本申請要求2014年8月6日提交的美國臨時申請系列No.62/033,825；2015年8月6日提交的美國申請系列No.14/819,577；和2015年8月6日提交的美國申請系列No.14/819,583的優(yōu)先權(quán)權(quán)益，其由此通過引用全文并入。
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明一般地涉及用于工業(yè)用途的細(xì)菌孢子組合物，所述工業(yè)用途如農(nóng)業(yè)、環(huán)境治理、堆制肥料、甲烷生產(chǎn)、保潔(cleansupplies)、采油和直接飼喂微生物。
背景技術(shù)：
：孢子形成細(xì)菌物種具有廣泛的工業(yè)應(yīng)用，包括在農(nóng)業(yè)、環(huán)境治理、堆制肥料、甲烷生產(chǎn)、采油和保潔中的用途。根據(jù)使用的特定細(xì)菌種，其中包含細(xì)菌的組合物可能特別地適用于農(nóng)業(yè)、園藝、環(huán)境、益生劑(probiotic)、水生動植物、工業(yè)和衛(wèi)生用途。幾種孢子形成細(xì)菌物種在許多行業(yè)中具有實用性。例如，巨大芽孢桿菌(Bacillusmegaterium)、解淀粉芽孢桿菌(Bacillusamyloliquefaciens)、地衣芽孢桿菌(Bacilluslicheniformis)、枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)和短小芽孢桿菌(Bacilluspumilus)用作農(nóng)業(yè)殺真菌劑，并且用于廢水處理、清潔產(chǎn)品和直接飼喂微生物中。關(guān)于農(nóng)業(yè)應(yīng)用，使用孢子形成細(xì)菌來增強(qiáng)植物的健康是本領(lǐng)域公知的。例如，Zhang等(2009，PlantJ58:568-577)教導(dǎo)了促進(jìn)植物生長的細(xì)菌枯草芽孢桿菌GB03提高了植物的鐵吸收和光合作用能力。Xie等(2009，PlantSignalingandBehavior4(10):948-953)教導(dǎo)了這一相同的枯草芽孢桿菌菌株產(chǎn)生的揮發(fā)物提高了植物生長和種子計數(shù)。Han等(2014，F(xiàn)rontiersinPlantScience5(525):1-8)報道了在接種了枯草芽孢桿菌GB03的土壤中生長的白三葉草植物在芽高度、根長度、植物生物量、葉面積和葉綠素含量方面顯著高于非接種的對照。也可以將此類細(xì)菌的孢子涂覆于種子或其他植物繁殖材料上，使得一旦播種或種植，則可以建立支持種子萌發(fā)、植物生長的刺激或種子和所得到的植物的生物防護(hù)的增強(qiáng)環(huán)境。例如，能夠在豆類植物中實現(xiàn)固氮的共生細(xì)菌，如來自根瘤菌(Rhizobium)和慢生根瘤菌(Bradyrhizobium)屬的那些，可以用于接種豆類植物以有助于根瘤形成?？梢酝ㄟ^涂覆種子、對種子或作物的農(nóng)田噴撒(dusting)或在種植時在犁溝中放置接種物來完成接種。孢子形成細(xì)菌還可以用于環(huán)境治理方法中，如生物治理(bioremediation)。生物治理涉及使用微生物將化合物轉(zhuǎn)化成無害或不太有害的化合物。生物治理技術(shù)通常比競爭的物理技術(shù)成本低，并且可以適用于更寬范圍的污染問題和現(xiàn)場條件的變化。參見US2002/0090697?？梢杂眉?xì)菌處理受污染的介質(zhì)以促進(jìn)水、土壤和工業(yè)廢水中有機(jī)污染物的生物降解。例如，Lupton等(美國專利No.5,062,956)討論了一種除去可溶性Cr(VI)的方法，其使用厭氧細(xì)菌將Cr(VI)還原成Cr(III)并作為不溶性氫氧化物(其作為固定沉淀出來)固定。Lupton等還描述了在連續(xù)生物反應(yīng)器中處理含有不合需要量的Cr(VI)的水性殘留物。Turick等(美國專利No.5,681,739)描述了一種降低液體水性殘留物中的Cr(VI)濃度的方法，包括提供Cr(Vi)-還原細(xì)菌、將液體水性殘留物與營養(yǎng)介質(zhì)(例如，糖蜜、醋酸、氨基酸、酪蛋白氨基酸、尿素)混合并將混合物接觸厭氧細(xì)菌來增強(qiáng)Cr(VI)還原成Cr(III)的步驟。這種方法可以用于六價鉻污染的土壤和/或地下水的生物治理。一個與使用此類細(xì)菌相關(guān)的困難是它們必須處于營養(yǎng)體狀態(tài)以提供這種益處，但難以將芽孢桿菌種和其他孢子形成細(xì)菌以營養(yǎng)體形式配制而使得它們具有適當(dāng)?shù)膬Υ嫫?。此外，營養(yǎng)體形式的芽孢桿菌種可能不能在工業(yè)用途需要的苛刻條件下存活，如在適合于種子萌發(fā)發(fā)生的條件之前種子或其他植物繁殖材料所經(jīng)歷的條件。相反，這些物種的孢子形式的制劑對于商業(yè)和實際應(yīng)用合適得多。例如，如Cartman等(2008，AppliedandEnvironmentalMicrobiology，8月，p.5254-5258)提到的，“細(xì)菌孢子特別適合用作活微生物產(chǎn)品，因為它們是代謝休眠的且對于環(huán)境應(yīng)激具有高度恢復(fù)力。這些固有特性從商業(yè)角度來看是高度需要的且意味著基于孢子的產(chǎn)品具有長保存期和在分配和儲存期間保持其生存力”。某些化合物(特別是某些L-氨基酸)刺激芽孢桿菌孢子萌發(fā)的用途已經(jīng)在文獻(xiàn)中報道。例如，F(xiàn)oerster等(1996，JournalofBacteriology91(3):1168-1177)公開了L-丙氨酸添加到水性溶液中的孢子混懸液中引起多種芽孢桿菌種的萌發(fā)。然而，在工業(yè)用途中使用細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物的組合的一個挑戰(zhàn)是在萌發(fā)化合物的存在下將孢子保持在無活性形式直至需要孢子萌發(fā)。例如，用細(xì)菌孢子組合物處理的植物繁殖材料(如種子)可以在種植前經(jīng)歷幾個月的儲存期。因此，存在著對于可以刺激細(xì)菌孢子在有利條件下快速萌發(fā)同時還防止孢子太早萌發(fā)直至需要孢子萌發(fā)的細(xì)菌孢子制劑的需求。此外，用于農(nóng)業(yè)或工業(yè)用途的細(xì)菌可以暴露于不利于細(xì)菌孢子萌發(fā)的廣泛的環(huán)境條件，如低土壤pH、高鹽濃度(例如，NaCl)和高金屬濃度(例如，銅和鋁)。因此，存在著對研發(fā)能夠在這些不利條件下萌發(fā)的細(xì)菌孢子制劑的需求。技術(shù)實現(xiàn)要素：在一個方面中，本發(fā)明涉及涂覆有包含細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物的組合物的植物繁殖材料。在某些實施方案中，將孢子和萌發(fā)化合物保持在無活性形式，使得萌發(fā)化合物不會誘導(dǎo)孢子的萌發(fā)直至組合物經(jīng)歷活化環(huán)境。組合物可以進(jìn)一步包含阻止細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物相互作用直至組合物經(jīng)歷活化環(huán)境的物質(zhì)。在某些實施方案中，所述物質(zhì)選自表面活性劑、遮蔽劑、塑化劑、著色劑、染料、增亮劑、乳化劑、助流劑、凝結(jié)劑、消泡劑、增稠劑、蠟、殺菌劑、填充劑、聚合物、潤濕劑和防凍劑。在某些實施方案中，所述組合物包含細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物的緊密混合物，其中細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物保持在鄰近的位置直至它們到達(dá)有利于萌發(fā)的環(huán)境。在某些實施方案中，植物繁殖材料選自花、種子、根、果實、塊莖、球莖、根莖、芽、苗、種子、葉、秧苗和移植物。在特定實施方案中，植物繁殖材料是種子。植物繁殖材料可以在萌發(fā)后或從土壤出芽后移栽。在上述植物繁殖材料的某些實施方案中，細(xì)菌孢子選自土壤芽孢桿菌(Bacillusagri)、Bacillusaizawai、白色芽孢桿菌(Bacillusalbolactis)、高地芽孢桿菌(Bacillusaltitudinis)、解淀粉芽孢桿菌、食丁酸芽孢桿菌(Bacillusbutanolivorans)、蠟狀芽孢桿菌(Bacilluscereus)、凝結(jié)芽孢桿菌(Bacilluscoagulans)、Bacillusendoparasiticus、Bacillusendorhythmos、堅強(qiáng)芽孢桿菌(Bacillusfirmus)、Bacilluskurstaki、Bacilluslacticola、乳病芽孢桿菌(Bacilluslactimorbus)、乳芽孢桿菌(Bacilluslactis)、側(cè)孢芽孢桿菌(Bacilluslaterosporus)、緩病芽孢桿菌(Bacilluslentimorbus)、地衣芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、水母芽孢桿菌(Bacillusmedusa)、Bacillusmetiens、莫海威芽孢桿菌(Bacillusmojavensis)、蕈狀芽孢桿菌(Bacillusmycoides)、納豆芽孢桿菌(Bacillusnatto)、Bacillusnigrificans、日本甲蟲芽孢桿菌(Bacilluspopillae)、短小芽孢桿菌、暹羅芽孢桿菌(Bacillussiamensis)、簡單芽孢桿菌(Bacillussimplex)、球形芽孢桿菌(Bacillussphaericus)、芽孢桿菌屬(Bacillusspp.)、枯草芽孢桿菌、蘇云金芽孢桿菌(Bacillusthuringiensis)、Bacillusunifagellatus、熱纖梭菌(Clostridiumthermocellum)、揚(yáng)氏梭菌(Clostridiumljungdahlii)、丙酮丁酸梭菌(Clostridiumacetobutylicum)、拜氏梭菌(Clostridiumbeijerinckii)、丁酸梭菌(Clostridiumbutyricum)、穿刺巴斯德氏芽菌(Pasteuriapenetrans)、多刺巴斯德氏芽菌(Pasteuriathornei)、Pasteurianishizawae和鏈霉菌屬(Streptomyces)的種。在上述植物繁殖材料的某些實施方案中，萌發(fā)化合物選自L-丙氨酸、L-纈氨酸、L-脯氨酸、L-亮氨酸、L-半胱氨酸、L-蘇氨酸、L-谷氨酰胺、L-天冬酰胺、L-苯丙氨酸及其類似物。在特定實施方案中，細(xì)菌孢子選自枯草芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、堅強(qiáng)芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌和短小芽孢桿菌；和萌發(fā)化合物選自L-丙氨酸、L-纈氨酸和L-天冬酰胺。組合物可以進(jìn)一步包含種子涂層聚合物。在某些實施方案中，組合物進(jìn)一步包含選自表面活性劑、遮蔽劑、塑化劑、著色劑、染料、增亮劑、乳化劑、助流劑、凝結(jié)劑、消泡劑、增稠劑、蠟、殺菌劑、填充劑、聚合物、潤濕劑和防凍劑的物質(zhì)。在另一個方面中，本發(fā)明涉及增強(qiáng)植物繁殖材料的生長或產(chǎn)量的方法，包括用包含細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物的組合物涂覆植物繁殖材料，其中所述植物繁殖材料的生長或產(chǎn)量相對于沒有涂覆所述組合物的相應(yīng)植物繁殖材料的生長或產(chǎn)量得到增強(qiáng)。在某些實施方案中，將孢子和萌發(fā)化合物保持在無活性形式，使得萌發(fā)化合物不會誘導(dǎo)孢子的萌發(fā)直至組合物經(jīng)歷活化環(huán)境。在一些實施方案中，組合物進(jìn)一步包含阻止細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物相互作用直至組合物經(jīng)歷活化環(huán)境的物質(zhì)。在一些實施方案中，所述物質(zhì)選自表面活性劑、遮蔽劑、塑化劑、著色劑、染料、增亮劑、乳化劑、助流劑、凝結(jié)劑、消泡劑、增稠劑、蠟、殺菌劑、填充劑、聚合物、潤濕劑和防凍劑。在上述方法的某些實施方案中，組合物包含細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物的緊密混合物，其中細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物保持在鄰近的位置直至它們到達(dá)有利于萌發(fā)的環(huán)境。在某些實施方案中，植物繁殖材料選自花、種子、根、果實、塊莖、球莖、根莖、芽、苗、種子、葉、秧苗和移植物。在特定實施方案中，植物繁殖材料是種子。在一些實施方案中，所述方法進(jìn)一步包括在萌發(fā)后或從土壤出芽后移栽所述植物繁殖材料。在某些實施方案中，上述方法中使用的細(xì)菌孢子選自土壤芽孢桿菌、Bacillusaizawai、白色芽孢桿菌、高地芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、食丁酸芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌、凝結(jié)芽孢桿菌、Bacillusendoparasiticus、Bacillusendorhythmos、堅強(qiáng)芽孢桿菌、Bacilluskurstaki、Bacilluslacticola、乳病芽孢桿菌、乳芽孢桿菌、側(cè)孢芽孢桿菌、緩病芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、水母芽孢桿菌、Bacillusmetiens、莫海威芽孢桿菌、蕈狀芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌、Bacillusnigrificans、日本甲蟲芽孢桿菌、短小芽孢桿菌、暹羅芽孢桿菌、簡單芽孢桿菌、球形芽孢桿菌、芽孢桿菌屬、枯草芽孢桿菌、蘇云金芽孢桿菌、Bacillusunifagellatus、熱纖梭菌、揚(yáng)氏梭菌、丙酮丁酸梭菌、拜氏梭菌、丁酸梭菌、穿刺巴斯德氏芽菌、多刺巴斯德氏芽菌、Pasteurianishizawae和鏈霉菌屬的種。在上述方法的某些實施方案中，萌發(fā)化合物選自L-丙氨酸、L-纈氨酸、L-脯氨酸、L-亮氨酸、L-半胱氨酸、L-蘇氨酸、L-谷氨酰胺、L-天冬酰胺、L-苯丙氨酸及其類似物。在一些實施方案中，細(xì)菌孢子選自枯草芽孢桿菌(B.subtilis)、解淀粉芽孢桿菌(B.amyloliquefaciens)、堅強(qiáng)芽孢桿菌(B.firmus)、地衣芽孢桿菌(B.licheniformis)、巨大芽孢桿菌(B.megaterium)和短小芽孢桿菌(B.pumilus)；且萌發(fā)化合物選自L-丙氨酸、L-纈氨酸和L-天冬酰胺。上述方法中使用的組合物可以進(jìn)一步包含種子涂層聚合物。在特定實施方案中，組合物包含表面活性劑、遮蔽劑、塑化劑、著色劑、染料、增亮劑、乳化劑、助流劑、凝結(jié)劑、消泡劑、增稠劑、蠟、殺菌劑、填充劑、聚合物、潤濕劑和防凍劑中的一種或多種。在另一個方面中，本發(fā)明涉及包含細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物的組合物，其中細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物保持在無活性形式，使得萌發(fā)化合物不會誘導(dǎo)孢子的萌發(fā)直至組合物經(jīng)歷活化環(huán)境。在一些實施方案中，組合物進(jìn)一步包含阻止細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物相互作用直至組合物經(jīng)歷活化環(huán)境的物質(zhì)。在一些實施方案中，所述物質(zhì)選自表面活性劑、遮蔽劑、塑化劑、著色劑、染料、增亮劑、乳化劑、助流劑、凝結(jié)劑、消泡劑、增稠劑、蠟、殺菌劑、填充劑、聚合物、潤濕劑和防凍劑。在上述組合物的特定實施方案中，細(xì)菌孢子選自土壤芽孢桿菌、Bacillusaizawai、白色芽孢桿菌、高地芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、食丁酸芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌、凝結(jié)芽孢桿菌、Bacillusendoparasiticus、Bacillusendorhythmos、堅強(qiáng)芽孢桿菌、Bacilluskurstaki、Bacilluslacticola、乳病芽孢桿菌、乳芽孢桿菌、側(cè)孢芽孢桿菌、緩病芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、水母芽孢桿菌、Bacillusmetiens、莫海威芽孢桿菌、蕈狀芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌、Bacillusnigrificans、日本甲蟲芽孢桿菌、短小芽孢桿菌、暹羅芽孢桿菌、簡單芽孢桿菌、球形芽孢桿菌、芽孢桿菌屬、枯草芽孢桿菌、蘇云金芽孢桿菌、Bacillusunifagellatus、熱纖梭菌、揚(yáng)氏梭菌、丙酮丁酸梭菌、拜氏梭菌、丁酸梭菌、穿刺巴斯德氏芽菌、多刺巴斯德氏芽菌、Pasteurianishizawae和鏈霉菌屬的種。