專(zhuān)利名稱(chēng)：：一種抗重金屬植物促生菌制劑及其施用方法一種抗重金屬植物促生菌制劑及其施用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于重金屬污染環(huán)境的生物修復(fù)
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種具有對(duì)重金屬鉛、鎘、銅、鋅抗性的植物促生菌制劑及其施用方法。
背景技術(shù)：
：隨著重金屬礦產(chǎn)資源和化石燃料的大規(guī)模開(kāi)發(fā)利用，工業(yè)"三廢"的大量排放以及含重金屬農(nóng)藥、化肥的大量使用對(duì)生態(tài)環(huán)境造成了嚴(yán)重污染。傳統(tǒng)重金屬污染的治理方法多為物理、化學(xué)法。如化學(xué)^t淀法、離子交換法、反滲透法萃取法、活性炭吸附法等，它們各有優(yōu)點(diǎn)，但存在著投資大、能耗高、易造成二次污染、操作困難等缺點(diǎn)。重金屬污染土壤的植物修復(fù)指利用植物尤其是一些重金屬超積累植物吸收污染土壤中的重金屬離子，從而達(dá)到修復(fù)目的的一種重金屬污染土壤的修復(fù)新途徑。與傳統(tǒng)重金屬污染修復(fù)方法相比，植物修復(fù)法具有環(huán)境友好、不產(chǎn)生二次污染、修復(fù)成本低廉等優(yōu)點(diǎn)，使得植物修復(fù)法成為重金屬污染修復(fù)研究的熱點(diǎn)，但是植物修復(fù)也存在著修復(fù)植物生物量小、生長(zhǎng)緩慢、單位面積上植物對(duì)重金屬的吸收和積累總量少等瓶頸問(wèn)題。近年來(lái)一些研究表明，自然界存在著大量定殖在植物根際，對(duì)植物生長(zhǎng)具有促進(jìn)作用的植物促生菌(Plantgrowthpromotingbacteria,PGPB)，這些植物根際微生物能夠產(chǎn)生植物生長(zhǎng)激素、固氮、溶解無(wú)機(jī)磷等營(yíng)養(yǎng)元素，具有提高共生植物生物量，降解有害有機(jī)殘留，拮抗植物病源菌入侵等功能。因此，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)和重金屬?gòu)?fù)合污染環(huán)境的治理中，開(kāi)發(fā)具有多種重金屬抗性，能夠提高植物抗逆性和促進(jìn)植物生長(zhǎng)的優(yōu)良植物促生菌劑及其科學(xué)簡(jiǎn)便施用方法，對(duì)于重金屬污染土壤的生物修復(fù)效率的提高具有重要意義。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明目的是克服現(xiàn)有技術(shù)存在的上述不足，提供一種具有重金屬鉛、鎘、銅、鋅抗性的植物促生菌制劑以及該制劑的施用方法。本發(fā)明提供的具有重金屬鉛、鎘、銅、鋅抗性的植物促生菌株D54,已于2009年8月12日保藏于"中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心"(北京市朝陽(yáng)區(qū)大屯路3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所)，分類(lèi)命名為伯克霍爾德氏菌B"/^oWm'a取D54，其保藏號(hào)為CGMCCNo.3223。本發(fā)明同時(shí)提供了一種含有以上所述菌株的抗重金屬植物促生菌制劑，所述的促生菌制劑的液體制劑中含有以上所述菌株的有效活菌數(shù)量為10-20億個(gè)/毫升，其冷凍干燥制得的固體制劑中有效活菌數(shù)量為不少于10億個(gè)/克。本發(fā)明提供的植物促生菌制劑的施用方法是，將上述植物促生菌制劑的液體制劑稀釋100倍(即每L水添加上述液體制劑10ml)浸泡植物種子l-2小時(shí)后播種，發(fā)芽2-3周后再澆灌1-2次上述稀釋100倍的液體制劑。