亚洲成年人黄色一级片,日本香港三级亚洲三级,黄色成人小视频,国产青草视频,国产一区二区久久精品,91在线免费公开视频,成年轻人网站色直接看

用于癌癥治療的新組合物和方法

文檔序號(hào):335161閱讀:1382來(lái)源:國(guó)知局
專利名稱:用于癌癥治療的新組合物和方法
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及應(yīng)用Stat3通路抑制劑和癌干細(xì)胞抑制劑組合治療癌癥及其他紊亂 的組合物和方法。
背景技術(shù)
癌干細(xì)胞(CSC)近年來(lái),一種新的腫瘤發(fā)生模型得到了廣泛認(rèn)可,其中提出假說(shuō),在全部腫瘤物質(zhì) 中僅一小部分負(fù)責(zé)腫瘤內(nèi)的致瘤活性,而老的模型或者說(shuō)克隆遺傳模型卻假定所有突變的 腫瘤細(xì)胞均等同地貢獻(xiàn)于此致瘤活性。根據(jù)新模型,這小部分腫瘤發(fā)生細(xì)胞是具有干細(xì)胞 樣性能的轉(zhuǎn)化細(xì)胞,并稱為“癌干細(xì)胞”(CSC)。在20世紀(jì)90年代,Bonnet和Dick首先在 體內(nèi)證明了急性髓性白血病(AML)中CSC的存在。他們的數(shù)據(jù)表明,僅小亞群的人AML細(xì)胞 在移植到免疫缺陷小鼠中時(shí)具有轉(zhuǎn)移AML的能力,而其他AML細(xì)胞不能夠誘發(fā)白血病。后 來(lái),證明這些CSC具有與原始造血干細(xì)胞相同的細(xì)胞標(biāo)志⑶347⑶38_[1]。從那以后,研究 人員已經(jīng)確鑿地在多種類型的腫瘤(包括腦、乳腺、皮膚、前列腺等的腫瘤)中發(fā)現(xiàn)CSC。腫瘤發(fā)生的CSC模型能夠解釋為什么為了確立腫瘤移植物,需要將幾萬(wàn)或幾十萬(wàn) 的腫瘤細(xì)胞注射到試驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)。在人AML中,這些CSC細(xì)胞的頻率低于萬(wàn)分之一 [2]。盡 管CSC在一個(gè)給定的腫瘤細(xì)胞群體中是稀少的,但有增加的證據(jù)表明此類細(xì)胞存在于幾乎 所有腫瘤類型中。然而,由于癌細(xì)胞系是從特異地適應(yīng)于在組織培養(yǎng)中生長(zhǎng)的癌細(xì)胞亞群 中選擇的,所以癌細(xì)胞系的生物學(xué)及功能特性可能經(jīng)歷顯著的變化。因此,并非所有的癌細(xì) 胞系都含有CSC。癌干細(xì)胞與正常干細(xì)胞享有許多相似的性狀。例如,CSC具有自我更新能力,即產(chǎn) 生其他的腫瘤發(fā)生癌干細(xì)胞的能力,一般速率比其他分裂腫瘤細(xì)胞低,但非有限次數(shù)的分 裂。CSC還具有分化成多種細(xì)胞類型的能力,這就解釋了如下組織學(xué)現(xiàn)象一許多腫瘤不 僅含有多種對(duì)宿主器官而言天然的細(xì)胞類型,而且腫瘤轉(zhuǎn)移中常常保持異質(zhì)性。已經(jīng)證明 CSC根本性地負(fù)責(zé)腫瘤發(fā)生、癌癥轉(zhuǎn)移和癌癥復(fù)發(fā)。CSC也稱為腫瘤起始細(xì)胞、癌干細(xì)胞樣 細(xì)胞、干細(xì)胞樣癌細(xì)胞、高致瘤性細(xì)胞、腫瘤干細(xì)胞、實(shí)體瘤干細(xì)胞或超級(jí)惡性細(xì)胞。癌干細(xì)胞的存在對(duì)于未來(lái)的癌癥治療和療法具有根本性的意義。目前癌癥治療的 功效在檢驗(yàn)的初始階段往往以腫瘤大小的縮減來(lái)衡量,即去掉的腫瘤物質(zhì)的量。由于CSC 構(gòu)成腫瘤的一個(gè)極小部分,且具有與其更為分化的子代顯著不同的生物學(xué)特征,所以對(duì)腫 瘤質(zhì)量的測(cè)量可能不一定能夠選擇出特異地作用于此干細(xì)胞的藥物。事實(shí)上,癌干細(xì)胞呈 現(xiàn)出抵抗放療(XRT),并且對(duì)化療劑和靶向藥物也表現(xiàn)出頑固性[3-5]。正常的體干細(xì)胞天 然地對(duì)化療劑具有耐藥性——他們具有將藥物泵出的多種泵(例如MDR)以及有效的DNA修復(fù)機(jī)制。而且,他們還具有緩慢的細(xì)胞更新速率,而化療劑靶向快速?gòu)?fù)制的細(xì)胞。癌干細(xì)胞 為正常干細(xì)胞的突變對(duì)應(yīng)物,可能也具有類似的機(jī)制使之幸免于藥物治療和放射治療。換 言之,傳統(tǒng)的化療法和放療法殺死不能再生腫瘤的分化了的或分化中的細(xì)胞,這些細(xì)胞構(gòu) 成腫瘤的大部分。另一方面,產(chǎn)生所述分化了的或分化中的細(xì)胞的癌干細(xì)胞群可能保持原 樣并引起疾病復(fù)發(fā)。傳統(tǒng)抗癌療法的另一危險(xiǎn)在于所述治療(例如化療)可能導(dǎo)致僅僅留 下耐受化療的癌干細(xì)胞,由此使得繼發(fā)的復(fù)發(fā)腫瘤很可能也是化療耐受的。由于存活的癌干細(xì)胞能夠使腫瘤重新建殖故而造成復(fù)發(fā),所以在抗癌療法中納入 抗CSC策略是絕對(duì)必要的(見(jiàn)


圖1)。這就類似于斬草需除根[6]。通過(guò)選擇性地靶向癌干 細(xì)胞,可以治療患有侵襲性不可切除腫瘤和頑固性或復(fù)發(fā)性癌癥的患者,以及防止腫瘤轉(zhuǎn) 移和復(fù)發(fā)。因此,開(kāi)發(fā)靶向癌干細(xì)胞的特異性療法為癌癥患者、尤其是轉(zhuǎn)移性癌癥患者的存 活和改善生活質(zhì)量提供了希望。開(kāi)啟這股未被利用的潛力的關(guān)鍵在于鑒定和驗(yàn)證對(duì)于癌干 細(xì)胞自我更新和存活具有選擇的重要性的通路。雖然在過(guò)去已闡述過(guò)位于胚胎干細(xì)胞或成 體干細(xì)胞的自我更新或癌癥的腫瘤發(fā)生背后的多個(gè)通路,但是尚未鑒定和驗(yàn)證用于癌干細(xì) 胞自我更新和存活的通路。也有許多鑒定和分離癌干細(xì)胞的研究。所用的方法主要是利用CSC外排藥物的能 力,或是基于癌干細(xì)胞相關(guān)表面標(biāo)志的表達(dá)。例如,由于CSC對(duì)許多化療劑具有耐藥性,那么CSC幾乎普遍地過(guò)表達(dá)藥物外排泵 如ABCG2(BCRP-1) [7-11]及其他ATP結(jié)合盒(ABC)超家族成員[12,13],就不足為奇。從 而,也采用最初用來(lái)富集造血和白血病干細(xì)胞的側(cè)群(side population, SP)技術(shù)來(lái)鑒定和 分離CSC[14]。這種技術(shù)首先由Goodell等人描述,利用熒光染料如Hoechst 33342的差異 性ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白依賴性外排來(lái)確定和分離富含CSC的細(xì)胞群[10,15]。具體而言,通過(guò)用戊 脈安(verapamil)阻斷藥物外排來(lái)揭示該SP,此時(shí)染料不再能夠泵出該SP。研究人員還集中于尋找使癌干細(xì)胞區(qū)別于大部分腫瘤的特異性標(biāo)志。最常表達(dá)的 CSC表面標(biāo)志包括⑶44、⑶133和⑶166 [16-24]。通過(guò)主要基于這些表面標(biāo)志的差異表達(dá) 來(lái)分選腫瘤細(xì)胞,已經(jīng)導(dǎo)致了迄今描述的高致瘤性CSC的大多數(shù)。因此,對(duì)于從癌細(xì)胞系和 大塊腫瘤組織中鑒定和分離癌干細(xì)胞而言,這些表面標(biāo)志是被充分驗(yàn)證了的。Stat3 通路哺乳動(dòng)物或人癌細(xì)胞中有許多不同的遺傳缺陷,且有許多已被研究以尋求治愈癌 癥。例如,已經(jīng)發(fā)現(xiàn)p53腫瘤阻遏蛋白在半數(shù)以上的人類癌癥中是缺陷型的或者全然無(wú)存。 STAT (信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄活化因子)蛋白家族是潛伏的轉(zhuǎn)錄因子,響應(yīng)細(xì)胞因子/生長(zhǎng)因子而 被激活以促進(jìn)增殖、存活及其他生物過(guò)程。其中,Stat3通過(guò)由生長(zhǎng)因子受體酪氨酸激酶、 Janus激酶或Src家族激酶等介導(dǎo)的關(guān)鍵酪氨酸殘基磷酸化而激活。這些激酶包括但不限 于 EGFR、JAK、Abl、KDR、c_Met、Src 和 Her2[25]。一旦酪氨酸磷酸化,Stat3 形成同源二聚 體,轉(zhuǎn)位至細(xì)胞核,結(jié)合靶基因啟動(dòng)子區(qū)中的特異性DNA效應(yīng)元件,誘導(dǎo)基因表達(dá)[26](見(jiàn) 圖2)。在正常細(xì)胞中,Stat3激活是瞬時(shí)的,受到嚴(yán)密的調(diào)控,持續(xù)30分鐘至數(shù)小時(shí)。然 而,發(fā)現(xiàn)Stat3在廣泛種類的人類癌癥(包括所有主要的癌癥以及一些血液腫瘤)中異常 激活。Stat3在癌癥進(jìn)展中起多種作用。作為一種有力的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子,它靶向參與許多重 要細(xì)胞功能的基因,例如Bcl-Xl、c-Myc、細(xì)胞周期蛋白Dl、Vegf、MMP-2和生存素[27-32]。它也是腫瘤免疫監(jiān)視和免疫細(xì)胞募集的關(guān)鍵負(fù)調(diào)控因子[33-35]。通過(guò)反義、siRNA、顯性失活形式的Stat3和/或阻斷酪氨酸激酶,消除Stat3信 號(hào)傳遞,在體外和/或體內(nèi)可以抑制某些癌細(xì)胞系或腫瘤[26,28,36,37]。但是尚未經(jīng)驗(yàn) 性地提供Stat3和癌干細(xì)胞功能之間的清楚關(guān)聯(lián)。研究人員也尚未發(fā)現(xiàn)有效的Stat3通路 抑制劑以開(kāi)發(fā)針對(duì)已經(jīng)發(fā)現(xiàn)含有癌干細(xì)胞的癌癥的潛在治療應(yīng)用。如早先所說(shuō)明的那樣, 最近已經(jīng)證明癌干細(xì)胞(CSC)根本性地負(fù)責(zé)腫瘤發(fā)生、癌癥轉(zhuǎn)移和癌癥復(fù)發(fā),故而在設(shè)計(jì) 靶向已知具有這些細(xì)胞的腫瘤的任何治愈性療法時(shí),不論CSC可能占該腫瘤物質(zhì)的多小比 例,都應(yīng)將其考慮在內(nèi)。在除癌癥以外的疾病中,已經(jīng)在許多自身免疫疾病和炎性疾病中證明了多種細(xì)胞 因子如白介素6(IL6)對(duì)Stat3的過(guò)度激活[38]。最近已經(jīng)揭示,Stat3通路還通過(guò)其在產(chǎn) 生TH17T細(xì)胞應(yīng)答中的基本作用而促進(jìn)病理性免疫反應(yīng)[39]。另外,已經(jīng)發(fā)現(xiàn)IL6-Stat3 通路介導(dǎo)的炎癥是動(dòng)脈粥樣硬化、外周血管疾病、冠狀動(dòng)脈疾病、高血壓、骨質(zhì)疏松癥、2型 糖尿病和癡呆的共同病因。發(fā)明概述本發(fā)明部分地基于本文提供的經(jīng)驗(yàn)性證據(jù),即,Stat3在廣譜癌癥中對(duì)癌干細(xì)胞 (CSC)的存活和自我更新能力均起著關(guān)鍵作用。本發(fā)明還提供數(shù)據(jù)確認(rèn)了某些化合物可以 起Stat3通路抑制劑作用,并且它們?cè)隗w外和體內(nèi)均有效地抑制CSC。從而,本發(fā)明的第一方面提供了治療患有異常Stat3通路活性相關(guān)紊亂的受試 者的方法,該方法包括步驟(a)向受試者施用第一量的第一藥劑,以抑制至少一些異常 Stat3通路活性;和(b)向受試者施用第二量的、包含信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制劑的第二藥劑。第一藥劑可以通過(guò)至少一種如下的作用抑制Stat3通路活性基本上抑制 Stat3蛋白的磷酸化、基本上抑制Stat3蛋白的二聚化、基本上抑制Stat3蛋白的核轉(zhuǎn)位 (translocation)、基本上抑制Stat3蛋白的DNA結(jié)合活性、和基本上抑制Stat3蛋白的轉(zhuǎn) 錄活性。在一個(gè)實(shí)施方案中,第一藥劑選自2-(1_羥乙基)_萘并[2,3_b]呋喃-4,9-二 酮、2-乙?;?7-氯-萘并[2,3-b]呋喃-4,9-二酮、2-乙?;鵢7_氟-萘并[2,3_b]呋 喃_4,9-二酮、2-乙?;敛2,3-b]呋喃_4,9-二酮、2-乙基-萘并[2,3_b]呋喃-4, 9_ 二酮、其對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、鹽或溶劑化物(下文稱作“本發(fā)明的化 合物”)。能夠通過(guò)本發(fā)明第一方面的方法治療的非癌癥紊亂包括但不限于自身免疫性疾 病、炎性疾病、炎性腸病、關(guān)節(jié)炎、哮喘、和系統(tǒng)性紅斑狼瘡、自身免疫性脫髓鞘疾病、阿爾茨 海默病、中風(fēng)、缺血再灌注損傷和多發(fā)性硬化癥。能夠通過(guò)該方法治療的癌癥包括但不限 于乳腺癌、頭頸部癌、肺癌、卵巢癌、胰腺癌、結(jié)直腸癌、前列腺癌、腎細(xì)胞癌、黑素瘤、肝細(xì) 胞癌、宮頸癌、肉瘤、腦瘤、胃癌、多發(fā)性骨髓瘤、白血病和淋巴瘤。已知這些非癌和癌的紊亂 與異常的Stat3通路活性相關(guān)。在一個(gè)特征中,第二藥劑是靶向劑,其可為生長(zhǎng)因子受體靶向劑、激酶靶向劑或血 管生成抑制劑。第二方面,本發(fā)明提供了治療患有異常Stat3通路活性相關(guān)癌癥的受試者的方 法,所述方法包括步驟(a)向受試者施用第一量的第一藥劑,以抑制至少一些異常Stat3
13通路活性;和(b)向受試者施用第二量的第二抗癌藥劑。有關(guān)第一藥劑的特征可類似于就本發(fā)明第一方面描述的那些特征,而第二抗癌藥 劑可為細(xì)胞毒性劑或化療劑。在一個(gè)實(shí)施方案中,第二藥劑是用于至少一種癌癥的標(biāo)準(zhǔn)一 線治療。在一個(gè)特征中,該抗癌藥劑是DNA損傷劑、抗有絲分裂劑和/或抗代謝物。例如, DNA損傷劑可為烷化劑、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑或DNA嵌入劑。在一個(gè)實(shí)施方案中,第二藥劑是 卡鉬、多柔比星、吉西他濱、多烯紫衫醇(docetaxel)或依托泊苷之一。能夠通過(guò)本發(fā)明第二方面的方法治療的癌癥包括已知與異常Stat3通路活性相 關(guān)的那些,在上文已經(jīng)列出,不在此重復(fù)。由于癌干細(xì)胞一般抵抗放療和傳統(tǒng)化療,因此靶向癌干細(xì)胞的藥物在與其他抗癌 療法組合應(yīng)用時(shí)應(yīng)具有協(xié)同效應(yīng)。因此,根據(jù)本發(fā)明的第三方面,治療受試者癌癥的方法包 括步驟(a)向受試者施用第一量的第一抗癌藥劑,以抑制癌干細(xì)胞(CSC)群;和(b)向受 試者施用第二量的第二抗癌藥劑,以抑制多數(shù)的普通癌細(xì)胞。在多個(gè)實(shí)施方案中,該方法的步驟(a)抑制至少一種CSC自我更新,和/或殺死 至少一種CSC。在一實(shí)施方案中,第一量的第一抗癌藥劑也殺死多數(shù)的普通癌細(xì)胞。在一 實(shí)施方案中,步驟(a)抑制癌干細(xì)胞中的至少一些Stat3通路活性。第一抗癌藥劑可以與 根據(jù)本發(fā)明第一方面的方法中的第一藥劑享有相同的特征和特點(diǎn),因?yàn)楸景l(fā)明已經(jīng)提供了 Stat3通路抑制劑能夠有效抑制CSC的證據(jù)。共享的特征可以包括,例如,本文所述的第一 抗癌藥劑能夠靶向的多個(gè)Stat3通路步驟。在多個(gè)實(shí)施方案中,第一抗癌藥劑可為小分子 Stat3抑制劑、針對(duì)Stat3的RNAi藥劑、針對(duì)Stat3的反義藥劑、肽模擬物Stat3抑制劑、或 G四聯(lián)體寡脫氧核苷酸Stat3抑制劑。能夠通過(guò)該方法治療的癌癥優(yōu)選是已知或確認(rèn)含有CSC的那些,包括但不限于 乳腺癌、頭頸部癌、肺癌、卵巢癌、胰腺癌、多發(fā)性骨髓瘤、結(jié)直腸癌、前列腺癌、黑素瘤、卡波 西肉瘤、尤文氏肉瘤、肝癌、胃癌、成神經(jīng)管細(xì)胞瘤、腦瘤和白血病。根據(jù)本發(fā)明第三方面的方法中的“第二抗癌藥劑”可與根據(jù)本發(fā)明第二方面的方 法中的“第二抗癌藥劑”相同,故所有共享的特征不在此重復(fù)。在一個(gè)實(shí)施方案中,第二藥劑是用于至少一種癌癥的標(biāo)準(zhǔn)一線治療。第二藥劑可 為細(xì)胞毒性劑。在一個(gè)特征中,該抗癌藥劑為DNA損傷劑、抗有絲分裂劑和/或抗代謝物。 例如,DNA損傷劑可為烷化劑、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑或DNA嵌入劑。在一個(gè)實(shí)施方案中,第二 藥劑是卡鉬、多柔比星、吉西他濱、多烯紫衫醇或依托泊苷之一。根據(jù)本發(fā)明的第四方面,提供了治療受試者癌癥的方法,包括步驟(a)向受試者 施用第一量的第一癌干細(xì)胞抑制劑,以抑制Stat3通路活性;和(b)向受試者施用第二量的 第二癌干細(xì)胞抑制劑,以抑制不同通路的活性。在一實(shí)施方案中,第二癌干細(xì)胞抑制劑是拉帕替尼(lapatinib)。在一些實(shí)施方案 中,第二量的第二抗癌藥劑本身對(duì)癌干細(xì)胞群不是治療有效的。能夠通過(guò)此方法治療的癌 癥優(yōu)選是已知或確認(rèn)含有CSC的那些,上文列出了一些實(shí)例。在多個(gè)實(shí)施方案中,癌癥是轉(zhuǎn) 移性的、標(biāo)準(zhǔn)一線癌癥治療頑固性的或復(fù)發(fā)性的。根據(jù)本發(fā)明的第五方面,提供了治療受試者癌癥的方法,包括步驟(a)向受試者 施用治療有效量的第一抗癌藥劑,其選自下組化合物2-(1_羥乙基)_萘并[2,3_b]呋