在上述組合物的一些實施方案中，萌發(fā)化合物選自L-丙氨酸、L-纈氨酸、L-脯氨酸、L-亮氨酸、L-半胱氨酸、L-蘇氨酸、L-谷氨酰胺、L-天冬酰胺、L-苯丙氨酸及其類似物。在特定實施方案中，細(xì)菌孢子選自枯草芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、堅強(qiáng)芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌和短小芽孢桿菌；和萌發(fā)化合物選自L-丙氨酸、L-纈氨酸和L-天冬酰胺。在一些實施方案中，組合物是干粉形式。在一些實施方案中，組合物包括阻止細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物相互作用直至組合物經(jīng)歷活化環(huán)境的物質(zhì)。在某些實施方案中，組合物是乳液形式。在另一個方面中，本發(fā)明涉及用組合物涂覆的植物或植物部分，所述組合物包含：a)細(xì)菌孢子；和b)萌發(fā)化合物。在另一個方面中，本發(fā)明涉及制備涂覆有組合物的植物或植物部分的方法，所述組合物包含：a)細(xì)菌孢子；和b)萌發(fā)化合物，所述方法包括用組合物處理植物或植物部分。在某些實施方案中，孢子和萌發(fā)化合物保持在無活性形式，使得萌發(fā)化合物不會誘導(dǎo)孢子的萌發(fā)直至組合物經(jīng)歷活化環(huán)境。在某些實施方案中，組合物進(jìn)一步包含阻止細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物相互作用直至組合物經(jīng)歷活化環(huán)境的物質(zhì)。在某些實施方案中，所述物質(zhì)選自表面活性劑、遮蔽劑、塑化劑、著色劑、染料、增亮劑、乳化劑、助流劑、凝結(jié)劑、消泡劑、增稠劑、蠟、殺菌劑、填充劑、聚合物、潤濕劑和防凍劑。在某些實施方案中，組合物包含細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物的緊密混合物，其中細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物保持在鄰近的位置直至它們到達(dá)有利于萌發(fā)的環(huán)境。在某些實施方案中，植物或植物部分選自花、種子、根、果實、塊莖、球莖、根莖、芽、苗、種子、葉、秧苗和移植物。在某些實施方案中，植物或植物部分是種子。在某些實施方案中，在萌發(fā)后或從土壤出芽后，用組合物涂覆植物或植物部分。在某些實施方案中，在萌發(fā)前或從土壤出芽前，用組合物涂覆植物或植物部分。在某些實施方案中，植物或植物部分是植物繁殖材料。在某些實施方案中，細(xì)菌孢子選自土壤芽孢桿菌、Bacillusaizawai、白色芽孢桿菌、高地芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、食丁酸芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌、凝結(jié)芽孢桿菌、Bacillusendoparasiticus、Bacillusendorhythmos、堅強(qiáng)芽孢桿菌、Bacilluskurstaki、Bacilluslacticola、乳病芽孢桿菌、乳芽孢桿菌、側(cè)孢芽孢桿菌、緩病芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、水母芽孢桿菌、Bacillusmetiens、莫海威芽孢桿菌、蕈狀芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌、Bacillusnigrificans、日本甲蟲芽孢桿菌、短小芽孢桿菌、暹羅芽孢桿菌、簡單芽孢桿菌、球形芽孢桿菌、芽孢桿菌屬、枯草芽孢桿菌、蘇云金芽孢桿菌、Bacillusunifagellatus、熱纖梭菌、揚(yáng)氏梭菌、丙酮丁酸梭菌、拜氏梭菌、丁酸梭菌、穿刺巴斯德氏芽菌、多刺巴斯德氏芽菌、Pasteurianishizawae和鏈霉菌屬的種。在某些實施方案中，萌發(fā)化合物選自果糖、葡萄糖、鉀、L-丙氨酸、L-纈氨酸、L-脯氨酸、L-亮氨酸、L-半胱氨酸、L-蘇氨酸、L-谷氨酰胺、L-天冬酰胺、L-苯丙氨酸及其類似物。在某些實施方案中，細(xì)菌孢子選自枯草芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、堅強(qiáng)芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌和短小芽孢桿菌；和萌發(fā)化合物選自L-丙氨酸、L-纈氨酸和L-天冬酰胺。在某些實施方案中，組合物進(jìn)一步包含種子涂層聚合物。在某些實施方案中，組合物進(jìn)一步包含選自表面活性劑、遮蔽劑、塑化劑、著色劑、染料、增亮劑、乳化劑、助流劑、凝結(jié)劑、消泡劑、增稠劑、蠟、殺菌劑、填充劑、聚合物、潤濕劑和防凍劑的物質(zhì)。在另一個方面中，本發(fā)明涉及增強(qiáng)植物或植物部分中的產(chǎn)量相關(guān)性狀的方法，包括用組合物處理植物或植物部分，所述組合物包含a)細(xì)菌孢子；和b)萌發(fā)化合物，其中植物或植物部分中的產(chǎn)量相關(guān)性狀相對于沒有用所述組合物涂覆的相應(yīng)植物或植物部分的產(chǎn)量相關(guān)性狀得到了增強(qiáng)。在某些實施方案中，將孢子和萌發(fā)化合物保持在無活性形式，使得萌發(fā)化合物不會誘導(dǎo)孢子的萌發(fā)直至組合物經(jīng)歷活化環(huán)境。在某些實施方案中，組合物進(jìn)一步包含阻止細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物相互作用直至組合物經(jīng)歷活化環(huán)境的物質(zhì)。在某些實施方案中，所述物質(zhì)選自表面活性劑、遮蔽劑、塑化劑、著色劑、染料、增亮劑、乳化劑、助流劑、凝結(jié)劑、消泡劑、增稠劑、蠟、殺菌劑、填充劑、聚合物、潤濕劑和防凍劑。在某些實施方案中，組合物包含細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物的緊密混合物，其中細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物保持在鄰近的位置直至它們到達(dá)有利于萌發(fā)的環(huán)境。在上述方法的某些實施方案中，植物或植物部分是植物繁殖材料。在某些實施方案中，植物或植物部分是種子。在某些實施方案中，植物或植物部分選自花、種子、根、果實、塊莖、球莖、根莖、芽、苗、種子、葉、秧苗和移植物。在某些實施方案中，所述方法包括在萌發(fā)后或從土壤出芽后，用組合物處理植物或植物部分。在某些實施方案中，所述方法包括在萌發(fā)前或從土壤出芽前，用組合物處理植物或植物部分。在某些實施方案中，細(xì)菌孢子選自土壤芽孢桿菌、Bacillusaizawai、白色芽孢桿菌、高地芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、食丁酸芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌、凝結(jié)芽孢桿菌、Bacillusendoparasiticus、Bacillusendorhythmos、堅強(qiáng)芽孢桿菌、Bacilluskurstaki、Bacilluslacticola、乳病芽孢桿菌、乳芽孢桿菌、側(cè)孢芽孢桿菌、緩病芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、水母芽孢桿菌、Bacillusmetiens、莫海威芽孢桿菌、蕈狀芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌、Bacillusnigrificans、日本甲蟲芽孢桿菌、短小芽孢桿菌、暹羅芽孢桿菌、簡單芽孢桿菌、球形芽孢桿菌、芽孢桿菌屬、枯草芽孢桿菌、蘇云金芽孢桿菌、Bacillusunifagellatus、熱纖梭菌、揚(yáng)氏梭菌、丙酮丁酸梭菌、拜氏梭菌、丁酸梭菌、穿刺巴斯德氏芽菌、多刺巴斯德氏芽菌、Pasteurianishizawae和鏈霉菌屬的種。在某些實施方案中，萌發(fā)化合物選自果糖、葡萄糖、鉀、L-丙氨酸、L-纈氨酸、L-脯氨酸、L-亮氨酸、L-半胱氨酸、L-蘇氨酸、L-谷氨酰胺、L-天冬酰胺、L-苯丙氨酸及其類似物。在某些實施方案中，細(xì)菌孢子選自枯草芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、堅強(qiáng)芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌和短小芽孢桿菌；和萌發(fā)化合物選自L-丙氨酸、L-纈氨酸和L-天冬酰胺。在某些實施方案中，組合物進(jìn)一步包含種子涂層聚合物。在某些實施方案中，組合物進(jìn)一步包含表面活性劑、遮蔽劑、塑化劑、著色劑、染料、增亮劑、乳化劑、助流劑、凝結(jié)劑、消泡劑、增稠劑、蠟、殺菌劑、填充劑、聚合物、潤濕劑和防凍劑中的一種或多種。在另一個方面中，本發(fā)明涉及用于處理廢水的方法，包括將包含細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物的組合物加入廢水中。在另一個方面中，本發(fā)明涉及用于環(huán)境治理的方法，包括將包含細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物的組合物施用于土壤或水。在另一個方面中，本發(fā)明涉及用于處理水產(chǎn)養(yǎng)殖系統(tǒng)中的水的方法，包括將包含細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物的組合物接觸水產(chǎn)養(yǎng)殖系統(tǒng)中的水。在某些實施方案中，水產(chǎn)養(yǎng)殖系統(tǒng)包括動物。在另一個方面中，本發(fā)明涉及用于在水產(chǎn)養(yǎng)殖系統(tǒng)中飼喂動物的方法，包括將包含組合物的動物飼料給予水產(chǎn)養(yǎng)殖系統(tǒng)中的動物，所述組合物包含細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物。在上述方法的某些實施方案中，動物選自魚、蝦或軟體動物。在某些實施方案中，水產(chǎn)養(yǎng)殖系統(tǒng)包括選自弧菌屬(Vibrio)的種、氣單胞菌屬(Aerononas)的種和黃桿菌屬(Flavobacterium)的種的病原體。在某些實施方案中，動物的生長相對于沒有用組合物處理的水產(chǎn)系統(tǒng)中的動物得到了提高。在某些實施方案中，組合物是顆粒、壓塊(briquettes)、丸狀、藥片或膠囊的形式。在另一個方面中，本發(fā)明涉及包含組合物和可接受載體的益生劑，所述組合物包含細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物。在某些實施方案中，可接受載體選自動物飼料、奶、酸奶、奶酪、發(fā)酵奶、谷物、發(fā)酵谷物、汁液、冰激凌或用于嬰兒或兒童的配方食品(formulation)。在另一個方面中，本發(fā)明涉及制備益生劑的方法，包括將包含細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物的組合物與可接受載體混合。在某些實施方案中，可接受載體選自動物飼料、奶、酸奶、奶酪、發(fā)酵奶、谷物、發(fā)酵谷物、汁液、冰激凌或用于嬰兒或兒童的配方食品。在另一個方面中，本發(fā)明涉及用于飼喂動物的方法，包括將包含細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物的組合物給予動物。在某些實施方案中，動物選自家禽、反芻動物、牛、豬、兔子、馬、甲殼類、軟體動物、魚和寵物。在另一個方面中，本發(fā)明涉及包含組合物和可接受載體的直接飼喂微生物，所述組合物包含細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物。在某些實施方案中，載體選自動物飼料、代乳品、乳清、植物油、蔗糖、二氧化硅、聚山梨酸酯80、丙二醇、丁羥基茴香醚、檸檬酸、乙氧喹、石灰石、稻殼、酵母培養(yǎng)物、麥芽糊精(malodextrin)、蔗糖、右旋糖、干淀粉和鋁硅酸鈉。在另一個方面中，本發(fā)明涉及制備直接飼喂微生物的方法，包括將包含孢子和萌發(fā)化合物的組合物與可接受載體混合。在某些實施方案中，可接受載體選自動物飼料、代乳品、乳清、植物油、蔗糖、二氧化硅、聚山梨酸酯80、丙二醇、丁羥基茴香醚、檸檬酸、乙氧喹、石灰石、稻殼、酵母培養(yǎng)物、麥芽糊精、蔗糖、右旋糖、干淀粉和鋁硅酸鈉。在另一個方面中，本發(fā)明涉及包含組合物和可接受載體的清潔產(chǎn)品，所述組合物包含細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物。在某些實施方案中，可接受載體選自去污劑、肥皂和香精。在另一個方面中，本發(fā)明涉及制備清潔產(chǎn)品的方法，包括將包含細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物的組合物與可接受載體混合。在某些實施方案中，可接受載體選自去污劑、肥皂和香精。在另一個方面中，本發(fā)明涉及從廢料產(chǎn)生甲烷的方法，包括將包含細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物的組合物施用于廢料。在另一個方面中，本發(fā)明涉及處理動物廢物、草墊或褥草的方法，包括將包含細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物的組合物施用于動物廢物、草墊或褥草。在另一個方面中，本發(fā)明涉及制備青貯飼料的方法，包括將包含細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物的組合物施用于青貯飼料。在另一個方面中，本發(fā)明涉及用于微生物增強(qiáng)采油(MEOR)方法，包括將包含細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物的組合物施用于油井。在某些實施方案中，細(xì)菌孢子選自枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌和莫海威芽孢桿菌。在另一個方面中，本發(fā)明涉及一種治療或預(yù)防易感疾病或患有疾病的受試者的疾病的方法，包括將有效量的包含細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物的組合物給藥于受試者，由此治療或預(yù)防受試者的疾病。在某些實施方案中，疾病是細(xì)菌疾病、真菌疾病或病毒疾病。在某些實施方案中，疾病是壞死性腸炎。在某些實施方案中，受試者是雞、火雞或鴨。在某些實施方案中，受試者感染了產(chǎn)氣莢膜梭菌(Clostridiumperfringens)。在某些實施方案中，治療或預(yù)防疾病導(dǎo)致與沒有施用組合物的受試者相比，降低死亡率、減少病變數(shù)量和提高增重。在上述任一方法的某些實施方案中，將孢子和萌發(fā)化合物保持在無活性形式，使得萌發(fā)化合物不會誘導(dǎo)孢子的萌發(fā)直至組合物經(jīng)歷活化環(huán)境。在上述任一方法的某些實施方案中，組合物進(jìn)一步包含阻止細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物相互作用直至組合物經(jīng)歷活化環(huán)境的物質(zhì)。在上述任一方法的某些實施方案中，所述物質(zhì)選自表面活性劑、遮蔽劑、塑化劑、著色劑、染料、增亮劑、乳化劑、助流劑、凝結(jié)劑、消泡劑、增稠劑、蠟、殺菌劑、填充劑、聚合物、潤濕劑和防凍劑。在上述任一方法的某些實施方案中，組合物包含細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物的緊密混合物，其中細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物保持在鄰近的位置直至它們到達(dá)有利于萌發(fā)的環(huán)境。在上述任一方法的某些實施方案中，細(xì)菌孢子選自土壤芽孢桿菌、Bacillusaizawai、白色芽孢桿菌、高地芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、食丁酸芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌、凝結(jié)芽孢桿菌、Bacillusendoparasiticus、Bacillusendorhythmos、堅強(qiáng)芽孢桿菌、Bacilluskurstaki、Bacilluslacticola、乳病芽孢桿菌、乳芽孢桿菌、側(cè)孢芽孢桿菌、緩病芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、水母芽孢桿菌、Bacillusmetiens、莫海威芽孢桿菌、蕈狀芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌、Bacillusnigrificans、日本甲蟲芽孢桿菌、短小芽孢桿菌、暹羅芽孢桿菌、簡單芽孢桿菌、球形芽孢桿菌、芽孢桿菌屬、枯草芽孢桿菌、蘇云金芽孢桿菌、Bacillusunifagellatus、熱纖梭菌、揚(yáng)氏梭菌、丙酮丁酸梭菌、拜氏梭菌、丁酸梭菌、穿刺巴斯德氏芽菌、多刺巴斯德氏芽菌、Pasteurianishizawae和鏈霉菌屬的種。在上述任一方法的某些實施方案中，萌發(fā)化合物選自果糖、葡萄糖、鉀、L-丙氨酸、L-纈氨酸、L-脯氨酸、L-亮氨酸、L-半胱氨酸、L-蘇氨酸、L-谷氨酰胺、L-天冬酰胺、L-苯丙氨酸及其類似物。