綠色北蟲草產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)方法
【專利摘要】一種綠色北蟲草產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)方法，屬于食用菌領域的蟲草栽培技術，包括：（1）北蟲草的菌種制作方法：（2）北蟲草產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)方法；（3）接種；（4）培養(yǎng)室管理；（5）采收分級與包裝；（6）烘干與保存。本發(fā)明富含硒元素，是一種周年綠色栽培北蟲草的產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)方法，一年四季均可栽培。本發(fā)明生產(chǎn)蟲草簡便、不易污染、投資少、見效快，以小麥、大米等為主要原料，用可以重復利用的塑料盆立體周年栽培綠色北蟲草。本發(fā)明節(jié)省土地資源，大棚、樓房、廠房均可生產(chǎn)北蟲草的創(chuàng)新技術?？梢源竺娣e周年綠色栽培，產(chǎn)業(yè)化程度高，富含硒元素、效益高。
【專利說明】綠色北蟲草產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)方法
【技術領域】
[0001]本專利屬于食用菌領域的蟲草栽培技術，尤其涉及一種綠色北蟲草產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)方法。
【背景技術】
[0002]北蟲草是北冬蟲草的簡稱，又稱北冬蟲夏草，也叫蛹蟲草或蛹草，俗名不老草，是蟲、菌結(jié)合的藥用真菌，現(xiàn)在可以純糧基栽培，是現(xiàn)代珍稀中草藥，北冬蟲夏草屬于真菌門，子囊菌綱，肉座菌目，麥角菌科，蟲草屬。它主要生長在我國的北方地區(qū)。
[0003]北蟲草是一種營養(yǎng)價值很高的“補藥”。北蟲草不僅含有豐富的蛋白質(zhì)和氨基酸，而且含有30多種人體所需的微量元素，是上等的滋補佳品。據(jù)了解，在蟲草屬的6 O多個種中，惟有冬蟲夏草和北蟲草的醫(yī)療價值最大、經(jīng)濟價值最高，所以在冬蟲夏草野生資源大幅度減少、且無法進行商品化人工栽培的情況下，北蟲草便成了國內(nèi)外醫(yī)藥界、保健食品界、生物界等各領域的寵兒。但北蟲草的生長需要嚴格的溫度、濕度和光照控制，要求溫度保持在15°C—20°C，還要有專門的設施設備。如果一點生物知識都沒有，也沒有懂技術的人做技術后臺、技術指導，普通老百姓很難栽培成功。需要強調(diào)指出的是，北蟲草萬不可隨便引種，無限擴繁。
[0004]我國北蟲草出口數(shù)量近一段時間比較穩(wěn)定，主要出口目的地為中國香港、日本和韓國。國際上北蟲草的需求量比較穩(wěn)定，每年均有10%左右的增長，但總量由于產(chǎn)品供給的局限性比較少。
[0005]國內(nèi)外許多專家對北蟲草營養(yǎng)化學成份，藥理及臨床效果的研究，都基本上和中華蟲草相同，主要有保肺益腎，止血化痰，調(diào)節(jié)身體機能，主治肺結(jié)核咳血，陽痿遺精，腰膝酸痛，美容護膚，神精衰弱，糖尿`病，升白血球，防癌、抗癌，對化療作用也很大。人工栽培的北蟲草藥用功效與野生北蟲草的功效相差無幾，有些表現(xiàn)還好于野生北蟲草。人工栽培北蟲草經(jīng)濟效益明顯，一年可種4次，不僅大大減少了栽培時間，種植戶也可取得不少收益。
[0006]隨著社會在發(fā)展，人們的保健意識也在加強，所以北蟲草的生產(chǎn)有很大的發(fā)展前景。從功能性食品保健飲料，北蟲草占有一席之地，如菌皮干，菌并等開發(fā)蟲草飲料，一定能制造出不可估計的經(jīng)濟效益，社會效益，由此可見，人工北蟲草據(jù)用很高的食用價值和藥用價值，是當代新開發(fā)的功能性儀器和飲料的資源及藥用資源。
[0007]中國專利號為ZL200710166278.6、申請日為 2007.11.09，公告日為 2008.05.07、
發(fā)明名稱為“小麥栽培北蟲草的方法”的專利公開了一種小麥栽培北蟲草的方法，以脫皮的麥粒、蠶種粉和營養(yǎng)液為罐頭瓶栽培的培養(yǎng)基。
[0008]中國申請?zhí)枮?3112668.5、申請日為2003.01.14，公告日為2003.06.25、發(fā)明名