14喃-4,9- 二酮、2-乙?;?7-氯-萘并[2,3-b]呋喃-4,9- 二酮、2-乙?;?7-氟-萘并 [2,3-b]呋喃-4,9-二酮、2-乙酰基萘并[2,3-b]呋喃-4,9-二酮、2-乙基-萘并[2, 3-b] 呋喃-4,9-二酮、其可藥用鹽或溶劑化物;和(b)施用并非選自該相同組的第二抗癌藥劑。第二抗癌藥劑可為在本發(fā)明其他方面描述的任何藥劑,包括任何細(xì)胞毒性劑或化 療劑及任何靶向劑。第六方面,本發(fā)明提供了藥物組合物,包含治療有效量的第一抗癌藥劑,其選自下 組化合物2-(1_羥乙基)-萘并[2,3-b]呋喃-4,9-二酮、2-乙酰基-7-氯-萘并[2,3-b] 呋喃-4,9- 二酮、2-乙?;?7-氟-萘并[2,3-b]呋喃-4,9- 二酮、2-乙?;敛2,3-b] 呋喃_4,9-二酮、2-乙基-萘并[2,3-b]呋喃_4,9-二酮、其可藥用鹽或溶劑化物;和第二 抗癌治療,其選自細(xì)胞毒性劑、靶向劑、放療劑、生物藥(biologic agent)、激素藥、HDAC 抑制劑、視黃醇類藥(retinoidagent)、檢查點(diǎn)激活物(checkpoint activator)、蛋白酶體 ?齊11、_齊11 (adjuvant agent)(adjunctive agent)。在一實(shí)施方案中,組合物還包含可藥用的賦形劑、載體或稀釋劑。本發(fā)明的其他方面(包括與本文所述方法相關(guān)的所有組合物和試劑盒)和實(shí)施方 案在如下發(fā)明詳述中闡釋,或?qū)?huì)因其變得顯而易見(jiàn)。附圖的簡(jiǎn)短說(shuō)明
圖1圖示了癌干細(xì)胞特異性癌癥療法和傳統(tǒng)癌癥療法之間的差異。圖2顯示了癌中的Stat3通路。圖3A顯示了 Stat3在Hoechst側(cè)群細(xì)胞中組成型地激活。圖3B顯示了 Stat3在CD133+細(xì)胞中組成型地激活。圖4A和4B顯示了癌干細(xì)胞中的Stat3敲低(knockdown)誘導(dǎo)凋亡。圖5顯示了癌干細(xì)胞中的Stat3敲低抑制癌干細(xì)胞球體形成。圖6顯示了化合物401抑制Stat3的轉(zhuǎn)錄激活活性。圖7A顯示了化合物401抑制核提取物中Stat3的DNA結(jié)合活性。圖7B顯示了化合物401、416和418抑制核提取物中Stat3的DNA結(jié)合活性。圖8A顯示了化合物401抑制異種移植腫瘤組織中Stat3的DNA結(jié)合活性。圖8B顯示了化合物401抑制異種移植腫瘤組織中Stat3的下游效應(yīng)子的表達(dá)水 平。圖9A顯示了 Hoechst側(cè)群的分選和分析。圖9B顯示了 Hoechst側(cè)群對(duì)化合物401與非側(cè)群一樣敏感。
圖10A顯示了化合物401使Hoechst側(cè)群細(xì)胞凋亡。
圖10B顯示了化合物401使⑶133+細(xì)胞凋亡。
圖11顯示了化合物401阻斷⑶44high球體形成。
圖12顯示了體內(nèi)化合物401處理降低異種移植腫瘤細(xì)胞的球體形成。
圖13顯示了化合物401在ISMS模型中抑制轉(zhuǎn)移。
圖14顯示了化合物401在A549人肺癌細(xì)胞中與索拉非尼(sorafenib)具有協(xié)同 效應(yīng)。
圖15顯示了化合物401在A549人肺癌細(xì)胞中與厄洛替尼(erlotinib)具有協(xié)同效應(yīng)。
圖16顯示了化合物401在A549人肺癌細(xì)胞中與拉帕替尼具有協(xié)同效應(yīng)。
圖17顯示了化合物401在A549人肺癌細(xì)胞中與索坦(sutent)具有協(xié)同效應(yīng)。
圖18顯示了化合物401在Paca-2人胰腺異種移植模型中與吉西他濱具有協(xié)同效應(yīng)。發(fā)明詳述如本文所用,單數(shù)形式的“一”、“一個(gè)”和“該”包括復(fù)數(shù)引述,除非上下文另有清 楚說(shuō)明。例如,術(shù)語(yǔ)“細(xì)胞”包括多個(gè)細(xì)胞,包括其混合物。如本文所用的術(shù)語(yǔ)“分離的”或“純化的”是指物質(zhì)實(shí)質(zhì)上或基本上不含在其天然 狀態(tài)下與其正常相伴的成分。純度和均質(zhì)性一般可以利用分析化學(xué)技術(shù)來(lái)確定,例如聚丙 烯酰胺凝膠電泳或高效液相色譜。如本文所用,術(shù)語(yǔ)“癌干細(xì)胞”和“CSC”可互換。CSC是哺乳動(dòng)物的,并且在優(yōu)選的 實(shí)施方案中,這些CSC是人類來(lái)源的,但它們并非旨在限于此。癌干細(xì)胞定義為、并在功能 上表征為源于實(shí)體瘤的細(xì)胞群,其(1)具有廣泛的增殖能力;2)能夠進(jìn)行不對(duì)稱細(xì)胞分 裂,生成一種或多種類型具有減小的增殖或發(fā)育潛力的分化子代;和(3)能夠進(jìn)行對(duì)稱細(xì) 胞分裂用于自我更新或自我維持。其他表征CSC的常見(jiàn)方法包括形態(tài)學(xué)和檢查細(xì)胞表面標(biāo) 志、轉(zhuǎn)錄譜、和藥物反應(yīng)。CSC在研究文獻(xiàn)中也稱作腫瘤/癌癥起始細(xì)胞、癌干細(xì)胞樣細(xì)胞、 干細(xì)胞樣癌細(xì)胞、高致瘤細(xì)胞、腫瘤干細(xì)胞、實(shí)體瘤干細(xì)胞、藥物存活細(xì)胞(DSC)、耐藥性細(xì) 胞(DRC)或超級(jí)惡性細(xì)胞。如本文所用,術(shù)語(yǔ)“自我更新”是指癌干細(xì)胞產(chǎn)生新的致瘤性癌干細(xì)胞以補(bǔ)充或增 加其數(shù)量的能力。如本文所用,術(shù)語(yǔ)"癌癥"和"癌變的"是指或者描述的是,哺乳動(dòng)物中一群細(xì) 胞以失控的細(xì)胞生長(zhǎng)為特征的生理狀況。如本文所用的“癌細(xì)胞”和“腫瘤細(xì)胞”是指源于 腫瘤的總細(xì)胞群,既包括構(gòu)成腫瘤細(xì)胞群體的大部分的非腫瘤發(fā)生性細(xì)胞,又包括腫瘤發(fā) 生性干細(xì)胞(癌干細(xì)胞)。癌癥的實(shí)例包括但不限于癌(carcinoma)、淋巴瘤、胚細(xì)胞瘤、 肉瘤和白血病。此類癌癥更具體的實(shí)例包括鱗狀細(xì)胞癌、小細(xì)胞肺癌、非小細(xì)胞肺癌、肺腺 癌、肺鱗癌、腹膜癌、肝細(xì)胞癌、胃腸癌、胰腺癌、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、宮頸癌、卵巢癌、肝癌、膀胱 癌、肝瘤、乳腺癌、結(jié)腸癌、結(jié)直腸癌、子宮內(nèi)膜癌或子宮癌、涎腺癌、腎癌、肝癌、前列腺癌、 外陰癌、甲狀腺癌、肝癌和各種類型的頭頸部癌。如本文所用的“腫瘤”是指由于過(guò)度細(xì)胞生長(zhǎng)或增值而產(chǎn)生的任何組織塊,或良性 (非癌變)或惡性的(癌變),包括癌前病變。如本文所用的“轉(zhuǎn)移”(metastasis)是指癌癥由起源位點(diǎn)擴(kuò)散或轉(zhuǎn)移到身體其他 區(qū)域、在新位置上形成類似的癌性病變的過(guò)程?!稗D(zhuǎn)移性”或“轉(zhuǎn)移”細(xì)胞是喪失與鄰近細(xì)胞 的粘附接觸、并借助血流或淋巴由疾病的原發(fā)部位遷移而浸潤(rùn)?quán)徑眢w結(jié)構(gòu)的細(xì)胞。如本文所用,術(shù)語(yǔ)“受試者”是指任何將作為特定治療的接受者的動(dòng)物(例如,哺 乳動(dòng)物),包括但不限于人、非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物、嚙齒類動(dòng)物等。一般,術(shù)語(yǔ)“受試者”和“患者” 就人類受試者而言在本文可互換使用。如本文所用的諸如“治療”或“緩解”等術(shù)語(yǔ)既指1)治愈、減緩、減輕所診斷病情 (condition)或紊亂的癥狀,和/或中斷其進(jìn)展的治療性措施,又指2)防止或減緩所靶向病 情或紊亂的發(fā)展的防范性或預(yù)防性措施。因而,需要治療的包括已經(jīng)患有紊亂的那些;易于患有紊亂的那些;以及欲預(yù)防紊亂的那些。如果患者顯示出如下一種或多種狀況,則該受試 者被本發(fā)明的方法成功地“治療”癌細(xì)胞數(shù)量的減小或完全不存在癌細(xì)胞;腫瘤大小的減 ?。话┘?xì)胞向周圍器官的浸潤(rùn)、包括癌向軟組織和骨的擴(kuò)散,的抑制或不存在;腫瘤轉(zhuǎn)移的 抑制或不存在;腫瘤生長(zhǎng)的抑制或不存在;與具體癌癥相關(guān)的一種或多種癥狀的減輕;減 小的發(fā)病率和死亡率;和生活質(zhì)量的提高。如本文所用,當(dāng)用在生物活性的語(yǔ)境中時(shí),術(shù)語(yǔ)“抑制”及其語(yǔ)法等同體是指生物 活性的下調(diào),這可以減小或消除所靶向的功能,例如蛋白質(zhì)的生產(chǎn)或分子的磷酸化。在特別 的實(shí)施方案中,抑制可以指所靶向活性的約20%,30%,40%,50%,60%,70%,80%,90% 或95 %的減小。當(dāng)用于紊亂或疾病的語(yǔ)境中時(shí),該術(shù)語(yǔ)是指成功地防止癥狀發(fā)作、緩解癥狀 或消除疾病、病情或紊亂。如本文所用的單數(shù)或復(fù)數(shù)形式的“普通癌細(xì)胞”是指非癌干細(xì)胞的癌細(xì)胞。如本文所用的“組合”療法或治療表示施用至少兩種不同的治療,以處理紊亂、病 情或癥狀,例如癌癥病情。此類組合療法可以包括在施用一種治療之前、期間和/或之后施 用另一種治療。這些治療的施用可以在時(shí)間上分開(kāi)長(zhǎng)達(dá)數(shù)周,但最常見(jiàn)的是48小時(shí)之內(nèi), 且最常見(jiàn)的是24小時(shí)之內(nèi)。如本文所用的術(shù)語(yǔ)"可藥用的賦形劑、載體或稀釋劑"表示可藥用的材料、組合 物或媒介物,例如參與將主題藥物活性劑由一種器官或身體部分?jǐn)y帶或運(yùn)輸至另一器官或 身體部分的液體或固體填充劑、稀釋劑、賦形劑、溶劑或包封材料。就與制劑中的其他成分 相容且對(duì)患者無(wú)害這一意義上,各載體必須是"可接受的"。能夠作為可藥用載體的材料 的一些實(shí)例包括糖,例如乳糖、葡萄糖和蔗糖;淀粉,例如玉米淀粉和馬鈴薯淀粉;纖維素 及其衍生物,例如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素和醋酸纖維素;黃芪膠粉;麥芽;明膠;滑 石;賦形劑,例如可可脂和栓劑蠟;油,例如花生油、棉籽油、紅花油、芝麻油、橄欖油、玉米 油和大豆油;甘醇,例如丙二醇;多元醇,例如甘油、山梨糖醇、甘露醇和聚乙二醇;酯,例如 油酸乙酯和月桂酸乙酯;瓊脂;緩沖劑,例如氫氧化鎂和氫氧化鋁;褐藻酸;無(wú)熱原水;等滲 鹽水;林格液;乙醇;磷酸鹽緩沖液;以及其他在藥學(xué)制劑中采用的無(wú)毒相容物質(zhì)。潤(rùn)濕劑、 乳化劑和潤(rùn)滑劑(例如十二烷基硫酸鈉、硬脂酸鎂和聚環(huán)氧乙烷_(kāi)聚環(huán)氧丙烷共聚物)、以 及著色劑、釋放劑、包衣劑、甜味劑、矯味劑和香料劑、防腐劑和抗氧化劑也可存在于組合物 中。本發(fā)明的化合物可以形成鹽,這也落在本發(fā)明的范圍內(nèi)。本文述及本發(fā)明的化合 物應(yīng)理解為包括述及其鹽,除非另有說(shuō)明。如本文所采用的術(shù)語(yǔ)“鹽”,表示與無(wú)機(jī)和/或有 機(jī)酸和堿形成的酸加成鹽和/或堿加成鹽。另外,當(dāng)本發(fā)明的化合物既含有堿性部分(例 如但不限于吡啶或咪唑)、又含有酸性部分(例如但不限于羧酸)時(shí),可以形成兩性離子 (“內(nèi)鹽”),并包括在如本文所用的術(shù)語(yǔ)“鹽”中。優(yōu)選可藥用的(即,無(wú)毒、生理上可接受 的)鹽,不過(guò)其他鹽也是有用的,例如用于制備期間可能采用的分離或純化步驟中。本發(fā)明 化合物的鹽可以,例如,通過(guò)使化合物I、II或III與一定量(例如等量)的酸或堿在介質(zhì) (例如鹽在其中沉淀的介質(zhì)或在水性介質(zhì))中反應(yīng)并之后凍干而形成。本文也考慮本發(fā)明化合物的溶劑化物。本發(fā)明化合物的溶劑化物包括例如水合 物。靶向Stat3通路
本發(fā)明提供了為Stat3通路活性有效抑制劑的化合物(實(shí)施例2)。由于Stat3通 路是經(jīng)激活可以促進(jìn)增殖、存活和許多其他生物學(xué)過(guò)程的潛伏轉(zhuǎn)錄因子,其牽涉到廣泛種 類的人類癌癥以及非癌癥紊亂,包括許多自身免疫病和炎性疾病(表1)。從而,本發(fā)明第 一方面提供了與異常(例如過(guò)表達(dá)的)Stat3通路活性相關(guān)的紊亂的組合治療。特別地,向 患者受試者施用第一量的第一藥劑以抑制至少一些異常的Stat3通路活性,以及還施用第 二量、包括信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制劑的第二藥劑。在多個(gè)實(shí)施方案中,抑制一些(例如20%、30%、 40%)、大多數(shù)(約50%以上)、或基本上所有(例如60%、70%、80%、90%、95%或100%) 的異常Stat3通路活性。第一量和第二量之一或兩者可為組合應(yīng)用前(即自身針對(duì)紊亂應(yīng) 用時(shí))相應(yīng)藥劑的治療有效量,或者由于組合的突出協(xié)同效應(yīng)而低于該量。第一藥劑可以 靶向Stat3通路中的一個(gè)或多個(gè)步驟。在一個(gè)實(shí)施方案中,第一藥劑是本發(fā)明的化合物。表1.人類疾病中STAT3通路的激活 第二藥劑,即信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制劑,可用來(lái)靶向與第一藥劑所抑制的通路不相同的通 路、相關(guān)的通路或者相同Stat3通路中不同的步驟。通常,當(dāng)組合療法中的兩類藥劑靶向相 同的通路(即使是不同的步驟)時(shí),預(yù)期的協(xié)同作用量是有限的。然而,下文實(shí)施例5提供 的數(shù)據(jù)顯示出在本發(fā)明化合物與推測(cè)靶向相同通路中的其他步驟的第二藥劑(例如酪氨 酸激酶和GFR靶向劑)之間令人驚訝地高的協(xié)同作用量,提示意料不到的抑制機(jī)制在起作