在上述任一方法的某些實施方案中，細(xì)菌孢子選自枯草芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、堅強(qiáng)芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌和短小芽孢桿菌；和萌發(fā)化合物選自L-丙氨酸、L-纈氨酸和L-天冬酰胺。在上述任一方法的某些實施方案中，組合物是干粉形式。在上述任一方法的某些實施方案中，組合物是乳液形式。具體實施方式在一個方面中，本發(fā)明的混合物由細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物組成。所采用的細(xì)菌物種可以是形成孢子的任何物種，且通常是在人體或動物中表現(xiàn)出所需的益生菌活性的物種。但是，具有其它工業(yè)用途的細(xì)菌物種(包括可用于農(nóng)業(yè)、環(huán)境治理、堆肥或甲烷生產(chǎn)、保潔等的那些)也可以使用。例如，由于其合成多種酶的能力及其環(huán)境可接受性，將芽孢桿菌屬的種用于眾多商業(yè)應(yīng)用中。根據(jù)所用的特定細(xì)菌物種，細(xì)菌的組合物可能特別適用于農(nóng)業(yè)、園藝、環(huán)境、益生劑、水生動植物、工業(yè)和衛(wèi)生用途。針對任何特定孢子/萌發(fā)化合物緊密混合物所使用的特定組合物將取決于這種混合物所打算的用途。在某些實施方案中，本發(fā)明涉及用包含：(a)細(xì)菌孢子；和(b)萌發(fā)化合物的組合物涂覆的植物或植物部分。細(xì)菌孢子包括增強(qiáng)植物生長的物種，其通常通過作為殺蟲劑(例如，殺真菌劑、殺線蟲劑或殺昆蟲劑)發(fā)揮作用；或通過增強(qiáng)用于生長的繁殖材料周圍的環(huán)境(例如，通過提高可利用營養(yǎng)素如氮的量)來增強(qiáng)植物生長。萌發(fā)化合物有助于細(xì)菌從其孢子快速轉(zhuǎn)化成其營養(yǎng)體狀態(tài)，由此能夠使細(xì)菌更快速地增強(qiáng)植物的生長。植物部分包括，但不限于，葉、莖、根、花、芽、果實、種子、塊莖、球莖和根莖。在某些實施方案中，植物或植物部分是植物繁殖材料。如本文中使用的，術(shù)語“植物繁殖材料”用于包括植物的所有生殖部分，如種子和營養(yǎng)性植物材料，如插條和塊莖(例如，馬鈴薯)，其可以用于植物的繁殖。這包括種子、根、果實、塊莖、球莖、根莖、芽、苗、秧苗和移植物，即，在萌發(fā)后或從土壤出芽后移栽的幼苗。這些移植物也可以通過浸沒或澆灌進(jìn)行全部或部分處理，在移栽前進(jìn)行保護(hù)。優(yōu)選，植物繁殖材料是種子。在本發(fā)明中特別有用的植物包括單子葉植物和雙子葉植物，包括但不限于選自槭屬(Acerspp.)、蔥屬(Alliumspp.)、莧屬(Amaranthusspp.)、菠蘿Ananascomosus、旱芹(Apiumgraveolens)、花生屬(Arachisspp.)、蘆筍(Asparagusofficinalis)、甜菜(Betavulgaris)、蕓薹屬(Brassicaspp.)(例如，甘藍(lán)型油菜(Brassicanapus)、蕪菁(Brassicarapa)亞種[加拿大油菜(canola)、油菜籽(oilseedrape)、白菜型油菜(turniprape)])、茶樹(Camelliasinensis)、美人蕉(Cannaindica)、大麻(Cannabissaliva)、辣椒屬(Capsicumspp.)、栗屬(Castaneaspp.)、苦苣(Cichoriumendivia)、西瓜(Citrulluslanatus)、柑桔屬(Citrusspp.)、椰子屬(Cocosspp.)、咖啡屬(Coffeaspp.)、蕪荽(Coriandrumsativum)、榛屬(Corylusspp.)、山楂屬(Crataegusspp.)、南瓜屬(Cucurbitaspp.)、黃瓜屬(Cucumisspp.)、胡蘿卜(Daucuscarota)、山毛櫸屬(Fagusspp.)、無花果(Ficuscarica)、草莓屬(Fragariaspp.)、銀杏(Ginkgobiloba)、大豆屬(Glycinespp.)(例如，大豆(Glycinemax)、Sojahispida或Sojamax)、陸地棉(Gossypiumhirsutum)、向日葵屬(Helianthusspp.)(例如，向日葵(Helianthusannuus)、木槿屬(Hibiscusspp.)、大麥屬(Hordeumspp.)(例如，大麥(Hordeumvulgare)、甘薯(Ipomoeabatatas)、核桃屬(Juglansspp.)、萵苣(Lactucasativa)、亞麻(Linumusitatissimum)、荔枝(Litchichinensis)、蓮屬(Lotusspp.)、絲瓜(Luffaacutangula)、羽扇豆屬(Lupinusspp.)、番茄屬(Lycopersiconspp.)(例如，番茄(Lycopersiconesculenturn)、櫻桃番茄(Lycopersiconlycopersicum)、Lycopersiconpyriforme)、蘋果屬(Malusspp.)、苜蓿(Medicagosativa)、薄荷屬(Menthaspp.)、芒(Miscanthussinensis)、黑桑(Morusnigra)、芭蕉屬(Musaspp.)、煙草屬(Nicotianaspp.)、木犀欖屬(Oleaspp.)、稻屬(Oryzaspp.)(例如，水稻(Oryzasativa)、闊葉野生稻(Oryzalatifolia))、黍稷(Panicummiliaceum)、柳枝稷(Panicumvirgatum)、百香果(Passifloraedulis)、歐芹(Petroselinumcrispum)、菜豆屬(Phaseolusspp.)、松屬(Pinusspp.)、阿月渾子(Pistaciavera)、豌豆屬(Pisumspp.)、早熟禾屬(Poaspp.)、楊屬(Populusspp.)、李屬(Prunusspp.)、西洋梨(Pyruscommunis)、櫟屬(Quercusspp.)、蘿卜(Raphanussativus)、波葉大黃(Rheumrhabarbarum)、醋栗屬(Ribesspp.)、蓖麻(Ricinuscommunis)、懸鉤子屬(Rubusspp.)、甘蔗屬(Saccharumspp.)、柳屬(Salixsp.)、接骨木屬(Sambucusspp.)、黑麥(Secalecereale)、芝麻屬(Sesamumspp.)、芥屬(Sinapissp.)、茄屬(Solanumspp.)(例如，馬鈴薯(Solanumtuberosum)、紅茄(Solanumintegrifolium)或番茄(Solanumlycopersicum)、高粱(Sorghumbicolor)、假高粱(Sorghumhalepense)、菠菜屬(Spinaciaspp.)、酸角(Tamarindusindica)、可可(Theobromacacao)、車軸草屬(Trifoliumspp.)、小黑麥(Triticosecalerimpaui)、小麥屬(Triticumspp.)(例如，小麥(Triticumaestivum)、硬粒小麥(Triticumdurum)、圓錐小麥(Triticumturgidum)、Triticumhybernum、莫迦小麥(Triticummacha)、馬卡小麥(Triticumsativum)或面包小麥(Triticumvulgare)、越橘屬(Vacciniumspp.)、蠶豆屬(Viciaspp.)、豇豆屬(Vignaspp.)、香堇菜(Violaodorata)、葡萄屬(Vitisspp.)和玉米(Zeamays)的草料或草料豆類、觀賞植物、糧食作物、樹木或灌木。尤其優(yōu)選的是水稻、油菜籽、加拿大油菜、大豆、玉米(corn)(玉米(maize))、棉花、甘蔗、苜蓿、高粱和小麥。本發(fā)明的組合物中使用的細(xì)菌包括任何具有工業(yè)用途的孢子形成細(xì)菌，所述用途如增強(qiáng)植物的生長、環(huán)境治理、廢水處理或用于水產(chǎn)養(yǎng)殖系統(tǒng)中。例如，植物生長的增強(qiáng)可以是形成生長的植物可利用的另外的資源的形式，如增強(qiáng)氮可利用率，例如，如通過根定殖細(xì)菌(rhizobacterium)或提供植物生長促進(jìn)物質(zhì)(如氨基酸、有機(jī)酸或激素)來提供的?；蛘?，細(xì)菌可以對植物(例如，植物繁殖材料)提供免受植物致病真菌或細(xì)菌和/或土生動物(如，屬于線蟲門(Nematoda)和袋形動物門(Aschelminthes)的那些)的有害影響的保護(hù)。對抗植物寄生線蟲和寄生微生物的保護(hù)作用可以通過對這些土生動物有害的和/或?qū)ξ⑸锶后w有害的幾丁質(zhì)分解、蛋白分解、膠原蛋白分解或其他活性來發(fā)生。呈現(xiàn)這些殺線蟲、殺真菌和殺細(xì)菌特性的細(xì)菌可以包括，但不限于，包括Bergey’sManualofSystematicBacteriology，第二版(2009)(其通過引用全文并入)中所列的厚壁菌門(Firmicutes)的孢子形成成員和放線菌門(Actinobacteria)的孢子形成成員。說明性的物種包括嗜堿芽孢桿菌(Bacillusalcalophilus)、高地芽孢桿菌、蜂房芽孢桿菌(Bacillusalvei)、解淀粉芽孢桿菌、解硫胺素芽孢桿菌(Bacillusaneurinolyticus)、炭疽芽孢桿菌(Bacillusanthracis)、Bacillusaquaemaris、萎縮芽胞桿菌(Bacillusatrophaeus)、Bacillusboronophilus、短芽孢桿菌(Bacillusbrevis)、熱溶芽孢桿菌(Bacilluscaldolyyicus)、中孢芽胞桿菌(Bacilluscentrosporus)、蠟狀芽孢桿菌、環(huán)狀芽孢桿菌(Bacilluscirculans)、克勞氏芽孢桿菌(Bacillusclausii)、凝結(jié)芽孢桿菌、堅強(qiáng)芽孢桿菌、黃熱芽孢桿菌(Bacillusflavothermus)、梭形芽孢桿菌(Bacillusfusiformis)、球芽胞桿菌(Bacillusglobigii)、深層芽孢桿菌(Bacillusinfernus)、幼蟲芽孢桿菌(Bacilluslarvae)、側(cè)孢芽孢桿菌、緩病芽孢桿菌、緩慢芽孢桿菌(Bacilluslentus)、地衣芽孢桿菌、巨大芽胞桿菌、馬鈴薯芽孢桿菌(Bacillusmesentericus)、莫海威芽孢桿菌、膠質(zhì)芽胞桿菌(Bacillusmucilaginosus)、蕈狀芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌、Bacilluspantothenicus、乳狀芽孢桿菌(Bacilluspopilliae)、多粘芽胞桿菌(Bacilluspolymyxa)、假炭疽桿菌(Bacilluspseudoanthracis)、短小芽孢桿菌、施氏芽胞桿菌(Bacillusschlegelii)、簡單芽胞桿菌、球形芽孢桿菌、耐熱芽孢芽孢桿菌(Bacillussporothermodurans)、嗜熱脂肪芽孢桿菌(Bacillusstearothermophilus)、枯草芽孢桿菌、熱葡糖苷酶芽胞桿菌(Bacillusthermoglucosidasius)、蘇云金芽胞桿菌、Bacillusvulgatis、韋氏芽孢桿菌(Bacillusweihenstephanensis)、熱纖梭菌、楊氏梭菌、丙酮丁醇梭菌、拜氏梭菌和丁酸梭菌。優(yōu)選的物種包括解淀粉芽孢桿菌、短芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌、克勞氏芽孢桿菌、凝結(jié)芽孢桿菌、堅強(qiáng)芽孢桿菌、側(cè)孢芽孢桿菌、緩慢芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、巨大芽胞桿菌、多粘芽胞桿菌、短小芽孢桿菌、簡單芽胞桿菌、球形芽孢桿菌、嗜熱脂肪芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、蘇云金芽胞桿菌、丁酸梭菌、穿刺巴斯德芽菌、多刺巴斯德氏芽菌、Pasteurianishizawa和鏈霉菌屬的種。特別優(yōu)選的細(xì)菌物種包括枯草芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、巨大芽胞桿菌和短小芽孢桿菌。萌發(fā)化合物可以包括有效地引起所用的特定孢子形成細(xì)菌物種的萌發(fā)的任何化合物。通常，這樣的萌發(fā)化合物是L-氨基酸，包括L-丙氨酸、L-纈氨酸、L-脯氨酸、L-亮氨酸、L-半胱氨酸、L-蘇氨酸、L-谷氨酰胺、L-天冬酰胺、L-苯丙氨酸及其類似物。這樣的類似物可以由本領(lǐng)域普通技術(shù)人員通過在基礎(chǔ)化學(xué)物質(zhì)的基團(tuán)上或基團(tuán)內(nèi)進(jìn)行取代而產(chǎn)生。因此，例如，L-丙氨酸的類似物包括：L-Leu-L-Ala、L-Ala-L-Leu、L-Pro-L-Ala、L-Ala-L-Pro、a-L-Glu-L-Ala、L-Ala-L-Glu、L-His-L-Ala、L-Ala-L-His、L-Ala-L-Ala、Gly-L-Ala、L-Ala-Gly、(N42-甲基磺?；?乙氧基羰基-L-丙氨酸二環(huán)己基銨鹽(N-MSOC-L-Ala)、N-叔丁氧羰基-L-丙氨酸(N-t-BOC-L-Ala)、N-乙酰基-L-丙氨酸(N-Ac-L-Ala)、N-2,4-二硝基苯基-L-丙氨酸(N-DNP-L-Ala)、N芐氧羰基-L-丙氨酸(N-CBZ-L-Ala)、5-二甲基氨基-l-萘磺?；?L-丙氨酸環(huán)己基胺鹽(N-丹磺?；?L-Ala)、N-苯甲酰基-L-丙氨酸(N-Bz-L-Ala)、L-丙氨酸甲基酯鹽酸鹽、L-丙氨酸乙基酯鹽酸鹽、L-丙氨酸叔丁基酯鹽酸鹽、L-丙氨酸芐基酯鹽酸鹽、L-丙胺酰胺、L-丙氨酸對-硝基酰替苯胺鹽酸鹽和L-丙氨醇。優(yōu)選的萌發(fā)化合物包括L-丙氨酸、L-纈氨酸和L-天冬酰胺。最優(yōu)選地，這種萌發(fā)化合物是L-丙氨酸。這些氨基酸可以作為單獨(dú)的化合物或以多肽的形式使用，如蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物，例如酪蛋白水解產(chǎn)物。有用的多肽通常包含至少50％的作為萌發(fā)劑發(fā)揮作用的氨基酸和不超過20％的作為抑制劑發(fā)揮作用的氨基酸，這樣的百分比是基于多肽中氨基酸的數(shù)目。在某些實施方案中，除了L-氨基酸外，還可以使用另外的萌發(fā)化合物來優(yōu)化細(xì)菌孢子的萌發(fā)和生長反應(yīng)。例如，在某些實施方案中，組合物包含至少一種L-氨基酸和選自果糖、葡萄糖和鉀離子的其他萌發(fā)化合物。特別優(yōu)選的芽孢桿菌/萌發(fā)化合物組合包括：L-丙氨酸+枯草芽孢桿菌、L-丙氨酸+地衣芽孢桿菌、L-丙氨酸+短小芽孢桿菌、L-丙氨酸+解淀粉芽孢桿菌、L-丙氨酸+凝結(jié)芽孢桿菌、L-丙氨酸+蠟狀芽孢桿菌、L-丙氨酸+克勞氏芽孢桿菌、L-丙氨酸+丁酸梭菌L-纈氨酸+枯草芽孢桿菌、L-纈氨酸+地衣芽孢桿菌、L-纈氨酸+短小芽孢桿菌、L-纈氨酸+解淀粉芽孢桿菌、L-纈氨酸+凝結(jié)芽孢桿菌、L-纈氨酸+蠟狀芽孢桿菌、L-纈氨酸+克勞氏芽孢桿菌、L-纈氨酸+丁酸梭菌L-丙氨酸+葡萄糖+果糖+鉀離子(GFK)+枯草芽孢桿菌、L-丙氨酸+葡萄糖+果糖+鉀離子(GFK)+地衣芽孢桿菌、L-丙氨酸+葡萄糖+果糖+鉀離子(GFK)+短小芽孢桿菌、L-丙氨酸+葡萄糖+果糖+鉀離子(GFK)+解淀粉芽孢桿菌、L-丙氨酸+葡萄糖+果糖+鉀離子(GFK)+凝結(jié)芽孢桿菌、L-丙氨酸+葡萄糖+果糖+鉀離子(GFK)+蠟狀芽孢桿菌、L-丙氨酸+葡萄糖+果糖+鉀離子(GFK)+克勞氏芽孢桿菌、L-丙氨酸+葡萄糖+果糖+鉀離子(GFK)+丁酸梭菌L-天冬酰胺+葡萄糖+果糖+鉀離子(GFK)+枯草芽孢桿菌、L-天冬酰胺+葡萄糖+果糖+鉀離子(GFK)+地衣芽孢桿菌、L-天冬酰胺+葡萄糖+果糖+鉀離子(GFK)+短小芽孢桿菌、L-天冬酰胺+葡萄糖+果糖+鉀離子(GFK)+解淀粉芽孢桿菌、L-天冬酰胺+葡萄糖+果糖+鉀離子(GFK)+凝結(jié)芽孢桿菌、L-天冬酰胺+葡萄糖+果糖+鉀離子(GFK)+蠟狀芽孢桿菌、L-天冬酰胺+葡萄糖+果糖+鉀離子(GFK)+克勞氏芽孢桿菌、L-天冬酰胺+葡萄糖+果糖+鉀離子(GFK)+丁酸梭菌L-丙氨酸+肌苷+枯草芽孢桿菌、L-丙氨酸+肌苷+地衣芽孢桿菌、L-丙氨酸+肌苷+短小芽孢桿菌、L-丙氨酸+肌苷+解淀粉芽孢桿菌、L-丙氨酸+肌苷+凝結(jié)芽孢桿菌、L-丙氨酸+肌苷+蠟狀芽孢桿菌、L-丙氨酸+肌苷+克勞氏芽孢桿菌、L-丙氨酸+肌苷+丁酸梭菌L-脯氨酸+葡萄糖+巨大芽胞桿菌、L-脯氨酸+巨大芽胞桿菌、L-乳酸+丁酸梭菌。萌發(fā)化合物以足以引起所使用的細(xì)菌孢子萌發(fā)的量存在。雖然這可以容易地通過常規(guī)實驗對于任何特定細(xì)菌孢子/萌發(fā)化合物混合物來確定，但這些萌發(fā)化合物通常在干燥之前以0.0001mg/mL-170mg/mL的濃度配制。在一些實施方式中，萌發(fā)化合物在干燥之前以0.0003mg/mL-170mg/mL，0.0003mg/mL-30mg/mL，0.001mg/mL-100mg/mL或0.001mg/mL-10mg/mL的濃度配制。在優(yōu)選的實施方式中，萌發(fā)化合物在干燥之前以0.001mg/mL-1mg/mL的濃度配制。為了進(jìn)一步增強(qiáng)萌發(fā)，優(yōu)選將孢子休克?？梢砸愿鞣N標(biāo)準(zhǔn)方法將孢子休克，所述方法例如滲透壓休克、熱休克、壓力休克、營養(yǎng)剝奪和/或暴露于某些酸。