專利名稱：一株鏈霉菌及其制備抑制植物病毒病制劑的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于微生物及其應(yīng)用領(lǐng)域，具體涉及一種鏈霉菌株及其用于制備抑制植物病毒病制劑的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
植物病毒是一種由核酸和蛋白質(zhì)組成的具有浸染活性的細(xì)胞內(nèi)寄生病原物，據(jù)國(guó)際病毒分類委員會(huì)(ICTV)的第八次報(bào)告，目前全世界發(fā)現(xiàn)的植物病毒種類達(dá)1122個(gè)。植物病毒所引起的植物病害素有“植物癌癥”之稱，其對(duì)農(nóng)作物的危害程度僅次于真菌病原物， 幾乎每種農(nóng)作物都受到2 3種病毒的危害。植物病毒病嚴(yán)重危害著全球農(nóng)業(yè)生產(chǎn)，據(jù)報(bào)道，全世界每年因病毒危害造成的植物損失竟達(dá)600億美元，其中僅糧食作物一項(xiàng)每年的經(jīng)濟(jì)損失就高達(dá)200億美元。我國(guó)每年因植物病毒危害造成的損失難以計(jì)數(shù)，有很多重要的病毒已遍及全國(guó)主要產(chǎn)區(qū)。如二十世紀(jì)70 80年代，我國(guó)北方地區(qū)因麥類黃矮病、叢矮病流行，一般減產(chǎn) 20 % 30 %，嚴(yán)重的達(dá)60 %，甚至絕產(chǎn)。近年來(lái)，黃瓜花葉病毒、煙草花葉病毒和芫菁花葉病毒造成許多蔬菜減產(chǎn)甚至絕產(chǎn)。因此，作物病毒病害的防治一直以來(lái)都是困擾農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的一大難題。由于植物病毒特殊的胞內(nèi)寄生性，使病毒自身的增殖與寄主的代謝融為一體；加之植物缺乏完整的免疫系統(tǒng)，病毒一旦浸染植物，就可在植物細(xì)胞內(nèi)無(wú)限期存活，直至寄主死亡。因此，使得植物病毒病的防治相對(duì)于病(真菌、細(xì)菌)、蟲(chóng)、草等害物的防治更為困難。 此外，植物病毒種類多，傳播途徑廣以及存在轉(zhuǎn)化成新型病毒和整合到寄主基因組的風(fēng)險(xiǎn)， 也加大了植物病毒病防治的難度。目前，除了免疫品種外，尚未開(kāi)發(fā)出對(duì)病毒有高度的選擇性而對(duì)寄主無(wú)毒或低毒的理想制劑?，F(xiàn)階段開(kāi)發(fā)的抗病毒制劑大多以預(yù)防為主，且藥效多不理想，在最佳使用濃度下其抑制率一般只有30% 60%，再加上藥劑品種較單一，使得病毒容易對(duì)這些藥劑產(chǎn)生抗性，因此尋找高效、廣譜、安全的抗植物病毒新藥是當(dāng)今農(nóng)藥研究的難點(diǎn)和熱點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于，提供一鏈霉菌株(Sti^ptomyces sp. )ZXOl (以下簡(jiǎn)稱菌株 ZXO1)，并通過(guò)試驗(yàn)證明該菌株ZXOl能夠用于制備抗植物病毒病制劑的應(yīng)用。本發(fā)明的菌株ZX01，已于2011年5月M日提交中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏，保藏號(hào)為CGMCC No. 4893。經(jīng)測(cè)定，該菌株ZXOl的16SrDNA序列如下所示tgcagtcgaa cgatgaaccc acttcggtgg gggattagtg gcgaacgggt gagtaacacg 60tgggcaatct gcccttcact ctgggacaag ccctggaaac ggggtctaat accggatacg 120accacttcag gcatctgatg gtggtggaaa gctccggcgg tgaaggatga gcccgcggcc 180tatcagcttg ttggtggggt aatggcccac caaggcgacg acgggtagcc ggcctgagag 240
ggcgaccggccacactgggactgagacacggcccagactcctacgggaggcagcagtggg300
gaatattgcacaatgggcgaaagcctgatgcagcgacgccgcgtgagggatgacggcctt360
cgggttgtaaacctctttcagcagggaagaagcgaaagtgacggtacctgcagaagaagc420
gccggctaactacgtgccagcagccgcggtaatacgtagggcgcaagcgttgtccggaat480
tattgggcgtaaagagctcgtaggcggcttgtcacgtcggatgtgaaagcccggggctta540
accccgggtctgcattcgatacgggcaggctagagtgtggtaggggagatcggaattcct600
ggtgtagcggtgaaatgcgcagatatcaggaggaacaccggtggcgaaggcggatctctg660
ggccattactgacgctgaggagcgaaagcgtggggagcgaacaggattagataccctggt720
