專利名稱：樺褐孔菌深層培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其是一種樺褐孔菌深層培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
樺褐孔菌Inonotus obliquus(Fr.)Pilat是十分珍稀而又名貴的藥用真菌，又名白樺茸、 樺癌褐孔菌、斜生纖孔，在國(guó)外也稱Inonotusobliquus, Fuscoporia oblique, Chaga， Black birchtinder(tuchwood)， birch mushroom,"力""7于夕少，，等，在分類學(xué)上屬擔(dān)子菌亞門(mén)
(Basidiomycotina)、層菌綱(Hymenomycetes)、非褶菌目(Aphyllophorales)、多孑L菌禾斗
(Polyporaceae)、揭臣卜孑L菌屬(Poriahypobrunnea Petch)。
樺褐孔菌(Inonotus obliquus(Fr.)Pilat)野生品種只有在活的樺樹(shù)上生長(zhǎng)10—15年才具 有很高的藥用價(jià)值，大致分布于北半球北緯45° 50°的地區(qū)，如北美、芬蘭、波蘭、 俄羅斯、中國(guó)(黑龍江、吉林省長(zhǎng)白山地區(qū))以及日本(北海道)等國(guó)家。樺褐孔菌在俄 羅斯、北歐、日本、美國(guó)和韓國(guó)被廣泛用來(lái)治療惡性腫瘤、糖尿病、心血管疾病、肝病和 艾滋病。
由于野生樺褐孔菌資源十分有限，遠(yuǎn)遠(yuǎn)滿足不了日益增長(zhǎng)的市場(chǎng)需求；而且，固體栽 培存在周期長(zhǎng)、污染機(jī)率高、易受周圍環(huán)境限制等缺點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足之處，提供一種栽培周期短、產(chǎn)量高、生產(chǎn)成 本低的樺褐孔菌深層培養(yǎng)方法。
本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的
一種樺褐孔菌深層培養(yǎng)方法，包括(l)斜面培養(yǎng)；(2)—級(jí)、二級(jí)、三級(jí)種子培養(yǎng)；(3)
深層發(fā)酵培養(yǎng)，其中深層發(fā)酵培養(yǎng)的條件如下
① 發(fā)酵培養(yǎng)基組成玉米糖化液0.1-10%、可溶性淀粉0.1-10%、酵母浸粉0.1-5%、
蛋白胨0.1-5%、 KH2P04 0.01-1%， MgS04 0.01-1%;
② 發(fā)酵周期為3-15d;
③ 培養(yǎng)溫度為20-35°C;
④ 培養(yǎng)基初始pH為4-8;
⑤ 搖床轉(zhuǎn)速為50-200r/min;
⑥ 接種量為5-20%;
⑦ 裝液量為1/10-4/5。
而且，所述斜面培養(yǎng)的培養(yǎng)基為PDA固體培養(yǎng)基。
而且，所述一級(jí)、二級(jí)、三級(jí)種子培養(yǎng)基的構(gòu)成均為葡萄糖2%、蛋白胨0.4%、磷酸二氫鉀0.2%、硫酸鎂0.05%， pH自然，各物質(zhì)單位均為m/V。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和有益效果為
1、 本發(fā)明運(yùn)用發(fā)酵工程技術(shù)生產(chǎn)樺褐孔菌，通過(guò)一級(jí)、二級(jí)、三級(jí)種子培養(yǎng)以及深 層發(fā)酵得到大量繁殖的菌株，彌補(bǔ)了自然菌產(chǎn)量不足的缺陷，具有顯著地經(jīng)濟(jì)意義，同時(shí) 發(fā)酵在無(wú)菌條件下進(jìn)行，有效避免了菌種被污染，為制備樺褐孔菌提供有利條件。
2、 本發(fā)明確定了樺褐孔菌深層培養(yǎng)的條件，為進(jìn)一步確定樺褐孔菌產(chǎn)胞外多糖的最
佳條件提供基礎(chǔ)，為研究和開(kāi)發(fā)樺褐孔菌資源，提供充足的藥用或醫(yī)用原材料具有很大的 現(xiàn)實(shí)意義。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步說(shuō)明，下述實(shí)施例是說(shuō)明性的，不是限定性的，不 能以下述實(shí)施例來(lái)限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。
實(shí)施例1:
本實(shí)施例中，以樺褐孔菌的最佳培養(yǎng)條件為主 一種樺褐孔菌深層培養(yǎng)方法，其培養(yǎng)的步驟是
(1) 斜面培養(yǎng)取斜面種子于PDA固體培養(yǎng)基上28'C恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)6d。
(2) —級(jí)、二級(jí)、三級(jí)種子培養(yǎng)將斜面培養(yǎng)基上菌絲刮下接入一級(jí)培養(yǎng)基中，靜置
4h，然后置于140r/min的恒溫調(diào)速搖瓶柜中振蕩培養(yǎng)7d，接入二級(jí)培養(yǎng)基中，同樣條件 培養(yǎng)4d，最后接入三級(jí)培養(yǎng)基中，同樣條件培養(yǎng)ld，即可用于深層發(fā)酵。