熱休克涉及在足以誘導(dǎo)熱休克蛋白產(chǎn)生的溫度下將孢子加熱足夠長的時間段。將細(xì)菌孢子休克的方法是本領(lǐng)域已知的。例如，Atluri等(2006,JournalofBacteriology188(1):28-36)描述了一種用于枯草芽孢桿菌的這種熱休克處理。本發(fā)明的組合物包含(a)細(xì)菌孢子和(b)萌發(fā)化合物；其特征在于所述孢子和萌發(fā)化合物保持在無活性形式，使得萌發(fā)化合物不會誘導(dǎo)孢子的萌發(fā)直至所述組合物經(jīng)歷活化環(huán)境。這樣的組合物可用于產(chǎn)生本發(fā)明的涂覆的植物或植物部分(例如，植物繁殖材料)，以及本文中所述的其他用途，如環(huán)境治理、廢水處理、疾病預(yù)防或治療、油回收或用于水產(chǎn)養(yǎng)殖系統(tǒng)中。如本文中使用的，術(shù)語“活化環(huán)境”是指允許萌發(fā)化合物和孢子相互作用而使得孢子被誘導(dǎo)進(jìn)入營養(yǎng)體狀態(tài)的環(huán)境。這樣的活化環(huán)境可以涉及添加水(通過雨水、土壤中的水分或在種植前添加到涂覆的植物繁殖材料的水)，或其可能需要如溫度、水分、pH和鹽度的因素的組合。因此，這樣的組合物可以包含孢子和萌發(fā)化合物的干燥混合物；或它們可以包括阻止孢子和萌發(fā)化合物相互作用的其他材料(例如，低溫熔化蠟)，直至達(dá)到需要的環(huán)境標(biāo)準(zhǔn)?？梢杂糜诮M合物中來防止孢子和萌發(fā)化合物相互作用的其他材料包括，但不限于，表面活性劑、遮蔽劑、塑化劑、著色劑和染料、增亮劑、乳化劑、助流劑、凝結(jié)劑、消泡劑、增稠劑、蠟、填充劑、聚合物、潤濕劑和防凍劑。此外，這樣的組合物可以采用乳液的形式，其中由于存在于不同的相中，孢子和萌發(fā)化合物保持沒有相互作用。在某些實施方案中，孢子和萌發(fā)化合物彼此在緊密混合物中。如本文中使用的，術(shù)語“緊密混合物”是指其中孢子和萌發(fā)化合物保持在鄰近的位置直到它們到達(dá)有利于萌發(fā)的環(huán)境(即，活化環(huán)境)的混合物。這種緊密混合物可以使用如噴霧干燥、凍干、空氣干燥或滾筒干燥的方法獲得。在優(yōu)選的實施方式中，緊密混合物通過噴霧干燥或凍干產(chǎn)生。當(dāng)形成這樣的緊密混合物時，重要的是孢子和萌發(fā)化合物不會在允許萌發(fā)化合物引起孢子萌發(fā)的條件下混合在一起，因為這可能引起過早萌發(fā)而對于混合物的保存期具有不利影響。這可以通過在噴霧干燥器中使用單獨(dú)的流(或者通過使用兩個噴嘴或者使用允許同時噴霧兩個單獨(dú)的流的單一噴嘴)，或者通過在不利于萌發(fā)的條件(例如，溫度)下凍干來避免。過早萌發(fā)也可以通過緊接在干燥之前將孢子塊引入含有萌發(fā)化合物的溶液中來避免。在優(yōu)選的實施方式中，萌發(fā)化合物被緊密混合物中的細(xì)菌孢子吸附或吸收。在進(jìn)一步的實施方式中，細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物精細(xì)地分散在整個緊密混合物中。在更進(jìn)一步的實施方式中，細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物微觀地分散在整個緊密混合物中，以使得基本上由細(xì)菌孢子組成的單個顆粒和基本上由萌發(fā)化合物組成的單個顆粒對于裸眼不可見。在一個實施方式中，緊密混合物通過在干燥之前在溶液中組合細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物制備。優(yōu)選地，細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物緊接在干燥之前在溶液中組合。雖然不希望受任何理論的限制，據(jù)信緊密混合物的形成將萌發(fā)化合物置于其可以在混合物到達(dá)適宜的萌發(fā)環(huán)境時更優(yōu)先地與孢子的萌發(fā)起始位點(diǎn)結(jié)合的鄰近位置中。這樣的鄰近位置允許萌發(fā)化合物在競爭中勝過可能存在的萌發(fā)干擾化合物(如D-氨基酸)，其結(jié)果是更高百分比的孢子會萌發(fā)。由于細(xì)菌一旦進(jìn)入營養(yǎng)體期它們呈指數(shù)生長，這種提高的百分比可以快速地導(dǎo)致培養(yǎng)物形成中幾個級數(shù)的增加。這樣的組合物可以進(jìn)一步包含附加的組分，包括共萌發(fā)劑、營養(yǎng)物和配制助劑，只要這樣的添加劑沒有誘導(dǎo)孢子和萌發(fā)化合物過早地相互作用。根據(jù)本發(fā)明的涂覆的植物或植物部分(例如，植物繁殖材料)可以是得益于接種物或者促進(jìn)植物生長或殺蟲微生物的存在的任何植物物種?？梢酝ㄟ^通常用于涂覆植物材料(例如，種子或其他萌發(fā)材料)的任何常規(guī)方式，用細(xì)菌和萌發(fā)化合物涂覆植物或植物部分(例如，植物繁殖材料)，只要這樣的方式?jīng)]有不利地影響孢子的存活力以及這樣的方式?jīng)]有導(dǎo)致萌發(fā)化合物過早地將細(xì)菌轉(zhuǎn)變成其營養(yǎng)體狀態(tài)?？梢允褂玫某Ｒ?guī)方式包括噴霧處理、滴注處理、浸透處理、涂抹處理、膜涂層處理、微丸涂層(pelletcoat)處理等。種子涂覆方法是本領(lǐng)域已知的并且描述于例如美國專利No.7,989,391和美國專利No.5,849,320中。在某些實施方案中，在萌發(fā)前或在從種植于其中的生長介質(zhì)(例如，土壤)出芽前，用組合物涂覆植物或植物部分(例如，種子)。在其他實施方案中，在萌發(fā)后或在從種植于其中的生長介質(zhì)(例如，土壤)出芽后，用組合物涂覆植物或植物部分，例如，通過將組合物噴射到在田間或溫室中生長的植物上。當(dāng)應(yīng)用這樣的涂覆時，重要的是沒有在允許萌發(fā)化合物引起孢子萌發(fā)的條件下將孢子和萌發(fā)化合物混合在一起，因為這將導(dǎo)致過早萌發(fā)，其對混合物的存儲期具有不利影響?？梢员苊膺@種情況的一種方式是通過在噴霧干燥器中使用分開的流(或者通過使用兩個噴嘴或允許同時噴霧兩個分開的流的單個噴嘴；或通過在不利于萌發(fā)的條件(例如，溫度)下冷凍干燥)。除了生物活性成分外，種子涂覆組合物可以包括許多材料和添加劑，其是活性成分制劑的部分或者有利于種子涂覆的操作性能或其在種子上的功能性和耐久性。涂覆添加劑的實例是將活性成分粘結(jié)于種子的涂層聚合物。種子涂層聚合物可以包括，例如，但不限于，蛋白質(zhì)、多糖、聚酯、聚氨酯、從不飽和單體制備的聚合物及其組合。有利于種子涂覆的操作性能或者其在種子上的功能性和耐久性的其他添加劑包括但不限于表面活性劑、遮蔽劑、塑化劑、著色劑和染料、增亮劑、乳化劑、助流劑、凝結(jié)劑、消泡劑、增稠劑、蠟、殺菌劑、填充劑、聚合物、潤濕劑和防凍劑。這些添加劑的性質(zhì)和作用是制劑領(lǐng)域的技術(shù)人員公知的。添加劑不應(yīng)當(dāng)干擾細(xì)菌的作用。本發(fā)明中有用的結(jié)合劑優(yōu)選包含天然或合成的并且對待涂覆的種子沒有植物毒性作用的粘性聚合物。粘合劑可以選自聚乙酸乙烯酯；聚乙酸乙烯酯共聚物；乙烯乙酸乙烯酯(EVA)共聚物；聚乙烯醇；聚乙烯醇共聚物；纖維素，包括乙基纖維素、甲基纖維素、羥甲基纖維素、羥丙基纖維素和羧甲基纖維素；聚乙烯吡咯烷酮；多糖，包括淀粉、改性淀粉、糊精、麥芽糊精、海藻酸鹽和殼聚糖；脂肪；油類；蛋白質(zhì)，包括明膠和玉米醇溶蛋白；阿拉伯樹膠；蟲膠；偏二氯乙烯和偏二氯乙烯共聚物；木素磺酸鈣；丙烯酸共聚物；聚乙烯丙烯酸酯；聚環(huán)氧乙烷；丙烯酰胺聚合物和共聚物；聚羥基丙烯酸乙酯、甲基丙烯酰胺單體；和聚氯丁烯。涂層中的粘合劑含量可以改變，但將在約0.01至約25％種子重量的范圍中，更優(yōu)選約0.05至約15％，和甚至更優(yōu)選約0.1％至約10％。繁殖材料涂層可以任選包括填充劑。填充劑可以是吸收劑或惰性填充劑，如本領(lǐng)域已知的，并且可以包括木粉、粘土、活性炭、糖類、硅藻土、谷粉、細(xì)谷粒無機(jī)固體、碳酸鈣等。可以使用的粘土和無機(jī)固體包括鈣膨潤土、高嶺土、陶土、滑石、珍珠巖、云母、蛭石、硅石、石英粉、蒙脫土及其混合物?？赡苡杏玫奶穷惏ê望溠亢?。谷粉包括小麥粉、燕麥粉和大麥粉。填充劑選擇為使得其將為種子提供適當(dāng)?shù)男夂?，例如，填充劑用于提高活性成分的?fù)載率和調(diào)節(jié)活性成分的受控釋放。填充劑可以幫助種子涂覆的產(chǎn)生或過程。填充劑的量可以改變，但通常填充劑組分的重量在約0.05至約75％種子重量的范圍中，更優(yōu)選約0.1至約50％，和甚至更優(yōu)選約0.5％至15％。任選地，塑化劑可以用于涂層制劑中。塑化劑通常用于使得通過涂層形成的膜更柔性、改善粘附和可鋪展性及提高處理的速度。提高的膜柔性對于最小化儲存、操作或播種過程中的破碎、破裂或剝離是重要的。許多塑化劑可以使用，然而，有用的塑化劑包括聚乙二醇、甘油、丁基芐基鄰苯二甲酸酯、甘醇苯甲酸酯和相關(guān)化合物。涂層中塑化劑的范圍在約0.1至約20％重量的范圍內(nèi)。處理過的種子還可以用薄膜外覆層包被，以保護(hù)活性組分涂層。這樣的外覆層是本領(lǐng)域已知的并且可以使用常規(guī)的流化床和鼓式膜涂層技術(shù)來施用。本發(fā)明還涉及增強(qiáng)植物或植物部分(例如，植物繁殖材料)的產(chǎn)量相關(guān)性狀的方法，包括用包含：a)細(xì)菌孢子；和b)萌發(fā)化合物的組合物涂覆植物，其中植物的產(chǎn)量相關(guān)性狀相對于沒有涂覆所述組合物的相應(yīng)植物的產(chǎn)量相關(guān)性狀得到了增強(qiáng)。如本文中使用的，術(shù)語“產(chǎn)量相關(guān)性狀”是指有助于提高植物產(chǎn)量的任何性狀。通過本發(fā)明的方法可以增強(qiáng)的產(chǎn)量相關(guān)性狀包括，但不限于，總種子發(fā)芽率、種子發(fā)芽速率(例如，種子發(fā)芽需要的天數(shù))、植物生物量、抗病性、昆蟲抗性、耐旱性、耐熱性、耐旱性、耐寒性、耐鹽性、重金屬耐受性、總產(chǎn)量、種子產(chǎn)量、開花時間(例如，早花時間)、根生長、早期活力、植物生物質(zhì)、植物大小、總植物干重、地上干重、地上鮮重、葉面積、莖體積、植物高度、蓮座叢直徑、葉長、根長、根質(zhì)量、分蘗數(shù)和葉數(shù)。在特定實施方案中，產(chǎn)量相關(guān)性狀選自總產(chǎn)量、總種子發(fā)芽率、種子發(fā)芽速率、植物生物量、昆蟲抗性、早花時間和耐旱性。如本文中使用的，術(shù)語“總種子發(fā)芽率”是指種植后萌發(fā)的種子的百分比。如本文中使用的，術(shù)語“生物量”是指植物的總重。在生物量的定義內(nèi)，可以在植物的一個或多個部分的生物量之間形成區(qū)分，植物的部分可以包括以下的任何一種或多種：地上部分，包括但不限于，芽生物量、種子生物量、葉生物量；地上可采收部分，包括但不限于，芽生物量、種子生物量、葉生物量；地下部分，包括但不限于，根生物量、塊莖、球莖；地下可采收部分，包括，但不限于，根生物量、塊莖、球莖；部分地在地下的可采收部分，包括但不限于，甜菜根和植物的其他下胚軸部分、根莖、匍匐莖或爬行根莖；植物性生物量，包括，但不限于，根生物量、芽生物量；繁殖器官；和繁殖體，包括但不限于，種子。如本文中使用的，術(shù)語“早花時間”是指早于對照植物開始開花的植物。因此，這個術(shù)語是指顯示出較早的開花起始的植物?？梢酝ㄟ^計算播種和第一個花簇出現(xiàn)之間的天數(shù)(“開花時間”)來評價植物的開花時間。植物的“開花時間”可以例如使用WO07/093444(將其完整內(nèi)容按引用并入本文中)中所述的方法來測定。如本文中使用的，術(shù)語“干旱條件”是指導(dǎo)致植物中含水量缺乏、植物可利用水的缺乏、植物中水吸收潛能的缺乏或植物的水供給減少的任何脅迫。特別地，“干旱”是指由短期或長期天氣模式導(dǎo)致的降水量缺乏。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員容易地確定干旱條件。例如，帕摩爾干旱嚴(yán)重性指數(shù)(PDSI)(其是土壤水分的量度)、作物水分指數(shù)(CMI)和Z指數(shù)可以用于確定干旱條件。使用本發(fā)明的方法可以增強(qiáng)產(chǎn)量相關(guān)性狀。例如，在一些實施方案中，相對于沒有施用本發(fā)明組合物的對照植物繁殖材料，本文中所述的任一產(chǎn)量相關(guān)性狀在已經(jīng)施用本發(fā)明組合物的植物(例如，植物繁殖材料)中可以提高至少約5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、150、200、300、400、500、600、700、800、900或1000％。例如，在一些實施方案中，相對于沒有施用本發(fā)明組合物的對照植物繁殖材料(例如，種子)，在已經(jīng)施用本發(fā)明組合物的植物繁殖材料(例如，種子)中總種子發(fā)芽率可以提高至少約1、2、3、4、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100％。這些值中的任何一個可以用于限定總種子發(fā)芽率提高的范圍。例如，在一些實施方案中，種子發(fā)芽率可以提高5-10％、5-20％或5-50％。在另一個實施方案中，與沒有施用本發(fā)明組合物的對照植物繁殖材料(例如，種子)相比，在已經(jīng)施用本發(fā)明組合物的植物繁殖材料(例如，種子)中種子發(fā)芽需要的天數(shù)可以減少1天。在一個實施方案中，與沒有施用本發(fā)明組合物的對照植物繁殖材料(例如，種子)相比，在已經(jīng)施用本發(fā)明水組合物的植物繁殖材料(例如，種子)中種子發(fā)芽需要的天數(shù)可以減少0.5天、1天、1.5天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天或14天。這些值中的任何一個可以用于限定種子發(fā)芽需要的天數(shù)的減少范圍。例如，種子發(fā)芽需要的天數(shù)可以減少1-2天、1-5天或2-5天。在另一個實施方案中，與沒有施用本發(fā)明組合物的對照植物(例如，植物繁殖材料)相比，在已經(jīng)施用本發(fā)明組合物的植物(例如，植物繁殖材料)中植物生物量可以提高至少約1、2、3、4、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100％。這些值中的任何一個可以用于限定植物生物量增長的范圍。例如，在一些實施方案中，植物生物量提高5-10％、5-20％或5-50％。在一些實施方案中，與沒有施用本發(fā)明組合物的對照植物(例如，植物繁殖材料)相比，在已經(jīng)施用本發(fā)明組合物的植物(例如，植物繁殖材料)中昆蟲抗性可以提高至少約1、2、3、4、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100％。例如，在一些實施方案中，昆蟲抗性提高5-10％、5-20％或5-30％?？梢酝ㄟ^在生物或非生物脅迫條件下測量本文中所述的任一產(chǎn)量相關(guān)性狀來測量昆蟲抗性、抗病性和環(huán)境脅迫耐受性(例如，耐旱性)。例如，可以通過在干旱條件下測量百分發(fā)芽率、發(fā)芽速率、植物生物量、產(chǎn)量或種子產(chǎn)量來測定耐旱性?？梢酝ㄟ^在合適的條件下測量產(chǎn)量相關(guān)性狀來定量昆蟲抗性、抗病性或環(huán)境脅迫耐受性。例如，用本發(fā)明的組合物處理的植物(例如，植物繁殖材料)相對于未用組合物處理的植物繁殖材料呈現(xiàn)出10％的產(chǎn)量提高將被確定為呈現(xiàn)耐旱性的10％提高。作為另一個實例，用本發(fā)明的組合物處理的植物(例如，植物繁殖材料)與沒有施用組合物的對照植物(例如，植物繁殖材料)相比呈現(xiàn)生葉速率10％的提高將被確定為呈現(xiàn)昆蟲抗性的10％提高。具有提高生葉速率的植物更能夠抵抗昆蟲侵襲或攻擊。在一些實施方案中，相對于沒有施用本發(fā)明的組合物的對照植物(例如，植物繁殖材料)，在已經(jīng)施用了本發(fā)明的組合物的植物(例如，植物繁殖材料)中抗病性或食草動物耐受性可以提高至少約1、2、3、4、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100％。在一些實施方案中，相對于沒有施用本發(fā)明組合物的對照植物(例如，植物繁殖材料)，在已經(jīng)施用了本發(fā)明的組合物的植物(例如，植物繁殖材料)中耐旱性可以提高至少約1、2、3、4、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100％。這些值中的任何一個可以用于限定抗病性或食草動物耐受性提高的范圍。例如，在一些實施方案中，抗病性或食草動物耐受性提高為5-10％、5-20％或5-30％。在一些實施方案中，相對于沒有施用本發(fā)明的組合物的對照植物(例如，植物繁殖材料)，在已經(jīng)施用了本發(fā)明的組合物的植物(例如，植物繁殖材料)中耐熱性或耐寒性可以提高至少約1、2、3、4、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100％。這些值中的任何一個可以用于限定耐熱性或耐寒性提高的范圍。例如，在一些實施方案中，耐熱性或耐寒性提高為5-10％、5-20％或5-30％。在一些實施方案中，相對于沒有施用本發(fā)明的組合物的對照植物(例如，植物繁殖材料)，在已經(jīng)施用了本發(fā)明的組合物的植物(例如，植物繁殖材料)中耐鹽性或重金屬耐受性可以提高至少約1、2、3、4、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100％?？