稱為“一種工廠化開放式培養(yǎng)北蟲草等食用菌的方法”的專利，闡明了本發(fā)明屬于涉及農(nóng)業(yè)【技術領域】，特別是北蟲草及珍稀珍貴食用菌的工廠化開放式培養(yǎng)。改發(fā)明的特征是:用帶有通氣窗和生長空間的塑料箱培養(yǎng)，在菌體表面噴灑無毒無害的成膜劑，形成的人工外殼，保護北蟲草等食用菌菌絲體，防止水分蒸發(fā)、隔離外界微生物的危害；從而，進入真正的開放式培養(yǎng)。
[0009]中國申請?zhí)?00410050381.0、申請日為2004.09.05，公告日為2005.03.02、發(fā)明名稱為“北蟲草培養(yǎng)基”的專利，涉及了一種北蟲草培養(yǎng)基，其組分配方由以下原料制成(按重量計):大米30，玉米1，土豆10，蠶蛹5，胡蘿卜1，維生素B10.01，維生素B20.01，礦
泉水50。依據(jù)本發(fā)明制成的培養(yǎng)基生產(chǎn)出的北蟲草，其特點是:生長周期短、質(zhì)量好、產(chǎn)量高、成活率達到98%。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0010]本發(fā)明的目的是提供一種簡便、不易污染、投資少、見效快，以小麥、大米等為主要原料，用塑料盆立體周年綠色栽培北蟲草的新技術。
[0011]為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術方案為:
一種綠色北蟲草產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)方法，其特征是包括以下步驟:
(I)北蟲草的菌種制作方法:
每次使用首代液體母種應用生產(chǎn)，保持北蟲草菌種遺傳性狀的穩(wěn)定性，確保出草和產(chǎn)業(yè)化優(yōu)質(zhì)栽培的成功率；
(1.1)菌種的選擇
選用菌絲潔白、適應性強、見光后轉(zhuǎn)色快、出草快、性狀穩(wěn)定的速生高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)菌種；根據(jù)供銷需要，選擇以下任意品種；
(1.1.1)冬蟲夏草
子座形態(tài)特征:子座主莖圓柱型向上，頭部長錐形，有白色被生孢子囊體，菌絲萌發(fā)快，轉(zhuǎn)色快，抗雜力強，子座長6~8cm，莖粗I~2mm，生長快且齊整，干燥后子囊頭部仍顯黃白色，產(chǎn)量較蛹蟲草低，草質(zhì)外觀不佳，蟲草素含量高；
(1.1.2)蛹蟲夏草
子座形態(tài)特征:子座主莖橢圓型向上，上部致頂端有許多小凸起的子囊孢子，呈淡桔黃色，菌絲萌發(fā)快，培養(yǎng)基轉(zhuǎn)色橙紅色，相繼發(fā)生乳黃色基點，子座發(fā)生較齊整，莖粗2~5_，子座最長18cm ;麥基子座橙紅色；米基子座桔黃色；
(1.1.3)頭孢蟲草
子座形態(tài)特征:子座圓柱向上，頭部橢圓球狀，被生子囊孢子，菌絲發(fā)育快，轉(zhuǎn)色橙紅色，原基相繼發(fā)生，草長度不整齊，子座莖粗2~3mm，最長可達8cm以上；
(1.2)子座選擇
子座選擇是培養(yǎng)新菌株的關鍵；選擇子座金黃或橙紅，子座生長點頂端大、長勢強壯、整齊的蟲草和菌絲組織最密集，菌絲活力最強的部位；要求:選擇蟲草成熟度在9成以上，子座長度在90~120cm， 子座頂部膨大直徑在3~5mm的高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)蟲草；用滅菌剪刀貼培養(yǎng)基處切斷，子座排列整齊；
(1.3 )子座處理 (1.3.1)子座滅菌
接種室潔凈度為100級,周邊區(qū)1000級；在無囷室內(nèi)，取上述子座用懾子夾住根部放在無菌水中浸洗50~60s，重復浸洗2~3次，然后用75%酒精或用濃度70~80%的氨基酸碘溶液浸洗30~60s滅菌；(1.3.2)子座選擇
滅菌后的子座在距生長點頂端2~4cm部位，用濃度70~80%的氨基酸碘溶液擦拭消毒的剪刀切取備用；
(1.4)菌種培養(yǎng)
(1.4.1)配制液體培養(yǎng)基配制
用去皮馬鈴薯500g、小麥100gj 1000ml，100~120°C煮熟25~30min，涼后用3~5層紗布或雙層濾紙過濾出溶液，再加葡萄糖干粉20~30g、酵母膏2~3g、天門冬酰胺I~2g、磷酸二氫鉀1.5~2g、硫酸鎂0.6~lg、生長素5~10ml、維生素BI25~30g,加蒸懼水調(diào)至1000ml溶液，再加入亞硒酸鈉溶液，使亞硒酸鈉濃度達到60mg/kg ;溶液pH值調(diào)至6~7.0 ;裝入10~500ml的試管或三角燒瓶中，制成液體培養(yǎng)基；試管或三角燒瓶用醫(yī)藥棉封口或耐高溫塑膜封口；