具體地,Stat3通過(guò)由生長(zhǎng)因子受體酪氨酸激酶、Janus激酶或Src家族激酶等介 導(dǎo)的關(guān)鍵酪氨酸殘基磷酸化而激活;一旦酪氨酸磷酸化,Stat3形成同源二聚體,轉(zhuǎn)位至細(xì) 胞核,結(jié)合靶基因啟動(dòng)子區(qū)中的特定DNA效應(yīng)元件,誘導(dǎo)基因表達(dá)。本發(fā)明的實(shí)施例2顯示 了在Stat3通路中,通過(guò)該DNA結(jié)合步驟,本發(fā)明化合物的抑制效應(yīng)是明顯的。而且,由于 此類效應(yīng)見(jiàn)于組成型激活的Stat3,故很可能本發(fā)明的化合物抑制Stat3蛋白的二聚化和/ 或核轉(zhuǎn)位。因此,當(dāng)其與也靶向相同Stat3通路的酪氨酸激酶(TKI)和GFR靶向劑組合時(shí), 觀察到的協(xié)同作用量令人驚訝地高。例如,當(dāng)化合物401與TKI索拉非尼組合時(shí),實(shí)現(xiàn)了來(lái) 自胰腺癌細(xì)胞系的細(xì)胞100%的抑制,而當(dāng)化合物401和索拉非尼單獨(dú)施用時(shí),兩者均僅能 分別實(shí)現(xiàn)相同細(xì)胞系66%的抑制——已知胰腺癌牽涉到Stat3的過(guò)表達(dá)[44]。事實(shí)上,所 有四種與化合物401組合檢驗(yàn)的TKI均顯示出顯著的協(xié)同作用。在本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案 中,組合治療實(shí)現(xiàn)癌細(xì)胞超過(guò)約50%、或70%、或90%的抑制。根據(jù)本發(fā)明第一方面的方法可應(yīng)用于治療癌癥或非癌癥紊亂,優(yōu)選已知與異常 Stat3通路活性相關(guān)的那些。與異常Stat3通路活性相關(guān)的非癌癥紊亂的實(shí)例包括但不 限于自身免疫性疾病、炎性疾病、炎性腸病、關(guān)節(jié)炎、哮喘、和系統(tǒng)性紅斑狼瘡、自身免疫性 脫髓鞘病、阿爾茨海默病、中風(fēng)、缺血再灌注損傷和多發(fā)性硬化癥。與異常Stat3通路活性 相關(guān)的癌癥的實(shí)例包括但不限于乳腺癌、頭頸部癌、肺癌、卵巢癌、胰腺癌、結(jié)直腸癌、前列 腺癌、腎細(xì)胞癌、黑素瘤、肝細(xì)胞癌、宮頸癌、肉瘤、腦瘤、胃癌、多發(fā)性骨髓瘤、白血病和淋巴 瘤。根據(jù)本發(fā)明第一方面的第二藥劑可為靶向劑,例如生長(zhǎng)因子受體靶向劑(見(jiàn)實(shí)施 例5中厄洛替尼(特羅凱)的數(shù)據(jù))、激酶靶向劑(見(jiàn)實(shí)施例5中拉帕替尼、厄洛替尼、舒尼 替尼和索拉非尼的數(shù)據(jù))或血管生成抑制劑(見(jiàn)實(shí)施例5中舒尼替尼和索拉非尼的數(shù)據(jù))。在一個(gè)實(shí)施方案中,第二藥劑是生長(zhǎng)因子受體靶向劑,例如靶向與激酶相關(guān)的生 長(zhǎng)因子受體[例如,表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)或血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體(VEGFR)]的抗體。 例如,靶向劑可為吉非替尼(艾瑞沙)厄洛替尼(特羅凱)、PD153035、西要昔單抗(愛(ài)必 要)、阿瓦斯丁、帕尼單抗、曲妥珠單抗和抗c-Met抗體。在一個(gè)實(shí)施方案中,第二藥劑是激酶靶向劑,其可為激酶抑制劑,例如酪氨酸 激酶抑制劑(TKI)。例如,TKI可為厄洛替尼(erlotinib)(特羅凱(Tarceva))、索坦 (Sutent)(舒尼替尼(sunitinib))、拉帕替尼(lapatinib)、索拉非尼(sorafenib)(多吉美 (nexavar))、凡德他尼(vandetanib)、阿西替尼(axitinib)、伯舒替尼(bosutinib)、西地 尼布(cedivanib)、達(dá)沙替尼(dasatinib)(撲瑞賽(sprycel))、吉非替尼(gefitinib)(艾 瑞沙(irressa))、伊馬替尼(imatinib)(格列衛(wèi)(gleevac))、來(lái)他替尼(lestaurtinib)、和 / 或 ARQ197。在多個(gè)實(shí)施方案中,激酶靶向劑為如下之一吉非替尼(艾瑞沙)、 ZD6474 (AZD6474)、EMD-72000 (馬妥珠單抗(matuzumab))、帕尼單抗(panitumab) (ABX-EGF)、ICR-62、CI-1033 (PD183805)、拉帕替尼(lapatinib)(泰克泊(tykerb))、 AEE788 (吡咯并嘧啶)、EKB-569、EXEL7647/EXEL 0999、厄洛替尼(特羅凱)、伊馬替 尼(格列衛(wèi))、索拉非尼(多吉美)、舒尼替尼(索坦)、達(dá)沙替尼(撲瑞賽)、凡德他 尼(ZACTIMA)、temsirolimus (歟瑞塞爾(torisel))、PTK787 (瓦他拉尼(vatalanib))、帕唑帕尼(pazopanib)、AZD2171、依維莫司(everolimus)、seliciclib、AMG706、阿西 替尼、PD0325901、PKC-412、CEP701、XL880、伯舒替尼、BIBF1120、BIBF1120、尼羅替尼 (nilotinib)、AZD6244、HKI-272、MS-275、BI2536、GX15-070、AZD0530、enzastaurin、 MLN-518 禾口 ARQ197。在一個(gè)實(shí)施方案中,第二藥劑是血管生成抑制劑,其可為如下之一 CM101、 IFN-a、IL-12、血小板因子-4、蘇拉明(suramin)、SU5416、血小板反應(yīng)蛋白、VEGFR拮抗 劑、血管生成抑制性留醇(angiostatic steroids) —肝素、軟骨源性血管生成抑制因子、 基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑、巴馬司他(batimastat)、馬立馬司他(marimastat)、制管張素 (angiostatin)、內(nèi)皮抑素(endostatin)、2_甲氧基雌二醇、替可加蘭(tecogalan)、血小板 反應(yīng)蛋白、a 3抑制劑、利諾胺(linomide)和ADH-1。在相關(guān)的第二方面,本發(fā)明提供了治療異常Stat3通路活性相關(guān)癌癥受試者的方 法,所述方法包括步驟(a)向受試者施用第一量的第一藥劑,以抑制至少一些異常Stat3 通路活性;和(b)向受試者施用第二量的第二抗癌藥劑??捎么朔椒ㄖ委煹陌┌Y包括已知 與異常通路活性相關(guān)(例如至少部分地由之引起)的那些,在上文就本發(fā)明第一方面提供 了其列表。有關(guān)第一藥劑的特征可類似于就本發(fā)明第一方面所描述的那些,而第二抗癌藥劑 可為細(xì)胞毒性劑或化療劑。在一個(gè)實(shí)施方案中,第二藥劑是用于至少一種癌癥的標(biāo)準(zhǔn)一線 治療。在該方法中使用的第一藥劑和第二藥劑的量可為組合應(yīng)用前相應(yīng)藥劑的治療有效量 或者低于該量。在一個(gè)特征中,抗癌藥劑是DNA損傷劑、抗有絲分裂劑、和/或抗代謝物。DNA損傷 劑可為烷化劑、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑、和/或DNA嵌入劑。如實(shí)施例5所示,將本發(fā)明的化合 物401分別與如下每一種一起添加到Paca2胰腺癌細(xì)胞中卡鉬(DNA烷化劑)、依托泊苷 (拓?fù)洚悩?gòu)酶II抑制劑)、多柔比星(DNA嵌入劑)、多烯紫杉醇(抗有絲分裂劑)和健擇 (Gemzar)/吉西他濱(抗代謝物)。每種組合中都發(fā)現(xiàn)了顯著的協(xié)同作用量。例如,當(dāng)化合 物401與健擇/吉西他濱組合時(shí),實(shí)現(xiàn)了胰腺癌細(xì)胞96%的抑制,而當(dāng)單獨(dú)施用時(shí),化合物 401和健擇僅能分別實(shí)現(xiàn)相同細(xì)胞系66%和36%的抑制。烷化劑可為如下之一苯丁酸氮芥(chlorambucil)、環(huán)磷酰胺 (cyclophosphamide)、異環(huán)磷酉先胺(ifosfamide)、氮芥(mechlorethamine)、美法倉(cāng) (melphalan) > ^Bf PgM(uracil mustard) > ^(thiotepa) > S $ (busulfan) > 卡莫司汀(carmustine)、洛莫司汀(lomustine)、鏈佐星(str印tozocin)、卡鉬 (carboplatin)、順鉬(cisplatin)、沙鉬(satraplatin)、奧沙禾lj 鉬(oxaliplatin)、 六甲蜜胺(altretamine)、ET-743、XL119 (becatecarin)、達(dá)卡巴嗪(dacarbazine)、 氮芥(chlormethine)、苯達(dá)莫司汀(bendamustine)、曲憐胺(trofosfamide)、烏 拉莫司汀(uramustine)、福莫司汀(fotemustine)、尼莫司汀(nimustine)、撥尼 莫司汀(prednimustine)、雷莫司汀(ranimustine)、司莫司汀(semustine)、奈 ;ii 白(nedaplatin)、triplatintetranitrate> 1=t" M yHi (mannosulfan)、曲胃 ff 凡(treosulfan)、替莫唑胺(temozolomide)、卡波醌(carboquone)、三亞胺醌 (triaziquone)、三亞乙基蜜胺(triethylenemelamine)、禾口丙卡巴餅(and procarbazin)。拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑可為如下之一多柔比星(doxorubicin,doxil)、柔紅M M (daunorubicin)、表柔比星(epirubicin)、依達(dá)比星(idarubicin)、二尹圣惠二 酮(anthracenedione,諾宵林(novantrone))、米托蒽酉昆(mitoxantrone)、絲裂霉素 C (mitomycin C)、博來(lái)霉素(bleomycin)、放線菌素 D (dactinomycin)、plicatomycin、 伊立替康(irinotecan)(開(kāi)普拓(camptosar))、喜豐對(duì)喊(camptothecin)、魯比替康 (rubitecan)、貝洛替康(belotecan)、依托泊苷(etoposide)、替尼泊苷(teniposide)和拓 撲替康(topotecan)(禾口美新(hycamptin))。DNA嵌入劑可為原黃素(proflavine)、多柔比星(阿霉素(adriamycin))、柔紅霉 素、放線菌素D和沙立度胺(thalidomide)??褂薪z分裂劑可為如下之一紫杉醇(paclitaxel,abraxane)/泰素(taxol)、 多烯紫杉醇(docetaxel)(泰索帝(taxotere))、BMS-275183、聚谷氨酸紫杉醇(xyotax), tocosal、異長(zhǎng)春堿(vinorlebine)、長(zhǎng)春新堿(vincristine)、長(zhǎng)春堿(vinblastine)、長(zhǎng)春 地辛(vindesine)、長(zhǎng)春利定(vinzolidine)、依托泊苷(VP-16)、替尼泊苷(teniposide) (VM-26)、伊沙匹隆(ixab印ilone)、larotaxel、ortataxel、tesetaxel 和伊斯平斯 (ispinesib)。抗代謝物可為如下之一氟脲嘧啶(5-FU)、氟尿苷(5-FUdR)、甲氨蝶呤、希羅 達(dá)(xeloda)、阿侖恩(arranon)、亞葉酸(leucovorin)、羥基脲、硫鳥(niǎo)嘌呤(6-TG)、巰嘌 呤(6-MP)、阿糖胞苷、噴司他丁(pentostatin)、磷酸氟達(dá)拉濱、克拉屈濱(cladribine) (2-CDA)、天冬酰胺酶(asparaginase)、吉西他濱、培美曲塞(pemetrexed)、硼替佐 米(bortezomib)、氨基喋呤(aminopterin)、雷替曲塞(raltitrexed)、氯法拉濱 (clofarabine)、依諾他濱(enocitabine)、sapacitabine 禾口阿扎胞苷(azacitidine)。在一個(gè)實(shí)施方案中,第二抗癌藥劑是如下之一卡鉬、多柔比星、吉西他濱、多烯紫 衫醇和依托泊苷。由于此方法抑制Stat3通路,本文證明該通路對(duì)于CSC的自我更新和存 活均至關(guān)重要(見(jiàn)實(shí)施例1中的數(shù)據(jù)),且已經(jīng)發(fā)現(xiàn)CSC根本性地負(fù)責(zé)藥物耐藥性、腫瘤復(fù) 發(fā)和轉(zhuǎn)移,所以在優(yōu)選的實(shí)施方案中,此方法用來(lái)治療或預(yù)防頑固性癌癥、復(fù)發(fā)性癌癥、和/ 或轉(zhuǎn)移性癌癥??拱┗熀蜕锆煼ǖ母嘤懻撘约斑m宜治療方案的實(shí)例可見(jiàn)于諸如Cancer Chemotherapy and Biotherapy :Principles and Practice,第三片反(2001),Chabner 禾口 Longo 編輯,以及 Handbook of Cancer Chemotherapy,第六版(2003),Skeet 編輯(兩者 均來(lái)自 Lippincott ffilliams&ffilkins, Philadelphia, Pa.,U.S.A.)的書(shū)籍;而且抗癌 治療,尤其是化療的方案可見(jiàn)于諸如美國(guó)癌癥研究所(National Cancer Institute, www. cancer, gov)、美國(guó)臨床月中瘤學(xué)會(huì)(American Society for Clinical Oncology,www, asco. org)禾口美國(guó)綜合癌癥網(wǎng)(National Comprehensive Cancer Network, www, nccn. org)維護(hù) 的那些網(wǎng)站。靶向癌干細(xì)胞本發(fā)明還提供了本發(fā)明的化合物抑制CSC的自我更新并使CSC凋亡的體外和體內(nèi) 數(shù)據(jù)(實(shí)施例3)。此外,本發(fā)明經(jīng)驗(yàn)性地確認(rèn)了本發(fā)明化合物對(duì)轉(zhuǎn)移性癌癥的功效(實(shí)施 例4)。癌癥療法(抗癌療法)的目的在于防止癌細(xì)胞增殖、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移及最終殺死其宿主 生物體,例如人或其他哺乳動(dòng)物。由于細(xì)胞增殖是許多正常細(xì)胞以及癌細(xì)胞的特征,大多數(shù)
22既有的抗癌療法對(duì)正常細(xì)胞也具有毒性作用,特別是對(duì)具有快速周轉(zhuǎn)率的那些正常細(xì)胞, 例如骨髓和粘膜細(xì)胞。因此,有效的癌癥療法需要對(duì)癌細(xì)胞具有顯著的生長(zhǎng)抑制或控制作 用,同時(shí)對(duì)宿主的正常細(xì)胞施加最小的毒性作用。自從20世紀(jì)40年代第一代有效的抗癌化合物進(jìn)入臨床試驗(yàn)以來(lái),癌癥復(fù)發(fā)和藥 物耐藥性依然是癌癥治療中一些最大的問(wèn)題。往往是能夠獲得癥狀的消退,但反應(yīng)屢屢為 部分性的,且僅有很短的持續(xù)時(shí)間,而且復(fù)發(fā)的癌癥傾向于對(duì)原來(lái)的藥物具有耐藥性?,F(xiàn)在 這可通過(guò)癌干細(xì)胞(CSC)的存在來(lái)解釋。如上文所述,全部腫瘤物質(zhì)中的這一小群細(xì)胞能 夠躲避對(duì)其余癌細(xì)胞有效的藥物和放療,這是因?yàn)镃SC大概與正常體干細(xì)胞享有相同類型 的生物機(jī)制,這些細(xì)胞對(duì)大多數(shù)(如果不是所有的話)化療劑具有天然的耐藥性。作為癌 物質(zhì)中腫瘤發(fā)生活性的真正根源,CSC能夠重新支持癌癥的再生,或者如果不予治療的話導(dǎo) 致轉(zhuǎn)移。由于初始治療僅留下藥物耐藥性癌干細(xì)胞,整個(gè)再生的或轉(zhuǎn)移的腫瘤變得對(duì)初始 “有效”療法具有耐受性的幾率顯著增加。目前,抗癌療法由于若干原因而組合應(yīng)用。其一,用兩種或更多種無(wú)交叉抵抗性的 療法治療可以防止腫瘤中抗性克隆的形成。對(duì)一種抗癌藥物(例如鉬抗癌化合物,如順鉬) 的耐藥性往往伴隨著對(duì)同類其他藥物(例如其他鉬化合物)的交叉耐藥性。而且,還存在 著多藥耐藥性,也稱為多效耐藥性,即用一種藥物治療不僅賦予對(duì)該藥物及對(duì)其類別的其 他藥物的耐藥性,而且還賦予對(duì)無(wú)關(guān)藥劑的耐藥性。其二,對(duì)處于不同生長(zhǎng)期的細(xì)胞具有活 性的兩種或更多種療法的組合可以殺死緩慢分裂的細(xì)胞以及活躍分裂的細(xì)胞,和/或募集 細(xì)胞進(jìn)入更為活躍的分裂狀態(tài),使它們對(duì)多種抗癌療法更加敏感。其三,組合治療可以通過(guò) 影響不同的通路或單一生化通路中的不同步驟來(lái)創(chuàng)建生化增強(qiáng)效應(yīng)。這些組合抗癌治療的基本理論沒(méi)有考慮到近來(lái)在確認(rèn)和表征癌干細(xì)胞方面獲得 的進(jìn)展。未能在組合療法中并入CSC特異性療法能夠解釋為何目前的組合療法不能治愈常 見(jiàn)癌癥如轉(zhuǎn)移性結(jié)腸癌和前列腺癌。鑒于本文提供的數(shù)據(jù)確認(rèn)了本發(fā)明化合物針對(duì)CSC的 功效(實(shí)施例3),本發(fā)明能夠設(shè)計(jì)組合CSC靶向劑和靶向普通癌細(xì)胞的其他藥劑的癌癥治 療方法。而且,雖然不希望束縛于特定的理論,本發(fā)明提供了藥物方案取代如下情形,在該 情形中當(dāng)原始的CSC由于僅靶向CSC的單一藥物療法而被耗竭時(shí),一些未被治療或未充分 治療的普通癌細(xì)胞會(huì)回復(fù)成或產(chǎn)生csc(目前這得到一些初步數(shù)據(jù)的支持)。由于癌干細(xì)胞一般抵抗放療和傳統(tǒng)化療,因此靶向癌干細(xì)胞的藥物在與其他抗癌 療法組合應(yīng)用時(shí)應(yīng)具有協(xié)同效應(yīng)。因此,本發(fā)明提供了治療受試者癌癥的方法,其包括步 驟(a)向受試者施用第一量的第一抗癌藥劑,以抑制癌干細(xì)胞群;和(b)向受試者施用第 二量的第二抗癌藥劑,以抑制多數(shù)的普通癌細(xì)胞。在多個(gè)實(shí)施方案中,抑制一些(例如20%、30%、40%)、大多數(shù)(約50%以上)、或 基本上所有(例如60%、70%、80%、90%、95%或100%)的CSC。,第一量和第二量之一或 兩者可為相應(yīng)藥劑在組合應(yīng)用前(即自身針對(duì)癌癥應(yīng)用時(shí))的治療有效量,或者由于組合 的突出協(xié)同效應(yīng)而低于該量。在一個(gè)實(shí)施方案中,第一藥劑是本發(fā)明的化合物,即,2-(1_羥 乙基)_萘并[2,3-b]呋喃-4,9-二酮、2-乙?;?7-氯-萘并[2,3-b]呋喃_4,9_ 二酮、 2-乙?;?7-氟-萘并[2,3-b]呋喃-4,9-二酮、2-乙?;敛2,3-b]呋喃_4,9-二酮、 2-乙基-萘并[2,3-b]呋喃_4,9-二酮、及其可藥用鹽或溶劑化物。此處的“第二抗癌藥劑”可為上述方法中相同的“第二抗癌藥劑”,故所有共享的特