梢允褂帽绢I(lǐng)域的標(biāo)準(zhǔn)方法來測定耐鹽性或重金屬耐受性。例如，可以通過測量陽離子的交換，例如，鈣至鈉的交換，來測定鹽度。這些值中的任何一個可以用于限定耐鹽性或重金屬耐受性提高的范圍。例如，在一些實施方案中，耐鹽性或重金屬耐受性提高可以為5-10％、5-20％或5-30％。在一些實施方案中，相對于沒有施用本發(fā)明的組合物的對照植物(例如，植物繁殖材料)，在已經(jīng)施用了本發(fā)明的組合物的植物(例如，植物繁殖材料)中總產(chǎn)量可以提高至少約1、2、3、4、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100％。這些值中的任何一個可以用于限定總產(chǎn)量提高的范圍。例如，在一些實施方案中，總產(chǎn)量提高1-5％、1-10％或1-15％。在一些實施方案中，相對于沒有施用本發(fā)明的組合物的對照植物(例如，植物繁殖材料)，在已經(jīng)施用了本發(fā)明的組合物的植物(例如，植物繁殖材料)中根生長、早期活力、植物大小、總植物干重、地上干重、地上鮮重、葉面積、莖體積、植物高度、蓮座叢直徑、葉長、根長、根質(zhì)量、分蘗數(shù)或葉數(shù)可以提高至少約1、2、3、4、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100％。這些值中的任何一個可以用于限定根生長、早期活力、植物大小、總植物干重、地上干重、地上鮮重、葉面積、莖體積、植物高度、蓮座叢直徑、葉長、根長、根質(zhì)量、分蘗數(shù)或葉數(shù)提高的范圍。例如，在一些實施方案中，根生長、早期活力、植物大小、總植物干重、地上干重、地上鮮重、葉面積、莖體積、植物高度、蓮座叢直徑、葉長、根長、根質(zhì)量、分蘗數(shù)或葉數(shù)可以提高1-5％、5-10％或5-20％。通常，“增強(qiáng)的產(chǎn)量相關(guān)性狀”或“產(chǎn)量相關(guān)性狀的提高”是指測試植物(例如，植物繁殖材料)中高于用于評價性狀水平的測試的標(biāo)準(zhǔn)誤差的性狀水平，并且優(yōu)選是對照樣品(例如，沒有接觸本發(fā)明組合物的植物繁殖材料的樣品)中的性狀水平，并優(yōu)選幾個對照樣品中的平均性狀表達(dá)水平的至少兩倍，和更優(yōu)選三倍、四倍、五倍或十倍。本文中所列范圍內(nèi)包括的值和范圍和/或中間值也意圖在本發(fā)明公開內(nèi)容的范圍內(nèi)。具有本文中所述值作為上限或下限的范圍也意圖在本發(fā)明公開內(nèi)容的范圍內(nèi)。本發(fā)明還提供了用于處理廢水的方法，包括將本文中所述的包含細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物的組合物加入廢水中。組合物可以用于處理任何廢水，包括市政廢水、工業(yè)廢水或農(nóng)業(yè)廢水，抽水站、泵和造紙廢水，食品加工廢水，石化廢水和動物廢料廢水。組合物還可以用于化糞池、集油器和廢水存儲槽中的現(xiàn)場廢水處理。在某些實施方案中，組合物可以用于降解餐館和商業(yè)廚房產(chǎn)生的廢水中的脂肪、油類和油脂。組合物還可以加入小規(guī)模廢水儲存罐中用于分解船、便攜式廁所和其他小型廢物容納系統(tǒng)中的廢物。本發(fā)明的廢水處理方法還可以在各種反應(yīng)器系統(tǒng)中進(jìn)行。例如，盡管廢水處理通常在罐中進(jìn)行，該反應(yīng)可以在用于廢水儲存的任何容器或儲存器中進(jìn)行，只要提供合適的條件來維持合適的環(huán)境以支持組合物中細(xì)菌的生長和生物活性。合適的廢水處理反應(yīng)器系統(tǒng)包括但不限于懸浮生長生物反應(yīng)器和附著生長生物反應(yīng)器。在懸浮生長生物反應(yīng)器中，可以通過攪動液體將組合物與廢水混合。在粘附生長生物反應(yīng)器中，提供各種固體支持介質(zhì)以允許組合物中的細(xì)菌粘附于其表面。合適的介質(zhì)包括，但不限于，滴濾器、旋轉(zhuǎn)生物接觸器、填充床反應(yīng)器和本領(lǐng)域已知的其他介質(zhì)。適用于本文中使用的再一種粘附生長生物反應(yīng)器是流化床反應(yīng)器或移動床反應(yīng)器。在這個系統(tǒng)中，含有細(xì)菌的生物載體保持懸浮于待處理的廢水中，通過與水混合相關(guān)的曳力流化。細(xì)菌可以捕獲在聚合物多孔材料中，如聚乙烯醇(PVA)、聚乙二醇(PEG)或其他聚合物凝膠(如藻酸鈣)的顆粒。細(xì)菌可以在懸浮載體中粘附而形成生物膜，所述載體如K1、K3、MiniChip和BiofilmChip塑料載體(AnoxKaldnes，瑞典)。流化床反應(yīng)器允許微生物群體快速增長，因此減少廢水處理需要的時間。使用細(xì)菌菌株處理廢水的方法是本領(lǐng)域已知的并且描述于例如美國專利申請公開No.2012/0000849和2011/0180476中。在某些實施方案中，用于廢水處理的組合物包含選自巨大芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和短小芽孢桿菌的細(xì)菌孢子。本發(fā)明還提供環(huán)境治理的方法，包括將上述任一種包含細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物的組合物施用于土壤或水。芽孢桿菌屬的種可以用于水和陸地的環(huán)境治理。用于土壤治理的作用方式與以上針對廢水處理所述的幾乎相同。細(xì)菌通過酶和產(chǎn)生酸來分解化學(xué)物質(zhì)和污染物，所述酸產(chǎn)生進(jìn)一步分解污染物或以更低反應(yīng)性的形式與其結(jié)合。本文中所述的組合物可以用于受廣泛污染物污染的環(huán)境介質(zhì)和廢水的生物治理和生物介導(dǎo)的化學(xué)還原，所述污染物包括鹵化有機(jī)化合物(例如，三氯乙烯、四氯乙烯、氟利昂)和無機(jī)污染物如基于砷的殺蟲劑、氰化物、鉻(VI)、鈾(VI)和其他毒性金屬的氧化形式。組合物還可以用于其他疏水性并且因此頑固性的有機(jī)污染物的處理，如有機(jī)氯殺蟲劑、多氯聯(lián)苯類(PCB)和聚環(huán)芳烴類(PAH)，這是通過促進(jìn)提高這些污染物的生物利用率和生物地球化學(xué)反應(yīng)性的過程。可以通過組合物增強(qiáng)的生物治理過程包括生物降解和生物介導(dǎo)的有機(jī)污染物的化學(xué)還原，所述污染物如鹵化溶劑、有機(jī)氯殺蟲劑和氯化烴類，其通過細(xì)菌轉(zhuǎn)化成無害無機(jī)物形式和/或較低有害性的副產(chǎn)物。此外，組合物可以促進(jìn)無機(jī)污染物的生物介導(dǎo)的化學(xué)還原，如基于砷的殺蟲劑、氰化物、鉻(VI)、鈾(VI)和其他毒性金屬的氧化形式。在某些實施方案中，組合物可以制成顆粒、壓塊、丸狀、藥片或膠囊的形式。組合物可以施用于并任選地混入污染的廢物(例如，淤泥、固體和/或液體廢物等)或其他受污染的介質(zhì)(如土壤、沉降物或水體等)中。對于涉及受污染地下水和含水層介質(zhì)的處理，組合物(例如，顆粒)可以應(yīng)用于安裝在受污染區(qū)域中的井內(nèi)的過濾墊(filtersocks)、濾罐或筒中。在另一個方面中，本發(fā)明涉及從廢料產(chǎn)生甲烷的方法，包括將本文中所述的包含細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物的組合物施用于廢料。在某些實施方案中，廢料來自市政廢物處理點(diǎn)。通過細(xì)菌分解廢料可以促進(jìn)產(chǎn)生甲烷的其他細(xì)菌的共同活性，所述甲烷作為能源捕獲?？梢詮陌袡C(jī)物質(zhì)的漿液或淤泥形式的廢料產(chǎn)生甲烷，例如，來自廢水處理、水純化產(chǎn)生的淤泥處理或顆粒狀生物可降解有機(jī)廢物處理的淤泥。在某些實施方案中，廢料是廢水處理生物固體。產(chǎn)生甲烷的方法可以包括使用熱水解處理復(fù)合有機(jī)材料(液體和殘余固體部分兩者)。然后通過細(xì)菌的厭氧消化可以用于甲烷的產(chǎn)生。本領(lǐng)域中描述了從廢料產(chǎn)生甲烷，例如，在美國專利No.8,470,567、美國專利No.7,311,834、美國專利No.7,101,482、美國專利No.6,966,989和美國專利No.7,332,095中。本發(fā)明還提供用于處理水產(chǎn)養(yǎng)殖系統(tǒng)中的水的方法，包括將上述任一種包含細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物的組合物接觸水產(chǎn)養(yǎng)殖系統(tǒng)中的水。組合物可以直接加入水中，或可以按照例如美國專利No.7,082,893中所述的用于生物過濾器系統(tǒng)中。組合物可以用于水產(chǎn)養(yǎng)殖系統(tǒng)中來治理和分解由為食物而飼養(yǎng)的水生物種(如蝦、魚和軟體動物(例如，蛤蜊))產(chǎn)生的廢物。在特定實施方案中，水產(chǎn)養(yǎng)殖系統(tǒng)是孵化場。組合物還可以用于水產(chǎn)養(yǎng)殖中以循環(huán)營養(yǎng)素、分解脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、淀粉以及產(chǎn)生氨基酸&增強(qiáng)飼料轉(zhuǎn)化的酶。組合物還可以用于產(chǎn)生天然抗生素并提供競爭性排除以提供針對環(huán)境以及動物的胃腸道中的病原體的保護(hù)。在特定實施方案中，水產(chǎn)養(yǎng)殖系統(tǒng)中的病原體是弧菌屬物種，例如，Vibriochagasii或溶珊瑚弧菌(Vibriocoralliilyticus)。在某些實施方案中，水產(chǎn)養(yǎng)殖系統(tǒng)中的病原體是以下表1A中所列的病原體之一。這種天然抗生素的產(chǎn)生和對抗病原體的競爭性排除也可以用于人益生菌中或用于生產(chǎn)動物和伴隨動物的直接飼喂微生物中。在某些實施方案中，通過將組合物懸浮于水中并隨后在每日換水后立即將懸浮液加入罐中而將組合物加入水產(chǎn)養(yǎng)殖系統(tǒng)中。在某些實施方案中，將組合物以1×103、1×104、1×105、1×106、1×107、1×108或1×109cfu細(xì)菌/ml水產(chǎn)養(yǎng)殖系統(tǒng)中的水的比率加入水產(chǎn)養(yǎng)殖系統(tǒng)中。這些值中的任何一個可以用于限定水產(chǎn)養(yǎng)殖系統(tǒng)中組合物的細(xì)菌濃度的范圍。例如，細(xì)菌的濃度可以為1×105-1×106或1×104-1×106cfu/ml水。相對于沒有用組合物處理的受感染水產(chǎn)養(yǎng)殖系統(tǒng)中的動物，用本文中所述的組合物處理病原體感染的水產(chǎn)養(yǎng)殖系統(tǒng)中的水可以提高水產(chǎn)養(yǎng)殖系統(tǒng)中的動物的存活百分比。在一些實施方案中，相對于沒有用組合物處理的受感染的水產(chǎn)養(yǎng)殖系統(tǒng)中的動物，水產(chǎn)養(yǎng)殖系統(tǒng)中的水的處理將動物存活百分比提高了至少約1、2、3、4、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、200、300、400或500％。在特定的實施方案中，存活百分比提高至少400％。本發(fā)明還涉及用于飼喂水產(chǎn)養(yǎng)殖系統(tǒng)中的動物的方法，包括將包含上述任一種組合物的動物飼料給予水產(chǎn)養(yǎng)殖系統(tǒng)中的動物，所述組合物包含細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物。在某些實施方案中，動物選自魚、蝦或軟體動物。在某些實施方案中，相對于給予不包含組合物的動物飼料的對照動物，該水產(chǎn)養(yǎng)殖系統(tǒng)中的動物的生長(例如，體重)得到了提高。在某些實施方案中，動物感染了以下表1A中提供的至少一種病原體。例如，在一些實施方案中，相對于未給予包含本發(fā)明的組合物的動物飼料的對照動物，已經(jīng)給予了包含本發(fā)明組合物的動物飼料的動物中體重可以提高至少約1、2、3、4、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100％。這些值中的任何一個可以用于限定體重增加的范圍。例如，在一些實施方案中，體重可以提高5-10％、5-20％或5-50％。在上述方法的某些實施方案中，細(xì)菌孢子選自地衣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和短小芽孢桿菌。本發(fā)明還提供用于食物的細(xì)菌孢子萌發(fā)化合物混合物，所述食品用于人食用或用于動物飼料。在某些實施方案中，用于人食用的食物是益生劑。在某些實施方案中，動物飼料是直接飼喂微生物。如本文中使用的，術(shù)語“益生劑”是指用于人食用的含有活微生物(即，能夠繁殖的微生物，如細(xì)菌孢子)的食品。如本文中使用的，術(shù)語“直接飼喂微生物”是指用于動物食用的含有活的微生物(即，能夠繁殖的微生物，如細(xì)菌孢子)的食料(即，動物飼料)。參見，例如，美國專利No.8,420,074。益生劑或直接飼喂微生物可以包含本文中所述的包含細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物的任一種組合物。使用孢子形成細(xì)菌(包括某些芽孢桿菌菌株)作為用于人和動物的益生菌在近年來已經(jīng)流行起來。如Knap等(WO2010/0700005)中所述的，將如枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌的物種用作動物飼料中的補(bǔ)充劑以通過提高動物飼料的消化和營養(yǎng)利用率來促進(jìn)生長。凝結(jié)芽孢桿菌是用于人食用的商業(yè)益生菌產(chǎn)品中的活性成分，幫助促進(jìn)蛋白質(zhì)、乳糖和果糖的消化。在某些實施方案中，食物或動物飼料包含選自短小芽孢桿菌、緩慢芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌和凝結(jié)芽孢桿菌的細(xì)菌孢子。包含細(xì)菌的直接飼喂微生物的有益效果包括病原體的競爭性排除、通過細(xì)菌酶和酸分解飼料而實現(xiàn)更有效的轉(zhuǎn)化、刺激免疫系統(tǒng)以及通過細(xì)菌產(chǎn)生抗生素和細(xì)菌素。細(xì)菌孢子以及(孢子萌發(fā)后)營養(yǎng)體狀態(tài)的細(xì)菌還通過降低氨臭味和分解肥料而使得更易于處理而改善動物的環(huán)境?？山邮艿妮d體可以加入直接飼喂微生物中?？山邮艿妮d體可以是液體載體、固體載體、水溶性載體或任何其他合適的載體。優(yōu)選的液體載體是代乳品。代乳品通常是粉末形式的代乳品，其與水混合以形成類似奶的組合物。另一種優(yōu)選的液體載體是水。干的載體包括，但不限于，動物飼料、乳清、石灰石(碳酸鈣)、稻殼、酵母培養(yǎng)物、干淀粉和硅鋁酸鈉。在某些實施方案中，水溶性載體選自乳清、麥芽糊精、蔗糖、右旋糖、干淀粉和硅鋁酸鈉。在其他實施方案中，用于直接飼喂微生物的可接受載體選自植物油、蔗糖、二氧化硅、聚山梨酸酯80、丙二醇、丁基羥基茴香醚、檸檬酸和乙氧喹。在某些實施方案中，直接飼喂微生物包含選自枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌和凝結(jié)芽孢桿菌的細(xì)菌孢子。在其他實施方案中，直接飼喂微生物包含選自巨大芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和短小芽孢桿菌的細(xì)菌孢子。在某些實施方案中，直接飼喂微生物作為在斷奶前7-19天的哺乳期中飼喂的奶補(bǔ)充劑(代乳品)、斷奶前1-2天給予接著在保育期中在水系統(tǒng)中給予7天的單劑量凝膠糊或灌服藥(drench)，或在斷奶前1-2天給予接著在保育過程中在漿狀飼料中給予2-3天的單劑量凝膠糊或灌服藥飼喂。直接飼喂微生物可以以其他形式，持續(xù)不同的時間段，以及在不同的動物生長階段飼喂。在某些實施方案中，給動物飼喂直接飼喂微生物，使得遞送至動物的細(xì)菌菌株量為至少1×107集落形成單位(CFU)、1×108CFU、1×109CFU或1×1010CFU/天。然而，應(yīng)當(dāng)注意到較高和較低劑量的細(xì)菌菌株也可以飼喂給動物。在某些實施方案中，動物飼料(例如，益生劑或直接微生物)包含每克動物飼料至少約1×103、1×104、1×105、1×106、1×107、1×108或1×109CFU的待遞送至動物的細(xì)菌菌株。這些值中的任何一個可以用于限定動物飼料中細(xì)菌菌株的濃度范圍。例如，在一些實施方案中，動物飼料包含至少約1×105-1×107CFU、5×105-5×106CFU或1×106-5×106CFU細(xì)菌菌株/克動物飼料。在某些實施方案中，用于人食用的食物(例如，益生劑)包含至少約1×103、1×104、1×105、1×106、1×107、1×108或1×109CFU的待遞送至人的細(xì)菌菌株/克用于人食用的食物。這些值中的任何一個可以用于限定用于人食用的食物中細(xì)菌菌株的濃度范圍。例如，在一些實施方案中，用于人食用的食物包含至少約1×105-1×107CFU、5×105-5×106CFU或1×106-5×106CFU細(xì)菌菌株/克動物飼料。在另一個方面中，本發(fā)明還涉及制備直接飼喂微生物的方法，包括將本文中所述的包含細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物的組合物與如上所述的用于直接飼喂微生物的可接受載體混合。