專利名稱：一種海蔥組織培養(yǎng)的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)技術(shù)、植物莖尖培養(yǎng)技術(shù)，主要是一種海蔥組織培養(yǎng)的方法。
背景技術(shù)：
海蔥(Ornithogalum caudatum),別名虎眼萬(wàn)年青,俗稱玻璃球花,葫蘆蘭等,為百合科、虎眼萬(wàn)年青屬植物，多年生球根草本花卉，原產(chǎn)非洲南部，喜陽(yáng)光，夏季忌陽(yáng)光直射，亦半陰耐寒，好濕潤(rùn)環(huán)境，冬季重霜后葉叢仍保持綠色。海蔥未開(kāi)花時(shí)株高約為30 40cm，開(kāi)花時(shí)花莖可達(dá)50 60cm高，一般每年4月中旬至5月上旬開(kāi)花，錐形花序，花有白色、橙色和重瓣種，幽雅、樸素，花期長(zhǎng)，是布置自然式園林和巖石園和優(yōu)良材料，也適用于切花和盆栽觀賞。同時(shí)，海蔥也有一定的要用價(jià)值，將其葉子和下面的鱗莖切片或塊泡酒，可舒筋活血，用于內(nèi)服外敷，對(duì)于跌打扭傷、肌肉過(guò)度疲勞有良好的恢復(fù)作用。目前，海蔥的繁殖主要通過(guò)種子及分球繁殖方式進(jìn)行，但是種球一般每年8 9月才能夠作為種球用來(lái)繁殖，而實(shí)生苗需要培育3 4年才能開(kāi)花，種球、種子生產(chǎn)受季節(jié)、年限限制嚴(yán)重，同時(shí)每年繁殖數(shù)量有限，不利用海蔥的推廣。同時(shí)，由于海蔥種球長(zhǎng)期處于地下，容易受到各種病毒的感染，若利用種球進(jìn)行無(wú)性繁殖，一旦種球感染病毒，便很難通過(guò)化學(xué)藥物根除，更嚴(yán)重降低海蔥的觀賞價(jià)值。植物組織培養(yǎng)技術(shù)被認(rèn)為是目前最高效的植物種苗快繁技術(shù)手段，目前，國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)到利用植物組培技術(shù)對(duì)海蔥進(jìn)行快速繁殖的文獻(xiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，而提供一種蔥組織培養(yǎng)的方法，解決建立良好的海蔥組培再生體系，為海蔥種苗生產(chǎn)、新品種創(chuàng)制及品質(zhì)遺傳改良等做好技術(shù)支持。本發(fā)明的目的是通過(guò)如下技術(shù)方案來(lái)完成的。這種海蔥組織培養(yǎng)的方法，該方法包括以下幾個(gè)步驟:1)、外植體的選取及處理:選取海蔥地下鱗莖及尚未開(kāi)放的花穗作為起始材料，將鱗莖剝?nèi)ネ獠縄 2層鱗片，花穗切成Icm長(zhǎng)度，作為組培用外植體；2)、初代培養(yǎng):在超凈工作臺(tái)上，將經(jīng)過(guò)表面消毒的外植體在轉(zhuǎn)移至無(wú)菌接種盤(pán)中，用無(wú)菌濾紙吸去外植體表面水分，接種于初代培養(yǎng)基MS+6-BA0.1 0.5mg/L+NAA0.05 0.2mg/L中進(jìn)行初代培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度25±2°C，光照時(shí)間為12 14h/d，光照強(qiáng)度為 45 60 μ.mo I.m 2.s 1 ;3)不定芽誘導(dǎo):初代培養(yǎng)獲得的干凈、成活材料在無(wú)菌工作臺(tái)上接種于不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+6-BA2.0 4.0mg/L+NAA0.05 0.2mg/L中，進(jìn)行不定芽的誘導(dǎo)，培養(yǎng)溫度25±2°C,光照時(shí)間為12 14h/d,光照強(qiáng)度為45 60 μ.mo I.τα2.s_1 ；4)不定芽增殖:不定芽增殖:在無(wú)菌工作臺(tái)上，將不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)獲得的2 3cm高的不定芽2 3個(gè)一叢，利用無(wú)菌的解剖刀將不定芽基部輕輕造成一些傷口，接種于不定芽增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，不定芽增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA0.5 3.0mg/L+NAA0.05 0.2mg/L,培養(yǎng)溫度25±2°C,光照時(shí)間為12 14h/d,光照強(qiáng)度為45 60 μ.moI.