23征不在此重復(fù)。在一個(gè)特征中,第二抗癌藥劑為DNA損傷劑、抗有絲分裂劑和/或抗代謝物。 例如,DNA損傷劑可為烷化劑、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑或DNA嵌入劑。適宜的烷化劑、拓?fù)洚悩?gòu) 酶抑制劑、DNA嵌入劑、抗有絲分裂劑和抗代謝物在上文列出,故不在此重復(fù)。在癌抑制實(shí) 驗(yàn)中在本發(fā)明化合物與每一種上述類別的化療劑組合應(yīng)用的情況下觀察到顯著的協(xié)同作 用(見(jiàn)實(shí)施例5)。在一個(gè)實(shí)施方案中,第二藥劑是卡鉬、多柔比星、吉西他濱、多烯紫衫醇和 依托泊苷之一。在另一特征中,第二抗癌藥劑是靶向劑,例如生長(zhǎng)因子受體靶向劑(見(jiàn)實(shí)施例5中 厄洛替尼(特羅凱)的數(shù)據(jù))、激酶靶向劑(見(jiàn)實(shí)施例5中拉帕替尼、厄洛替尼、舒尼替尼和 索拉非尼的數(shù)據(jù))或血管生成抑制劑(見(jiàn)實(shí)施例5中舒尼替尼和索拉非尼的數(shù)據(jù))。在癌 抑制實(shí)驗(yàn)中在本發(fā)明化合物與每一種上述類別的靶向劑組合應(yīng)用的情況下觀察到顯著的 協(xié)同作用。適宜的生長(zhǎng)因子受體靶向劑、激酶靶向劑(尤其是TKI)、以及血管生成抑制劑在 上文列出,故不在此重復(fù)。由于此方法采用特異性地靶向腫瘤中的CSC細(xì)胞(其根本性地負(fù)責(zé)藥物耐藥性、 腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移)的治療劑,所以在優(yōu)選的實(shí)施方案中,此方法用來(lái)治療或預(yù)防頑固性癌 癥、復(fù)發(fā)性癌癥、和/或轉(zhuǎn)移性癌癥。在以組合治療靶向CSC方面,一個(gè)策略應(yīng)當(dāng)旨在靶向牽涉CSC關(guān)鍵生物學(xué)功能 (如自我更新和存活)的一個(gè)以上通路。為此,本發(fā)明提供了治療受試者癌癥的方法,包括 步驟(a)向受試者施用第一量的第一癌干細(xì)胞抑制劑,以抑制Stat3通路活性;和(b)向 受試者施用第二量的第二癌干細(xì)胞抑制劑,以抑制不同通路的活性。在一實(shí)施方案中,此方 法中第一和/或第二抗癌藥劑的量就其自身對(duì)癌干細(xì)胞群并非治療有效的——但是由于通 過(guò)該組合實(shí)現(xiàn)的顯著協(xié)同作用,較低的量能夠在此方法中應(yīng)用以引發(fā)患者的反應(yīng)。在一個(gè)實(shí)施方案中,第二抗癌干細(xì)胞劑是拉帕替尼(INN)或二甲苯磺酸拉帕替尼 (USAN)——其被FDA于2007年批準(zhǔn)用于患有晚期轉(zhuǎn)移性乳腺癌的患者。拉帕替尼是ATP 競(jìng)爭(zhēng)性表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)和HER2/neu(ErbB-2)雙重酪氨酸激酶抑制劑。其通過(guò)與 EGFR/HER2蛋白激酶結(jié)構(gòu)域的ATP結(jié)合口袋結(jié)合而抑制受體的自磷酸化和激活。下文實(shí)施 例5呈現(xiàn)的數(shù)據(jù)顯示,針對(duì)Paca2胰腺癌細(xì)胞實(shí)現(xiàn)了顯著的協(xié)同作用組合前,化合物401 和拉帕替尼的抑制率分別為32%和27%,而組合后的抑制率暴漲至74%,高于兩抑制率之 和。由于此方法額外關(guān)注CSC(其根本性地負(fù)責(zé)藥物耐藥性、腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移),所以在優(yōu)選 的實(shí)施方案中,此方法用來(lái)治療或預(yù)防頑固性癌癥、復(fù)發(fā)性癌癥、和/或轉(zhuǎn)移性癌癥。本發(fā)明的制劑包括適于口服、經(jīng)鼻、局部(包括口腔和舌下)、直腸、陰道和/或腸 胃外施用的那些。制劑可以便利地以單位劑型的形式提供,并且可以通過(guò)任何藥學(xué)領(lǐng)域公 知的方法制備。可與載體材料混合以生產(chǎn)單劑型的活性成分量將根據(jù)待治療的哺乳動(dòng)物和 具體的施用方式而變??膳c載體材料混合以生產(chǎn)單劑型的活性成分量一般是產(chǎn)生治療效果 的化合物量。一般而言,在100%中,該量的范圍是例如約至約99%活性成分、約5%至 約70%、約10%至約30%。材料和方法生物學(xué)測(cè)定法本發(fā)明的化合物可根據(jù)上文所述的方案進(jìn)行檢查。表2顯示了在該方案中描述的 化合物的列表。
表2 細(xì)胞培養(yǎng)HeLa、DU145、H1299、DLD1、SW480、A549、MCF7、LN18、HCT116、H印G2、 Paca2、Panel、LNcap、FaDu、HT29 和 PC3 細(xì)胞(ATCC, Manassas, VA)在補(bǔ)充有 10%胎牛血 清(FBS) (Gemini Bio-Products,West Sacramento,CA)和 5%青霉素 / 鏈霉素 / 兩性霉素 B(Invitrogen)的 Dulbecco 改良 Eagle 培養(yǎng)基(DMEM) (Invitrogen, Carlsbad, CA)中維持。Hoechst側(cè)群為鑒定和分離側(cè)群(SP)和非SP級(jí)分,用胰蛋白酶和EDTA自培養(yǎng)皿 中取出SW480細(xì)胞,離心沉淀,以磷酸緩沖鹽水(PBS)洗滌,并重懸于37°C含2% FBS和ImM HEPES 的 Dulbecco 改良 Eagle 培養(yǎng)基(DMEM)中。然后用 Hoechst 33342 (Invitrogen)以 5 u g/mL的濃度標(biāo)記細(xì)胞。標(biāo)記的細(xì)胞單獨(dú)或與50 y M戊脈安(verapamil,Sigma-Aldrich, St. Louis) 一起于37°C孵育120分鐘。染色后,使細(xì)胞懸浮于含2 % FBS和ImM HEPES 的Hanks平衡鹽溶液(HBSS ; Invitrogen)中,流經(jīng)40 y m濾網(wǎng),并維持在4 °C直至進(jìn)行流 式細(xì)胞術(shù)分析。Hoechst染料在350nm激發(fā),并利用450DF10 (450/20nm帶通濾光片)和 675LP(675nm長(zhǎng)波通截止濾光片)光學(xué)濾光片在兩個(gè)波長(zhǎng)測(cè)量其熒光。正向和側(cè)向散射光 設(shè)門并不嚴(yán)格,僅排除碎片[15]。以表面標(biāo)志進(jìn)行CSC分離通過(guò)主要基于表面標(biāo)志(例如⑶44或⑶133)的 差異表達(dá)來(lái)分選腫瘤細(xì)胞,已經(jīng)產(chǎn)生了大多數(shù)迄今描述的高致瘤性CSC。CD133基于稍 加修改的Ricci-Vitiani等人的方法[21]分離。⑶133+細(xì)胞通過(guò)熒光激活細(xì)胞分選 (FACS)或基于磁納米顆粒的分離法進(jìn)行分離。簡(jiǎn)言之,對(duì)于基于FACS的細(xì)胞分選,以 CD133/1 (aci33)-pe標(biāo)記io7細(xì)胞/mL ;或?qū)τ诨诖艌?chǎng)的分離,利用EasySep ,生物素 選擇試劑盒(MiltenyiBiotec)按照生產(chǎn)商的建議以CD133/1 (AC133)-生物素(Miltenyi Biotec, Auburn, CA)標(biāo)記107細(xì)胞/mL。非特異性標(biāo)記用提供的FcR阻斷試劑來(lái)阻斷,而抗體 孵育(1 11)在冰上于具有2% FBS和ImM EDTA的PBS中進(jìn)行15分鐘。對(duì)于EasySep 分離進(jìn)行5次洗滌,而在FACS分選前細(xì)胞在400 X g沉淀5分鐘,并重懸至2 X 107mL。⑶44high細(xì)胞根據(jù)稍加修改的Ponti等人所述的方法[81]通過(guò)FACS分離。簡(jiǎn)言 之,經(jīng)胰蛋白酶消化和37°C生長(zhǎng)培養(yǎng)基中30分鐘的細(xì)胞恢復(fù)之后,細(xì)胞在400Xg沉淀,并 于具有2%FBS和ImM EDTA的PBS中重懸至1X106細(xì)胞/mL。細(xì)胞隨之在冰上與1 100 稀釋的 CD44-FITC(BD Biosicences, SanDiego, CA)孵育 15 分鐘?;蛘?,利用 CD24-PE(BDBioscences,San Diego, CA) (1 100)進(jìn)行負(fù)選擇。洗滌3次之后,細(xì)胞重懸至2 X 106/mL, 并流經(jīng)40 y m濾網(wǎng),之后進(jìn)行分選。球體測(cè)定試驗(yàn)一種測(cè)量細(xì)胞群自我更新能力的可靠方法是在不存在血清或貼壁 的情況下被培養(yǎng)為球體的能力。CD44high FaDu或Hoechst側(cè)群癌干細(xì)胞在超低附著板中于 癌干細(xì)胞培養(yǎng)基(DMEM/F12,B27Neurobasal 增補(bǔ)物,20ng/ml EGF, 10ng/ml FGF, 4 u g/ml 胰 島素和0.4%BSA)中培養(yǎng)以允許球體形成。一般,10-14天培養(yǎng)后通過(guò)顯微鏡檢評(píng)估球體 形成,并記錄具有> 50個(gè)細(xì)胞的球體。螢光素酶報(bào)告試驗(yàn)HeLa細(xì)胞用Stat3_螢光素酶(Stat3-Luc)報(bào)告載體 (Panomics, Fremont, CA)禾口海腎螢光素酶(Promega, Madison, WI)通過(guò) Lipofectamine 2000如生產(chǎn)商(Invitrogen)所述進(jìn)行共轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染之后,細(xì)胞在含0. 5% FBS的培養(yǎng)基中 維持24小時(shí)。細(xì)胞隨之用所示的化合物處理30分鐘,之后向培養(yǎng)基中添加25ng/ml制瘤素 M(0SM) (R&D Systems,Minneapolis,MN)。繼 0SM 添加后 6 小時(shí),收獲細(xì)胞,并利用 Dual-Glo 螢光素酶測(cè)定系統(tǒng)如生產(chǎn)商(Promega)所述測(cè)量螢火蟲(chóng)和海腎螢光素酶的水平。凋亡分析用或未用化合物處理的細(xì)胞在處理后5小時(shí)收獲,進(jìn)行膜聯(lián)蛋白-V染 色。收集的細(xì)胞以PBS洗滌,重懸于含膜聯(lián)蛋白-V-FITC的緩沖液中,并按照生產(chǎn)商(Roche) 的說(shuō)明染色。膜聯(lián)蛋白-v陽(yáng)性細(xì)胞通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)確定。STAT3DNA 結(jié)合測(cè)定試驗(yàn)如生產(chǎn)商(Li-Cor Biosciences, Lincoln, NE)所述進(jìn) 行電泳遷移率變動(dòng)分析(EMSA)。簡(jiǎn)言之,利用NucBuster蛋白質(zhì)提取試劑盒如生產(chǎn)商(EMD Biosciences, San Diego,CA)所述由HeLa細(xì)胞制備核提取物。5iig核提取物與所示劑 量的所示化合物一起預(yù)孵育30分鐘,之后再與IR700標(biāo)記的共有Stat3寡核苷酸一起孵 育15分鐘。樣品隨之在聚丙烯酰胺凝膠上電泳,并應(yīng)用Odyssey紅外成像系統(tǒng)(Li-Cor Biosciences)直接掃描。對(duì)于酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA),5 y g核提取物與所示濃度的所 示化合物預(yù)孵育30分鐘,之后添加生物素化的寡聚體(5’-生物素-GATCCTTCTGGGAATTCCTA GATC-3'SEQ ID NO. 1)。Stat3_DNA復(fù)合物隨之被捕獲到鏈親和素包被的96孔板(Pierce, Rockford, IL)上。結(jié)合的復(fù)合物隨之與Stat3多克隆抗體(Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz,CA)、接著是抗兔HRP綴合的二抗(GE Healthcare,Pittsburgh,PA)進(jìn)行孵育。 結(jié)合的抗體隨之通過(guò)添加TMB底物(Pierce)并在450nm測(cè)量吸光值而觀察。細(xì)胞生存力確定對(duì)于3-(4,5_ 二甲基噻唑-2-基)-2,5_ 二苯基四唑鐺(MTT) (Sigma-Aldrich, St. Louis, M0)分析,細(xì)胞以10,000細(xì)胞/孔接種在96孔板中。種板后 24小時(shí),以所示劑量向細(xì)胞中添加化合物。化合物添加后22小時(shí),向各孔添加MTT(0. 5mg/ ml終濃度),并使板在37°C再孵育2小時(shí)。然后吸出培養(yǎng)基,并使甲臜產(chǎn)物溶解在100 u 1 異丙醇中。各孔的吸光值利用微板讀數(shù)器在570nm測(cè)量。免疫熒光用所示化合物處理所示時(shí)間的細(xì)胞在4%甲醛或冷甲醇中固定,分別 用于檢測(cè)膜聯(lián)蛋白V、裂解的胱天蛋白酶3(cleaVed caspase 3)或stat3。蓋片風(fēng)干,在 PBS中室溫重新水合10分鐘。樣品之后在封閉緩沖液(PBS,5%FBS)中在潮濕箱中室溫孵 育10分鐘。細(xì)胞與一抗在4°C孵育過(guò)夜。洗滌后,細(xì)胞與1 500稀釋的FITC綴合的抗兔 抗體室溫孵育1小時(shí)。用配備有落射熒光和SPOT鑲嵌(XD相機(jī)的Nikon TE200顯微鏡捕 獲圖像。多克隆抗裂解的胱天蛋白酶3抗體(1 100)獲自Cell Signaling Technology, Danvers, MA.公司。膜聯(lián)蛋白-V-FITC獲自德國(guó)Penzberg的羅氏(Roche)公司。多克隆抗Stat3抗體獲自Santa Cruz公司。通過(guò).TPIV 技術(shù)敲低基因TPIV (治療通路鑒定和驗(yàn)證)技術(shù) (BostonBiomedical Inc. ,Norwood,MA,USA)提供了能夠用來(lái)首先轉(zhuǎn)染細(xì)菌、進(jìn)而被哺乳動(dòng) 物受試者攝取的質(zhì)粒。在細(xì)菌裂解后,由TPFV 質(zhì)粒編碼并由細(xì)菌加工的dsRNA被釋放到 哺乳動(dòng)物細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中,實(shí)現(xiàn)所靶向基因的敲低。TPIV 技術(shù)在共同擁有的于2008年 6月30日遞交的PCT專利申請(qǐng)PCT/US08/68866中描述,其全部?jī)?nèi)容并入本文作為參考。具 體而言,編碼針對(duì)Stat3的有效siRNA序列的TPIV 質(zhì)粒利用如下引物通過(guò)PCR克隆購(gòu)自 Origene Technologies (Rockville, MD, USA)的 Stat3 質(zhì)粒來(lái)構(gòu)建TPIV_Stat3 (300bp 插 入物)引物Stat3TPIV For 5,-GGATCTAGAATCAGCTACAGCAGC(SEQ ID NO. 2)Stat3TPIV Rev 5,-TCCTCTAGAGGGCAATCTCCATTG(SEQ ID NO. 3)對(duì)照質(zhì)粒應(yīng)用購(gòu)自Promega(Madison,WI, USA)的pGL2質(zhì)粒來(lái)構(gòu)建。 TPIV-GL2 (300bp 插入物)引物GL2TPIV For 5,-CCCTCTAGATGGTTCCTGGAAC(SEQ ID NO. 4)GL2TPIV Rev 5,-GCTCTAGAAACCCCTTTTTGG(SEQ ID NO. 5)化學(xué)感受態(tài)大腸桿菌(E. Coli)BL21(DE3)pLYSe細(xì)菌(50 100 yl)用對(duì)照或 lOOng靶向Stat3的TPIV 質(zhì)粒按照生產(chǎn)商(Stratagene)的說(shuō)明進(jìn)行轉(zhuǎn)化。