在另一個方面中，本發(fā)明涉及用于飼喂動物的方法，包括將本文中所述的包含細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物的組合物給予動物。在某些實施方案中，可以將動物飼料結(jié)合其他動物飼料成分給予動物。動物可以是任何感興趣的動物。在某些實施方案中，動物是選自家禽、反芻動物、牛、豬、兔、馬、魚和寵物的動物。組合物可以以至少103、104、105、106、107、108或109集落形成單位(CFU)細(xì)菌/克飼料的劑量來給予。還可以通過將組合物加入用于動物的飲水中、將組合物噴撒到動物上或經(jīng)由糊狀物、凝膠或大丸劑施用來給予組合物。在某些實施方案中，益生劑包含本文中所述的組合物和可接受載體，所述組合物包含細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物。在某些實施方案中，用于益生劑的可接受載體選自奶、酸奶、奶酪、發(fā)酵奶、谷物、發(fā)酵谷物、汁液、冰激凌或用于嬰兒或兒童的配方食品。本發(fā)明還涉及制備益生劑的方法，包括將本文中所述的組合物與如上所述的用于益生劑的可接受載體混合，所述組合物包含細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物。在另一個方面中，本發(fā)明涉及處理土壤、生長介質(zhì)或堆肥的方法，包括將本文中所述的包含細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物的組合物施用于土壤、生長介質(zhì)或堆肥。細(xì)菌孢子可以與任何合適的載體混合并噴撒或散布在土壤、生長介質(zhì)或堆肥上。在萌發(fā)和進(jìn)入營養(yǎng)體狀態(tài)時，細(xì)菌孢子開始利用周圍介質(zhì)并且隨后經(jīng)由營養(yǎng)物循環(huán)(將物質(zhì)分解成可以被植物吸收的較簡單形式)或釋放結(jié)合的物質(zhì)來產(chǎn)生對植物有益的物質(zhì)。通過營養(yǎng)物循環(huán)使得可用的物質(zhì)包括氮、磷、鉀、鋅、鐵、鎂和其他微量營養(yǎng)素。細(xì)菌還產(chǎn)生抗生素、抗真菌化合物、細(xì)菌素、有機(jī)酸、氨基酸、酶和鐵載體，這些可以被植物利用或結(jié)合周圍根圍一起工作來給植物提供益處。在另一個方面中，本發(fā)明涉及提高植物的病原體或昆蟲抗性的方法，包括將本文中所述的包含細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物的組合物施用于植物，其中相對于沒有用組合物處理的相應(yīng)植物，病原體或昆蟲抗性提高。細(xì)菌可以通過誘導(dǎo)抗性(例如，對病原體和昆蟲的誘導(dǎo)系統(tǒng)抗性(ISR))來提高植物的病原體或昆蟲抗性。細(xì)菌還可以通過形成生物膜和經(jīng)由營養(yǎng)素和空間的競爭性排除阻止其他細(xì)菌或真菌的生長來提高植物的病原體抗性。在某些實施方案中，病原體是真菌病原體、細(xì)菌病原體或病毒病原體。在某些實施方案中，用于提高真菌病原體抗性的組合物包含選自巨大芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和短小芽孢桿菌的細(xì)菌孢子。在另一個方面中，本發(fā)明涉及包含本文中所述的組合物和可接受載體的清潔產(chǎn)品，所述組合物包含細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物。在某些實施方案中，清潔產(chǎn)品包含選自巨大芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和短小芽孢桿菌的細(xì)菌孢子。在某些實施方案中，用于清潔產(chǎn)品的可接受載體選自去污劑、肥皂和香精。在某些實施方案中，清潔產(chǎn)品用于浴室和中轉(zhuǎn)區(qū)域。細(xì)菌可以提高清潔產(chǎn)品的有效性的方式之一是通過使用尿素作為能量源，由此分解尿素并減少臭味，如氨。一旦細(xì)菌孢子萌發(fā)，細(xì)菌的營養(yǎng)體狀態(tài)可以在瓷磚之間的水泥漿中和地毯的墊料中生長以提供不合需要的物質(zhì)的分解。在某些實施方案中，清潔產(chǎn)品包括至少約1×103、1×104、1×105、1×106、1×107、1×108或1×109CFU細(xì)菌孢子/克清潔產(chǎn)品。這些值中的任一個可以用于限定清潔產(chǎn)品中細(xì)菌孢子的量的范圍。例如，在一些實施方案中，清潔產(chǎn)品包含至少約1×105-1×107CFU、5×105-5×106CFU或1×106-5×106CFU細(xì)菌菌株/克清潔產(chǎn)品。本發(fā)明還涉及制備清潔產(chǎn)品的方法，包括將本文中所述的包含細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物的組合物與可接受載體混合。在某些實施方案中，方法中所用的可接受載體選自去污劑、肥皂和香精。本發(fā)明還涉及處理動物廢物、草墊或褥草的方法，包括將本文中所述的包含細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物的組合物應(yīng)用于動物廢物、草墊或褥草。在另一個方面中，本發(fā)明涉及包含本文中所述的組合物的青貯飼料，所述組合物包含細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物。本發(fā)明還涉及制備青貯飼料的方法，包括將包含細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物的組合物應(yīng)用于青貯飼料。青貯飼料是一種通過在筒倉或其他密閉容器中發(fā)酵植物生物質(zhì)產(chǎn)生的動物飼料，所述植物生物質(zhì)如草、干草、谷類作物或玉米。在處理用于生產(chǎn)青貯飼料的農(nóng)業(yè)原料時，將植物生物質(zhì)，如草或玉米，與乳酸細(xì)菌混合以形成青貯飼料。青貯飼料的生產(chǎn)是用于提高動物飼料的穩(wěn)定性和提高原料的特性的公知方法。對于生產(chǎn)青貯飼料，玉米和草類、黍、具有或不具有谷粒的谷物和豆類植物適宜作為原料。為了生產(chǎn)青貯飼料，常常使用青貯助劑，稱為青貯起發(fā)劑(silagestarter)，其包含化學(xué)添加劑和微生物添加劑。微生物添加劑也可以加入青貯飼料中，例如，用于抑制污染生物體的生長、減少霉菌毒素或減少反芻動物的甲烷排放。用于制備含有微生物添加劑的青貯飼料的方法是本領(lǐng)域已知的并且描述于例如US2011/0142991中。在某些實施方案中，青貯飼料包含至少約1×103、1×104、1×105、1×106、1×107、1×108或1×109CFU細(xì)菌孢子/克青貯飼料。這些值中的任一個可以用于限定青貯飼料中細(xì)菌菌株的濃度范圍。例如，在一些實施方案中，青貯飼料包含至少約1×105-1×107CFU、5×105-5×106CFU或1×106-5×106CFU細(xì)菌菌株/克青貯飼料。本發(fā)明還涉及用于微生物增強(qiáng)采油(MEOR)的方法，包括將包含細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物的組合物施用于油井。在某些實施方案中，將組合物施用于油井的鉆孔或油井的儲層。MEOR是三次采油過程，其中將微生物用于在成熟油層中受困的原油的活化(mobilization)。MEOR可以通過改變油、水或巖石界面特性或通過由于生物阻塞引起的流動行為的變化而提高油回收。用于MEOR的方法描述于例如美國專利No.8,746,334和8,826,975及Al-Sulaimani等，2011，Biotechnol.Bioinf.Bioeng.1(2):147-158中。MEOR可以通過將油井的排空部分重新加壓至目標(biāo)壓力或通過產(chǎn)氣細(xì)菌菌株產(chǎn)生目標(biāo)量的氣體來增強(qiáng)油回收?？梢詫?xì)菌孢子和萌發(fā)化合物的組合物通過油井注入至油井儲層中。然后將井密封直至井中的壓力達(dá)到目標(biāo)壓力或產(chǎn)生目標(biāo)量的氣體以提高油井的油產(chǎn)量。在儲層顯著耗盡后，地下油儲層常常灌注水以提供額外的壓力而利于油回收。在一些實施方案中，將本文中所述的組合物與這種灌注水一起注入井中。這種情況中，灌注水作為水性液體載體發(fā)揮作用。或者，本發(fā)明的組合物可以與灌注水分開注入井中。在這后一種情況中，提供另一種水性液體，即，除了灌注水以外的液體，來作為載體。通過灌注水將微生物注入油井中的方法描述于例如美國專利No.5,044,435中。在某些實施方案中，芽孢桿菌或梭菌屬物種可以用于MEOR。在特定的實施方案中，用于MEOR的細(xì)菌物種選自枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌和莫海威芽孢桿菌。本發(fā)明還涉及治療或預(yù)防受試者的疾病的方法，包括將有效量的本文中所述的包含細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物的組合物給藥于受試者，由此治療或預(yù)防受試者的疾病。“有效量”是足以治療受試者的疾病的量。有效量可以在一次或多次給藥中給予。在某些實施方案中，通過將組合物加入飼料(例如，動物飼料)中將組合物給予受試者。在某些實施方案中，通過本發(fā)明的組合物治療或預(yù)防的疾病選自細(xì)菌疾病、真菌疾病和病毒疾病。如本文中使用的，術(shù)語“細(xì)菌疾病”、“真菌疾病”和“病毒疾病”分別指由細(xì)菌病原體、真菌病原體或病毒病原體引起的疾病。在特定的實施方案中，疾病是細(xì)菌疾病。通過給予細(xì)菌組合物，例如，通過給予芽孢桿菌物種控制的幾種病原體是本領(lǐng)域已知的。例如，Baron(2009，PostgraduateMedicine121(2):1-5)教導(dǎo)了將包含凝結(jié)芽孢桿菌的益生劑給予甲型流感病毒或腺病毒感染的人類受試者顯著提高了受試者的免疫應(yīng)答。Bastos等(2013，Viruses5:1219-1230)。已知通過芽孢桿菌物種控制的病原體的實例以及由這些病原體引起的相應(yīng)疾病顯示于以下的表1A中。表1A.通過芽孢桿菌物種控制的示例性病原體和相應(yīng)疾病。本發(fā)明還涉及預(yù)防或降低易受病原體感染的受試者中的病原體感染的方法，包括將有效量的本文中所述的包含細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物的組合物給藥于受試者，由此預(yù)防或降低受試者中的感染。在某些實施方案中，病原體是細(xì)菌、真菌或病毒。在某些實施方案中，病原體選自表1A中所列的病原體。在特定實施方案中，通過本發(fā)明的組合物治療或預(yù)防的疾病是壞死性腸炎。壞死性腸炎是雞、火雞和鴨中看到的急性或慢性腸毒血癥，由產(chǎn)氣莢膜梭菌引起，并且特征在于血纖蛋白-壞死性腸炎，通常是中腸-小腸的。死亡率可以為5-50％，通常大約為10％。感染通過糞便-口傳播發(fā)生。致病生物體的孢子是高度抗性的。致病因素包括球蟲病(coccidiosis)/球蟲病(coccidiasis)、膳食(高蛋白)、高粘度膳食(常常與膳食中包含高燕麥和小麥相關(guān))、受污染的飼料和/或水以及其他衰竭性疾病。壞死性腸炎的征兆包括抑郁、豎起的羽毛、缺乏食欲、閉眼、不動、深色腹瀉和突然死亡。癥狀還包括損傷、增厚和膨脹的小腸(通常是中部至末端)、具有白喉膜的腸粘膜、具有壞死物質(zhì)的深棕色的腸內(nèi)容物、嗉囊中膽汁染色液體的回流(如果上端小腸受到影響)。受影響的鳥類易于脫水并發(fā)生快速腐敗?？梢曰谇萑旱臍v史和肉眼損傷來進(jìn)行推測性診斷。證實是基于來自受影響組織的涂片中大量桿狀物的觀察以及對特定藥物的良好響應(yīng)，通常在短于48小時內(nèi)。標(biāo)準(zhǔn)處理包括飲用水中的青霉素類(例如，苯氧甲基青霉素、羥氨芐青霉素)或飼料中的桿菌肽(例如，100ppm)。在上述任一方法的某些實施方案中，受試者是人。在上述任一方法的某些實施方案中，受試者是非人動物。在某些實施方案中，受試者選自雞、火雞和鴨。在某些實施方案中，受試者選自魚、蝦或軟體動物。在某些實施方案中，魚選自鮭魚、鱒魚、鯉魚、梭子魚、鱸魚、鯰魚、大菱鲆和鰈魚。實施例提供以下實施例來說明根據(jù)本發(fā)明原理的本發(fā)明，但其不是解釋為以任何方式限制本發(fā)明。在以下實施例中，術(shù)語“GOSD”(萌發(fā)優(yōu)化噴霧干燥)和“GO+”是指其中萌發(fā)優(yōu)化劑(L-丙氨酸，除非另外指明)與所指示的特定芽胞桿菌物種一起噴霧干燥的組合物。芽胞桿菌物種的孢子與緊接在噴霧干燥之前作為包含0.044克丙氨酸/毫升蒸餾水的溶液引入孢子塊中的L-丙氨酸一起噴霧干燥。術(shù)語“GO-”是指其中芽胞桿菌物種在不存在萌發(fā)化合物的情況下類似地噴霧干燥的組合物。此外，以下方法用于在實施例中測定孢子萌發(fā)，除非另外指明。當(dāng)孢子置于營養(yǎng)溶液中并開始萌發(fā)時，它們釋放導(dǎo)致發(fā)黑的吡啶二羧酸和離子。萌發(fā)的這一指示劑導(dǎo)致孢子懸浮液的可見光消光的降低。因此，萌發(fā)率通過計數(shù)暗/亮孢子相的比例并在u.v.-可見光分光光度計下監(jiān)測萌發(fā)孢子懸浮液在600nm處的光密度(O.D.600)的降低來測定。這個比率隨后轉(zhuǎn)換為百分萌發(fā)率。實施例1：在與L-丙氨酸的緊密混合物中枯草芽孢桿菌ENV923的萌發(fā)增加為了比較本發(fā)明緊密混合物的孢子的萌發(fā)率與不存在萌發(fā)劑的常用孢子的萌發(fā)率，進(jìn)行以下處理：A.緊密混合物的形成：枯草芽孢桿菌ENV923的孢子與緊接在干燥之前作為包含0.044克丙氨酸/毫升蒸餾水的溶液引入孢子塊中的L-丙氨酸一起噴霧干燥。產(chǎn)生的緊密混合物通過隨后引入由蒸餾水中的0.01M磷酸鹽緩沖液組成而得到pH7的溶液中萌發(fā)。B.孢子與萌發(fā)劑的常規(guī)混合：枯草芽孢桿菌ENV923的孢子噴霧干燥并隨后引入由蒸餾水中0.01M磷酸鹽緩沖液組成而得到pH7的溶液中。這些孢子通過引入由蒸餾水中0.01M磷酸鹽緩沖液組成而得到pH7的溶液(每毫升溶液加0.0001克丙氨酸)中來萌發(fā)。C.單獨(dú)孢子的萌發(fā)：枯草芽孢桿菌ENV923的孢子噴霧干燥并隨后引入由蒸餾水中的0.01M磷酸鹽緩沖液組成而得到pH7的溶液中。這樣的處理各自進(jìn)行兩次重復(fù)。以下表1B顯示這種處理影響枯草芽孢桿菌ENV923萌發(fā)的平均結(jié)果，如通過光密度的百分下降測量的。光密度的下降指示萌發(fā)的進(jìn)展。光密度(OD)在600nm波長下用Jenway6320D型可見光范圍分光光度計測量。使用的L-丙氨酸純度為99％并來源于AlfaAeser；Heysham,Lancashire,UnitedKingdom。表1B.隨時間從OD(600nm)基線的百分降低樣品時間(分鐘)05101520緊密混合物0％2.7％17.7％34.3％41.2％常規(guī)混合0％0.5％18.8％31.9％33.7％單獨(dú)孢子0％1.3％3.2％4.1％7.5％以上結(jié)果表明，通過如噴霧干燥的方法配制成與萌發(fā)化合物的緊密混合物的孢子比與相同萌發(fā)劑常規(guī)混合的孢子更快地萌發(fā)。因此，用本發(fā)明的組合物涂覆的植物繁殖材料將更快速和有效地接收與其所涂覆的特定細(xì)菌相關(guān)的益處，因為這樣的細(xì)菌將以大幅提高的量存在。實施例2：用GOSD處理的枯草芽孢桿菌菌株ENV923的萌發(fā)增加枯草芽孢桿菌孢子在L-丙氨酸溶液存在下通過對孢子噴霧干燥而用GOSD(萌發(fā)優(yōu)化噴霧干燥)進(jìn)行處理，且萌發(fā)水平通過光密度(OD)讀數(shù)測定。0.01M磷酸鉀緩沖液，pH70.01M磷酸鉀緩沖液使用1MK2HPO4(87.09g，溶解于0.5L蒸餾水中)和1MKH2PO4(68.045g，溶解于0.5L蒸餾水中)溶液制備。將61.5ml的1MK2HPO4與38.5ml的1MKH2PO4合并和用蒸餾水稀釋到1000ml而制備pH7.0的0.1M磷酸鉀緩沖液。用蒸餾水以1:10的比率進(jìn)一步稀釋0.1M磷酸鉀緩沖液，獲得0.01M磷酸鉀緩沖液，pH7.0。緩沖液通過在121℃下高壓處理進(jìn)行滅菌六十(60)分鐘?？莶菅挎邨U菌孢子懸浮液在0.01M磷酸鉀緩沖液，pH7.0中以1.7x108cfu/ml的濃度制備，在預(yù)熱的37℃水浴中孵育并在45分鐘時間內(nèi)以5分鐘間隔評估百分萌發(fā)率。表2結(jié)論：GOSD處理顯著地提高枯草芽孢桿菌孢子的百分萌發(fā)率和萌發(fā)速度。實施例3：用GOSD處理的地衣芽孢桿菌菌株ENV100的萌發(fā)增加如實施例1中所述，地衣芽孢桿菌孢子在0.044克L-丙氨酸/mL蒸餾水存在下通過對孢子噴霧干燥而用GOSD進(jìn)行處理。萌發(fā)水平使用用于孢子懸浮液制備的0.01M磷酸鉀緩沖液，pH7.0如上所述通過光密度(OD)讀數(shù)測定。地衣芽孢桿菌孢子懸浮液在0.01M磷酸鉀緩沖液，pH7.0中以1.29x108cfu/ml的濃度制備，在預(yù)熱的37℃水浴中孵育并在四十五(45)分鐘時間內(nèi)以五(5)分鐘的間隔評估百分萌發(fā)率。表3結(jié)論：GOSD處理顯著提高地衣芽孢桿菌孢子的百分萌發(fā)率和萌發(fā)速度。實施例4：用GOSD處理的枯草芽孢桿菌菌株ENV923在各種pH水平下的萌發(fā)增加枯草芽孢桿菌菌株ENV923GO+和GO-孢子如上所述制備并重懸浮在各種pH水平的0.01M磷酸鉀緩沖液中。如上所述進(jìn)行OD600測量。pH3.0-7.0下的0.01M磷酸鉀緩沖液0.01M磷酸鉀緩沖液，pH7.0緩沖液如實施例1中所述制備?！