(1.4.2)液體培養(yǎng)基滅菌 用常溫滅種方法或高壓蒸汽滅菌均可；
(1.4.2.1)常溫滅菌:把盛有液體培養(yǎng)基的試管或三角燒瓶放在蒸鍋內(nèi)，裝滿后把蒸鍋蓋緊，溫度升到103°C、壓力達到0.05~0.08 MPa，保持6 — 8hr，然后降溫、壓力表歸零移入接菌室接菌應用；
(1.4.2.2)高壓蒸汽滅菌:
具體條件如下:滅菌溫度:125°C ;有效滅菌時間不低于3.5hr ;滅菌壓力:0.135MPa ；真空度:第一次真空度:-0.011~-0.055 MPa, 15min，抽去冷空氣；第二次真空度:-0.055MPa ;真空度:-0.055 Mpa保持`穩(wěn)定；滅菌時間:5~7.5hr ;燜置時間:滅菌結(jié)束后燜置30min,利于原料糖化、滅菌和營養(yǎng)物質(zhì)的轉(zhuǎn)化；
(1.4.3 )液體培養(yǎng)基接種
(1.4.3.1)接種室要求:潔凈度為100級，周邊區(qū)1000級；
特別潔凈接種室技術指標:接種室:0.2個/30min.Φ90皿(5個/m3);周邊區(qū):0.4個/30min.Φ90皿(10個/m3);表面最大染菌密度:5個/cm2 ;空氣潔凈度級別:接種室100級，周邊區(qū)1000級；物流:①袋料一清潔通道一接種室；接種后反向返回；②無菌物品、敷料、滅菌的儀器及器材、菌種、一次性無菌物品一清潔通道一接種室；接種后反向返回；接種人員:清潔區(qū)換鞋一一更衣室，脫去外面工作服一二更換接種衣一緩沖間或直吹室一潔凈走廊一刷手間一潔凈接種室；接種后反向返回；)其他指標和監(jiān)測項目:
①溫度:18~26°C；
②相對濕度:45~65%；
③照度.)3001x ；
④沉降菌(個/O90mm(X5h): ^ 10 ；
⑤靜壓差:潔凈區(qū)與非潔凈區(qū)之間>10Pa；
潔凈級別不同房間之間>5Pa ；
⑥塵埃粒子數(shù)(個/立方米≤5μ m O < 20000 ( 60000 ；
(1.4.3.2)選擇子座:
步驟“1.3.2子座選擇”的子座用無菌水擦刷表層并沖洗，撕開子座，用解剖刀從子座內(nèi)心切取麥粒大組織塊，每個試管放置I~5個滅菌子座組織塊，三角燒瓶放置I~50個滅菌子座組織塊；要求:每IOml液體培養(yǎng)基放置I個滅菌子座組織塊；然后用醫(yī)用藥棉封Π ；
(1.4.4)液體菌種培養(yǎng)
盛有液體培養(yǎng)基的試管或三角燒瓶，在下列條件下培養(yǎng)7~10d，形成菌球，生產(chǎn)出高濃度的北蟲草菌種懸濁液:
溫度:20~28°C ;濕度:65~70% ;光照:黑暗；PH值:6.0~7.0 ;時間:7~IOd ;條件:搖床培養(yǎng)；
優(yōu)質(zhì)北蟲草菌種懸濁液目測標準:純菌球多、菌液清晰；
劣質(zhì)菌種懸濁液目測標準:純菌球少、菌液混濁或凈止時間長，菌膜少的菌種應淘汰； (1.5)液體菌種保存
有菌種保存箱或用梭氏法保存兩種方法，任選一種方法保存；
(1.5.1)用菌種保存箱保存 用菌種保存箱保存；要求:溫度10°C ;保存天數(shù):7-15d ;液體菌種隨時制作隨時用，防止退化、活力減弱；
(1.5.2)用梭氏法保存
梭氏法保存:將容有I滴北蟲草菌種懸液的小管，置于盛有氫氧化鉀或五氧化二磷吸水劑的大試管中，用真空泵抽至1.3帕時，將大試管密封保存；這是為減少細胞死亡率而采取的一種不經(jīng)凍結(jié)、緩慢脫水的干燥保藏法，適用于多種細菌、真菌；
要求:溫度10°C ;保存天數(shù):7~15d ;液體菌種隨時制作隨時用，防止退化、活力減弱；
(2)北蟲草產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)方法
(2.1)培養(yǎng)基制作
(2.1.1)養(yǎng)菌室消毒滅菌
首先對培植北蟲草的室內(nèi)進行嚴格消毒處理，可使用煙霧彈、過氧乙酸等消毒劑(粉或液)空氣消毒滅菌、地面用濃度10%高錳酸鉀擦洗干凈，進行封閉2~4hr備用；
(2.1.2)配置營養(yǎng)液 營養(yǎng)液配方按重量百分比:
磷酸二氫鉀:20~40g ;維生素B1、B2:各20~30g ;食用葡萄糖粉:30~50g ;加蒸餾水全部溶解，并調(diào)配到1000ml，再加入亞硒酸鈉溶液，使亞硒酸鈉濃度達到60mg/kg ； PH值:清水加入碳酸氫鈉，調(diào)制PH7.5~8 ;