πΓ2 *s_1 ；5)、不定芽生根誘導(dǎo):從基部將高生長(zhǎng)到3 5cm的叢生不定芽分開(kāi)成單個(gè)不定芽，接入生根培養(yǎng)基中進(jìn)行不定根的誘導(dǎo)，生根培養(yǎng)基為MS+IBA0 0.5mg/L或1/2MS+IBA0 0.5mg/L,培養(yǎng)溫度25±2°C，光照時(shí)間為12 14h/d，光照強(qiáng)度為45 60 μ.mo I.m 2.s 1 ；6)、組培苗馴化及移栽:不定芽基部長(zhǎng)出3 5條I 2cm的不定根后，將組培移至溫室，散射光培養(yǎng)5d后打開(kāi)瓶蓋，再培養(yǎng)I 2d，完成組培苗移栽前馴化，然后將組培苗從培養(yǎng)瓶取出，洗凈組培苗表面瓊脂，栽入基質(zhì)中，保濕90 %以上培養(yǎng)15d，然后在溫室中正常培養(yǎng)。初代培養(yǎng)、不定芽誘導(dǎo)及增殖、不定芽生根誘導(dǎo)基本培養(yǎng)基均為MS培養(yǎng)基，蔗糖用量為20 40g/L，凝固劑為瓊脂粉，用量為8 9g/L，培養(yǎng)基pH分裝前調(diào)整為5.7 5.8。本發(fā)明有益的效果是:1、通過(guò)組織培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行海蔥種苗快繁，生產(chǎn)不受地區(qū)、季節(jié)、氣候及母株生長(zhǎng)年限的限制，便于工廠化育苗，可根據(jù)訂單進(jìn)行生產(chǎn)，生產(chǎn)時(shí)間及規(guī)模可控，為海蔥的推廣應(yīng)用提供充足的優(yōu)質(zhì)種苗保障。2、繁殖系數(shù)達(dá)到3 5，生根率100%，移栽成活率100%，達(dá)到花卉種苗工廠化育苗生產(chǎn)的要求，目前尚未見(jiàn)關(guān)于海蔥組織培養(yǎng)的文獻(xiàn)報(bào)道。3、海蔥不定芽誘導(dǎo)采用直接器官發(fā)生，無(wú)愈組織傷誘導(dǎo)及愈傷分化誘導(dǎo)環(huán)節(jié)，減少植物組培過(guò)程中后代變異的發(fā)生，后代種苗遺傳背景一致，最大限度保持母本的優(yōu)良性狀。4、有利于結(jié)實(shí)率低、甚至不結(jié)實(shí)的優(yōu)良海蔥品種的推廣。5、建立良好的組培快繁體系，為今后利用植物生物技術(shù)對(duì)海蔥進(jìn)行新品種培育、遺傳改良等研究工作奠定基礎(chǔ)。
具體實(shí)施例方式下面通過(guò)具體實(shí)施方式
對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步闡述，實(shí)施例將幫助更好地理解本發(fā)明，但本發(fā)明并不僅僅局限于下述實(shí)施例。本發(fā)明所述的一種蔥組織培養(yǎng)的方法，步驟如下:1、培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件:初代培養(yǎng)、不定芽誘導(dǎo)及增殖、不定芽生根誘導(dǎo)基本培養(yǎng)基均為MS培養(yǎng)基，蔗糖用量為20 40g/L，凝固劑為瓊脂粉，用量為8 9g/L，培養(yǎng)基pH分裝前調(diào)整為5.7 5.8 ;初代培養(yǎng)基為MS+6-BA0.1 0.5mg/L+NAA0.05 0.2mg/L ;不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+6-BA2.0 4.0mg/L+NAA0.05 0.2mg/L ;不定芽增殖培養(yǎng)基為 MS+6-BA0.5 3.0mg/L+NAA0.05 0.2mg/L ;生根培養(yǎng)基為 MS+IBA0 0.5mg/L 或1/2MS+IBA0 0.5mg/L ;初代培養(yǎng)、不定芽誘導(dǎo)及增殖、不定芽生根培養(yǎng)條件為，培養(yǎng)溫度25±2°C,光照時(shí)間為12 14h/d,光照強(qiáng)度為45 60 μ.mo I.πΓ2.s'2、外植體的處理與消毒:選取海蔥地下鱗莖及尚未開(kāi)放的花穗作為起始材料，將鱗莖剝?nèi)ネ獠縄 2層鱗片，花穗切成Icm左右長(zhǎng)度，處理好的外植體用洗潔精溶液清洗20min，期間不斷輕輕攪拌，然后流水沖洗經(jīng)洗潔精清洗的外植體材料20 30min，在已經(jīng)過(guò)消毒的超凈工作臺(tái)上將經(jīng)流水清洗過(guò)的外植體轉(zhuǎn)移至無(wú)菌錐形瓶中，用75%酒精浸泡60s，期間不斷輕輕晃動(dòng)錐形瓶，去除附在外植體表面氣泡，倒出75%酒精，再用0.l%HgCl2溶液浸泡材料8 lOmin，或用有效氯濃度為l%NaC10溶液浸泡材料10 15min，浸泡期間不斷輕輕晃動(dòng)錐形瓶，去除附在外植體表面氣泡，倒出0.1ffigCl2溶液或l%NaC10溶液，用無(wú)菌水清洗經(jīng)過(guò)消毒處理的外植體4 5次，用無(wú)菌水浸泡、備用。