固體制劑的施用方法是，將有效活菌數(shù)量達(dá)到10億個(gè)/克的粉末狀固體制劑，溶于水中(每10g上述固體制劑加水lL)，后續(xù)步驟與上述液體制劑施用方法相同。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和積極效果本發(fā)明菌株具有多種重金屬(鉛、鎘、銅、鋅)抗性且能產(chǎn)生植物生長(zhǎng)激素，固氮，溶解難溶性無(wú)機(jī)磷，活化難溶重金屬鹽(CdC03)的特性，可以顯著提高接種植物生物量，提高植物抗逆性，與重金屬修復(fù)植物聯(lián)用可提高污染土壤修復(fù)效率，且環(huán)境友好無(wú)"二次污染"。其具體功能如下-1、促進(jìn)接種植物營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收本發(fā)明所采用的伯克霍爾德氏菌(5"r狄oWer/a平D54)所特有的土壤難溶磷肥，鉀肥活化作用能夠促進(jìn)共生宿主植物對(duì)無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)元素的吸收利用從而促進(jìn)其生長(zhǎng)。本發(fā)明所用伯克霍爾德氏菌(^r狄oWm'fl平D54)能夠在無(wú)氮阿須貝氏(Ashby)培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，證明其具有一定自生固氮能力，通過(guò)與共生植物的聯(lián)合固氮作用可以有效提供植物生長(zhǎng)所需氮素促進(jìn)植物生長(zhǎng)發(fā)育。2、重金屬污染土壤植物的生理調(diào)節(jié)功能本發(fā)明菌劑中所采用的伯克霍爾德氏菌(5w狄oWm'a平D54)能夠產(chǎn)生植物生長(zhǎng)激素口引哚乙酸(IAA)，分泌嗜鐵素(Siderophore)和l-Aminocyclopropanecarboxylicacid(ACC)脫氨酶。其中，植物生長(zhǎng)激素吲哚乙酸(IAA)能夠促進(jìn)植物生長(zhǎng)組織分生，促進(jìn)植物生根等生理活性。鐵元素對(duì)于植物生長(zhǎng)發(fā)育至關(guān)重要，然而環(huán)境中可供植物利用的有效態(tài)鐵元素含量極低，加上重金屬污染環(huán)境土壤pH值變化使得鐵元素大量流失，造成經(jīng)常導(dǎo)致植物生長(zhǎng)鐵缺乏癥。在植物根際微環(huán)境中，伯克霍爾德氏菌(B"r狄oWm'a5p.D54)分泌的嗜鐵素(Siderophore)對(duì)鐵元素具有很強(qiáng)的螯合作用，能夠?qū)⑼寥乐械蔫F元素富集在其周?chē)?，解決植物生長(zhǎng)對(duì)鐵元素的需求。在重金屬污染環(huán)境中，重金屬離子的毒害使得植物體內(nèi)乙烯含量升高，可導(dǎo)致植物生長(zhǎng)明顯受到抑制。l-Aminocyclopropanecarboxylicacid(ACC)作為乙烯前體物質(zhì)，由此可看出ACC脫氨酶的活性與植物抗逆性關(guān)系密切，本菌劑中伯克霍爾德氏菌(S"/"狄oW^7'aw.D54)具有較高ACC脫氨酶的活性，在根際共生條件下能夠通過(guò)降低ACC濃度而降低植物體內(nèi)乙烯濃度，從而提高植物在重金屬污染環(huán)境中的抗逆性。3.土壤難溶性重金屬鹽的活化作用在土壤中重金屬多以難溶碳酸鹽、磷酸鹽和氫氧化物形態(tài)存在，其中以碳酸鹽為主，在pH較高的堿性土壤中尤為明顯。本菌劑所采用的伯克霍爾德氏菌(5"r狄oWw/"平D54)對(duì)難溶性重金屬鹽如CdC03(常溫下溶解度為3.932x10—5)活化效果明顯。在植物根際環(huán)境中經(jīng)過(guò)本發(fā)明菌劑活化難溶重金屬鹽產(chǎn)生的較高濃度的有效態(tài)重金屬離子能夠使得重金屬修復(fù)植物重金屬吸收量顯著增加，從而提高重金屬污染修復(fù)效率。4.