(2.1.3)塑料盆培養(yǎng)基制作
(2.1.3.1)配料處理；200L水加入4ml慶大霉素，將小麥、碎玉米、大米浸泡4~5hr，撈出雜質(zhì)，淋干配料水分，10斤小麥加入2斤大米拌均備用；
(2.1.3.1)配方配料；把小麥、大米、碎玉米按比例混合均勻或者單一小麥灌裝到白色聚乙烯塑料盆中，灌裝深度1.5~2cm，加營養(yǎng)液后覆蓋耐高溫塑料薄膜，再用耐高溫皮筋扎緊扎實等待高溫滅菌，制作成塑料盆培養(yǎng)基；或不覆蓋高溫塑料薄膜，制作成塑料盆培養(yǎng)基;
配料如下按重量百分比:
小麥:1000g ;玉米:100~200g，玉米破碎；大米:100~200g ;營養(yǎng)液:加入營養(yǎng)液與小麥的比例:0.5~2ml:1~5g,以配料全吸收無液體流動為最佳；白色聚乙烯塑料盆規(guī)格:長X寬X高=40~100X40~60X 10~15cm;
(2.2 )滅菌
用常溫滅種方法或高壓蒸汽滅菌，兩種方法任選一種；
(2.2.1)常溫滅菌
把塑料盆培養(yǎng)基平放在蒸鍋內(nèi)，主要把小麥等料搖平至全部覆蓋塑料盆底部并均勻，裝滿后把蒸鍋蓋緊，溫度升到103°C、壓力達到0.05~0.08 MPa，保持6 — 8hr，然后降溫、壓力表歸零移入接菌室接菌應用；
(2.2.2)高壓蒸汽滅菌 具體條件如下:
滅菌溫度:125°C ;有效滅菌時間不低于3.5hr ;滅菌壓力:0.135MPa ;真空度:第一次真空度:-0.011~-0.055 MPa, 15min，抽去冷空氣；第二次真空度:-0.055 MPa ;真空度:-0.055 Mpa保持穩(wěn)定；滅菌時間:5~7.5hr ;燜置時間:滅菌結(jié)束后燜置30min，利于原料糖化、滅菌和營養(yǎng)物質(zhì)的轉(zhuǎn)化；
(3)接種
用常規(guī)接種或高潔凈度接種室接種方法，任選一種；
(3.1)常規(guī)接種
(3.1.1)覆蓋塑料薄膜的培養(yǎng)基接種
接種前要把接種室進行全方位消毒處理一使用煙霧彈、過氧乙酸等消毒劑(粉或液)、地面用高錳酸鉀擦洗干凈，進行封閉2~4hr滅菌；工作人員的服裝也在消毒室進行消毒，人員進入必須換上紫外線消毒過的服裝；把蒸過的盆放在空氣凈化臺上進行接種；用接菌機微細針頭刺破塑料盆上的塑料膜，向里面培養(yǎng)基均勻噴灑液體菌種，把培養(yǎng)基全部覆蓋均勻，靜置3~4hr，移到培養(yǎng)室上架；
(3.1.2)不覆蓋塑料薄膜的培養(yǎng)基接種 不覆蓋塑料薄膜的塑料盆培養(yǎng)基，用用接菌機均勻噴灑液體菌種，然后在菌體表面用接種槍噴灑成膜劑；成膜劑配方質(zhì)量百分比:
殼聚糖:固體粉末CS-90粉或殼聚糖溶液CS-90，其中殼聚糖質(zhì)量百分比含量2%，醋酸質(zhì)量百分比含量為2%:2.5%以下；
乳化劑:農(nóng)浮600號1.0~5.0% ;
分散展著劑:分散展著劑0.5~5.0% ; pH值調(diào)節(jié)劑:0.1~5.0% ;
上述物質(zhì)加蒸餾水或礦泉水按比例配成15000ml溶液；
(3.2)高潔凈度接種室接種 (3.2.1)接種室條件
接菌室，具備封閉性好，有通排過濾凈化空氣裝置，設有紫外線燈滅菌和煙霧，氣霧化學間替性滅菌措施，接菌工具有火焰消毒，酒精和滅菌劑消毒，后并由無菌水沖洗，確保不帶雜菌的條件，接種室為100級潔凈度；
滅菌后的盛料塑料盆在接種室接種，接菌后靜置3~4hr，移到培養(yǎng)室上架；
3.2.2液體菌種處理
對液體菌種嚴格審查無雜菌后，對原液體菌的菌球應用攪拌器打碎菌球，否則接菌點少并有堵塞接種槍槍孔的現(xiàn)像；100~200ml原液體菌種加蒸餾水兌至1000ml液體菌種； (3.2.3)接種
用75%酒精棉球擦抹接種槍針頭和塑料盆覆蓋的塑料膜針眼部位，插入針頭，射2~3次，形成盆內(nèi)菌種全覆蓋，植入菌種后培養(yǎng)基全吸收菌液為最佳，上架躺放時不流液體于瓶壁底位部；
(4)培養(yǎng)室管理 (4.1 )養(yǎng)菌
(4.1.1)塑料盆培養(yǎng)基擺放
接種后的塑料盆培養(yǎng)基平放在消毒滅菌后的養(yǎng)菌室內(nèi)，整齊的平方塑料盆培養(yǎng)基； 第一種方法碼垛盆，以塑料盆間空碼垛:
第一層:塑料盆培養(yǎng)基在縱、橫方向上彼此留有稍小于塑料盆寬度的間隙；
第二層:塑料盆培養(yǎng)基放在第一層塑料盆培養(yǎng)基的上方間隙處；
第三層:塑料盆培養(yǎng)基放在第二層塑料盆培養(yǎng)基的上方間隙處；以此類推，可以放置10~20層的高度，各層間呈“品”字形排列；