然后將單菌 落接種到含100 u g/ml氨芐青霉素的BHI培養(yǎng)基中,并于37°C生長(zhǎng)過(guò)夜。第二天,將5ml各 過(guò)夜培養(yǎng)物1 40稀釋至含100 y g/ml氨芐青霉素的新鮮BHI培養(yǎng)基中,并再生長(zhǎng)2-4小 時(shí)(直至0D_ = 0. 5)。各培養(yǎng)物隨之用IPTG(lmM終濃度)處理2-4小時(shí),以誘導(dǎo)長(zhǎng)雙鏈 RNA轉(zhuǎn)錄,其會(huì)被細(xì)菌加工為混合siRNA。在IPTG誘導(dǎo)之后,通過(guò)測(cè)量0D6(1(1值來(lái)計(jì)算各培養(yǎng) 物中的細(xì)菌總數(shù)(8 X108細(xì)菌/ml培養(yǎng)物具有0D_= 1)。然后根據(jù)細(xì)胞匯合度和在適當(dāng)反 應(yīng)體積中所需的感染復(fù)數(shù)(M0I ;嘗試20 1至2000 1的細(xì)菌比細(xì)胞范圍),計(jì)算用于細(xì) 胞處理的細(xì)菌數(shù)目。根據(jù)經(jīng)驗(yàn),應(yīng)選擇反應(yīng)體積以導(dǎo)致對(duì)于1000 1M0I為3X108/ml。所 需體積的細(xì)菌培養(yǎng)物隨之在2500g 4°C離心10分鐘,沉淀用無(wú)血清培養(yǎng)基(用于細(xì)菌感染 的細(xì)胞,加上100 ii g/ml氨芐青霉素和ImM IPTG)洗滌一次,并以細(xì)菌感染(bactofection) 所需的密度重懸于相同的培養(yǎng)基中。同時(shí)分離癌細(xì)胞或癌干細(xì)胞,在細(xì)菌感染前30分鐘,將細(xì)胞培養(yǎng)基替換為2ml含 100 y g/ml氨芐青霉素和ImM IPTG的新鮮無(wú)血清培養(yǎng)基。上文制備的細(xì)菌隨之以期望的 M0I添加到細(xì)胞中,37°C感染2小時(shí)。感染期過(guò)后,細(xì)胞用無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基洗滌3次。細(xì)胞隨之與2ml含有100 u g/ml 氨芐青霉素和150 y g/ml慶大霉素的新鮮完全細(xì)胞培養(yǎng)基孵育2小時(shí),以殺死任何殘留的 胞外細(xì)菌。在氨芐青霉素和慶大霉素處理后,細(xì)胞與3ml含10 y g/ml氧氟沙星的新鮮完全 RPMI 1640培養(yǎng)基孵育,以殺死任何胞內(nèi)細(xì)菌。隨之收獲細(xì)胞或在各時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行分析,以評(píng) 估靶基因沉默的程度和產(chǎn)生的表型。活體評(píng)價(jià)(in life evaluations)還對(duì)每只動(dòng)物的健康狀態(tài)進(jìn)行了每日檢查。每
27三天檢查體重。按照機(jī)構(gòu)的動(dòng)物管理方法每日供應(yīng)食物和水。引起>20%致死率和/或> 20%凈體重?fù)p失的處理視為有毒性。結(jié)果表達(dá)為平均腫瘤體積(mm3) 士SE。P值< 0. 05視 為統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)。動(dòng)物管理4_5周齡的雄性或雌性無(wú)胸腺裸鼠(Charles RiverLaboratories, Wilmington,MA.)在研究開(kāi)始前適應(yīng)動(dòng)物畜舍設(shè)施至少一周。所利用的所有實(shí)驗(yàn)方法與美 國(guó)生理學(xué)會(huì)(American Physiology Society)所給出的指南以及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物護(hù)理和使用指南 (Guide for the Care and Useof Laboratory Animals)相符,并且也得到了波士頓生物醫(yī) 學(xué)公司(BostonBiomedical Inc.)研究所動(dòng)物護(hù)理和使用委員會(huì)(Institutional Animal Careand Use Committee)的批準(zhǔn)。動(dòng)物4只一組關(guān)進(jìn)木屑鋪底的籠中,置于具有控制的溫 度(68° F-72° F)、光照(12小時(shí)光-暗周期)和濕度(45-55%)的房間。實(shí)驗(yàn)期間動(dòng)物 自由飲水?dāng)z食。脾內(nèi)裸鼠模型系統(tǒng)(ISMS模型)雌性裸鼠麻醉并置于無(wú)菌條件,在左側(cè)腹切割以 露出脾臟。利用27號(hào)針在脾被膜下注射0. lml PBS中的100萬(wàn)人結(jié)腸癌HT29細(xì)胞。將脾 重置于腹膜腔內(nèi),并閉合切口。移植后第二天開(kāi)始處理直至檢查當(dāng)天。處理策略為每周5 天一天一次(5qd/wk)的腹膜內(nèi)注射。小鼠在垂死時(shí)或注射后30天處死。取出脾和肝進(jìn)行 檢查,并記錄腫瘤病變數(shù)。實(shí)施例1鑒定Stat3作為抗癌干細(xì)胞靶標(biāo)在CSC中Stat3的敲低可以誘導(dǎo)凋亡。為確定癌干細(xì)胞是否表達(dá)Stat3,以及 Stat3是否組成型激活,我們進(jìn)行了免疫熒光顯微鏡檢,這不僅允許分析罕見(jiàn)細(xì)胞群,而且 還提供了有關(guān)蛋白質(zhì)定位的額外信息,以及能夠?qū)⑷旧c表型(即凋亡)相關(guān)聯(lián)。在通過(guò) FACS自SW480結(jié)腸癌細(xì)胞分離的NSP和SP細(xì)胞中對(duì)p_Stat3和Stat3進(jìn)行了免疫熒光檢 測(cè)后,我們確定了 Stat3確實(shí)存在于SP細(xì)胞中,且在細(xì)胞核中適度富集(圖3A)。另外,我 們還在SP細(xì)胞中觀察到比NSP細(xì)胞增加的p-Stat3染色,提示SP細(xì)胞的存活可能更大比 重地依賴于Stat3。還評(píng)價(jià)了自FaDu人頭頸部癌細(xì)胞和LN18人成膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞分離的⑶133+細(xì) 胞中的Stat3狀態(tài)。如圖3B所示,Stat3在這些細(xì)胞中也具有組成型活性。綜上所述,這 些數(shù)據(jù)提示Stat3是對(duì)于癌干細(xì)胞特別重要的靶標(biāo)。我們接下來(lái)利用TPIV 檢驗(yàn)了在CSC中Stat3敲低的效應(yīng)。免疫熒光分析揭 示,在新鮮分離的CSC(SP)上感染24小時(shí)之內(nèi)(圖4A)能夠?qū)崿F(xiàn)Stat3的顯著耗竭,并發(fā) 現(xiàn)用靶向Stat3的TPIV ,質(zhì)粒處理的大多數(shù)細(xì)胞在感染24小時(shí)之內(nèi)經(jīng)歷凋亡,而對(duì)照 TPIV 質(zhì)粒并不誘導(dǎo)高于對(duì)照未感染細(xì)胞的凋亡水平(圖4B)。這些數(shù)據(jù)i正明癌干細(xì)胞 依賴于Stat3用于存活。在CSC中敲低Stat3抑制CSC球體形成。通過(guò)FACS分離QM^gh/a^f FaDu或 Hoeschst側(cè)群癌干細(xì)胞,并在超低附著板中于癌干細(xì)胞培養(yǎng)基(DMEM/F12,B27Neurobasal 增補(bǔ)物,20ng/mL EGF, 10ng/mL FGF,4 y g/mL胰島素和0. 4% BSA)中培養(yǎng)以允許球體形成。 收集初級(jí)球體(primary spheres),用胰蛋白酶解聚,并在TPIV 處理之前分配至96孔超 低附著板中。以1000的M0I施加細(xì)菌兩小時(shí),之后添加抗生素混合物(青-鏈霉素混合物 (penstr印)、慶大霉素、氧氟沙星)。10-14天培養(yǎng)后評(píng)估球體形成。在添加臺(tái)盼藍(lán)鑒定死
28細(xì)胞之前(圖5,左上圖)或之后(圖5,左下圖)獲取代表性的球體圖像。相對(duì)球體形成 示于圖5的右圖。數(shù)據(jù)清楚地表明,在癌干細(xì)胞中Stat3敲低抑制球體形成,證明Stat3是 癌干細(xì)胞的關(guān)鍵自我更新因子。實(shí)施例2鑒定抑制Stat3通路活件的化合物Stat3轉(zhuǎn)錄活性的抑制。利用Stat3_螢光素酶(Stat3-luc)報(bào)告分子構(gòu)建體檢 驗(yàn)了化合物在細(xì)胞中抑制Stat3轉(zhuǎn)錄激活活性的能力。轉(zhuǎn)染了 Stat3-luC的細(xì)胞在減少 血清的培養(yǎng)基中培養(yǎng),之后再添加所示的化合物孵育30分鐘。細(xì)胞隨之用25ng/ml制瘤 素M(OSM)刺激6小時(shí),之后檢測(cè)Stat3-luc報(bào)告分子活性。細(xì)胞與化合物401孵育抑制了 0SM刺激的Stat3報(bào)告分子活性(圖6,左圖)。納入AG490 ( 一種已知的Jak-Stat通路抑 制劑)作為Stat3抑制的陽(yáng)性對(duì)照。依托泊苷納入作為遺傳毒性活性對(duì)照,其顯示出很小 或無(wú)Stat3抑制作用?;衔?001為萘而非作為本發(fā)明化合物的萘醌,其即便是在高得多 的濃度也不抑制0SM刺激的Stat3報(bào)告分子活性(圖6,右圖)。在Stat3螢光素酶報(bào)告分子測(cè)定中檢驗(yàn)了其他化合物,且結(jié)果總結(jié)于表3。表3 Stat3DNA結(jié)合活性的抑制。應(yīng)用來(lái)自HeLa細(xì)胞的核提取物(如通過(guò)酪氨酸705 殘基磷酸化所檢測(cè)的那樣,其含有組成型激活的Stat3)進(jìn)行Stat3EMSA以監(jiān)測(cè)Stat3DNA 結(jié)合活性。核提取物與所示化合物孵育,之后再與IR700標(biāo)記的Stat3共有寡核苷酸孵育。 Stat3與寡核苷酸的結(jié)合通過(guò)凝膠電泳監(jiān)測(cè),并利用LiCor Odyssey紅外掃描儀檢測(cè)。鑒定 到Stat3滯后條帶,并通過(guò)抗Stat3抗體的超級(jí)遷移(圖7A,左圖)和Stat3肽的劑量依賴 性抑制進(jìn)行了確認(rèn)(圖7A,中圖)。在孵育標(biāo)記的探針和化合物401之后觀察到Stat3DNA 結(jié)合的劑量依賴性抑制(圖7A,右圖)。在EMSA測(cè)定中檢驗(yàn)了其他化合物。如圖7B所示,化合物401、416和418能夠抑 制Stat3的DNA結(jié)合活性。異種移植腫瘤組織中Stat3下游效應(yīng)子的抑制。從在收獲前4小時(shí)用化合物401 或載體對(duì)照處理過(guò)的異種移植Paca2腫瘤中制備提取物。樣品通過(guò)western印跡和EMSA 分析,以評(píng)價(jià)Stat3下游效應(yīng)子表達(dá)水平和Stat3DNA結(jié)合活性。化合物401處理的樣品 (T)與對(duì)照(V)相比顯示出Stat3 DNA結(jié)合活性下降(圖8A)。另外,化合物401處理導(dǎo)致 Stat3下游效應(yīng)子細(xì)胞周期蛋白D1和生存素的表達(dá)水平下降(圖8B)。
實(shí)施例3鑒定靶向癌干細(xì)胞的化合物鑒定使癌干細(xì)胞凋亡的化合物。由于已經(jīng)證明癌干細(xì)胞活躍地外排Hoechst,故用 Hoechst染色SW480細(xì)胞,分選側(cè)群(如圖9A所示,左圖圍起來(lái)的區(qū)域)以富集癌干細(xì)胞。 為確認(rèn)此側(cè)群富集癌干細(xì)胞,對(duì)照組的SW480細(xì)胞首先用戊脈安(verapamil,ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白 抑制劑)處理,之后用Hoechst染色。如圖9A右圖所示,戊脈安處理導(dǎo)致側(cè)群?jiǎn)适АT贛TT測(cè)定中評(píng)估了化合物401對(duì)Hoechst側(cè)群的IC5(1,并與對(duì)非側(cè)群的IC5(1進(jìn) 行了比較。結(jié)果顯示,側(cè)群對(duì)化合物401與非側(cè)群一樣敏感(圖9B,右圖)。然而,側(cè)群對(duì) 多柔比星比非側(cè)群耐藥性大得多(圖9B,左圖),這與之前的公開(kāi)一致[7,82]。這些數(shù)據(jù)提 示化合物401殺死癌干細(xì)胞。Hoechst側(cè)群細(xì)胞用化合物401處理,并通過(guò)膜聯(lián)蛋白V(凋亡的早期標(biāo)志)染色 來(lái)評(píng)估細(xì)胞死亡模式。結(jié)果顯示,垂死細(xì)胞為膜聯(lián)蛋白V陽(yáng)性(
圖10A),證明化合物401使 癌干細(xì)胞凋亡??蛇x地,我們進(jìn)行了 CD133(常見(jiàn)的癌干細(xì)胞表面標(biāo)志之一)抗體磁珠沉降以富集 癌干細(xì)胞。CD133+細(xì)胞隨之用化合物401處理,接著用抗裂解的胱天蛋白酶3 (凋亡標(biāo)志) 的抗體染色。如
圖10B所示,許多CD133+細(xì)胞在化合物401處理后變成裂解型胱天蛋白酶 3陽(yáng)性的,證實(shí)化合物401使癌干細(xì)胞凋亡。鑒定在體外抑制CSC球體形成的化合物。癌干細(xì)胞的標(biāo)志之一是其自我更新的能 力。一種測(cè)量細(xì)胞群自我更新能力的可靠方法是其在不存在血清或附著的情況下培養(yǎng)為球 體的能力。為比較化合物401與其他靶向及化療劑的該能力,F(xiàn)ACS分離的⑶44high CSC作 為球體培養(yǎng)72小時(shí),之后用一組治療劑進(jìn)行攻擊。所檢驗(yàn)的藥劑中,只有化合物401有效 防止球體增殖(
圖11)。注意,盡管施加的多柔比星和多烯紫杉醇的量大約十倍于其在類 似測(cè)定中導(dǎo)致細(xì)胞死亡的IC5(1濃度,但球體還是具有耐藥性。添加的特羅凱(Tarceva)、索 坦(Sutent)和格列衛(wèi)(Gleevec)大約三倍于其報(bào)告的治療濃度。這證明雖然癌干細(xì)胞對(duì) 傳統(tǒng)化療劑和靶向劑具有耐藥性,但化合物401高度有效地抑制其生長(zhǎng)。鑒定在體內(nèi)抑制CSC球體形成的化合物。六周齡雌性無(wú)胸腺nu/nu小鼠獲自 Charles River Labs (Wilmington,MA)。小鼠在腰窩處皮下注射處于0. 2mL無(wú)血清DMEM中 的6X 106FaDu或Paca2癌細(xì)胞。在異種移植物大小達(dá)到 200mm3后,攜帶Paca2異種移植 腫瘤的動(dòng)物通過(guò)腹膜內(nèi)施用載體、吉西他濱(120mg/kg,一周兩次)或化合物401 (20mg/kg) 一周,而攜帶FaDu異種移植腫瘤的動(dòng)物通過(guò)腹膜內(nèi)每日施用載體、卡鉬(30mg/kg)或化合 物401(20mg/kg)兩周,之后處死。然后分別針對(duì)Paca2和FaDu細(xì)胞,收集腫瘤。在動(dòng)物處 死并無(wú)菌取出腫瘤后制備單細(xì)胞懸液。簡(jiǎn)言之,用無(wú)菌解剖刀將腫瘤切成0. 1mm3的碎塊, 之后在lmg/mL膠原酶/HBSS中持續(xù)震蕩消化15-30分鐘。在流經(jīng)40 y m濾網(wǎng)后,將細(xì)胞懸 液層放在lmL Histopaque上,并在1440 X g離心30分鐘后收集界面層,而除去RBC、死細(xì)胞 和細(xì)胞碎片。然后計(jì)數(shù)活細(xì)胞,并用來(lái)測(cè)量其形成球體的能力。細(xì)胞以100細(xì)胞/孔的密 度分配到超低附著96孔板的癌干細(xì)胞培養(yǎng)基中(DMEM/F12,B27Neurobasal增補(bǔ)物,20ng/ mL EGF,10ng/mL FGF,4 u g/mL胰島素和0. 4% BSA)。每三天添加新鮮培養(yǎng)基,并在10-14 天培養(yǎng)后測(cè)定球體形成。記錄具有>50個(gè)細(xì)胞的球體。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí),添加臺(tái)盼藍(lán)以鑒定死 細(xì)胞。如
圖12所示,如增加的球體形成所證明的,標(biāo)準(zhǔn)化療吉西他濱(上圖)和卡鉬(下圖)富集了癌干細(xì)胞。相反地,如減少的球體形成所證明的那樣,化合物401處理減少了癌 干細(xì)胞。實(shí)施例4抗轉(zhuǎn)移功效還檢驗(yàn)了化合物401在ISMS模型中抑制轉(zhuǎn)移的能力。脾內(nèi)裸鼠模型系統(tǒng)(ISMS模 型)適于研究結(jié)直腸癌的惡性行為,因?yàn)榇思夹g(shù)能夠在肝中產(chǎn)生實(shí)驗(yàn)性轉(zhuǎn)移。在此模型中, 在裸鼠脾被膜下注射處于0. lml PBS中的100萬(wàn)HT29細(xì)胞。將脾重置于腹膜腔內(nèi),并閉合 切口。小鼠在垂死時(shí)或注射后30天處死。取出脾和肝進(jìn)行檢查,并記錄腫瘤病變數(shù)(number of tumorlesions)。小鼠分成2組,對(duì)照組給予載體(n = 4),而另一組接受20mg/kg化合 物401(n = 4)。在Ls.注射后第2天起至第30天,5天/周腹膜內(nèi)施用藥物。顯微鏡檢 估算原發(fā)性腫瘤和轉(zhuǎn)移性肝腫瘤的數(shù)目。代表性照片示于