橹苽鋚H范圍3.0-6.0的0.01M磷酸鉀緩沖液，基礎(chǔ)緩沖液使用通過混合13.2ml的1MK2HPO4和86.8ml的1MKH2PO4溶液(實施例1中所述)和用蒸餾水使體積達(dá)到1L制備的0.1M磷酸鉀緩沖液，pH6.0?！楂@得pH5.0-pH3.0的0.01M磷酸鉀緩沖液，0.1M磷酸鉀緩沖液，pH6.0用蒸餾水稀釋，緩沖液的pH使用1MH2PO4降低到pH5.0、pH4.0和pH3.0并且最終體積用蒸餾水達(dá)到，保持0.1M緩沖液與蒸餾水的比率1:10。制備的緩沖液儲存在4℃下，且在各實驗前，緩沖液的pH使用1MNaOH或1MH2PO4重新調(diào)節(jié)。表4各種pH水平下具有GOSD(GO+)和不具有GOSD(GO-)的萌發(fā)結(jié)果，表格中顯示了以5分鐘間隔測量的百分萌發(fā)率結(jié)論：GOSD的處理使得枯草芽孢桿菌孢子能夠更快地萌發(fā)并克服較低pH水平的影響。實施例5：用GOSD處理的枯草芽孢桿菌菌株ENV923的萌發(fā)增加。各種溫度水平影響的孢子萌發(fā)反應(yīng)，表格中顯示以10分鐘間隔測量的百分萌發(fā)率?？莶菅挎邨U菌菌株ENV923GOSD和對照孢子如上所述制備。孢子的萌發(fā)如上所述通過光密度(OD)測量進(jìn)行測試。制備用于OD600測量的孢子懸浮液并在0.01M磷酸鉀緩沖液，pH7.0(磷酸鹽緩沖液，pH7.0制劑)中以1.7x108cfu/ml的濃度冷卻到4℃。對于各孢子緩沖液，制備填充到3ml體積的3個培養(yǎng)管。在攪拌和初始OD600測量后，管在預(yù)熱到25℃、30℃和37℃的水浴中孵育120min。以10min的間隔攪拌管并進(jìn)行OD600測量。表5.GO-和GO+的枯草芽孢桿菌在37℃、30℃和25℃下的百分萌發(fā)率結(jié)論：用GOSD處理(GO+)使得枯草芽孢桿菌孢子能夠更快地萌發(fā)并克服低溫方案的影響。實施例6：在不同摩爾的NaCl溶液存在下具有或不具有GOSD的地衣芽孢桿菌的百分萌發(fā)率培養(yǎng)基：培養(yǎng)基是稀胰蛋白酶大豆液體培養(yǎng)基(mTSB)(BD,211822)。培養(yǎng)基通過在加熱和攪拌條件下在1L水中懸浮50mg的胰蛋白酶大豆液體培養(yǎng)基粉末直到完全溶解而制備。然后等分到瓶中并在121℃下高壓處理30分鐘。基于制造商報告的粉末含量，mTSB培養(yǎng)基每升包含：酪蛋白的胰消化物：28.3mg大豆的木瓜蛋白酶(Papic)消化物：5.0mg右旋糖：4.2mg氯化鈉：8.3mg磷酸氫二鉀：4.2mg在培養(yǎng)基加熱和高壓處理之前，在適宜情況下添加氯化鈉(AmrescoX190)以誘導(dǎo)滲透壓力，以使得最終濃度為0.5M或1.5M(分別為29.22g/L和87.66g/L)。孢子懸浮液：用或未用GOSD處理的地衣芽孢桿菌菌株ENV100的孢子粉末懸浮在無菌共混罐內(nèi)的具有0.1％OctosolSLS(FT-SLS-246DRUM,TiarcoChemical,Dalton,GA)的無菌水中。孢子通過以5秒間隔共混總共至少15秒的時間或直到孢子視覺上完全懸浮而進(jìn)行懸浮。進(jìn)行這一操作以使得共混罐中的最終濃度是1x1010cfu/ml。從這一孢子懸浮液，250μl轉(zhuǎn)移到含有4.75mlmTSB的管中以給出5x108cfu/ml的最終濃度。這些濃度通過對各批孢子進(jìn)行優(yōu)化以獲得大約0.6的起始OD600而測定。OD萌發(fā)分析：含有懸浮的孢子的管立即渦旋，對于零時間點(diǎn)在OD600下測量并在37℃水浴中孵育。以相應(yīng)的時間間隔，記錄時間、移除管、渦旋、以O(shè)D600測量并返回到水浴中。OD600的降低百分比通過從零時間點(diǎn)值減去測量的值，除以零時間點(diǎn)值并乘以100％確定。完全萌發(fā)先前證明為對應(yīng)于60％的OD600降低百分比。因此，萌發(fā)百分率通過將OD600降低百分比乘以1.67測定。表6.在0、0.5摩爾和1.5摩爾的NaCl溶液存在下具有GOSD(GO+)和不具有GOSD(GO-)的地衣芽孢桿菌孢子在一個小時內(nèi)的％萌發(fā)結(jié)論：GOSD的處理使得地衣芽孢桿菌孢子能夠更快地萌發(fā)并克服不同鹽(NaCl)水平的滲透壓力影響。實施例7：在不同ppm的銅溶液存在下具有和不具有GOSD的地衣芽孢桿菌的百分萌發(fā)率。培養(yǎng)基：mTSB培養(yǎng)基如上制備，但補(bǔ)充NaCl到50mM的最終濃度以產(chǎn)生滲透壓平衡的培養(yǎng)基。1x105ppm硝酸銅(II)半(五水合物)(AlfaAesar12523)原液通過將2g量懸浮到20ml水中并進(jìn)行0.22μm過濾來制備。將其添加到mTSB等份中以獲得0、50、100和200ppm最終濃度。孢子懸浮液：用或未用GOSD處理的地衣芽孢桿菌菌株ENV100的孢子粉末懸浮在無菌共混罐內(nèi)的具有0.1％OctosolSLS(FT-SLS-246DRUM,TiarcoChemical,Dalton,GA)的無菌水中。孢子通過以5秒間隔共混總共至少15秒或直到孢子視覺上完全懸浮而進(jìn)行懸浮。進(jìn)行這一操作以使得共混罐中的最終濃度是2x109cfu/ml。從這一孢子懸浮液，250μl轉(zhuǎn)移到含有4.75mlmTSB的管中以給出1x108cfu/ml的最終濃度。這些濃度通過對各批孢子進(jìn)行優(yōu)化以獲得大約0.6的起始OD600而測定。OD萌發(fā)分析：如實施例6中所示進(jìn)行和計算。表7.在0、50ppm、100ppm和200ppm的銅離子溶液存在下具有GOSD(GO+)和不具有GOSD(GO-)的地衣芽孢桿菌孢子在一個小時內(nèi)的百分萌發(fā)率結(jié)論：GOSD的處理使得地衣芽孢桿菌孢子能夠更快地萌發(fā)并克服各種水平的銅離子的脅迫效應(yīng)。實施例8：在不同ppm的鋁溶液存在下具有和不具有GOSD的地衣芽孢桿菌的百分萌發(fā)率。培養(yǎng)基：mTSB培養(yǎng)基如上制備，但補(bǔ)充NaCl到50mM的最終濃度以產(chǎn)生滲透壓平衡的培養(yǎng)基。1000ppmAl3+原液通過將0.62g的Al2(SO4)3*14H2O(AlfaAesar12362)懸浮到50ml水中并進(jìn)行0.22μm過濾來制備。將其添加到mTSB等份中以獲得0、0.25、0.50和1.0ppm最終濃度。然后培養(yǎng)基的pH通過添加HCl使其下降到pH4.5以允許Al3+離子完全分離。孢子懸浮液：用或未用GOSD處理的地衣芽孢桿菌菌株ENV100的孢子粉末懸浮在無菌共混罐內(nèi)的具有0.1％OctosolSLS(FT-SLS-246DRUM,TiarcoChemical,Dalton,GA)的無菌水中。孢子通過以5秒間隔共混總共至少15秒或直到孢子視覺上完全懸浮而進(jìn)行懸浮。進(jìn)行這一操作以使得共混罐中的最終濃度是1x1010cfu/ml。從這一孢子懸浮液，250μl轉(zhuǎn)移到含有4.75mlmTSB的管中以給出5x108cfu/ml的最終濃度。這些濃度通過對各批孢子進(jìn)行優(yōu)化以獲得大約0.6的起始OD600而測定。OD萌發(fā)分析：如實施例6中進(jìn)行和計算。表8.在0、0.25ppm、0.50ppm和1.0ppm的鋁離子溶液存在下具有GOSD(GO+)和不具有GOSD(GO-)的地衣芽孢桿菌孢子在一個小時內(nèi)的百分萌發(fā)率結(jié)論：GOSD的處理使得地衣芽孢桿菌孢子能夠更快地萌發(fā)并克服各種鋁離子水平的脅迫效應(yīng)。實施例9：在不同毫摩爾的膽汁鹽溶液存在下具有和不具有GOSD的地衣芽孢桿菌的百分萌發(fā)率培養(yǎng)基：mTSB培養(yǎng)基如上制備，但補(bǔ)充NaCl到50mM的最終濃度以產(chǎn)生滲透壓平衡的培養(yǎng)基。80mM膽汁鹽原液通過將2.5g?；敲撗跄懰徕c(SigmaT0875)、1.1g甘氨脫氧膽酸鈉(SigmaG9910)和0.346g脫氧膽酸鈉(SigmaD5670)懸浮到100ml水中并進(jìn)行0.22μm過濾來制備。將其添加到mTSB等份中以獲得0、4、6和8mM最終濃度。孢子懸浮液：用或未用GOSD處理的地衣芽孢桿菌菌株ENV100的孢子粉末懸浮在無菌共混罐內(nèi)的具有0.1％OctosolSLS(FT-SLS-246DRUM,TiarcoChemical,Dalton,GA)的無菌水中。孢子通過以5秒間隔共混總共至少15秒或直到孢子視覺上完全懸浮而進(jìn)行懸浮。進(jìn)行這一操作以使得共混罐中的最終濃度是1x1010cfu/ml。從這一孢子懸浮液，250μl轉(zhuǎn)移到含有4.75mlmTSB的管中以給出5x108cfu/ml的最終濃度。這些濃度通過對各批孢子進(jìn)行優(yōu)化以獲得大約0.6的起始OD600而測定。OD萌發(fā)分析：如上進(jìn)行和計算。表9.在0、4mM、6mM和8mMppm的膽汁鹽溶液存在下具有GOSD(GO+)和不具有GOSD(GO-)的地衣芽孢桿菌孢子在一個小時內(nèi)的百分萌發(fā)率結(jié)論：GOSD的處理使得地衣芽孢桿菌孢子能夠更快地萌發(fā)并克服可能在胃腸道中遇到的各種膽汁鹽水平的脅迫效應(yīng)。實施例10：在限定磷酸鉀培養(yǎng)基和2％葡萄糖中具有和不具有GOSD的地衣芽孢桿菌的三次重復(fù)的平均生長地衣芽孢桿菌菌株ENV431GO+孢子用GOSD處理(過程如之前描述)。作為對照使用在未用GOSD的情況下噴霧干燥的來自相同培養(yǎng)物的GO-孢子。在補(bǔ)充有2％葡萄糖的最低鹽培養(yǎng)基中進(jìn)行生長測試。培養(yǎng)基培養(yǎng)基通過在蒸餾水中溶解(NH4)2SO4(1.26g/L)、MgCl2(0.81g/L)、CaCl2(0.15g/L)、NaCl(0.05g/L)并添加1ml/L1000×微量礦物質(zhì)混合物(MnSO4(0.85g/50ml)、ZnSO4(0.15g/50ml)、FeSO4×7H2O(0.15g/50ml)、硫胺素鹽酸鹽(0.05g/50ml))制備。制備的溶液傾倒到燒瓶中(90ml/燒瓶)并在121℃下高壓處理40min。在接種前，培養(yǎng)基補(bǔ)充4ml過濾除菌的25×磷酸鉀(K2HPO4(3.44g/50ml)、KH2PO4(2.81g/50ml))溶液和2ml50×(100g/200ml)葡萄糖溶液達(dá)到2％最終濃度。地衣芽孢桿菌細(xì)胞的生長用于接種的孢子量使用GO-和GO+孢子粉末計數(shù)測定。濃縮的(1000×)地衣芽孢桿菌菌株ENV431孢子懸浮液通過用無菌水在無菌共混罐中共混孢子制備，并添加到具有培養(yǎng)基的燒瓶中達(dá)到下表中作為0h指示的濃度。初始培養(yǎng)物的計數(shù)通過進(jìn)行共混孢子懸浮液的稀釋和平板計數(shù)獲得。對于各孢子樣品準(zhǔn)備3個燒瓶。燒瓶在30℃、150rpm下接種，并生長48h。在24h和48h時獲取樣品并進(jìn)行平板計數(shù)。表10.最低磷酸鉀培養(yǎng)基和2％葡萄糖中具有GOSD(GO+)或不具有GOSD(GO-)的地衣芽孢桿菌的三次重復(fù)的平均生長。顯示的數(shù)據(jù)是以cfu/ml計。0小時24小時48小時地衣芽孢桿菌GO-1.88x1032.20x1049.4x104地衣芽孢桿菌GO+1.46x1037.95x1043.65x105結(jié)論：GOSD處理顯著地提高地衣芽孢桿菌萌發(fā)率和生長率。實施例11：地衣芽孢桿菌在兩天時間內(nèi)的生長；比較在不同濃度NaCl存在下具有或不具有GOSD的處理培養(yǎng)基：mTSB如上制備，但在適宜情況下添加氯化鈉(AmrescoX190)以使得最終濃度為0、0.5、1.0或1.5M(分別0、29.22、58.44或87.66g/L)而誘導(dǎo)滲透壓力。培養(yǎng)基加熱，等分到燒瓶中并高壓處理。平板計數(shù)瓊脂(PCA)(BD247910)按照制造商的指示制備：23.5g粉末懸浮在1L水中，伴隨頻繁攪拌使其沸騰，等分到玻璃缸中并高壓處理。培養(yǎng)基缸在45℃水浴中冷卻直到需要使用。粉末的制造商對于每升PCA報告以下含量：酪蛋白的胰消化物：5.0g酵母提取物：2.5g右旋糖：1.0g瓊脂：15.0g孢子懸浮液：用或未用GOSD處理的地衣芽孢桿菌菌株ENV100的孢子粉末懸浮在無菌共混罐內(nèi)的具有0.1％OctosolSLS(FT-SLS-246DRUM,TiarcoChemical,Dalton,GA)的無菌水中。孢子通過以5秒間隔共混總共至少15秒或直到孢子視覺上完全懸浮，隨后在無菌水中系列稀釋而進(jìn)行懸浮。進(jìn)行這一操作以使得培養(yǎng)瓶中的最終濃度是1x102cfu/ml。定量：燒瓶在37℃下以150rpm振蕩孵育28小時(“1天”)或50小時(“2天”)。來自各燒瓶的等份試樣系列地稀釋到具有傾倒于其上冷卻到<45℃的PCA的皮氏皿中，打旋并使其固化。平板倒置并在37℃下孵育大約24小時。計數(shù)集落并基于稀釋計算濃度。來自各燒瓶的大約10μl樣品也在PCA平板上劃線以測試純度。表11.在通過鹽溶液的滲透壓力激發(fā)時用GOSD處理的地衣芽孢桿菌(GO+)的生長結(jié)論：GOSD處理顯著增加滲透鹽壓力下地衣芽孢桿菌的萌發(fā)和生長。實施例12：枯草芽孢桿菌菌株ENV923的蛋白酶活性如之前所述用GOSD處理的枯草芽孢桿菌菌株ENV923孢子(GO+)及未處理的枯草芽孢桿菌菌株ENV923孢子(GO-)用于蛋白酶活性測試。培養(yǎng)基化學(xué)限定鹽培養(yǎng)基(CDSM)用于在蛋白酶測試中進(jìn)行細(xì)胞增殖。培養(yǎng)基通過在蒸餾水中溶解基礎(chǔ)溶液組分(g/L)：(NH4)SO4，1.26g；L-谷氨酸，1.18g；MgCl2，0.81；CaCl2，0.155和85％L-乳酸(0.530ml/L)，并添加1ml/L的1000×微量礦物質(zhì)混合物(g/50ml)制備。具有基礎(chǔ)溶液的燒瓶(48ml/燒瓶)高壓處理40min。在接種前，添加2ml單獨(dú)制備的具有葡萄糖(g/50ml)的過濾除菌的25×緩沖溶液：MOPS,11.6；KH2PO4,0.6；葡萄糖,4.5?？莶菅挎邨U菌ENV923細(xì)胞的生長用于接種的孢子量使用GO-和GO+孢子粉末計數(shù)確定。濃縮的(1000×)枯草芽孢桿菌菌株ENV923孢子懸浮液通過在無菌混合罐中使用無菌的0.01M磷酸鉀緩沖液，pH7.0共混孢子制備，并以約1x104cfu/ml的濃度添加到燒瓶中。初始培養(yǎng)物的計數(shù)通過進(jìn)行共混孢子懸浮液的稀釋和平板計數(shù)確認(rèn)。對于各孢子樣品制備3個燒瓶。燒瓶在30℃下以150rpm孵育，且樣品在48h時獲取。蛋白酶活性分析蛋白酶活性分析使用酪蛋白作為底物和與酪氨酸反應(yīng)并幫助藍(lán)色顯色的Folin&Ciocalateu’s酚試劑對細(xì)胞上清液進(jìn)行。蛋白酶活性單位定義為在一分鐘內(nèi)釋放1μg的酪氨酸的酶量。試管中酪氨酸的量通過在Jenway7305分光光度計中測量OD650并使用標(biāo)準(zhǔn)曲線計算釋放的酪氨酸來測定。試劑試劑1：0.05M磷酸鉀緩沖液，pH7.00.1M磷酸鉀緩沖液，pH7.0(如實施例1中所述制備)用蒸餾水以1:1的比率稀釋以獲得0.05M磷酸鉀緩沖液，pH7.0試劑2：0.65％酪蛋白溶液0.65g酪蛋白溶解在80ml的0.05M磷酸鉀緩沖液，pH7.0中，加熱以使得酪蛋白溶解到溶液中，并用0.05M磷酸鉀緩沖液，pH7.0使終體積達(dá)到100ml。試劑3：15％三氯乙酸(TCA)15g的TCA溶解在蒸餾水中并使終體積達(dá)到100ml。試劑4：20％Na2CO320g的Na2CO3溶解在蒸餾水中并使終體積達(dá)到100ml。蛋白酶分析·10ml培養(yǎng)物離心且上清液通過0.2μm過濾器過濾到無菌管中?！?ml過濾的上清液與3ml的0.65％酪蛋白溶液混合并置于37℃水浴中1h?！し磻?yīng)通過添加6ml的15％TCA停止且樣品離心5min。·0.5ml各樣品與1ml的20％Na2CO3混合，接著添加0.5ml的Folin&Ciolcallieu’s酚試劑并在室溫下孵育20min以允許藍(lán)色顯色?！?ml蒸餾水添加到各樣品中并在混合后測量OD650?！橛嬎愕鞍酌富钚?，酪氨酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線通過獲得酪氨酸溶解在蒸餾水中的系列稀釋、用與培養(yǎng)物樣品相同的條件進(jìn)行處理和測量OD650來制備。表12.用GOSD處理的枯草芽孢桿菌(GO+)相對于對照(GO-)的蛋白酶產(chǎn)生結(jié)論：枯草芽孢桿菌孢子用GOSD處理使得能夠產(chǎn)生更多的酶如蛋白酶。實施例13：綠色產(chǎn)色鏈霉菌(Streptomycesviridochromogenes)在萌發(fā)化合物存在下的萌發(fā)綠色產(chǎn)色鏈霉菌孢子通過傾倒10ml的TX緩沖液(0.05MTris-HCl緩沖液，pH7.3，具有0.001％Tween80)和用無菌棉花拭子除去孢子而從平板收獲。來自平板的孢子懸浮液傾倒到無菌的50ml管中。當(dāng)獲得所有樣品的孢子懸浮液時，通過將具有孢子懸浮液的管放置在加熱模塊中而使得溫度達(dá)到55℃進(jìn)行熱休克，且將溫度保持在55℃10min。在熱休克后，孢子懸浮液在冰水中冷卻5min并旋轉(zhuǎn)30min。倒掉上清液，孢子在4℃下重懸在25ml0.02M磷酸鉀緩沖液，pH7.0中并旋轉(zhuǎn)15min。在倒掉上清液后，孢子重懸在20ml的0.02M磷酸鉀緩沖液，pH7.0中并劇烈混合以獲得實驗中使用的孢子懸浮液。樣品通過混合1.5ml的2×萌發(fā)劑共混物與1.5ml孢子懸浮液制備。所有萌發(fā)劑共混物在蒸餾水中制備為2×50ml溶液。氯化鈣制備為100X溶液(0.4g/10ml)且20μl添加到10ml的2X萌發(fā)劑共混物中。