透明的塑料盆通過這種碼垛盆方法，使得各層的塑料盆在有光線的條件下得到的散射光足以滿足生長需要；
或第二種方法架體結(jié)構(gòu):
塑料盆培養(yǎng)基放置在金屬層架上，每層架高度30~50cm、寬度60~80cm、長度任意； 擺放塑料盆培養(yǎng)基的四周留有80~150cm寬的工作道；
(4.1.2 )養(yǎng)菌出草
塑料盆培養(yǎng)基擺放完畢后，養(yǎng)菌室內(nèi)靜置養(yǎng)菌；
(4.1.2.1)菌絲培育；條件是:
室內(nèi)溫度:15~20°C，架體上中下設溫度表檢查，并做好記錄；室內(nèi)濕度:75~85%;室內(nèi)光照:黑暗；養(yǎng)菌時間:3~4d ;
(4.1.2.2 )子座培育 第5天給光,條件是:
室內(nèi)溫度:18~23°C ;室內(nèi)濕度:65~70% ;保持濕度是滿足菌絲體的水分供應；采收前10~15d降低空氣濕度至50~65%,防止成熟過快導致菌株死亡；
光照強度:弱光，200~5001ux或每隔2~5m，放置一個3~5W的LED燈照明；基內(nèi)菌絲形成接菌部位幅射狀態(tài)時，夜間全時給光，白日需外入散射光線，直至采收期；
培植時間:30~45d ;在8~IOd后菌絲由白轉(zhuǎn)黃或橙紅色時，繼續(xù)培植，不斷生長；氧氣:滿足菌絲體的氧氣供應；觀察，當菌絲輻射外圍生長時，用釘板刺出封閉膜孔道，放出二氧化碳，輸入新鮮空氣，促進菌絲生長過程轉(zhuǎn)色性縵延生長；
(4.1.2.3)注意事項
濕度控制:菌絲與子座生長發(fā)育，都需要水分，濕度大容易行成氣生菌絲，影響子座發(fā)生率和轉(zhuǎn)色慢的現(xiàn)象；濕度小，則影響子座生長的產(chǎn)量和菌絲體靠水分輸送營養(yǎng)，造成生長發(fā)育不良的現(xiàn)象；控 制培養(yǎng)基PH值:一是配制培養(yǎng)基時pH值8~9高出最佳pH值6~7，在滅菌時PH值降低1~2個，尤其滅菌和降溫的時間延長，造成pH值的下降，這是做好余量準備；(5)采收分級與包裝 (5.1)采收標準
北蟲草植育40~45天時,子座上部至頂端形成凸起孢子囊時,子座長6~15cm、菌株孢頭直徑2~6_時蟲草成熟，進入采收期，要及時收獲，在架體上有封口薄膜的塑料盆揭去封口膜、促進子實體失水和以收縮的培養(yǎng)基繼續(xù)收縮2~4hr，可連草帶培養(yǎng)基一塊拔出處理；
(5.2)采收方法
有封口薄膜的塑料盆去膜，一手握住蟲草、一手握住培養(yǎng)基撕下或一手握住蟲草、一手用剪刀剪下或用機械刀具割下；一茬蟲草收貨后，每盆噴灑營養(yǎng)液10~100ml，可以出二茬蟲草，以此類推，可以出草3茬；
(5.3)北蟲草分級方法 (5.3.1)按照外觀分級
【權利要求】
1.一種綠色北蟲草產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)方法，其特征是包括以下步驟: (I)北蟲草的菌種制作方法: 每次使用首代液體母種應用生產(chǎn)，保持北蟲草菌種遺傳性狀的穩(wěn)定性，確保出草和產(chǎn)業(yè)化優(yōu)質(zhì)栽培的成功率； (1.1)菌種的選擇 選用菌絲潔白、適應性強、見光后轉(zhuǎn)色快、出草快、性狀穩(wěn)定的速生高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)菌種；根據(jù)供銷需要，選擇以下任意品種； (1.1.1)冬蟲夏草 子座形態(tài)特征:子座主莖圓柱型向上，頭部長錐形，有白色被生孢子囊體，菌絲萌發(fā)快，轉(zhuǎn)色快，抗雜力強，子座長6~8cm，莖粗I~2mm，生長快且齊整，干燥后子囊頭部仍顯黃白色，產(chǎn)量較蛹蟲草低，草質(zhì)外觀不佳，蟲草素含量高； (1.1.2)蛹蟲夏草 子座形態(tài)特征:子座主莖橢圓型向上，上部致頂端有許多小凸起的子囊孢子，呈淡桔黃色，菌絲萌發(fā)快，培養(yǎng)基轉(zhuǎn)色橙紅色，相繼發(fā)生乳黃色基點，子座發(fā)生較齊整，莖粗2~5_，子座最長18cm ;麥基子座橙紅色；米基子座桔黃色； (1.1.3)頭孢蟲草 子座形態(tài)特征:子座圓柱向上，頭部橢圓球狀，被生子囊孢子，菌絲發(fā)育快，轉(zhuǎn)色橙紅色，原基相繼發(fā)生，草長度不整齊，子座莖粗2~3mm，最長可達8cm以上；