植物病原菌的生物防治作用農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中使用過(guò)量的有機(jī)農(nóng)藥(含大量多氯聯(lián)苯和滴滴涕等)造成環(huán)境中難降解的持久性有機(jī)污染物(pops)濃度急劇升高，進(jìn)而對(duì)生態(tài)環(huán)境造成嚴(yán)重的危害，研究證實(shí)通過(guò)食物鏈有機(jī)污染物已經(jīng)危害到了我們?nèi)祟?lèi)的健康。相比于有機(jī)農(nóng)藥，生物防治劑具有對(duì)人、畜、農(nóng)作物安全和自然環(huán)境友好等特點(diǎn)。本發(fā)明菌劑中所采用的伯克霍爾德氏菌(5MrMoWen'fl乎D54)能夠有效的拮抗數(shù)種農(nóng)作物致病真菌辣椒疫霉菌(iV^啤M^"ai戸/cO、番琉灰霉菌(fio吵"sc/werca)、棉花枯萎菌、甜瓜蔓枯病菌(Df辦we〃a6^0"z'"e)。有利于提高作物抵抗病蟲(chóng)害能力。具體實(shí)施方式實(shí)施例l:本發(fā)明所用中心菌株的分離與鑒定本發(fā)明所用菌株是從廣東重金屬?gòu)?fù)合污染土壤分離篩選得到的一株具有多種重金屬(鉛、鎘、銅、鋅)抗性且能產(chǎn)生植物生長(zhǎng)激素，固氮，溶解難溶性無(wú)機(jī)磷，活化難溶重金屬鹽(CdC03)的菌株D54，經(jīng)16SrDNA序列分析法結(jié)合傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)以及生理生化特征描述確定菌株D54歸屬于p-變形菌綱(Betaproteobacteria)伯克霍爾德氏菌屬(^^/wWm'a平D54)，2009年8月12日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，其保藏號(hào)為CGMCCNo.3223。接種該菌制成的菌劑可以顯著提高接種植物生物量，提高植物抗病蟲(chóng)害和抗逆性。將其與重金屬修復(fù)植物聯(lián)用可有效提高污染土壤修復(fù)效率。其主要生物學(xué)性狀如下菌落圓形，呈黃白色，不透明。G—、短棒狀、無(wú)芽孢，氧化酶、半乳糖甙酶、脲酶、葡萄糖甙酶、色氨酸酶陽(yáng)性，精氨酸雙水解酶、蛋白酶、硝酸鹽還原酶陰性。能同化葡萄糖、阿拉伯糖、檸檬酸鹽、蘋(píng)果酸，苯乙酸，不能同化己二酸。實(shí)施例2:本發(fā)明提供的植物促生菌制劑的制備將上述伯克霍爾德氏菌(B^yt;/oWm'"平D54)在含有滅菌液體改良SMN培養(yǎng)基(葡萄糖，1.0g;蔗糖，1.0g;乙酸鈉，1.0g;檸檬酸鈉，1.0g;蘋(píng)果酸，1.0g;(NH4)2S04，2.0g;KH2P04，2.0g;K2HP04，0.2g;MgS04，0.2g;CaCl2，0.1g;FeS04，5mg;H3B03,2mg;ZnS04，5mg;Na2Mo04，lmg;CoS04，1mg;CuS04，1mg;NiS04，1mg;pH7.2士0.02)28。C，150r/min，培養(yǎng)4天，添加滅菌草炭(21%v/v)、腐殖質(zhì)(20%v/v)，粘附劑甲基纖維素(10%v/v)濃縮制得不同規(guī)格的液體制劑密封包裝，有效活菌數(shù)量達(dá)到10-20億個(gè)/毫升。本發(fā)明所采用粉末狀固體制劑，由卜.沭的液休制劑，經(jīng)低溫冷凍干燥制得，其特征在于，制成品體積小，質(zhì)量輕，便于運(yùn)輸保存，其有效活菌數(shù)量達(dá)到10億個(gè)/克。實(shí)施例3:本發(fā)明提供的植物促生菌制劑的施用方法在作物種子播種前，將實(shí)施例2制備的有效活菌數(shù)量達(dá)到10-20億個(gè)/毫升的上述液體制劑稀釋100倍(10ml/L，即每L水添加上述液體制劑10ml)后浸種1-2小時(shí)，待種子發(fā)芽2-3周后再澆灌上述稀釋100倍的液體制劑1-2次，有效提高活菌侵染幾率。冷凍干燥制劑的施用方法是，將有效活菌數(shù)量達(dá)到10億個(gè)/克的粉末狀固體制劑，溶于水中(每10g上述固體制劑加水1L)，后續(xù)步驟與上述液體制劑施用方法相同。