agtccacgccgtaaacgttgggaactaggtgttggcgacattccacgtcgtcggtgccgc780
agctaacgcattaagttccccgcctggggagtacggccgcaaggctaaaactcaaaggaa840
ttgacgggggcccgcacaagcagcggagcatgtggcttaattcgacgcaacgcgaagaac900
cttaccaaggcttgacatataccggaaacatctagagataggtgcccccttgtggtcggt960
atacaggtggtgcatggctgtcgtcagctcgtgtcgtgagatgttgggttaagtcccgca1020
acgagcgcaacccttgttctgtgttgccagcatgcccttcggggtgatggggactcacag1080
gagactgccggggtcaactcggaggaaggtggggacgacgtcaagtcatcatgcccctta1140
tgtcttgggctgcacacgtgctacaatggccggtacaaagagctgcgaagccgtgaggcg1200
gagcgaatctcaaaaagccggtctcagttcggattggggtctgcaactcgaccccatgaa1260
gtcggagttgctagtaatcgcagatcagcattgctgcggtgaatacgttcCCgggCCttg1320
tacacaccgcccgtcacgtcacgaaagtcggtaacacccgaagccggtggcccaacccct1380
tgtgggagggagct 1394。
該鏈霉菌株(Streptomyces sp.)ZXOl的種子培養(yǎng)條件為
在觀！、^。!!)!!!條件下，放置在培養(yǎng)基上培養(yǎng)36h;所述培養(yǎng)基組成為葡萄糖
10g/L 7. 2。
經(jīng)申請(qǐng)人驗(yàn)證，菌株ZXOl發(fā)酵后的發(fā)酵液，含有抑制TMV、CMV和BYDV復(fù)制、增殖的物質(zhì)，可用于制備抗植物病毒病制劑。
經(jīng)試驗(yàn)證明，本發(fā)明的鏈霉菌株ZXOl經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)后，可用于制備抗植物病毒病制發(fā)酵培養(yǎng)條件如下
在觀！、ISOrpm條件下培養(yǎng)7d ；培養(yǎng)基組成為小米10g/L、葡萄糖10g/L、碳酸鈣


圖1是對(duì)鏈霉菌ZXOl進(jìn)化樹(shù)分析的示意圖。下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。
具體實(shí)施例方式
本申請(qǐng)的課題組在我國(guó)新疆喀納斯湖采集的土樣中分離得到一菌株，申請(qǐng)人將其命名為ZX01，該菌株ZXOl的種子培養(yǎng)條件為
在觀！、^。^!!!條件下培養(yǎng)36h;培養(yǎng)基組成為葡萄糖10g/L、酵母膏10g/L， 氯化鈉:2. 5g/L，七水硫酸鎂0. 5g/L，三水磷酸氫二鉀0. 5g/L，pH值7. 2。經(jīng)形態(tài)學(xué)鑒定及16SrDNA序列分析初步確定該菌株ZXOl為鏈霉菌屬；進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，該菌株的發(fā)酵液對(duì)TMV、CMV和BYDV具有較強(qiáng)的抑制、鈍化和治療作用。發(fā)酵培養(yǎng)條件如下在^°C、ISOrpm條件下培養(yǎng)7d ；培養(yǎng)基組成為小米10g/L、葡萄糖10g/L、碳酸鈣 2g/L、氯化鈉2. 5g/L、蛋白胨3g/L，pH7. 2 7. 4。經(jīng)發(fā)酵后的發(fā)酵液可直接用于制備抗植物病毒病制劑。本發(fā)明的鏈霉菌ZXO1，已于2011年5月M日提交中國(guó)普通微生物保藏中心保藏， 保藏號(hào)為 CGMCC No. 4893。1、菌株ZXOl的鑒定本發(fā)明的菌株ZXOl的形態(tài)特征、培養(yǎng)特征、生理生化特征及16SrDNA的序列和菌種分類結(jié)果如下菌株ZXOl在大多數(shù)培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好(見(jiàn)表1)，在高氏培養(yǎng)基上菌落絨毛狀，基內(nèi)菌絲體無(wú)橫隔，不斷裂，氣生菌絲生長(zhǎng)旺盛，孢子柱形，表面光滑。ZXOl菌株在各種培養(yǎng)基上均無(wú)可溶性色素產(chǎn)生。表1 菌株ZXOl的培養(yǎng)特征
權(quán)利要求
1.一鏈霉菌株(Sti^ptomyces sp.) ZXOl，其特征在于，其保藏編號(hào)為CGMCC No. 4893。