(1.2)子座選擇 子座選擇是培養(yǎng)新菌株的關鍵；選擇子座金黃或橙紅，子座生長點頂端大、長勢強壯、整齊的蟲草和菌絲組織最密集，菌絲活力最強的部位；要求:選擇蟲草成熟度在9成以上，子座長度在90~120cm，子座頂部膨大直徑在3~5mm的高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)蟲草；用滅菌剪刀貼培養(yǎng)基處切斷，子座排列整齊； (1.3 )子座處理 (1.3.1)子座滅菌 接種室潔凈度為100級,周邊區(qū)1000級；在無囷室內(nèi)，取上述子座用懾子夾住根部放在無菌水中浸洗50~60s，重復浸洗2~3次，然后用75%酒精或用濃度70~80%的氨基酸碘溶液浸洗30~60s滅菌； (1.3.2)子座選擇 滅菌后的子座在距生長點頂端2~4cm部位，用濃度70~80%的氨基酸碘溶液擦拭消毒的剪刀切取備用； (1.4)菌種培養(yǎng) (1.4.1)配制液體培養(yǎng)基配制 用去皮馬鈴薯500g、小麥100gj 1000ml, 100~120°C煮熟25~30min,涼后用3~5層紗布或雙層濾紙過濾出溶液，再加葡萄糖干粉20~30g、酵母膏2~3g、天門冬酰胺I~2g、磷酸二氫鉀1.5~2g、硫酸鎂0.6~lg、生長素5~10ml、維生素B125~30g,加蒸懼水調(diào)至1000ml溶液，再加入亞硒酸鈉溶液，使亞硒酸鈉濃度達到60mg/kg ;溶液pH值調(diào)至6~7.0 ;裝入10~500ml的試管或三角燒瓶中，制成液體培養(yǎng)基；試管或三角燒瓶用醫(yī)藥棉封口或耐高溫塑膜封口；(1.4.2)液體培養(yǎng)基滅菌 用常溫滅種方法或高壓蒸汽滅菌均可； (1.4.2.1)常溫滅菌:把盛有液體培養(yǎng)基的試管或三角燒瓶放在蒸鍋內(nèi)，裝滿后把蒸鍋蓋緊，溫度升到103°C、壓力達到0.05~0.08 MPa，保持6 — 8hr，然后降溫、壓力表歸零移入接菌室接菌應用； (1.4.2.2)高壓蒸汽滅菌: 具體條件如下:滅菌溫度:125°C ;有效滅菌時間不低于3.5hr ;滅菌壓力:0.135MPa ；真空度:第一次真空度:-0.011~-0.055 MPa, 15min，抽去冷空氣；第二次真空度:-0.055MPa ;真空度:-0.055 Mpa保持穩(wěn)定；滅菌時間:5~7.5hr ;燜置時間:滅菌結(jié)束后燜置30min,利于原料糖化、滅菌和營養(yǎng)物質(zhì)的轉(zhuǎn)化； (1.4.3 )液體培養(yǎng)基接種 (1.4.3.1)接種室要求:潔凈度為100級，周邊區(qū)1000級； 特別潔凈接種室技術指標:接種室:0.2個/30min.Φ90皿(5個/m3);周邊區(qū):0.4個/30min.Φ90皿(10個/m3);表面最大染菌密度:5個/cm2 ;空氣潔凈度級別:接種室100級，周邊區(qū)1000級；物流:①袋料一清潔通道一接種室；接種后反向返回；②無菌物品、敷料、滅菌的儀器及器材、菌種、一次性無菌物品一清潔通道一接種室；接種后反向返回；接種人員:清潔區(qū)換鞋一一更衣室，脫去外面工作服一二更換接種衣一緩沖間或直吹室一潔凈走廊一刷手間一潔凈接種室；接種后反向返回；)其他指標和監(jiān)測項目: ①溫度:18~26°C； ②相對濕度:45~65%； ③照度.)3001x ； ④沉降菌(個/O90mm(X5h): ^ 10 ； ⑤靜壓差:潔凈區(qū)與非潔凈區(qū)之間>10Pa； 潔凈級別不同房間之間>5Pa ； ⑥塵埃粒子數(shù)(個/立方米):≥5μ m O < 20000 ( 60000 ； (1.4.3.2)選擇子座: 步驟“1.3.2子座選擇”的子座用無菌水擦刷表層并沖洗，撕開子座，用解剖刀從子座內(nèi)心切取麥粒大組織塊，每個試管放置I~5個滅菌子座組織塊，三角燒瓶放置I~50個滅菌子座組織塊；要求:每IOml液體培養(yǎng)基放置I個滅菌子座組織塊；然后用醫(yī)用藥棉封Π ； (1.4.4)液體菌種培養(yǎng) 盛有液體培養(yǎng)基的試管或三角燒瓶，在下列條件下培養(yǎng)7~10d，形成菌球，生產(chǎn)出高濃度的北蟲草菌種懸濁液: 溫度:20~28°C ;濕度:65~70% ;光照:黑暗；PH值:6.0~7.0 ;時間:7~IOd ;條件:搖床培養(yǎng)； 優(yōu)質(zhì)北蟲草菌種懸濁液目測標準:純菌球多、菌液清晰； 劣質(zhì)菌種懸濁液目測標準:純菌球少、菌液混濁或凈止時間長，菌膜少的菌種應淘汰； (1.5)液體菌種保存 有菌種保存箱或用梭氏法保存兩種方法，任選一種方法保存；(1.5.1)用菌種保存箱保存 