將表面消毒(10%NaClO，l小時(shí))黑麥草、油菜、紫花苜蓿種子各100粒放置于加雙層濾紙的無(wú)菌培養(yǎng)皿中(培養(yǎng)皿直徑9cm)，加入6ml經(jīng)過(guò)100倍稀釋的實(shí)施例2所述液體制劑或由固體制劑加水后所得液體，并按照本實(shí)施例所述方法施加后，接菌組紫花苜蓿，黑麥草，黔油發(fā)芽率分別為，83±5%，85±6%，72±4%;無(wú)菌對(duì)照組發(fā)芽率分別為68±3%，82±3%，70±3%,接菌組發(fā)芽率高于無(wú)菌對(duì)照組，且紫花苜蓿接菌發(fā)芽率顯著高于對(duì)照組。(p<0.05)實(shí)施例4:菌株D54對(duì)重金屬鉛、鎘、銅、鋅抗性采用梯度平板法確定菌株D54對(duì)鉛、鎘、銅、鋅抗性。配制300毫升固體LB培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)入500ml三角瓶中，121°C，30min滅菌后按相應(yīng)濃度精確加入單獨(dú)滅菌的已知一系列濃度重金屬鉛、鎘、銅、鋅溶液(鉛50-850mg/L，鎘20-1600mg/L，銅20-200mg/L，鋅50-2600mg/L)，充分震蕩混勻。待培養(yǎng)基冷卻至50'C時(shí)倒平板。待制作好的平板冷卻至室溫后接1%(v/v)對(duì)數(shù)期菌液(活菌數(shù)量約lxl()S個(gè)/ml)，28'C，3-7d，觀察生長(zhǎng)情況并記錄。結(jié)果如表l所示，菌株D54具有較高的重金屬鉛、鎘、銅、鋅抗性，其中對(duì)Cd^、Pb2+、Cu2+、Zn2+最低抑制濃度(MIC)分別達(dá)到1500mg/L、800mg/L、150mg/L和2500mg/L，如表1所示。表1菌株D54對(duì)重金屬鉛、鎘、銅、鋅抗性<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>說(shuō)明"+"表示生長(zhǎng)；"-"表示不生長(zhǎng)實(shí)施例5:菌株D54對(duì)難溶性重金屬鹽CdC03的活化作用配制改良液體SMN培養(yǎng)基(甘露醇，lO.Og;(NH)2S04，2.0;蛋白胨，2.0g;KH2P04，0.5g;MgS(V7H20，0.5g;;NaCl，0.5g;FeS04-7H20，0.05g;酵母浸粉，l.Og，純水1000ml;pH7.0±0.02)，加入0.5%(v/v)的CdC03,充分混勻后取分裝于250ml三角瓶中，每瓶100ml。將上述培養(yǎng)基12rC，30min滅菌后，待培養(yǎng)基冷卻至室溫，接入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期種子培養(yǎng)液lml(D54活菌數(shù)量約lxl()S個(gè)/ml)。30°C，200rmp培養(yǎng)，不同時(shí)間點(diǎn)取樣檢測(cè)培養(yǎng)液中游離態(tài)CcP濃度變化情況。結(jié)果表明菌株D54對(duì)難溶性重金屬鹽CdC03具有較強(qiáng)的活化作用。如表2所示，30h培養(yǎng)后培養(yǎng)液中水溶性C(P濃度達(dá)到281.92mg/L是不接菌對(duì)照(11.432mg/L)的24.66倍，如表2所示。表2菌株D54對(duì)難溶性重金屬鹽CdC03的活化作用<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>實(shí)施例6:菌株D54對(duì)難溶性無(wú)機(jī)磷酸鹽Ca3(P04)2的活化作用在Pikovskaya，sagar培養(yǎng)基((NH4)2S04,0.5;NaCl，0.2;MgSO4.7H2O,0.1;MnS04,0.002;FeS047H20,0.002;KC1，0.2;yeastextract,0.5;glucose10.0;Ca3(P04)2，5.0;pH7.0±0.02)中加入0.5g/L難溶磷酸鈣沉淀，滅菌后，接種1%的對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)菌液，設(shè)置不加菌和加菌不加重金屬鹽及空白對(duì)照，30°C，200r/min，72h后用無(wú)菌槍頭吸取10ml培養(yǎng)液8000rmp，20min，4'C離心上清液過(guò)0.22^im濾膜鉬藍(lán)法測(cè)定培養(yǎng)液中有效磷濃度。