一種提高白僵蠶得率的孢子懸液及其應(yīng)用的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種提高白僵蠶得率的孢子懸液及其應(yīng)用，一種提高白僵蠶得率的孢子懸液，其原料組分包括：白僵菌孢子粉、聚山梨酯-80、蔗糖、蛋白胨、輔料物質(zhì)、無(wú)菌水，所述孢子懸液中各成分的占比為：白僵菌孢子1×106-5×106個(gè)/mL、聚山梨酯-800.2份（質(zhì)量百分比）、蔗糖1-3份、蛋白胨0.4-0.6份、輔料物質(zhì)0.05份、其余為無(wú)菌水，所述輔料物質(zhì)可以是硫酸鎂、氯霉素、硫酸鏈霉素。公開(kāi)了一種能夠顯著提高白僵蠶得率的白僵菌孢子懸液，提供一種優(yōu)化的白僵菌懸液濃度，同時(shí)提高了白僵菌懸液的粘附性和活力，提高其發(fā)芽率，對(duì)于白僵蠶的生產(chǎn)在產(chǎn)量和質(zhì)量方面都有著顯著提升。
【專(zhuān)利說(shuō)明】—種提局白僵奮得率的孢子懸液及其應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于中藥生產(chǎn)【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種提高白僵蠶得率的孢子懸液及其應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002]僵蠶是一種優(yōu)良的中藥材，具有息風(fēng)止痙、祛風(fēng)止痛、化痰散結(jié)的功效，在中成藥和中藥方劑中應(yīng)用廣泛。據(jù)統(tǒng)計(jì)，在513種人用成藥中有49種含白僵蠶，64種兒科成藥中含白僵蠶的有29種。隨著僵蠶藥理成分和功能研究的深入，發(fā)現(xiàn)僵蠶水提物或醇提物在美白祛斑、抗驚厥、抗凝、降糖降脂等方面也表現(xiàn)出良好的功效。近年來(lái)，僵蠶相關(guān)產(chǎn)品的研發(fā)也開(kāi)始起步，進(jìn)一步拓展了僵蠶在藥食領(lǐng)域的應(yīng)用，最新資料表明，僵蠶國(guó)內(nèi)年需求量已達(dá)2500-3000噸，僵蠶需求呈逐年增加的趨勢(shì)，僵蠶的生產(chǎn)和加工具有廣闊的市場(chǎng)前景。
[0003]僵蠶人工生產(chǎn)的步驟是:家蠶飼養(yǎng)至五齡起蠶，體表噴灑白僵菌孢子懸液，待病原充分粘附后開(kāi)始喂食桑葉，一般在5-6天內(nèi)家蠶出現(xiàn)大批量死亡，死蠶進(jìn)一步僵化，最后曬干或烘干后獲得僵蠶。
[0004]一般的家蠶品種在五齡期食桑七日即成熟蠶，第7天開(kāi)始吐絲結(jié)繭。因此，家蠶若在第6天還不發(fā)病，一般都會(huì)在結(jié)繭過(guò)程中死亡，或者成為僵蛹，不僅降低了僵蠶得率，還增加了僵蠶收獲的難度。白僵菌在保存過(guò)程中孢子活力出現(xiàn)一定程度地下降，往往造成僵蠶延遲發(fā)病，影響到僵蠶的得率和產(chǎn)量。另一方面，家蠶發(fā)病太早則會(huì)影響僵蠶收獲的質(zhì)量，導(dǎo)致收獲的白僵蠶較小，因?yàn)榧倚Q在五齡第3-5天為盛食期，所以，提高家蠶在第5、6天的發(fā)病率對(duì)于提高白僵蠶的質(zhì)量有很大影響，這就對(duì)白僵菌的粘附性、感染率、單位濃度和單位施用量等都有較大的要求。
[0005]申請(qǐng)?zhí)枮椤癈N201010536189.8”的中國(guó)專(zhuān)利中，公開(kāi)了名稱(chēng)為“一種用添加營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)提高球孢白僵菌孢子萌發(fā)率的方法”的發(fā)明專(zhuān)利，該發(fā)明以球孢白僵菌(Beauveriabassiana)(保藏編號(hào)為CCTCC No:M209238)為發(fā)酵菌株，將其產(chǎn)生的孢子配制成一定濃度的孢子懸浮液，在該孢子懸浮液中添加最終濃度為0.5%-10%的麩皮浸出液，在適當(dāng)?shù)臈l件下(250mL的三角瓶，裝液量50mL;25°C、180rpm搖床12h)進(jìn)行培養(yǎng)。該添加麩皮浸出液的方式能夠提升白僵菌孢子的萌芽率，然而該方式只能單方面的提高白僵菌孢子的萌芽率，對(duì)于白僵菌孢子的活力的保持效果和粘附性提升不明顯，且每次使用都需重新發(fā)酵，時(shí)間跨度大。