用菌種保存箱保存；要求:溫度10°C ;保存天數(shù):7-15d ;液體菌種隨時制作隨時用，防止退化、活力減弱； (1.5.2)用梭氏法保存 梭氏法保存:將容有I滴北蟲草菌種懸液的小管，置于盛有氫氧化鉀或五氧化二磷吸水劑的大試管中，用真空泵抽至1.3帕時，將大試管密封保存；這是為減少細胞死亡率而采取的一種不經(jīng)凍結(jié)、緩慢脫水的干燥保藏法，適用于多種細菌、真菌； 要求:溫度10°C ;保存天數(shù):7~15d ;液體菌種隨時制作隨時用，防止退化、活力減弱； (2)北蟲草產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)方法 (2.1)培養(yǎng)基制作 (2.1.1)養(yǎng)菌室消毒滅菌 首先對培植北蟲草的室內(nèi)進行嚴格消毒處理，可使用煙霧彈、過氧乙酸等消毒劑(粉或液)空氣消毒滅菌、地面用濃度10%高錳酸鉀擦洗干凈，進行封閉2~4hr備用； (2.1.2)配置營養(yǎng)液 營養(yǎng)液配方按重量百分比: 磷酸二氫鉀:20~40g ;維生素B1、B2:各20~30g ;食用葡萄糖粉:30~50g ;加蒸餾水全部溶解，并調(diào)配到1000ml，再加入亞硒酸鈉溶液，使亞硒酸鈉濃度達到60mg/kg ； PH值:清水加入碳 酸氫鈉，調(diào)制PH7.5~8 ; (2.1.3)塑料盆培養(yǎng)基制作 (2.1.3.1)配料處理；200L水加入4ml慶大霉素，將小麥、碎玉米、大米浸泡4~5hr，撈出雜質(zhì)，淋干配料水分，10斤小麥加入2斤大米拌均備用； (2.1.3.1)配方配料；把小麥、大米、碎玉米按比例混合均勻或者單一小麥灌裝到白色聚乙烯塑料盆中，灌裝深度1.5~2cm，加營養(yǎng)液后覆蓋耐高溫塑料薄膜，再用耐高溫皮筋扎緊扎實等待高溫滅菌，制作成塑料盆培養(yǎng)基；或不覆蓋高溫塑料薄膜，制作成塑料盆培養(yǎng)基; 配料如下按重量百分比: 小麥:1000g ;玉米:100~200g，玉米破碎；大米:100~200g ;營養(yǎng)液:加入營養(yǎng)液與小麥的比例:0.5~2ml:1~5g,以配料全吸收無液體流動為最佳； 白色聚乙烯塑料盆規(guī)格:長X寬X高=40~100X40~60X 10~15cm; (2.2 )滅菌 用常溫滅種方法或高壓蒸汽滅菌，兩種方法任選一種； (2.2.1)常溫滅菌 把塑料盆培養(yǎng)基平放在蒸鍋內(nèi)，主要把小麥等料搖平至全部覆蓋塑料盆底部并均勻，裝滿后把蒸鍋蓋緊，溫度升到103°C、壓力達到0.05~0.08 MPa，保持6 — 8hr，然后降溫、壓力表歸零移入接菌室接菌應用； (2.2.2)高壓蒸汽滅菌 具體條件如下: 滅菌溫度:125°C ;有效滅菌時間不低于3.5hr ;滅菌壓力:0.135MPa ;真空度:第一次真空度:-0.011~-0.055 MPa, 15min，抽去冷空氣；第二次真空度:-0.055 MPa ;真空度:-0.055 Mpa保持穩(wěn)定；滅菌時間:5~7.5hr ;燜置時間:滅菌結(jié)束后燜置30min，利于原料糖化、滅菌和營養(yǎng)物質(zhì)的轉(zhuǎn)化； (3)接種 用常規(guī)接種或高潔凈度接種室接種方法，任選一種； (3.1)常規(guī)接種 (3.1.1)覆蓋塑料薄膜的培養(yǎng)基接種 接種前要把接種室進行全方位消毒處理一使用煙霧彈、過氧乙酸等消毒劑(粉或液)、地面用高錳酸鉀擦洗干凈，進行封閉2~4hr滅菌；工作人員的服裝也在消毒室進行消毒，人員進入必須換上紫外線消毒過的服裝；把蒸過的盆放在空氣凈化臺上進行接種；用接菌機微細針頭刺破塑料盆上的塑料膜，向里面培養(yǎng)基均勻噴灑液體菌種，把培養(yǎng)基全部覆蓋均勻，靜置3~4hr，移到培養(yǎng)室上架； (3.1.2)不覆蓋塑料薄膜的培養(yǎng)基接種 不覆蓋塑料薄膜的塑料盆培養(yǎng)基，用用接菌機均勻噴灑液體菌種，然后在菌體表面用接種槍噴灑成膜劑；成膜劑配方質(zhì)量百分比: 殼聚糖:固體粉末CS-90粉或殼聚糖溶液CS-90，其中殼聚糖質(zhì)量百分比含量2%，醋酸質(zhì)量百分比含量為2%:2.5%以下； 乳化劑:農(nóng)浮600號1.0~5.0% ; 分散展著劑:分散展著劑0.5~5.0% ; pH值調(diào)節(jié)劑:0.1~5.0% ;