結(jié)果表明接種了D54的培養(yǎng)液中有效磷濃度為157.92mg/L，而無(wú)菌對(duì)照只有4.06mg/L，是無(wú)菌對(duì)照的38.9倍。實(shí)施例7:植物促生菌D54發(fā)酵液植物促生性狀在以L-色氨酸為唯一N源的液體SMN培養(yǎng)基發(fā)酵72h后，采用檢測(cè)535nm處IAA吸光值法檢測(cè)發(fā)酵液中的吲哚乙酸(IAA)含量；在無(wú)鐵LB液體培養(yǎng)基發(fā)酵72h后采用平板定性，480nm檢測(cè)培養(yǎng)液中2，3-dihydroxybenzoicacid濃度對(duì)菌株產(chǎn)嗜鐵素(Siderophore)進(jìn)行定量；在以ACC為唯一N源的液體SM培養(yǎng)基中按體積比接入"/。對(duì)數(shù)期菌株D54(活菌數(shù)量約lxl()8個(gè)/ml)，30°C，200r/min，72h后540nm檢測(cè)培養(yǎng)液中a-ketobutyrate濃度。結(jié)果如表3所示。表3植物促生菌D54發(fā)酵液植物促生性狀圉株^^^^生長(zhǎng)素(IAAmg/L)嗜鐵素(Siderophoremg/L)ACC脫氨酶Mmola-KB/mg/hD540.6786±0.0620.2248±0.0235.38±0.013實(shí)施例8:菌株D54對(duì)植物病原真菌的抑制作用將菌株D54接種l。/。(v/v)到改良液體SMN培養(yǎng)基1000ml，30°C,200r/min，72h后10000rmp，20min，4。C離心上清液過(guò)0.22pm濾膜，稀釋后按照l(shuí):5比例均勻混入滅菌后冷卻到50。C左右的固體土豆汁(PDA)培養(yǎng)基，然后用瓊脂塊法測(cè)定菌株D54發(fā)酵液對(duì)f共試植物病原真菌的皿內(nèi)拮抗性。供試植物致病菌為辣椒疫霉菌(尸^to/^Aoracfl戸/c/)、番茄灰霉菌(5o/r;;toa'wewfl)、棉花枯萎菌、甜瓜蔓枯病菌("辦《^//"6own'ae)。結(jié)果如表4所示，菌株D54對(duì)上述四種供試致病真菌具有顯著的抑制效果。表4菌株D54對(duì)四種植物病原真—菌的拮抗作用菌落直徑^^k辣椒疫霉菌番茄灰霉菌棉花枯萎菌甜瓜蔓枯病菌CK3.46+0.192.81+0.581.77+0.053.92+0.20D54發(fā)酵液2.25±0.140.96±0.120.62±0.021.66±0.09實(shí)施例9:重金屬脅迫下本制劑對(duì)植物種子萌發(fā)和根系發(fā)育的促進(jìn)作用將表面消毒(10%NaClO，l小時(shí))黑麥草、油菜、紫花苜蓿種子各100粒放置于加7雙層濾紙的無(wú)菌培養(yǎng)皿中(培養(yǎng)皿直徑9cm)，加入3ml經(jīng)過(guò)100倍稀釋的本發(fā)明液體制劑，然后注入121°C，30min滅菌的CcP濃度為60mg/L的CdCb溶液，使得培養(yǎng)皿內(nèi)Cd2+終濃度達(dá)到30mg/L,設(shè)無(wú)菌水對(duì)照組，各處理三次重復(fù)。在人工氣候箱中黑暗條件下，25°C，10d后采用根系掃描分析系統(tǒng)分析接菌與對(duì)照組黑麥草、油菜、紫花苜蓿根長(zhǎng)情況如表5所示，按照上述方法施加本菌劑后對(duì)三種作物根長(zhǎng)，根面積，莖長(zhǎng)，莖面積測(cè)量結(jié)果表明與無(wú)菌對(duì)照組相比，黑麥草(牧草)根長(zhǎng)，莖長(zhǎng)及莖面積顯著提高；黔油(油料作物)根長(zhǎng)和根面積顯著提高；紫花苜蓿莖面積顯著提高。