[0006]申請(qǐng)?zhí)枮椤癈N201110025267.2”的中國(guó)專(zhuān)利中，公開(kāi)了名稱(chēng)為“一種球孢白僵菌殺蟲(chóng)劑懸乳劑及其制備方法”的發(fā)明專(zhuān)利，其特征在于按重量份數(shù)由以下成分組成:球孢白僵菌孢子粉:20-80份；乳化分散劑:10-60份；增稠劑:10-30份；懸浮穩(wěn)定劑:10-30份；展著劑:10-30份；糖:10-60份；蛋白胨:1-10份；所述的球孢白僵菌孢子粉的白僵菌含孢量為500億/克。該球孢白僵菌殺蟲(chóng)劑中球孢白僵菌孢子粉的配比較高，主要用做殺蟲(chóng)劑，不能控制家蠶的發(fā)病時(shí)間，不適合作為白僵蠶的生產(chǎn)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]為了解決上述問(wèn)題，本發(fā)明公開(kāi)了一種提高白僵蠶得率的孢子懸液及其應(yīng)用，以解決現(xiàn)有的白僵蠶在生產(chǎn)中出現(xiàn)的白僵蠶的產(chǎn)量和質(zhì)量的問(wèn)題，提供了一種能夠顯著提高白僵蠶得率的白僵菌孢子懸液，對(duì)白僵菌懸液的濃度進(jìn)行了優(yōu)化，同時(shí)提高了白僵菌懸液的粘附性和活力，提高其發(fā)芽率，對(duì)于白僵蠶的生產(chǎn)在產(chǎn)量和質(zhì)量方面都有著顯著提升。
[0008]一種提高白僵蠶得率的孢子懸液，其原料組分包括:白僵菌孢子粉、聚山梨酯-80、蔗糖、蛋白胨、輔料物質(zhì)、無(wú)菌水，所述孢子懸液中各成分的占比為:白僵菌孢子1\106-5父106個(gè)/1^、聚山梨酯-80 0.2份(質(zhì)量百分比)、蔗糖1-3份、蛋白胨0.4-0.6份、輔料物質(zhì)0.05份、其余為無(wú)菌水。
[0009]作為一種優(yōu)選方式，所述輔料物質(zhì)可以是硫酸鎂、氯霉素、硫酸鏈霉素。
[0010]作為一種優(yōu)選方式，其原料及配比包括:白僵菌孢子3 X 16個(gè)/mL、聚山梨酯-80
0.2份(質(zhì)量百分比)、蔗糖2份、蛋白胨0.5份、輔料物質(zhì)I份，其余為無(wú)菌水。
[0011]一種提高白僵蠶得率的孢子懸液的制作方法，包括以下配置步驟:(1)使用聚山梨酯-80、白僵菌孢子粉和無(wú)菌水配制孢子初步懸液，可采用血球計(jì)數(shù)法進(jìn)行濃度確定；
(2)在所述孢子初步懸液中加入蔗糖、蛋白胨及輔料物質(zhì)，混合充分溶解。
[0012]一種提高白僵蠶得率的孢子懸液的接種方法，包括以下步驟:(I)選取某一品種的家蠶進(jìn)行飼養(yǎng)，飼養(yǎng)至第四次蛻皮進(jìn)入五齡起蠶階段(食桑之前)；(2)以權(quán)利要求4的方法配制孢子懸液，將孢子懸液置于噴霧器中；(3)將孢子懸液體噴于家蠶的體表，至家蠶體表全部濕潤(rùn)為止，一小時(shí)后將處理過(guò)的家蠶繼續(xù)進(jìn)行桑葉飼養(yǎng)，控制環(huán)境處于適宜的溫度和濕度；(4)將死亡的家蠶待稍變硬后挑出，進(jìn)行進(jìn)一步充分僵化，然后烘干制成白僵蠶。
[0013]本發(fā)明在白僵菌懸液中加入了蔗糖跟蛋白胨，蔗糖能夠?yàn)榘捉┚咦影l(fā)芽提供碳源和維持滲透壓，蛋白胨主要提供發(fā)芽所需氮源，提高其發(fā)芽率，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)能夠延長(zhǎng)白僵菌在家蠶表面的存活時(shí)間，保持白僵菌孢子的活力，同時(shí)，加入了蔗糖和蛋白胨也提高了白僵菌懸液的粘度，提高其粘附性，使其更加容易粘附在家蠶的體表，提高了其感染效率。
[0014]對(duì)白僵菌孢子懸液的孢子濃度進(jìn)行優(yōu)化和確定，采用了 1父106-5父106個(gè)/1^的菌體濃度，該數(shù)據(jù)是根據(jù)該白僵菌孢子懸液的活力和粘附性進(jìn)行調(diào)整，目的是提高家蠶在第5、6天的發(fā)病率，控制家蠶發(fā)病時(shí)間的一致性，從而提高白僵蠶的得率和質(zhì)量。
[0015]在白僵菌孢子懸液中加入了氯霉素、硫酸鏈霉素等輔料物質(zhì)，其目的是對(duì)細(xì)菌進(jìn)行抑制，防止其它細(xì)菌對(duì)白僵菌孢子感染效果的影響。