圖13。在載體對(duì)照組中,脾臟處 有重負(fù)荷的原發(fā)性腫瘤(
圖13,上左圖)。還觀察到大量的自發(fā)肝轉(zhuǎn)移(
圖13,上右圖)。 化合物401處理顯著降低了原發(fā)性腫瘤病灶數(shù)和自發(fā)肝轉(zhuǎn)移數(shù)(
圖13,下圖)。實(shí)施例5組合活件Paca2人胰腺癌細(xì)胞、A549人肺癌細(xì)胞和IfepG2人肝癌細(xì)胞(美國(guó)典型培養(yǎng)物保 藏中心)在含有10%胎牛血清、100單位/mL青霉素、100iig/mL鏈霉素和2mM L-谷氨酰胺 的Dulbecco改良Eagle培養(yǎng)基中培養(yǎng)?;衔?01和索坦由Boston Biomedical, Inc.有 限公司合成??ㄣf、多柔比星、多烯紫杉醇、依托泊苷獲自Sigma (St. Louis,M0),并以lOmM 溶于水或DMS0中。厄洛替尼來(lái)自American Custom Chemicals (San Diego, CA) 吉西他濱 來(lái)自Eli Lilly (Indianapolis,IN),為水性20mM貯液的形式。索拉非尼購(gòu)自LKT (St. Paul, MN)。拉帕替尼來(lái)自LC Laboratories (Woburn,MA)。除非另行指出,所有化合物以lOmM溶 于DMS0中,并等份貯存于-20°C呈指數(shù)生長(zhǎng)的Paca2胰腺癌細(xì)胞以1,000細(xì)胞/孔接種在 6孔板中,并允許其貼壁24小時(shí)。然后向培養(yǎng)基中添加漸增濃度的個(gè)體藥物及組合藥物,再 過(guò)24小時(shí)。24小時(shí)接觸后,除去藥物,并在接下來(lái)的10-14天添加新鮮培養(yǎng)基,允許集落形 成。固定細(xì)胞,并用GIEMSA(Gibco BRL)染色。大于50個(gè)細(xì)胞的集落記錄為存活者,并針 對(duì)未處理的對(duì)照就細(xì)胞存活百分?jǐn)?shù)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。結(jié)果為一式兩份實(shí)驗(yàn)的平均值。可選地, 在A549和H印G2細(xì)胞中在處理后72小時(shí)進(jìn)行MTT測(cè)定。我們的數(shù)據(jù)證明,化合物401與所有檢驗(yàn)的化合物組合時(shí)均具有有益效果。其中, 與酪氨酸激酶抑制劑(TKI)組合顯示出最出色的結(jié)果。例如,如
圖14所示,化合物401與 索拉非尼組合時(shí)在人肺A549細(xì)胞中72小時(shí)具有協(xié)同效應(yīng)。與此類似,
圖15至17表明化 合物401分別與厄洛替尼、拉帕替尼和舒尼替尼(索坦組合時(shí)在人肺A549細(xì)胞中72小 時(shí)也具有協(xié)同效應(yīng)。其余數(shù)據(jù)總結(jié)于表4,證明化合物401與所有檢驗(yàn)藥物組合時(shí)均表現(xiàn)出 有益效果。表4
31 而且,我們還檢驗(yàn)了化合物401與吉西他濱在人胰腺癌異種移植模型中的組合效 應(yīng)。簡(jiǎn)言之,無(wú)胸腺雌性裸鼠(Ncr)皮下接種8X106MIA PaCa_2人胰腺癌細(xì)胞,并使腫瘤生 長(zhǎng)至約150mm3的大小。將動(dòng)物隨機(jī)分成4組,每組6只動(dòng)物,并用載體對(duì)照處理、每日口服 100mg/kg臨床制劑(20%GeluCire)形式的化合物401、每三天腹膜內(nèi)注射120mg/kg(溶于
PBS中)吉西他濱(健擇 )、或施用后兩者。小鼠接受總計(jì)兩周的處理,并分析腫瘤的平均 體積。

圖18所示,用化合物401 (100mg/kg)或是吉西他濱(120mg/kg)單獨(dú)處理在處 理期間以類似的程度延遲腫瘤生長(zhǎng)。用化合物401(100mg/kg)組合吉西他濱(120mg/kg) 處理的動(dòng)物顯示出對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的協(xié)同效應(yīng)。對(duì)于任何處理策略,未觀察到明顯的毒性。我 們的數(shù)據(jù)提示,化合物401組合吉西他濱在治療胰腺癌方面具有臨床益處。本文引述的所有參考文獻(xiàn)在適用法律允許的程度上整體并入本文作為參考,并在 相同的程度上用于所有目的,就如同明確單獨(dú)地說(shuō)明將各單個(gè)出版物或?qū)@驅(qū)@暾?qǐng)全 文并入作為參考用于所有目的一樣。在并入作為參考的出版物和專利或?qū)@暾?qǐng)與本說(shuō)明 書(shū)所含公開(kāi)內(nèi)容相悖的程度上,本說(shuō)明書(shū)旨在替換和/或優(yōu)先于任何這樣的矛盾材料。在本說(shuō)明書(shū)和權(quán)利要求書(shū)中所用的表達(dá)成分、反應(yīng)條件、分析結(jié)果等等數(shù)量的數(shù) 字在所有情況下應(yīng)理解為受術(shù)語(yǔ)“約”修飾。從而,除非有相反說(shuō)明,本說(shuō)明書(shū)和所附權(quán)利 要求書(shū)中闡述的數(shù)值參數(shù)為近似值,其可以根據(jù)本發(fā)明尋求獲得的期望性能而變。各數(shù)值 參數(shù)應(yīng)按照有效數(shù)字和普通舍入方法加以解釋,但絲毫、也不應(yīng)試圖限制等同原則對(duì)權(quán)利 要求范圍的適用。可對(duì)本發(fā)明進(jìn)行修飾和改變而不偏離其精神和范圍,這對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而 易見(jiàn)的。本文所述的具體實(shí)施方案僅僅是作為舉例提供,而不意味著以任何方式加以限制。 意思是說(shuō)明書(shū)和實(shí)施例應(yīng)視為僅僅是例示性的,而本發(fā)明的真正范圍和精神由如下權(quán)利要 求表明。參考文獻(xiàn)1. Bonnet,D. ,Normal and leukaemic stem cells. Br J Haematol, 2005. 130(4) p. 469-79.2. Bonnet, D.和 J.E.Dick, Human acute myeloid leukemia is organized as ahierarchy that originates from a primitiye hematopoietic cell. Nat Med, 1997. 3(7) :p. 730-7.3. Baumann, M. , M. Krause 和 R. Hill, Exploring the role of cancer stemcells in radioresistance. Nat Rev Cancer,2008. 8(7) :p. 545-54.4. Hambardzumyan, D. , M. Squatrito 和 E. C. Holland, Radiation resistanceand stem-like cells in brain tumors. Cancer Cell,2006. 10(6) :p. 454-6.5. Dean,M. , T. Fojo和 S. Bates, Tumour stem cells and drug resistance. NatRev Cancer, 2005. 5(4) :p. 275-84.6. Jones, R. J. , ff. H. Matsui 和 B. D. Smith, Cancer stem cells :are wemissing the target ? J Natl Cancer Inst,2004. 96(8) :p. 583-5.7. Ho,M. M.等人,Side population in human lung cancer cell lines antitumors is enriched with stem-like cancer cells. Cancer Res,2007. 67(10) :p. 4827-33.8. Wang, J.等人,Identification of cancer stem cell-like side population cellsin human nasopharyngeal carcinoma cell line.Cancer Res,2007.67 (8) p. 3716-24.9. Haraguchi, N.等人,Characterization of a side population of cancer cellsfrom human gastrointestinal system. Stem Cells,2006. 24(3) :p. 506-13.10. Doyle, L. A.和 D. D. Ross, Multidrug resistance mediated by thebreastcancer resistance protein BCRP(ABCG2). Oncogene,2003. 22(47) :p. 7340-58.11. Alvi, A. J.等 人,F(xiàn)unctional and molecular characterisation of mammaryside population cells.Breast Cancer Res,2003. 5(1) :p. Rl-8.12. Frank, N. Y.等 人,ABCB5_mediated doxorubicin transport andchemoresi stance in human malignant melanoma. Cancer Res,2005. 65 (10) p. 4320-33.13. Schatton,T.等人,Identification of cells initiating human melanomas. Nature, 2008. 451 (7176) :p. 345-9.14. Kondo,T.,T. Setoguchi 禾口T. Taga,Persistence of a small subpopulationof cancer stem-like cells in the C6 glioma cell line. Proc Natl Acad Sci USA, 2004. 101(3) :p. 781-6.15. Goodel 1, M. A.等 人,Isolation and functional properties of murinehematopoietic stem eelIs that are replicating in vivo. J Exp Med, 1996. 183(4) :p. 1797-806.16. Al-Hajj, M. 入,Prospective identification of tumorigenie breast cancercells. Proc Natl Acad Sci USA, 2003. 100(7) :p. 3983—8.17. Collins, A. T.等 人,Prospective identification of tumorigenic prostatecancer stem cells. Cancer Res,2005. 65(23) :p.10946-51.18. Li, C.等人,Identification of pancreatic cancer stem cells. Cancer Res, 2007. 67(3) :p. 1030-7.19. Ma, S.等 人,Identification and characterization of tumorigenic livercancer stem/progenitor cells. Gastroenterology,2007.132 (7) :p. 2542-56.20. Prince, M. E.等人,Identification of a subpopulation of cells with cancerstem cell properties in head and neck squamous cell carcinoma.Proc Natl Acad Sci U S A, 2007. 104(3) :p. 973-8.21. Ricci-Vi tiani, L.等 人,Identification and expansion of humancolon-cancer-initiating cells. Nature,2007. 445(7123) :p. 111-5.22. Singh, S. K.等 人,Identification of a cancer stem cell in human braintumors. Cancer Res, 2003. 63 (18) :p. 5821-8.23. Dalerba, P.等人,Phenotypic characterization of human colorectal cancerstem cells. Proc Natl Acad Sci U S A, 2007. 104(24) :p. 10158—63.24. Klein, W. M.等 人,Increased expression of stem cell markers in malignantmelanoma. Mod Pathol, 2007. 20 (1) :p. 102-7.25. Yu,H. Stat3 :Linking oncogenesis with tumor immune evasion, in AACR2008 Annual Meeting. 2008. San Diego, CA.26. Pedranzini, L. , A. Leitch 禾口 J. Bromberg,Stat3 is required for thedevelopment of skin cancer. J Clin Invest,2004.114(5) :p. 619-22.27. Catlett-Falcone, R.等人,Constitutive activation of Stat3 signaling confersresistance to apoptosis in human U266 myeloma cells.Immunity,1999. 10(1) :p. 105-15.28. Bromberg,J. F.等人,Stat3 as an oncogene. Cell,1999. 98 (3) :p. 295-303.29. Kan da, N.等 人,STAT3 is constitutively activated and supports cellsurvival in association with survivin expression in gastric cancer cells. Oncogene,2004. 23(28) :p. 4921—9.30. Schlette, E. J.等人,Survivin expression predicts poorer prognosis inanaplastic large-cell lymphoma. J Clin Oncol,2004. 22 (9) :p. 1682-8.31. Niu,G.等 人,Constitutive Stat3 activity up-regulates VEGF expressionand tumor angiogenesis. Oncogene,2002. 21 (13) :p. 2000-8.32. Xie, T. X.等 人,Stat3 activation regulates the expression of matrixmetalloproteinase-2 and tumor invasion and metastasis. Oncogene,
2004.23(20) :p. 3550-60.33. Kortylewski, M.等 人,Inhibiting Stat3 signaling in the hematopoieticsystem elicits multicomponent antitumor immunity.Nat Med,
