毒2h，期間置于搖床上不停攪拌；棄去次氯酸鈉，清洗干凈，用蒸餾水浸泡過夜；用10ml10％(v/v)的NaClO消毒20min，無菌條件下放入愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基中。培養(yǎng)基配方為MS基礎(chǔ)培養(yǎng)基上添加2,4-D1mg/L，6-BA2mg/L，蔗糖30g/L，脯氨酸0.7～1g/L,KH2PO41～2g/L,CuSO41～3μM,pH為5.824℃，在光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)10～15d誘導(dǎo)獲得愈傷組織，繼續(xù)培養(yǎng)30～40d時(shí)，可從愈傷組織中再生出大量的叢生芽，具體實(shí)驗(yàn)效果見圖1，圖2，圖3，圖4和圖5。經(jīng)過統(tǒng)計(jì)，100顆甜高粱成熟種子誘導(dǎo)芽分化率可達(dá)到90％以上。叢生芽生根培養(yǎng)轉(zhuǎn)移分化成芽的愈傷組織至生根培養(yǎng)基上進(jìn)行生根誘導(dǎo)培養(yǎng)，25℃，光照條件下培養(yǎng)15～20d，誘導(dǎo)生根，得到再生植株(圖6)。其中，生根培養(yǎng)基配方為MS基礎(chǔ)培養(yǎng)基上添加IAA1.5mg/L，蔗糖30g/L，脯氨酸0.7～1g/L,KH2PO41～2g/L,CuSO40.15～0.3mg/L，pH為5.8。移栽至溫室打開培養(yǎng)瓶封口，將再生植株煉苗4～6d，移栽至溫室即可(圖7)。實(shí)施例二：本發(fā)明選擇甜高粱種子為外植體，在MS培養(yǎng)基上添加不同的激素配比及營養(yǎng)物質(zhì)，誘導(dǎo)愈傷組織，分化及生根誘導(dǎo)。具體生產(chǎn)過程為：(1)選取外植體選取成熟飽滿的甜高粱種子100顆。(2)愈傷誘導(dǎo)及芽分化將種子置于培養(yǎng)皿中，采用10ml10％(v/v)的NaClO表面消毒2h，期間置于搖床上不停攪拌；棄去次氯酸鈉，清洗干凈，用蒸餾水浸泡過夜；用10ml10％質(zhì)量分?jǐn)?shù)次氯酸鈉消毒20min，無菌水清洗3～5遍，無菌條件下接種到愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基中。培養(yǎng)基配方為MS基礎(chǔ)培養(yǎng)基上添加2,4-D3mg/L，6-BA1.0mg/L，蔗糖30g/L，脯氨酸0.7～1g/L,KH2PO41～2g/L,CuSO41～3μM,pH為5.8。25℃，在光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)15～20d誘導(dǎo)獲得愈傷組織；分化培養(yǎng)，30～40d時(shí)，可從愈傷組織中再生出大量的叢生芽。經(jīng)過統(tǒng)計(jì)，100顆甜高粱成熟種子誘導(dǎo)芽分化率只能達(dá)到65％左右。(3)叢生芽生根培養(yǎng)轉(zhuǎn)移分化成芽的愈傷組織至生根培養(yǎng)基上進(jìn)行生根誘導(dǎo)培養(yǎng)，25℃，光照條件下培養(yǎng)20～30d，誘導(dǎo)生根，得到再生植株。其中，生根培養(yǎng)基配方為MS基礎(chǔ)培養(yǎng)基上添加IAA2.0mg/L，蔗糖30g/L，脯氨酸0.7～1g/L,KH2PO41～2g/L,CuSO40.15～0.3mg/L，pH為5.8。(4)移栽至溫室打開培養(yǎng)瓶封口，將再生植株煉苗4～6d，移栽至溫室即可。