萌發(fā)化合物的最終濃度如下：0.89mg/ml的L-丙氨酸；1.17mg/ml的L-纈氨酸，13.2mg/ml的L-天冬酰胺；2.25mg/ml的葡萄糖；和2.25mg/ml的果糖。在測量初始OD600后，樣品轉(zhuǎn)移到30℃水浴中且OD600在90min內(nèi)以15min間隔測量以測定萌發(fā)率。表13.ENV151(綠色產(chǎn)色鏈霉菌)光密度的％降低結(jié)論：綠色產(chǎn)色鏈霉菌孢子用萌發(fā)化合物增強(qiáng)萌發(fā)。實施例14：細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物的緊密混合物與常規(guī)混合之間萌發(fā)率的比較為了比較緊密混合物的孢子的萌發(fā)率和與萌發(fā)劑常規(guī)混合的孢子的萌發(fā)率，進(jìn)行以下處理：A.緊密混合物的形成：枯草芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、短芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌、凝結(jié)芽孢桿菌、堅強(qiáng)芽孢桿菌、側(cè)孢芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、巨大芽胞桿菌、蕈狀芽孢桿菌、日本金龜子芽孢桿菌、多粘芽胞桿菌、短小芽孢桿菌、蘇云金芽胞桿菌、穿刺巴斯德芽菌、多刺巴斯德氏芽菌、Pasteurianishizawae、綠色產(chǎn)色鏈霉菌、灰綠鏈霉菌(Streptomycesgriseoviridis)、利迪鏈霉菌(Streptomyceslydicus)、褶皺鏈霉菌(Streptomycesplicatus)、仙臺鏈霉菌(Streptomycessindeneusis)、婁徹氏鏈霉菌(Streptomycesrochei)、Streptomycesalni、綠色鏈霉菌(Streptomycesviridis)、熱普通鏈霉菌(Streptomycesthermovulgaris)、灰色鏈霉菌(Streptomycesgriseus)、酸性瘡痂鏈霉菌(Streptomycesacidiscabies)、金色鏈霉菌(Streptomycesaureofaciens)、鮮黃鏈霉菌(Streptomycesgalbus)、細(xì)黃鏈霉菌(Streptomycesmicroflavus)和金色鏈霉菌的孢子緊接在干燥之前與作為包含0.044克氨基酸/毫升蒸餾水的溶液引入孢子塊中的L-丙氨酸、L-纈氨酸、L-脯氨酸、L-亮氨酸、L-半胱氨酸、L-蘇氨酸、L-谷氨酰胺、L-天冬酰胺或L-苯丙氨酸一起干燥。產(chǎn)生的緊密混合物隨后通過引入由蒸餾水中0.01M磷酸鹽緩沖液組成而得到pH7的溶液中而萌發(fā)。B.孢子與萌發(fā)劑的常規(guī)混合：枯草芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、短芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌、凝結(jié)芽孢桿菌、堅強(qiáng)芽孢桿菌、側(cè)孢芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、巨大芽胞桿菌、蕈狀芽孢桿菌、日本金龜子芽孢桿菌、多粘芽胞桿菌、短小芽孢桿菌、蘇云金芽胞桿菌、穿刺巴斯德芽菌、多刺巴斯德氏芽菌、Pasteurianishizawae、綠色產(chǎn)色鏈霉菌、灰綠鏈霉菌、利迪鏈霉菌、褶皺鏈霉菌、仙臺鏈霉菌、婁徹氏鏈霉菌、Streptomycesalni、綠色鏈霉菌、熱普通鏈霉菌、灰色鏈霉菌、酸性瘡痂鏈霉菌、金色鏈霉菌、鮮黃鏈霉菌、細(xì)黃鏈霉菌和金色鏈霉菌的孢子水化和干燥。這類孢子通過引入由蒸餾水中0.01M磷酸鹽緩沖液而得到pH7及0.0001克L-丙氨酸、L-纈氨酸、L-脯氨酸、L-亮氨酸、L-半胱氨酸、L-蘇氨酸、L-谷氨酰胺、L-天冬酰胺或L-苯丙氨酸/毫升溶液組成的溶液中而萌發(fā)。C.單獨(dú)孢子的萌發(fā)：枯草芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、短芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌、凝結(jié)芽孢桿菌、堅強(qiáng)芽孢桿菌、側(cè)孢芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、巨大芽胞桿菌、蕈狀芽孢桿菌、日本金龜子芽孢桿菌、多粘芽胞桿菌、短小芽孢桿菌、蘇云金芽胞桿菌、穿刺巴斯德芽菌、多刺巴斯德氏芽菌、Pasteurianishizawae、綠色產(chǎn)色鏈霉菌、灰綠鏈霉菌、利迪鏈霉菌、褶皺鏈霉菌、仙臺鏈霉菌、婁徹氏鏈霉菌、Streptomycesalni、綠色鏈霉菌、熱普通鏈霉菌、灰色鏈霉菌、酸性瘡痂鏈霉菌、金色鏈霉菌、鮮黃鏈霉菌、細(xì)黃鏈霉菌和金色鏈霉菌的孢子被水化和干燥。孢子隨后通過引入由蒸餾水中0.01M磷酸鹽緩沖液組成而得到pH7的溶液中而萌發(fā)。由這樣的處理各自得到的孢子的萌發(fā)通過光密度的百分下降或通過在顯微鏡下計數(shù)萌發(fā)孢子的數(shù)目測量。發(fā)現(xiàn)緊密混合的組合物比其相應(yīng)的常規(guī)混合的等同物更快地萌發(fā)。實施例15：用地衣芽孢桿菌孢子萌發(fā)化合物混合物處理玉米葉、胡蘿卜根和馬鈴薯塊莖為了制備地衣芽孢桿菌孢子萌發(fā)化合物混合物，將0.044gL-丙氨酸/ml蒸餾水的溶液引入地衣芽孢桿菌孢子塊中，并且將混合物立即噴霧干燥。所得到的含有芽孢桿菌孢子和L-丙氨酸的緊密混合物的噴霧干燥粉末在以下處理中稱為“GO+”。還將沒有添加L-丙氨酸的芽孢桿菌孢子噴霧干燥用作對照。將沒有添加L-丙氨酸的噴霧干燥的芽孢桿菌孢子在以下處理中描述為“GO-”。在懸浮噴霧干燥的地衣芽孢桿菌孢子前，測定GO+和GO-制劑的細(xì)菌計數(shù)以如以下表14中針對所示的孢子濃度的差異進(jìn)行調(diào)整。表14.地衣芽孢桿菌孢子的噴霧干燥GO+和GO-制劑中的細(xì)菌計數(shù)將噴霧干燥的孢子懸浮于pH7.0的0.01M磷酸鉀緩沖液中，其在加入孢子前已經(jīng)冷卻至4℃。如表14中所示，將GO+和GO-噴霧干燥制劑分別以0.018g/ml和0.009g/ml的濃度加入緩沖液中以針對每個制劑中的孢子濃度的差異進(jìn)行調(diào)整。玉米(Zeamays)葉獲自在田間生長的植物。將每片葉子切成大約2.5cm片段。將胡蘿卜(Daucuscarota)根和馬鈴薯(Solanumtuberosum)塊莖切成節(jié)段，保留外皮。將植物樣品放置在皮氏培養(yǎng)皿中的濕濾紙上，每個皮氏培養(yǎng)皿一個植物樣品。將大約150μl孢子懸浮液添加到每個植物樣品。對于胡蘿卜和馬鈴薯樣品，將孢子懸浮液施用于皮表面，即，根或塊莖的外表面。覆蓋包含植物樣品的皮氏培養(yǎng)皿并在37℃下孵育。對于0min的樣品，細(xì)胞計數(shù)獲自孢子懸浮液的管。隨后，在每個時間點(diǎn)(15min、30min和60min)從處理的葉片段獲取樣品并在相襯顯微鏡下觀察。通過拍取一些觀察視野的照片并計數(shù)暗和亮的細(xì)胞來獲得相亮和相暗孢子數(shù)。基于相襯顯微鏡下的相亮(未萌發(fā))和相暗(萌發(fā))孢子的數(shù)量來確定孢子萌發(fā)水平。如以下表15中所示，用含有L-丙氨酸的制劑(GO+)處理的玉米葉上的萌發(fā)孢子百分比比不含L-丙氨酸的制劑(GO-)高得多。例如，在30min內(nèi)94％的GO+孢子萌發(fā)，而低于20％的GO-孢子甚至在60min后才萌發(fā)。對于胡蘿卜根(表16)和馬鈴薯塊莖(表17)觀察到了相似結(jié)果。這些結(jié)果表明將L-丙氨酸加入噴霧干燥的制劑中導(dǎo)致植物表面上孢子的更快萌發(fā)。表15.玉米葉上具有L-丙氨酸(GO+)或不具有L-丙氨酸(GO-)的地衣芽孢桿菌的萌發(fā)?！癛ep”是重復(fù)，“Avg”是平均。表16.胡蘿卜根上具有L-丙氨酸(GO+)或不具有L-丙氨酸(GO-)的地衣芽孢桿菌的萌發(fā)?！癛ep”是重復(fù)，“Avg”是平均。表17.馬鈴薯塊莖上具有L-丙氨酸(GO+)或不具有L-丙氨酸(GO-)的地衣芽孢桿菌的萌發(fā)。“Rep”是重復(fù)，“Avg”是平均。實施例16：用包含細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物的組合物涂覆的玉米種子的萌發(fā)、植物生長和產(chǎn)量的評價用實施例14中所列的包含細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物的各種組合的組合物涂覆玉米種子。通過常規(guī)方式，如美國專利No.7,989,391和美國專利No.5,849,320中所述的那些，來進(jìn)行種子涂覆。評價了以下處理：A.用細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物的緊密組合物涂覆的種子B.用細(xì)菌孢子和萌發(fā)化合物的常規(guī)混合物涂覆的種子C.用單獨(dú)的細(xì)菌孢子涂覆的種子D.未涂覆的種子在植物出芽的第一天開始并在出芽第一天后持續(xù)三周，通過每天測量出苗率來測量溫室和田間試驗中的種子萌發(fā)率。通過采收成熟穗并將其在37℃烤箱中干燥三天來測量產(chǎn)量。然后將穗脫粒并且收集種子和計數(shù)。還通過將從每株植物采收的種子稱重來測量總的種子重量。實施例17：芽孢桿菌益生劑在巨型艾美球蟲(Eimeriamaxima)和產(chǎn)氣莢膜梭菌感染的雞中的作用在Cobb500小雞(家雞(Gallusgallusdomesticus))上進(jìn)行28-天籠養(yǎng)測試(batterytest)來測定含有芽孢桿菌益生菌劑的補(bǔ)充飼料或標(biāo)準(zhǔn)抗生素處理(桿菌肽)對感染了巨型艾美球蟲(家禽中球蟲病的致病劑)和產(chǎn)氣莢膜梭菌(壞死性腸炎的致病劑)的雞的作用。芽孢桿菌益生劑含有等比例的枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌和短小芽孢桿菌。通過將芽孢桿菌物種的孢子和L-丙氨酸噴霧干燥來制備GO+芽孢桿菌益生劑。如上所述緊接在噴霧干燥前作為含有0.044克丙氨酸/毫升蒸餾水的溶液將L-丙氨酸引入孢子塊中。如上所述，通過將沒有添加L-丙氨酸的芽孢桿菌物種的孢子噴霧干燥來形成GO-芽孢桿菌益生劑。研究對每個處理組包括八個重復(fù)的籠子，每個籠子八只小雞(每個處理組64只)。評價了以下處理組。處理組2-5感染了巨型艾美球蟲和產(chǎn)氣莢膜梭菌(感染的)。處理組1沒有感染巨型艾美球蟲或產(chǎn)氣莢膜梭菌來用作未受感染的陰性對照。1)無飼料添加劑，無感染(未受感染的陰性對照)2)無飼料添加劑，感染的(感染的陰性對照)3)GO-芽孢桿菌益生劑，2×106cfu/g飼料，感染的4)GO+芽孢桿菌益生劑，2×106cfu/g飼料，感染的5)抗生素桿菌肽，50g/噸飼料，感染的(陽性對照)在第0天開始給雞飼喂處理或未處理的飼料。在第14天時，用巨型艾美球蟲感染接著用產(chǎn)氣莢膜梭菌(壞死性腸炎的致病劑)施加于處理組2-5中的雞。在第28天評價雞的飼料轉(zhuǎn)化率、體重增長、病變評分和死亡百分比。飼料轉(zhuǎn)化計算為從第0天至第28天產(chǎn)生1kg體重需要的食物kg數(shù)的比率。例如，1.6的飼料轉(zhuǎn)化率表示需要1.6kg食物來產(chǎn)生1kg體重。體重增加計算為從第0天至第28天的體重增加。病變評分是基于病變的視覺觀察，0為正常，且3為最嚴(yán)重。GO-和GO+芽孢桿菌益生劑都比受感染的陰性對照(處理組2)降低了死亡百分比。參見表18。與用桿菌肽處理的那些相比，用GO+益生劑處理的小雞中的死亡百分比更低，但差異不是統(tǒng)計學(xué)顯著的。GO+益生劑和抗生素處理組的體重增加呈現(xiàn)出高于感染的陰性對照的顯著增加。這些結(jié)果表明具有GO+益生劑的雞飼料的處理在病原體挑戰(zhàn)過程中與標(biāo)準(zhǔn)抗生素處理相比獲得了相同或更好的結(jié)果。表18.感染巨型艾美球蟲和產(chǎn)氣莢膜梭菌(處理組2-5)的雞中或未感染的陰性對照(處理組1)中的飼料轉(zhuǎn)化率、體重增加、病變評分和死亡百分比。處理組如上所述。數(shù)值后的字母表示處理組間的統(tǒng)計學(xué)顯著差異。飼料轉(zhuǎn)化率體重增加(kg)病變評分(0-3)死亡率(％)處理組第0-28天第0-28天11.600bc0.805a0.0c0.0b21.913a0.696c0.8a14.1a31.707b0.726bc0.2c3.1b41.691bc0.755ab0.5b1.6b51.585c0.811a0.5b3.1b實施例18：益生劑對感染弧菌屬的種的蛤蜊的作用通過分離和定量孵化所的細(xì)菌載量，評價了正經(jīng)歷幼蟲死亡事件的佛羅里達(dá)雙殼類孵化所的死亡的誘因。確定弧菌物種占到水源中100％的好氧菌計數(shù)(4×104cfu/ml)，和孵化所中大約50％的好氧菌計數(shù)(2×104cfu/ml)。在這個大的弧菌群中，發(fā)現(xiàn)了在不同培養(yǎng)基上兩種主要的菌落形態(tài)并送去鑒定。觀察到的兩種主要的弧菌菌株為Vibriochagasii和溶珊瑚弧菌，其中后者顯示為對雙殼類是劇毒的。地衣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和短小芽孢桿菌的單個菌株對弧菌生長的排除區(qū)的測量和生物膜形成的限制表明，這些芽孢桿菌菌株發(fā)現(xiàn)具有中等至良好的對抗大部分測試的弧菌菌株的活性。這些結(jié)果表明芽孢桿菌菌株在生物膜形成中勝過從孵化所分離的弧菌物種的菌株，并且具有對弧菌生物膜的直接作用。用含有等比例的兩個地衣芽孢桿菌菌株、一個枯草芽孢桿菌菌株和一個短小芽孢桿菌菌株的4菌株益生菌共混物處理感染弧菌菌株的蛤蜊幼蟲槽。如上所述，作為GO+(具有L-丙氨酸)或GO-(不具有L-丙氨酸)，通過噴霧干燥來配制芽孢桿菌菌株。通過將噴霧干燥的制劑懸浮于1升水中且然后在每日換水后以5×105cfu/ml的劑量將懸浮液立即加入槽中將益生劑加入槽中。在處理階段開始時和每日處理開始后12天，將蛤蜊幼蟲在不同尺寸的篩網(wǎng)過濾器(150、200、250或300μm)上過篩。在第12天，相對于起始的幼蟲數(shù)，記錄每個篩網(wǎng)尺寸上發(fā)現(xiàn)的活蛤蜊幼蟲的數(shù)量。參見表19。在蛤蜊死亡事件的過程中，未處理的槽只具有～10％存活率，而GO-處理的槽具有～20％存活率，和GO+處理的槽具有～40％存活率。另外，益生劑處理提高了生長速率(在較大的篩網(wǎng)上收集到更多幼蟲)，GO+處理的槽生長最快。表19.用益生劑處理12天后各種不同大小的蛤蜊幼蟲的百分存活率。蛤蜊幼蟲槽感染了弧菌菌株。實施例19：在含有膽汁鹽的雞飼料提取物中在評價地衣芽孢桿菌制劑的密閉系統(tǒng)中測定生物需氧量(BOD)在補(bǔ)充了膽汁鹽的雞飼料提取物中測量地衣芽孢桿菌的細(xì)菌需氧量(BOD)，從而測定細(xì)菌在膽汁鹽脅迫下生長的能力。將雞飼料作為能源結(jié)合4mM膽汁鹽(60％牛黃脫氧膽酸鹽、30％甘氨脫氧膽酸鹽，10％脫氧膽酸鹽)使用。培養(yǎng)基：補(bǔ)充了膽汁鹽的雞飼料提取物的制備將42.44g雞飼料(ChickStarterGrower)稱重至燒杯中并且隨后使用咖啡研磨機(jī)磨成粉。用溫的自來水使體積達(dá)到總共1升，并且將混合物在攪拌板上混合60分鐘。將100ml溶液分配至250mL有擋板的搖瓶中，包括2個“預(yù)備測試燒瓶”，并高壓滅菌。膽汁鹽原液(BSSS)：1.1.8g牛黃脫氧膽酸鹽2.0.9g甘氨脫氧膽酸鹽3.0.3g脫氧膽酸鹽。將每種組分單獨(dú)地與少量自來水混合直至剛好溶解，并且隨后將溶液混合在一起，使體積為30mL，并且無菌過濾。制備0.1N的HCl溶液并加入上述預(yù)備測試燒瓶中以將pH降至2.25。記錄用于降低pH的HCl的體積。恰好90分鐘后，記錄pH(在這個時間過程中pH升高)。將1.6mlBSSS加入每個燒瓶中。15分鐘后，使用1.0MNaOH將pH提高至7.5。記錄所用的NaOH的體積。15分鐘后，記錄pH(在這個時間跨度中，pH下降)。將結(jié)果平均，并且將該量用于處理剩余的含有雞飼料提取物的燒瓶。孢子懸浮液：將地衣芽孢桿菌菌株ENV100的孢子粉制成GO+(如上所述，與L-丙氨酸一起噴霧干燥)或GO-(如上所述，在沒有L-丙氨酸的情況下噴霧干燥)制劑。在無菌混合器罐內(nèi)于具有0.1％OctosolSLS(FT-SLS-246DRUM，TiarcoChemical，Dalton，GA)的無菌水中將制劑懸浮。通過以5秒間隔共混總共至少15秒或直至看到孢子完全懸浮來懸浮孢子，接著在無菌水中連續(xù)稀釋。進(jìn)行這一操作使得BOD瓶中的終濃度為5×107cfu/ml或5×103cfu/ml。BOD試驗：根據(jù)制造商的說明，在BODTRAKII儀器(Hach2952450)上測量生物需氧量(BOD)。將2ml上述制備的含有膽汁鹽的雞飼料提取物加入BOD瓶中的98ml水中，高壓滅菌，并使其冷卻至室溫。接種前，將BODTRAKII儀器和瓶子在37℃下預(yù)溫育。如上所述對瓶子接種，并且根據(jù)制造商的說明立即封閉，并且在37℃下孵育。完成分析后，從儀器下載數(shù)據(jù)，并且將大約10μl培養(yǎng)物劃線至PCA平板以測試純度。如表20中所示，地衣芽孢桿菌孢子的GO+制劑使得能夠在膽汁鹽脅迫條件下生長并且與對照處理相比導(dǎo)致提高的代謝(如通過生物需氧量測量的)。這些數(shù)據(jù)證明了GO+制劑提高了膽汁脅迫條件下的地衣芽孢桿菌生長。表20.含有雞飼料提取物和膽汁鹽的地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物中表示為氧利用量(mg/L)的生物需氧量(BOD)測量當(dāng)前第1頁1 2 3