2005.11 (12) :p. 1314-21.34. Burdelya, L.等人,Stat3 activity in melanoma cells affects migration ofimmune effector cells and nitric oxide-mediated antitumor effects. JImmunol, 2005. 174(7) :p. 3925-31.35. Wang, T.等 人,Regulation of the innate and adaptive immune responsesby Stat-3 signaling in tumor cells. Nat Med,2004. 10(1) :p. 48-54.36. Darnell, J. E. , Validating Stat3 in cancer therapy. Nat Med, 2005. 11 (6) p. 595-6.37. Zhang, L.等人,Intratumoral delivery and suppression of prostate tumorgrowth by attenuated Salmonella enterica serovar typhimurium carryingplasmid-based small interfering RNAs. Cancer Res, 2007. 67(12) :p. 5859-64.38.Campbell, I. L. , Cytokine-mediated inflammation,tumorigenesis 禾口 disease-associated JAK/STAT/S0CS signaling circuits in the CNS. Brain ResBrain Res Rev, 2005. 48(2) :p. 166-77.39. Harris, T. J.等 人,Cutting edge :An in vivo requirement for STAT3signaling in TH17 development and TH17_dependent autoimmunity. JImmunol, 2007. 179(7) :p. 4313-7.40. Watson, C. J.禾口 W. R. Mi 1 ler,Elevated levels of members of the STATfamily of transcription factors in breast carcinoma nuclear extracts. Br JCancer, 1995. 71(4) :p. 840-4.41. Song,J. I.禾口 J. R. Grandis,STAT signaling in head and neck cancer. Oncogene,2000. 19(21) :p. 2489-95.42. Song, L.等人,Activation of Stat3 by receptor tyrosine kinases andcytokines regulates survival in human non-small cell carcinoma cells. Oncogene,2003. 22(27) :p. 4150-65.
35
43. Savarese, T. M.等人,Coexpression of oncostatin M and its receptors andevidence for STAT3 activation in human ovarian carcinomas. Cytokine, 2002. 17(6) :p. 324-34.44. Toyonaga, T. 入,Blockade of constitutively activated Januskinase/ signal transducer and activator of transcription_3 patjway inhibitsgrowth of human pancreatic cancer. Cancer Lett,2003. 201 (1) :p.107-16.45. Corvinus, F. M.等 人,Persistent STAT3 activation in colon cancer isassociated with enhanced cell proliferation and tumor growth. Neoplasia, 2005. 7(6) :p. 545-55.46. Gao, B.等入,Constitutive activation of JAK-STAT3 signaling by BRCAlin human prostate cancer cells. FEBS Lett,2001. 488(3) :p. 179—84.47. Buettner, R. , L. B. Mora 禾口 R. Jove, Activated STAT signaling in humantumors provides novel molecular targets for therapeutic intervention. ClinCancer Res, 2002. 8 (4) :p. 945-54.48. Carson, W. E.,Interferon-alpha-induced activation of signal transducerand activator of transcription proteins in malignant melanoma. Clin CancerRes, 1998. 4(9) :p. 2219-28.49. Chen,C. L.等 人,Stat3 activation in human endometrial and cervicalcancers. Br J Cancer,2007. 96(4) :p.591-9.50. Lai, R.等人,STAT3 is activated in a subset of the Ewing sarcoma familyof tumours. J Pathol, 2006. 208(5) :p. 624-32.51. Punjabi, A. S.等人,Persistent activation of STAT3 by latent Kaposi ' ssarcoma-associated herpesvirus infection of endothelial cells. J Virol, 2007. 81 (5) :p. 2449-58.52. Schaefer, L. K.等 人,Constitutive activation of Stat3alpha in brain tumors :localization to tumor endothelial cells and activation by the endothelialtyrosine kinase receptor (VEGFR-2). Oncogene,2002. 21 (13) :p.2058-65.53. Puthier, D. , R. Bataille 禾口 M. Amiot, IL—6 up—regulates mcl — 1 in humanmyeloma cells through JAK/STA T rather than ras/MAP kinase pathway. Eur J Immunol, 1999. 29(12) :p. 3945-50.54. Migone, T. S.等人,Constitutively activated Jak-STAT pathway in T cellstransformed with HTL V_I. Science,1995. 269 (5220) :p. 79-81.55. Spiekermann, K.等 人,Const i tut iye activation of STAT transcriptionfactors in acute myelogenous leukemia. Eur J Haematol,2001. 67(2) p. 63-71.56. Epling-Burnette, P. K.等入,Inhibition of STAT3 signaling leads toapoptosis of leukemic large granular lymphocytes and decreased Mcl-lexpression. J Clin Invest, 2001. 107(3) :p. 351-62.57. Weber-Nordt, R. M.等 A, Constitutive activation of STAT proteins
36inprimary lymphoid and myeloid leukemia cells and in Epstein—Barr virus (EBV)-related lymphoma cell lines.Blood,1996. 88 (3) :p. 809—16.58. Sommer,V. H.等 人,In vivo activation of STAT3 in cutaneous T-cel1lymphoma. Evidence for an antiapoptotic function of STAT3.Leukemia, 2004. 18(7) :p. 1288-95.59. Lai, R.等 人,Signal transducer and activator of transcription-3 activationcontributes to high tissue inhibitor of metalloproteinase-1 expression inanaplastic lymphoma kinase-positive anaplastic large cell lymphoma. Am JPathol, 2004. 164(6) :p. 2251-8.60. Fu, X. Y. , STAT3 in immune responses and inflammatory bowel diseases. Cell Res, 2006. 16(2) :p. 214—9.61. Feldmann,M.,F(xiàn). M. Brennan 禾口 R. N. Maini,Role of cytokines inrheumatoid arthritis. Annu Rev Immunol,1996. 14 :p.397-440.62. Krause, A.等 人,Rheumatoid arthritis synoviocyte survival is dependenton Stat3. J Immunol, 2002. 169(11) :p. 6610-6.63. Pfitzner, E.等 人,The role of STATs in inflammation and inflammatorydiseases. Curr Pharm Des,2004.10 (23) :p. 2839-50.64. Lovato, P.等人,Constitutive STAT3 activation in intestinal T cells frompatients with Crohn' s disease. J Biol Chem,2003. 278(19) :p.16777-81.65. I shihara, K.禾口 T.Hirano,IL-6 in auto immune disease and chronicinflammatory proliferative disease.Cytokine Growth Factor Rev, 2002. 13(4-5) :p. 357-68.66. Ivashkiv, LB.禾口 I. Tassiulas,Can S0CS make arthritis better ? J Clinlnvest,2003. 111 (6) :p. 795-7.67. Sengupta, T. K.等 A, Activation of monocyte effector genes and STATfamily transcription factors by inflammatory synovial fluid is independent of interferon gamma. J Exp Med, 1995. 181 (3) :p. 1015-25.68. Shouda, T.等人,Induction of the cytokine signal regulator S0CS3/ CIS3as a therapeutic strategy for treating inflammatory arthritis. J Clin Invest, 2001. 108(12) :p. 1781—8.69. Harada, T.等人,Increased express ion of STAT3 in SLE T cellscontributes to enhanced chemokine—mediated cell migration. Autoimmunity, 2007. 40(1) :p. 1-8.70. Simeone-Penney, M. C.等 人,Airway epithelial STAT3 is required forallergic inflammation in a murine model of asthma. J Immunol,2007. 178(10) p. 6191-9.71. Hagler, M.,Smith-Norowitz,T.,Chice,S.,Wallner, S.,Viterbo,D., Mueller,C.,Groos,R.,Nowakowski, M.,Schulze,R.,Zenilman,M.,Sophorolipids decrease IgE production in U266 cells by downregulation ofBSAP(Pax5), TLR—2,STAT3 and IL-6.Journal of Allergy and CIinicalImmunology,2007. 119(S1) p. S263-S263.72. Benkhart, E. M.等 人’ Role of Stat3 in lipopolysaccharide-induced IL-lOgene expression. J Immunol,2000. 165(3) :p.1612-7.73. Sano, S.等 人,Stat3 links activated keratinocytes and immunocytesrequired for development of psoriasis in a novel transgenic mouse model. NatMed, 2005. 11(1) :p. 43-9.74. Lim, C. P.等 K, Stat3 contributes to keloid pathogenesis via promotingcollagen production,cell proliferation and migration. Oncogene, 2006. 25(39) :p. 5416-25.75. Arany, I.等 人,Correlation between pretreatment levels of interferonresponse genes and clinical responses to an immune response modifier(Imiquimod)in genital warts. Antimicrob Agents Chemother,2000.44 (7) p. 1869-73.76. Tefferi,A.,Classification,diagnosis and management ofmyeloproliferative disorders in the JAK2V617F era. Hematology Am SocHematol Educ Program,2006 :p.240-5.77. Roder, S.等 人,STAT3 is constitutively active in some patients withPolycythemia rubra vera. Exp Hematol,2001. 29(6) :p. 694-702.78. Kim, 0. S.等 人,JAK-STAT signaling mediates gangliosides-inducedi nflammatory responses in brain microglial cells.J Biol Chem,2002. 277 (43) p. 40594-601.79. Wyss-Coray, T.,Inflammation in Alzheimer disease driving force, bystander or beneficial response ? Nat Med,2006. 12(9) :p. 1005-15.80. Stelmasiak, Z.等人,Interleukin-6 concentration in serum andcerebrospinal fluid in multiple sclerosis patients. Med Sci Monit,2000. 6(6) p. 1104-8.81. Ponti, D.等人,Isolation and in vitro propagation of tumorigenie breastcancer cells with stem/progenitor cell properties. Cancer Res, 2005. 65(13) :p. 5506-11.82. Szotek, P. P.等 人,Ovarian cancer side population defines cells with stemce11 — 1 ike characteristics and Mullerian Inhibiting Substance responsiveness.Proc Natl Acad Sci U S A,2006. 103(30) :p. 11154-9.