3、初代培養(yǎng):在超凈工作臺(tái)上，將經(jīng)過(guò)表面消毒的外植體在轉(zhuǎn)移至無(wú)菌接種盤(pán)中，用無(wú)菌濾紙吸去外植體表面水分，接種于初代培養(yǎng)基MS+6-BA0.1 0.5mg/L+NAA0.05
0.2mg/L中進(jìn)行初代培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度25±2°C，光照時(shí)間為12 14h/d，光照強(qiáng)度為45 60 μ.mo I^m2-S104、不定芽誘導(dǎo):初代培養(yǎng)獲得的干凈、成活材料在無(wú)菌工作臺(tái)上接種于不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+6-BA2.0 4.0mg/L+NAA0.05 0.2mg/L中，進(jìn)行不定芽的誘導(dǎo)，培養(yǎng)溫度25±2°C,光照時(shí)間為12 14h/d,光照強(qiáng)度為45 60 μ.mo I.πΓ2.s'5、不定芽增殖:在無(wú)菌工作臺(tái)上，將不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)獲得的2 3cm高的不定芽2 3個(gè)一叢，利用無(wú)菌的解剖刀將不定芽基部輕輕造成一些傷口，接種于不定芽增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，不定芽增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA0.5 3.0mg/L+NAA0.05 0.2mg/L,培養(yǎng)溫度25±2°C,光照時(shí)間為12 14h/d,光照強(qiáng)度為45 60 μ.mo I.m_2.s'6、不定芽生根誘導(dǎo):從基部將高生長(zhǎng)到3 5cm的叢生不定芽分開(kāi)成單個(gè)不定芽，接入生根培養(yǎng)基中進(jìn)行不定根的誘導(dǎo)，生根培養(yǎng)基為MS+IBA0 0.5mg/L或1/2MS+IBA0
0.5mg/L,培養(yǎng)溫度25±2°C,光照時(shí)間為12 14h/d,光照強(qiáng)度為45 60 μ.mol.1rT2-S-1,生根率100%。7、組培苗馴化及移栽:不定芽基部長(zhǎng)出3 5條I 2cm的不定根后，將組培移至溫室，散射光培養(yǎng)5d后打開(kāi)瓶蓋，再培養(yǎng)I 2d，完成組培苗移栽前馴化，然后將組培苗從培養(yǎng)瓶取出，洗凈組培苗表面瓊脂，栽入基質(zhì)中，保濕90%以上培養(yǎng)15d，然后在溫室中正常培養(yǎng)，移栽成活率100%。最后，應(yīng)當(dāng)指出，以上 實(shí)例僅是本發(fā)明較有代表性的例子。顯然，本發(fā)明的技術(shù)方案并不限于上述實(shí)例，還可以有許多變形，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員能從本發(fā)明公開(kāi)的內(nèi)容直接導(dǎo)出或聯(lián)想到的所有變形，均應(yīng)認(rèn)為是本發(fā)明的保護(hù)范圍。
權(quán)利要求
1.一種海蔥組織培養(yǎng)的方法，其特征在于:該方法包括以下幾個(gè)步驟: 1)、外植體的選取及處理:選取海蔥地下鱗莖及尚未開(kāi)放的花穗作為起始材料，將鱗莖剝?nèi)ネ獠縄 2層鱗片，花穗切成Icm長(zhǎng)度，作為組培用外植體； 2)、初代培養(yǎng):在超凈工作臺(tái)上，將經(jīng)過(guò)表面消毒的外植體在轉(zhuǎn)移至無(wú)菌接種盤(pán)中，用無(wú)菌濾紙吸去外植體表面水分，接種于初代培養(yǎng)基MS+6-BA0.1 0.5mg/L+NAA0.05 0.2mg/L中進(jìn)行初代培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度25±2°C，光照時(shí)間為12 14h/d，光照強(qiáng)度為45 60 μ.mo I.m 2.s 1 ； 3)不定芽誘導(dǎo):初代培養(yǎng)獲得的干凈、成活材料在無(wú)菌工作臺(tái)上接種于不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+6-BA2.0 4.0mg/L+NAA0.05 0.2mg/L中，進(jìn)行不定芽的誘導(dǎo)，培養(yǎng)溫度25±2°C,光照時(shí)間為12 14h/d,光照強(qiáng)度為45 60 μ.mo I.