2.如權(quán)利要求1所述的鏈霉菌株(Sti^ptomycessp.) ZXOl，其特征在于，該鏈霉菌株的16SrDNA序列如下所示tgcagtcgaa cgatgaaccc acttcggtgg gggattagtg gcgaacgggt gagtaacacg 60 tgggcaatctgcccttcactctgggacaagccctggaaacggggtctaataccggatacg120accacttcaggcatctgatggtggtggaaagctccggcggtgaaggatgagcccgcggcc180tatcagcttgttggtggggtaatggcccaccaaggcgacgacgggtagccggcctgagag240ggcgaccggccacactgggactgagacacggcccagactcctacgggaggcagcagtggg300gaatattgcacaatgggcgaaagcctgatgcagcgacgccgcgtgagggatgacggcctt360cgggttgtaaacctctttcagcagggaagaagcgaaagtgacggtacctgcagaagaagc420gccggctaactacgtgccagcagccgcggtaatacgtagggcgcaagcgttgtccggaat480tattgggcgtaaagagctcgtaggcggcttgtcacgtcggatgtgaaagcccggggctta540accccgggtctgcattcgatacgggcaggctagagtgtggtaggggagatcggaattcct600ggtgtagcggtgaaatgcgcagatatcaggaggaacaccggtggcgaaggcggatctctg660ggccattactgacgctgaggagcgaaagcgtggggagcgaacaggattagataccctggt720agtccacgccgtaaacgttgggaactaggtgttggcgacattccacgtcgtcggtgccgc780agctaacgcattaagttccccgcctggggagtacggccgcaaggctaaaactcaaaggaa840ttgacgggggcccgcacaagcagcggagcatgtggcttaattcgacgcaacgcgaagaac900cttaccaaggcttgacatataccggaaacatctagagataggtgcccccttgtggtcggt960atacaggtggtgcatggctgtcgtcagctcgtgtcgtgagatgttgggttaagtcccgca1020acgagcgcaacccttgttctgtgttgccagcatgcccttcggggtgatggggactcacag1080gagactgccggggtcaactcggaggaaggtggggacgacgtcaagtcatcatgcccctta1140tgtcttgggctgcacacgtgctacaatggccggtacaaagagctgcgaagccgtgaggcg1200gagcgaatctcaaaaagccggtctcagttcggattggggtctgcaactcgaccccatgaa1260gtcggagttgctagtaatcgcagatcagcattgctgcggtgaatacgttcCCgggCCttg1320tacacaccgcccgtcacgtcacgaaagtcggtaacacccgaagccggtggcccaacccct1380tgtgggagggagct 1394。
3.權(quán)利要求1所述的鏈霉菌株(Sti^ptomycessp.)ZX01，其特征在于，該鏈霉菌株 (Streptomyces sp. )ZX01的種子培養(yǎng)條件為在^°C、120rpm條件下，放置在培養(yǎng)基培養(yǎng)36h ；所述培養(yǎng)基組成為葡萄糖10g/L、 酵母膏10g/L，氯化鈉2. 5g/L，七水硫酸鎂0. 5g/L，三水磷酸氫二鉀0. 5g/L，pH值7. 2。
4.權(quán)利要求1或2所述的鏈霉菌株(Sti^ptomycessp.)ZX01用于制備抗植物病毒病制劑的應(yīng)用。
5.如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的鏈霉菌株(Sti^ptomycessp.)ZX01 經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)后的發(fā)酵液直接用于制備抗植物病毒病制劑，所述的發(fā)酵培養(yǎng)條件為在^°C、180rpm條件下培養(yǎng)7d ；培養(yǎng)基組成為小米10g/L、葡萄糖10g/L、碳酸鈣 2g/L、氯化鈉2. 5g/L、蛋白胨:3g/L, pH 值 7. 2 7. 4。
全文摘要
本發(fā)明涉及一株鏈霉菌(Streptomyces sp.)ZX01，該菌株通過(guò)發(fā)酵培養(yǎng)得到的發(fā)酵產(chǎn)物可用于防治煙草花葉病毒病(Tobacco mosaic virus，TMV)、黃瓜花葉病毒病(Cucumber mosaic virus，CMV)和小麥黃矮病毒病(Barley yellowdwarf virus，BYDV)等多種植物病毒病。該菌株已于2011年5月24日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏號(hào)為CGMCC No.4893。
文檔編號(hào)A01P1/00GK102337239SQ20111030173
公開(kāi)日2012年2月1日 申請(qǐng)日期2011年10月8日 優(yōu)先權(quán)日2011年10月8日
發(fā)明者馮俊濤, 周大偉, 張興, 景炳年, 韓立榮 申請(qǐng)人:楊凌農(nóng)科大無(wú)公害農(nóng)藥研究服務(wù)中心