【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0016]為了更清楚地說(shuō)明本發(fā)明實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對(duì)實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹，顯而易見(jiàn)地，下面描述中的附圖僅僅是本發(fā)明的一些實(shí)施例，對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來(lái)講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。
[0017]圖1為實(shí)施例的家蠶死亡率實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖。

【具體實(shí)施方式】
[0018]本發(fā)明主要針對(duì)現(xiàn)有的僵蠶生產(chǎn)方法存在發(fā)病延遲、得率低的缺陷，提供一種提高白僵蠶得率的孢子懸浮液，該方法通過(guò)在孢子懸浮液中加入促進(jìn)孢子發(fā)芽的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)來(lái)實(shí)現(xiàn)。將該懸浮液體噴家蠶后，能夠增加孢子在家蠶體表的粘附性，加快孢子的發(fā)芽，提高白僵菌入侵蠶體的成功率。本發(fā)明的方法可操作性強(qiáng)，家蠶發(fā)病整齊，僵蠶質(zhì)量和產(chǎn)量高。
[0019]下面將對(duì)本發(fā)明中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒(méi)有作出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。
[0020]實(shí)施例1:
本實(shí)施例的原料及其配比包括:白僵菌孢子3X106個(gè)/mL、聚山梨酯-80 0.2份(質(zhì)量百分比)、蔗糖2份、蛋白胨0.5份、輔料物質(zhì)0.05份，其余為無(wú)菌水。
[0021]其接種步驟為:(1)選取某一品種的家蠶進(jìn)行飼養(yǎng)，飼養(yǎng)至第四次蛻皮后五齡起蠶階段(食桑之前)，2小時(shí)之后，挑選出來(lái)進(jìn)入后續(xù)處理，該處理組設(shè)置30頭蠶；(2)以上述的方法配置孢子懸液，將孢子懸液置于噴霧器中；(3)將孢子懸液體噴于家蠶的體表，至家蠶體表全部濕潤(rùn)為止，一小時(shí)后將處理過(guò)的家蠶繼續(xù)進(jìn)行桑葉飼養(yǎng)，控制飼養(yǎng)環(huán)境處于適宜的溫度和濕度，7天內(nèi)每天調(diào)查其死亡情況；(4)記錄每天死亡家蠶數(shù)，將死亡的家蠶待稍變硬后挑出，進(jìn)行進(jìn)一步充分僵化，然后烘干制成白僵蠶。
[0022]實(shí)施例2:
本實(shí)施例的原料及其配比包括:白僵菌孢子3X106個(gè)/mL、聚山梨酯-80 0.2份(質(zhì)量百分比)、其余為無(wú)菌水。
[0023]其接種步驟為:(1)選取某一品種的家蠶進(jìn)行飼養(yǎng)，飼養(yǎng)至第四次蛻皮后五齡起蠶階段(食桑之前)，2小時(shí)之后，挑選出來(lái)進(jìn)入后續(xù)處理，該處理組設(shè)置30頭蠶；(2)以上述的方法配置孢子懸液，將孢子懸液置于噴霧器中；(3)將孢子懸液體噴于家蠶的體表，至家蠶體表全部濕潤(rùn)為止，一小時(shí)后將處理過(guò)的家蠶繼續(xù)進(jìn)行桑葉飼養(yǎng)，控制飼養(yǎng)環(huán)境處于適宜的溫度和濕度，7天內(nèi)每天調(diào)查其死亡情況；(4)記錄每天死亡家蠶數(shù)，將死亡的家蠶待稍變硬后挑出，進(jìn)行進(jìn)一步充分僵化，然后烘干制成白僵蠶。
[0024]實(shí)施例1和2的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖1所示。