上述物質(zhì)加蒸餾水或礦泉水按比例配成15000ml溶液； (3.2)高潔凈度接種室接種 (3.2.1)接種室條件 接菌室，具備封閉性好，有通排過濾凈化空氣裝置，設有紫外線燈滅菌和煙霧，氣霧化學間替性滅菌措施，接菌工具有火焰消毒，酒精和滅菌劑消毒，后并由無菌水沖洗，確保不帶雜菌的條件，接種室為100級潔凈度； 滅菌后的盛料塑料盆在接種室接種，接菌后靜置3~4hr，移到培養(yǎng)室上架； ，3.2.2液體菌種處理 對液體菌種嚴格審查無雜菌后，對原液體菌的菌球應用攪拌器打碎菌球，否則接菌點少并有堵塞接種槍槍孔的現(xiàn)像；100~200ml原液體菌種加蒸餾水兌至1000ml液體菌種；(3.2.3)接種 用75%酒精棉球擦抹接種槍針頭和塑料盆覆蓋的塑料膜針眼部位，插入針頭，射2~3次，形成盆內(nèi)菌種全覆蓋，植入菌種后培養(yǎng)基全吸收菌液為最佳，上架躺放時不流液體于瓶壁底位部； (4)培養(yǎng)室管理 (4.1 )養(yǎng)菌 (4.1.1)塑料盆培養(yǎng)基擺放 接種后的塑料盆培養(yǎng)基平放在消毒滅菌后的養(yǎng)菌室內(nèi)，整齊的平方塑料盆培養(yǎng)基； 第一種方法碼垛盆，以塑料盆間空碼垛: 第一層:塑料盆培養(yǎng)基在縱、橫方向上彼此留有稍小于塑料盆寬度的間隙；第二層:塑料盆培養(yǎng)基放在第一層塑料盆培養(yǎng)基的上方間隙處； 第三層:塑料盆培養(yǎng)基放在第二層塑料盆培養(yǎng)基的上方間隙處；以此類推，可以放置10~20層的高度，各層間呈“品”字形排列； 透明的塑料盆通過這種碼垛盆方法，使得各層的塑料盆在有光線的條件下得到的散射光足以滿足生長需要； 或第二種方法架體結(jié)構(gòu): 塑料盆培養(yǎng)基放置在金屬層架上，每層架高度30~50cm、寬度60~80cm、長度任意； 擺放塑料盆培養(yǎng)基的四周留有80~150cm寬的工作道； (4.1.2 )養(yǎng)菌出草 塑料盆培養(yǎng)基擺放完畢后，養(yǎng)菌室內(nèi)靜置養(yǎng)菌； (4.1.2.1)菌絲培育；條件是: 室內(nèi)溫度:15~20°C，架體上中下設溫度表檢查，并做好記錄；室內(nèi)濕度:75~85%;室內(nèi)光照:黑暗；養(yǎng)菌時間:3~4d ; (4.1.2.2 )子座培育 第5天給光,條件是: 室內(nèi)溫度:18~23°C ;室內(nèi)濕度:65~70% ;保持濕度是滿足菌絲體的水分供應；采收前10~15d降低空氣濕度至50~65%,防止成熟過快導致菌株死亡； 光照強度:弱光，200~5001ux或每隔2~5m，放置一個3~5W的LED燈照明；基內(nèi)菌絲形成接菌部位幅射狀態(tài)時，夜間全時給光，白日需外入散射光線，直至采收期； 培植時間:30~45d ;在8~IOd后菌絲由白轉(zhuǎn)黃或橙紅色時，繼續(xù)培植，不斷生長；氧氣:滿足菌絲體的氧氣供應；觀察，當菌絲輻射外圍生長時，用釘板刺出封閉膜孔道，放出二氧化碳，輸入新鮮空氣，促進菌絲生長過程轉(zhuǎn)色性縵延生長； (4.1.2.3)注意事項 濕度控制:菌絲與子座生長發(fā)育，都需要水分，濕度大容易行成氣生菌絲，影響子座發(fā)生率和轉(zhuǎn)色慢的現(xiàn)象；濕度小，則影響子座生長的產(chǎn)量和菌絲體靠水分輸送營養(yǎng)，造成生長發(fā)育不良的現(xiàn)象；控制培養(yǎng)基PH值:一是配制培養(yǎng)基時pH值8~9高出最佳pH值6~7，在滅菌時PH值降低I~2個，尤其滅菌和降溫的時間延長，造成pH值的下降，這是做好余量準備； (5)采收分級與包裝 (5.1)采收標準 北蟲草植育40~45天時,子座上部至頂端形成凸起孢子囊時,子座長6~15cm、菌株孢頭直徑2~6_時蟲草成熟，進入采收期，要及時收獲，在架體上有封口薄膜的塑料盆揭去封口膜、促進子實體失水和以收縮的培養(yǎng)基繼續(xù)收縮2~4hr，可連草帶培養(yǎng)基一塊拔出處理； (5.2)采收方法 有封口薄膜的塑料盆去膜，一手握住蟲草、一手握住培養(yǎng)基撕下或一手握住蟲草、一手用剪刀剪下或用機械刀具割下；一茬蟲草收貨后，每盆噴灑營養(yǎng)液10~100ml，可以出二茬蟲草，以此類推，可以出草3茬； (5.3)北蟲草分級方法(5.3.1)按照外觀分級
【文檔編號】A01G1/04GK103843583SQ201410079301
【公開日】2014年6月11日 申請日期:2014年3月6日 優(yōu)先權日:2014年3月6日
【發(fā)明者】劉彥君, 丁志強, 劉昭常 申請人:劉彥君, 丁志強, 劉昭常