表5重金屬脅迫下本制劑對(duì)植物種子萌發(fā)和根系發(fā)育的促進(jìn)作用<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>說(shuō)明"*"表示差異達(dá)到顯著水-(/K0.05)實(shí)施例10:重金屬?gòu)?fù)合污染土壤施用本制劑對(duì)重金屬超積累植物促生作用選用重金屬?gòu)?fù)合污染土壤(有效態(tài)鉛126.15mg/kg;鎘9.32mg/kg;鋅630.27mg/kg),盆栽法種植重金屬超積累植物東南景天，并按照實(shí)施例3所述方法添加實(shí)施例2方法所制的制劑，人工氣候室(16h光照，8h黑夜，濕度60)，90天培養(yǎng)。收獲分開(kāi)地上部分與根部稱(chēng)量鮮重，然后105°C殺青，75°C持續(xù)干燥72h，后稱(chēng)量地上部與根部干重。結(jié)果如表6所示，施用了本制劑的植株地上部與根部生物量分別是未施加菌劑對(duì)照的2.7倍和1.97倍。表6重金屬?gòu)?fù)合污染土壤施用本制劑對(duì)重金屬超積累植物東南景天促生作用<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>權(quán)利要求1、一株具有重金屬鉛、鎘、銅、鋅抗性的植物促生菌，現(xiàn)保藏于“中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心”，分類(lèi)命名為伯克霍爾德氏菌Burkholderiasp.D54，其保藏號(hào)為CGMCCNo.3223。2、一種含有權(quán)利要求1所述菌株的抗重金屬植物促生菌制劑，其特征在于所述的促生菌制劑的液體制劑中含權(quán)利要求1所述菌株的有效活菌數(shù)量為10-20億個(gè)/毫升，其冷凍干燥制得的固體制劑中有效活菌數(shù)量為不少于10億個(gè)/克。3、一種權(quán)利要求2所述植物促生菌制劑的施用方法，其特征在于，將權(quán)利要求2所述植物促生菌制劑的液體制劑稀釋100倍浸泡植物種子1-2小時(shí)后播種，發(fā)芽2-3周后再澆灌1-2次上述稀釋100倍的液體制劑。全文摘要一種抗重金屬植物促生菌及其制劑施用方法。屬重金屬污染環(huán)境生物修復(fù)領(lǐng)域。本發(fā)明菌株D54保藏號(hào)為CGMCCNo.3223，屬伯克霍爾德氏菌屬(Burkholderiasp.)，對(duì)多種重金屬具有較高抗性，其中對(duì)Pb²⁺、Cd²⁺、Cu²⁺、Zn²⁺抗性分別達(dá)到800mg/L、1500mg/L、150mg/L和2500mg/L。另外，菌株D54具有產(chǎn)生植物生長(zhǎng)激素(IAA)、產(chǎn)生1-氨基-1-羧基環(huán)丙烷(ACC)脫氨酶、分泌嗜鐵素(Siderophore)、溶解無(wú)機(jī)磷酸鹽、固氮等植物促生作用及拮抗植物病源菌入侵等生物防治功能。能顯著提高施用植物生物量，提高其抗病抗逆性。本液體制劑有效活菌數(shù)量達(dá)到10-20億個(gè)/毫升，固體制劑有效活菌數(shù)量達(dá)10億個(gè)/克。液體制劑稀釋100倍后浸種1-2小時(shí)，待種子發(fā)芽2-3周后澆灌稀釋后液體制劑1-2次(10ml/kg)，能有效提高植物活菌侵染幾率。文檔編號(hào)A01N63/02GK101671636SQ200910070348公開(kāi)日2010年3月17日申請(qǐng)日期2009年9月4日優(yōu)先權(quán)日2009年9月4日發(fā)明者丁永禎,唐世榮,宋正國(guó),居學(xué)海,趙玉杰,郭軍康申請(qǐng)人:農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所