πΓ2.s_1 ； 4)不定芽增殖:不定芽增殖:在無(wú)菌工作臺(tái)上，將不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)獲得的2 3cm高的不定芽2 3個(gè)一叢，利用無(wú)菌的解剖刀將不定芽基部輕輕造成一些傷口，接種于不定芽增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，不定芽增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA0.5 3.0mg/L+NAA0.05 0.2mg/L,培養(yǎng)溫度25±2°C,光照時(shí)間為12 14h/d,光照強(qiáng)度為45 60 μ.mo I.m 2.s 1 ； 5)、不定芽生根誘導(dǎo):從基部將高生長(zhǎng)到3 5cm的叢生不定芽分開(kāi)成單個(gè)不定芽,接入生根培養(yǎng)基中進(jìn)行不定根的誘導(dǎo)，生根培養(yǎng)基為MS+IBA0 0.5mg/L或1/2MS+IBA0 0.5mg/L,培養(yǎng)溫度25±2°C,光照時(shí)間為12 14h/d,光照強(qiáng)度為45 60 μ.moI.πΓ2 *s_1 ； 6)、組培苗馴化及移栽:不定芽基部長(zhǎng)出3 5條I 2cm的不定根后，將組培移至溫室，散射光培養(yǎng)5d后打開(kāi)瓶蓋，再培養(yǎng)I 2d，完成組培苗移栽前馴化，然后將組培苗從培養(yǎng)瓶取出，洗凈組培苗表面瓊脂，栽入基質(zhì)中，保濕90%以上培養(yǎng)15d，然后在溫室中正常培養(yǎng)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的海蔥組織培養(yǎng)的方法，其特征在于:初代培養(yǎng)、不定芽誘導(dǎo)及增殖、不定芽生根誘導(dǎo) 基本培養(yǎng)基均為MS培養(yǎng)基，蔗糖用量為20 40g/L，凝固劑為瓊脂粉，用量為8 9g/L，培養(yǎng)基pH分裝前調(diào)整為5.7 5.8。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種海蔥組織培養(yǎng)的方法，包括如下步驟培養(yǎng)基的配制、外植體的選取與消毒、初代培養(yǎng)、不定芽誘導(dǎo)、不定芽增值、不定芽生根誘導(dǎo)、組培苗馴化及移栽?；九囵B(yǎng)基選用MS培養(yǎng)基，蔗糖用量為20～40g/L，凝固劑為瓊脂粉，用量為8～9g/L，培養(yǎng)基pH分裝前調(diào)整為5.7～5.8；初代培養(yǎng)基為MS+6-BA0.1～0.5mg/L+NAA0.05～0.2mg/L；不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+6-BA2.0～4.0mg/L+NAA0.05～0.2mg/L；不定芽增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA0.5～3.0mg/L+NAA0.05～0.2mg/L；生根培養(yǎng)基為MS+IBA0～0.5mg/L或1/2MS+IBA0～0.5mg/L。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)建立的海蔥組培快繁技術(shù)體系增殖系數(shù)3～5，生根率100％，移栽成活率100％，組培苗健壯均勻，適合優(yōu)良海蔥種苗脫毒及規(guī)?；a(chǎn)。
文檔編號(hào)A01H4/00GK103141388SQ20131007405
公開(kāi)日2013年6月12日 申請(qǐng)日期2013年3月8日 優(yōu)先權(quán)日2013年3月8日
發(fā)明者汪一婷, 陳志 , 牟豪杰, 呂永平, 周迪江, 陳劍平 申請(qǐng)人:浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院