其中 一級(jí)、二級(jí)、三級(jí)種子培養(yǎng)基均采用通用的藥用真菌培養(yǎng)基，成分為(m/V): 葡萄糖2%、蛋白胨0.4%、磷酸二氫鉀0.2%、硫酸鎂0.05%， pH自然(一般為5.5)的 液體培養(yǎng)基。
(3) 深層發(fā)酵培養(yǎng)，條件如下
培養(yǎng)基為玉米糖化液2.76%、可溶性淀粉1.9%、酵母浸粉0.75%、蛋白胨0.95%、 KH2P04 0.2%， MgS04 0.05%;菌絲體生物量最佳積累時(shí)間為6d;最佳培養(yǎng)溫度為28 °C;培養(yǎng)基最佳初始pH為5;確定搖床的最佳轉(zhuǎn)速為130r/min;接種量為10%;裝液量 為每個(gè)250mL的三角瓶裝70mL培養(yǎng)基。
實(shí)施例2:
本實(shí)施例中，以樺褐孔菌胞外多糖的最佳培養(yǎng)條件為主-
一種樺褐孔菌深層培養(yǎng)方法，其培養(yǎng)的步驟是
(1) 斜面培養(yǎng)取斜面種子于PDA固體培養(yǎng)基上2『C恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)6d。
(2) —級(jí)、二級(jí)、三級(jí)種子培養(yǎng)將斜面培養(yǎng)基上菌絲刮下接入一級(jí)培養(yǎng)基中，靜置 4h，然后置于140r/min的恒溫調(diào)速搖瓶柜中振蕩培養(yǎng)7d，接入二級(jí)培養(yǎng)基中，同樣條件 培養(yǎng)4d，最后接入三級(jí)培養(yǎng)基中，同樣條件培養(yǎng)ld，即可用于發(fā)酵。
其中 一級(jí)、二級(jí)、三級(jí)種子培養(yǎng)基均采用通用的藥用真菌培養(yǎng)基，成分為(m/V): 葡萄糖2%、蛋白胨0.4%、磷酸二氫鉀0.2%、硫酸鎂0.05%， pH(pH5.5)自然的液體培養(yǎng)基。
(3)深層發(fā)酵條件，條件如下
培養(yǎng)基玉米糖化液2.1%、可溶性淀粉2.23%、酵母浸粉0.51%、蛋白胨0.41%、 KH2P04 0.2%， MgS04 0.05%;胞外多糖最佳積累時(shí)間為7d;最佳培養(yǎng)溫度為28。C; 培養(yǎng)基最佳初始pH為6;確定搖床的最佳轉(zhuǎn)速為130r/min;接種量為10%;裝液量為每 個(gè)250mL的三角瓶裝70mL培養(yǎng)基。
權(quán)利要求
1、一種樺褐孔菌深層培養(yǎng)方法，包括(1)斜面培養(yǎng)；(2)一級(jí)、二級(jí)、三級(jí)種子培養(yǎng)；(3)深層發(fā)酵培養(yǎng)，其特征在于深層發(fā)酵培養(yǎng)的條件如下①發(fā)酵培養(yǎng)基組成玉米糖化液0.1-10％、可溶性淀粉0.1-10％、酵母浸粉0.1-5％、蛋白胨0.1-5％、KH2PO4 0.01-1％，MgSO4 0.01-1％；②發(fā)酵周期為3-15d；③培養(yǎng)溫度為20-35℃；④培養(yǎng)基初始pH為4-8；⑤搖床轉(zhuǎn)速為50-200r/min；⑥接種量為5-20％；⑦裝液量為1/10-4/5。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的樺褐孔菌深層培養(yǎng)方法，其特征在于所述斜面培養(yǎng)的培 養(yǎng)基為PDA固體培養(yǎng)基。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的樺褐孔菌深層培養(yǎng)方法，其特征在于所述一級(jí)、二級(jí)、 三級(jí)種子培養(yǎng)基的構(gòu)成均為葡萄糖2%、蛋白胨0.4%、磷酸二氫鉀0.2%、硫酸鎂0.05%， pH自然，各物質(zhì)單位均為m/V。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種樺褐孔菌深層培養(yǎng)方法，包括(1)斜面培養(yǎng)；(2)一級(jí)、二級(jí)、三級(jí)種子培養(yǎng)；(3)深層發(fā)酵培養(yǎng)，其中深層發(fā)酵培養(yǎng)的條件如下①發(fā)酵培養(yǎng)基組成玉米糖化液0.1-10％、可溶性淀粉0.1-10％、酵母浸粉0.1-5％、蛋白胨0.1-5％、KH₂PO₄ 0.01-1％，MgSO₄ 0.01-1％；②發(fā)酵周期為3-15d；③培養(yǎng)溫度為20-35℃；④培養(yǎng)基初始pH為4-8；⑤搖床轉(zhuǎn)速為50-200r/min；⑥接種量為5-20％；⑦裝液量為1/10-4/5。本發(fā)明運(yùn)用發(fā)酵工程技術(shù)生產(chǎn)樺褐孔菌，通過(guò)一級(jí)、二級(jí)、三級(jí)種子培養(yǎng)以及深層發(fā)酵得到大量繁殖的菌株，彌補(bǔ)了自然菌產(chǎn)量不足的缺陷，具有顯著的經(jīng)濟(jì)意義，同時(shí)發(fā)酵在無(wú)菌條件下進(jìn)行，有效避免了菌種被污染，為制備樺褐孔菌提供有利條件。
文檔編號(hào)A01G1/04GK101622939SQ20091007002
公開(kāi)日2010年1月13日 申請(qǐng)日期2009年8月3日 優(yōu)先權(quán)日2009年8月3日
發(fā)明者史佳寧, 張澤生, 浩 王 申請(qǐng)人:天津科技大學(xué)