[0025]在進(jìn)行不同實(shí)施例的實(shí)驗(yàn)接種過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)本發(fā)明提供的白僵菌孢子接種液相對(duì)于常用的白僵菌孢子接種液在粘附性方面具有更加優(yōu)異的效果，與五齡蠶的體表有較高的親和力，降低了生產(chǎn)人員的操作難度，也提高了白僵菌孢子的感染成功率。
[0026]由圖1可以看出，本發(fā)明公布的白僵菌孢子接種液組能夠加快家蠶發(fā)病死亡時(shí)間。對(duì)照組第5天死亡率為4.17%，而試驗(yàn)組死亡率達(dá)到29.9%，相應(yīng)的第6天的死亡率試驗(yàn)組也有明顯的提升，此外，到家蠶上蔟前為止，對(duì)照組僵化率為70.1%，新接種液組僵化率達(dá)到83.3%。因此，用本接種方法可以明顯提高家蠶發(fā)病率和僵蠶得率，尤其是第5-7天的發(fā)病率，此時(shí)死亡的家蠶所制得的白僵蠶的質(zhì)量是最高的，增加僵蠶質(zhì)量和收益。
[0027]以上內(nèi)容是結(jié)合具體的優(yōu)選實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明所作的進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明，不能認(rèn)定本發(fā)明的具體實(shí)施只局限于這些說(shuō)明。對(duì)于本發(fā)明所屬【技術(shù)領(lǐng)域】的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干簡(jiǎn)單推演或替換，都應(yīng)當(dāng)視為屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【權(quán)利要求】
1.一種提高白僵蠶得率的孢子懸液，其特征在于，其原料組分包括:白僵菌孢子粉、聚山梨酯-80、蔗糖、蛋白胨、輔料物質(zhì)、無(wú)菌水，所述孢子懸液中各成分的占比為:白僵菌孢子1\106-5父106個(gè)/1^、聚山梨酯-80 0.2份(質(zhì)量百分比)、蔗糖1_3份、蛋白胨0.4-0.6份、輔料物質(zhì)0.05份、其余為無(wú)菌水。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提高白僵蠶得率的孢子懸液，其特征在于，所述輔料物質(zhì)可以是硫酸鎂、氯霉素、硫酸鏈霉素。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提高白僵蠶得率的孢子懸液，其特征在于，其原料及配比包括:白僵菌孢子3X 16個(gè)/mL、聚山梨酯-80 0.2份(質(zhì)量百分比)、蔗糖2份、蛋白胨0.5份、輔料物質(zhì)0.05份，其余為無(wú)菌水。
4.一種提高白僵蠶得率的孢子懸液的制作方法，其特征在于，包括以下配置步驟:(1)使用聚山梨酯-80、白僵菌孢子粉和無(wú)菌水配制孢子初步懸液，可采用血球計(jì)數(shù)法進(jìn)行濃度確定；(2)在所述孢子初步懸液中加入蔗糖、蛋白胨及輔料物質(zhì)，混合充分溶解。
5.一種提高白僵蠶得率的孢子懸液的接種方法，其特征在于，包括以下步驟:(1)選取某一品種的家蠶進(jìn)行飼養(yǎng)，飼養(yǎng)至第四次蛻皮進(jìn)入五齡起蠶階段(食桑之前)；(2)以權(quán)利要求4的方法配制孢子懸液，將孢子懸液置于噴霧器中；(3)將孢子懸液體噴于家蠶的體表，至家蠶體表全部濕潤(rùn)為止，一小時(shí)后將處理過(guò)的家蠶繼續(xù)進(jìn)行桑葉飼養(yǎng)，控制環(huán)境處于適宜的溫度和濕度；(4)將死亡的家蠶待稍變硬后挑出，進(jìn)行進(jìn)一步充分僵化，然后烘干制成白僵蠶。
【文檔編號(hào)】A01K67/04GK104430212SQ201410788630
【公開(kāi)日】2015年3月25日 申請(qǐng)日期:2014年12月17日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月17日
【發(fā)明者】邢東旭, 楊瓊, 李麗, 羅國(guó)慶, 肖陽(yáng), 李慶榮, 葉明強(qiáng), 劉新濤 申請(qǐng)人:廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶業(yè)與農(nóng)產(chǎn)品加工研究所