38
權(quán)利要求
治療異常Stat3通路活性相關(guān)紊亂受試者的方法,所述方法包括步驟(a)向受試者施用第一量的第一藥劑,以抑制至少一些異常Stat3通路活性;和(b)向受試者施用第二量的、包含信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制劑的第二藥劑。
2.權(quán)利要求1的方法,其中第一藥劑通過(guò)選自下組的作用抑制Stat3通路活性基本 上抑制Stat3蛋白的磷酸化、基本上抑制Stat3蛋白的二聚化、基本上抑制Stat3蛋白的核 轉(zhuǎn)位、基本上抑制Stat3蛋白的DNA結(jié)合活性、和基本上抑制Stat3蛋白的轉(zhuǎn)錄活性。
3.權(quán)利要求1的方法,其中第一藥劑選自下組化合物及其可藥用鹽或溶劑化物 2-(1_羥乙基)-萘并[2,3-b]呋喃-4,9-二酮、2-乙?;?7-氯-萘并[2,3_b]呋喃-4, 9-二酮、2-乙?;?7-氟-萘并[2,3-b]呋喃-4,9-二酮、2-乙酰基萘并[2,3-b]呋喃-4, 9-二酮、2-乙基-萘并[2,3-b]呋喃-4,9-二酮。
4.權(quán)利要求1的方法,其中所述紊亂選自下組自身免疫性疾病、炎性疾病、炎性腸病、 關(guān)節(jié)炎、哮喘、和系統(tǒng)性紅斑狼瘡、自身免疫性脫髓鞘病、阿爾茨海默病、中風(fēng)、缺血再灌注 損傷和多發(fā)性硬化癥。
5.權(quán)利要求1的方法,其中所述紊亂是癌癥。
6.權(quán)利要求5的方法,其中所述癌癥選自下組乳腺癌、頭頸部癌、肺癌、卵巢癌、胰腺 癌、結(jié)直腸癌、前列腺癌、腎細(xì)胞癌、黑素瘤、肝細(xì)胞癌、宮頸癌、肉瘤、腦瘤、胃癌、多發(fā)性骨 髓瘤、白血病和淋巴瘤。
7.權(quán)利要求1的方法,其中第二藥劑包含靶向劑。
8.權(quán)利要求1的方法,其中第二藥劑包含生長(zhǎng)因子受體靶向劑。
9.權(quán)利要求8的方法,其中所述生長(zhǎng)因子受體靶向劑包含靶向與激酶相關(guān)的生長(zhǎng)因子 受體的抗體。
10.權(quán)利要求8的方法,其中所述生長(zhǎng)因子受體選自下組表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR) 或血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體(VEGFR)。
11.權(quán)利要求8的方法,其中所述生長(zhǎng)因子受體靶向劑選自下組吉非替尼(艾瑞沙)、 特羅凱、PD153035、西妥昔單抗(愛(ài)必妥)、阿瓦斯丁、帕尼單抗、曲妥珠單抗和抗c-Met抗 體。
12.權(quán)利要求1的方法,其中第二藥劑包含激酶靶向劑。
13.權(quán)利要求12的方法,其中所述激酶靶向劑包含激酶抑制劑。
14.權(quán)利要求12的方法,其中所述激酶靶向劑包含酪氨酸激酶抑制劑(TKI)。
15.權(quán)利要求14的方法,其中TKI選自下組厄洛替尼(特羅凱)、索坦(舒尼替尼)、 拉帕替尼、索拉非尼(多吉美)、凡德他尼、阿西替尼、伯舒替尼、西地尼布、達(dá)沙替尼(撲瑞 賽)、吉非替尼(艾瑞沙)、伊馬替尼(格列衛(wèi))、來(lái)他替尼、ARQ197。
16.權(quán)利要求12的方法,其中所述激酶靶向劑選自下組吉非替尼(艾瑞 沙)、ZD6474 (AZD6474)、EMD-72000 (馬妥珠單抗)、帕尼單抗(ABX-EGF)、ICR-62、 CI-1033(PD183805)、拉帕替尼(泰克泊)、AEE788 (吡咯并嘧啶)、EKB_569、EXEL 7647/EXEL 0999、厄洛替尼(特羅凱)、伊馬替尼(格列衛(wèi))、索拉非尼(多吉美)、舒尼替尼(索坦)、達(dá) 沙替尼(撲瑞賽)、凡德他尼(ZACTIMA) demsirolimus (馱瑞塞爾)、PTK787(瓦他拉尼)、帕 唑帕尼、AZD2171、依維莫司、seliciclib、AMG 706、阿西替尼、PD0325901、PKC_412、CEP701、 XL880、伯舒替尼、BIBF1120、BIBF1120、尼羅替尼、AZD6244、HKI-272、MS-275、BI2536、GX15-070、AZD0530、enzastaurin、MLN-518 和 ARQ197。
17.權(quán)利要求1的方法,其中第二藥劑包含血管生成抑制劑。
18.權(quán)利要求17的方法,其中所述血管生成抑制劑選自下組CM101、IFN-a、IL_12、血 小板因子-4、蘇拉明、STO416、血小板反應(yīng)蛋白、VEGFR拮抗劑、血管生成抑制性甾醇+肝素、 軟骨源性血管生成抑制因子、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑、巴馬司他、馬立馬司他、制管張素、內(nèi) 皮抑素、2-甲氧基雌二醇、替可加蘭、血小板反應(yīng)蛋白、α νβ 3抑制劑、利諾胺和ADH-I。
19.治療異常Stat3通路活性相關(guān)癌癥受試者的方法,所述方法包括步驟(a)向受試者施用第一量的第一藥劑,以抑制至少一些異常Stat3通路活性;和(b)向受試者施用第二量的第二抗癌藥劑。
20.權(quán)利要求19的方法,其中第一藥劑通過(guò)選自下組的作用抑制Stat3通路活性基 本上抑制Stat3蛋白的磷酸化、基本上抑制Stat3蛋白的二聚化、基本上抑制Stat3蛋白的 核轉(zhuǎn)位、基本上抑制Stat3蛋白的DNA結(jié)合活性、和基本上抑制Stat3蛋白的轉(zhuǎn)錄活性。
21.權(quán)利要求19的方法,其中第一藥劑選自下組化合物及其可藥用鹽或溶劑化物 2-(1_羥乙基)-萘并[2,3-b]呋喃-4,9-二酮、2-乙酰基-7-氯-萘并[2,3_b]呋喃-4, 9-二酮、2-乙?;?7-氟-萘并[2,3-b]呋喃-4,9-二酮、2-乙?;敛2,3-b]呋喃_4, 9-二酮、2-乙基-萘并[2,3-b]呋喃-4,9-二酮。
22.權(quán)利要求19的方法,其中所述癌癥選自下組乳腺癌、頭頸部癌、肺癌、卵巢癌、胰 腺癌、結(jié)直腸癌、前列腺癌、腎細(xì)胞癌、黑素瘤、肝細(xì)胞癌、宮頸癌、肉瘤、腦瘤、胃癌、多發(fā)性 骨髓瘤、白血病和淋巴瘤。
23.權(quán)利要求19的方法,其中第二藥劑是至少一種癌癥的標(biāo)準(zhǔn)一線治療。
24.權(quán)利要求19的方法,其中第二藥劑包含細(xì)胞毒性劑。
25.權(quán)利要求19的方法,其中第二藥劑選自下組DNA損傷劑、抗有絲分裂劑和抗代謝物。
26.權(quán)利要求25的方法,其中所述DNA損傷劑選自下組烷化劑、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑和 DNA嵌入劑。
27.權(quán)利要求26的方法,其中所述烷化劑選自下組苯丁酸氮芥、環(huán)磷酰胺、異環(huán)磷酰 胺、氮芥、美法侖、尿嘧啶氮芥、塞替派、白消安、卡莫司汀、洛莫司汀、鏈佐星、卡鉬、順鉬、沙 鉬、奧沙利鉬、六甲蜜胺、ET-743、XL119(becatecarin)、達(dá)卡巴嗪、氮芥、苯達(dá)莫司汀、曲磷 胺、烏拉莫司汀、福莫司汀、尼莫司汀、潑尼莫司汀、雷莫司汀、司莫司汀、奈達(dá)鉬、triplatin tetranitrate、甘露舒凡、曲奧舒凡、替莫唑胺、卡波醌、三亞胺醌、三亞乙基蜜胺和丙卡巴 胼。
28.權(quán)利要求26的方法,其中所述拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑選自下組多柔比星(doxil)、柔 紅霉素、表柔比星、依達(dá)比星、蒽二酮(諾肖林)、米托蒽醌、絲裂霉素C、博來(lái)霉素、放線菌素 D^licatomycin、伊立替康(開(kāi)普拓)、喜樹(shù)堿、魯比替康、貝洛替康、依托泊苷、替尼泊苷和 拓?fù)涮婵?和美新)。
29.權(quán)利要求26的方法,其中所述DNA嵌入劑選自下組原黃素、多柔比星(阿霉素)、 柔紅霉素、放線菌素D和沙立度胺。
30.權(quán)利要求25的方法,其中所述抗有絲分裂劑選自下組紫杉醇(abraxane)/泰 素、多烯紫杉醇(泰索帝)、BMS-275183、聚谷氨酸紫杉醇、tocosal、異長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春地辛、長(zhǎng)春利定、依托泊苷(VP-16)、替尼泊苷(VM-26)、伊沙匹隆、拉洛他賽、 ortataxel、tesetaxel 禾口伊其j 平其
31.權(quán)利要求25的方法,其中所述抗代謝物選自下組氟脲嘧啶(5-FU)、氟尿苷 (5-FUdR)、甲氨蝶呤、希羅達(dá)、阿侖恩、亞葉酸、羥基脲、硫鳥(niǎo)嘌呤(6-TG)、巰嘌呤(6-MP)、阿 糖胞苷、噴司他丁、磷酸氟達(dá)拉濱、克拉屈濱(2-CDA)、天冬酰胺酶、吉西他濱、培美曲塞、硼 替佐米、氨基喋呤、雷替曲塞、氯法拉濱、依諾他濱、sapacitabine和阿扎胞苷。
32.權(quán)利要求19的方法,其中第二藥劑選自下組卡鉬、多柔比星、吉西他濱、多烯紫衫 醇和依托泊苷。
33.權(quán)利要求19的方法,其中所述癌癥是轉(zhuǎn)移性的、標(biāo)準(zhǔn)一線癌癥治療頑固性的或復(fù) 發(fā)性的。
34.治療受試者癌癥的方法,包括步驟(a)向受試者施用第一量的第一抗癌藥劑,以抑制癌干細(xì)胞群;和(b)向受試者施用第二量的第二抗癌藥劑,以抑制多數(shù)的非癌干細(xì)胞的癌細(xì)胞。
35.權(quán)利要求34的方法,其中步驟(a)包括抑制至少一種癌干細(xì)胞自我更新。
36.權(quán)利要求34的方法,其中步驟(a)包括殺死至少一種癌干細(xì)胞。
37.權(quán)利要求36的方法,其中步驟(a)還包括抑制至少另一種癌干細(xì)胞自我更新。
38.權(quán)利要求34的方法,其中第一量的第一抗癌藥劑也殺死多數(shù)的普通癌細(xì)胞。
39.權(quán)利要求34的方法,其中步驟(a)抑制癌干細(xì)胞中的至少一些Stat3通路活性。
40.權(quán)利要求39的方法,其中第一抗癌藥劑通過(guò)選自下組的作用抑制Stat3通路活性 基本上抑制Stat3蛋白的磷酸化、基本上抑制Stat3蛋白的二聚化、基本上抑制Stat3蛋白 的核轉(zhuǎn)位、基本上抑制Stat3蛋白的DNA結(jié)合活性、和基本上抑制Stat3蛋白的轉(zhuǎn)錄活性。
41.權(quán)利要求34的方法,其中第一抗癌藥劑選自下組小分子Stat3抑制劑、針對(duì) Stat3的RNAi藥劑、針對(duì)Stat3的反義藥劑、肽模擬物Stat3抑制劑和G四聯(lián)體寡聚脫氧核 苷酸Stat3抑制劑。
42.權(quán)利要求34的方法,其中第一抗癌藥劑選自下組化合物及其可藥用鹽或溶劑化 物2-(1_羥乙基)-萘并[2,3-b]呋喃-4,9-二酮、2-乙?;?7-氯-萘并[2,3_b]呋 喃_4,9-二酮、2-乙?;?7-氟-萘并[2,3-b]呋喃-4,9-二酮、2-乙酰基萘并[2,3_b] 呋喃_4,9-二酮、2-乙基-萘并[2,3-b]呋喃-4,9-二酮。
43.權(quán)利要求34的方法,其中所述癌癥選自下組乳腺癌、頭頸部癌、肺癌、卵巢癌、胰 腺癌、多發(fā)性骨髓瘤、結(jié)直腸癌、前列腺癌、黑素瘤、卡波西肉瘤、尤文氏肉瘤、肝癌、胃癌、成 神經(jīng)管細(xì)胞瘤、腦瘤和白血病。
44.權(quán)利要求34的方法,其中第二藥劑是至少一種癌癥的標(biāo)準(zhǔn)一線治療。
45.權(quán)利要求34的方法,其中第二藥劑包含細(xì)胞毒性劑。
46.權(quán)利要求34的方法,其中第二藥劑選自下組DNA損傷劑、抗有絲分裂劑和抗代謝物。
47.權(quán)利要求46的方法,其中所述DNA損傷劑選自下組烷化劑、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑和 DNA嵌入劑。
48.權(quán)利要求47的方法,其中所述烷化劑選自下組苯丁酸氮芥、環(huán)磷酰胺、異環(huán)磷酰 胺、氮芥、美法侖、尿嘧啶氮芥、塞替派、白消安、卡莫司汀、洛莫司汀、鏈佐星、卡鉬、順鉬、沙鉬、奧沙利鉬、六甲蜜胺、ET-743、XL119(becatecarin)、達(dá)卡巴嗪、氮芥、苯達(dá)莫司汀、曲磷 胺、烏拉莫司汀、福莫司汀、尼莫司汀、潑尼莫司汀、雷莫司汀、司莫司汀、奈達(dá)鉬、triplatin tetranitrate、甘露舒凡、曲奧舒凡、替莫唑胺、卡波醌、三亞胺醌、三亞乙基蜜胺和丙卡巴 胼。
49.權(quán)利要求47的方法,其中所述拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑選自下組多柔比星(doxil)、柔 紅霉素、表柔比星、依達(dá)比星、蒽二酮(諾肖林)、米托蒽醌、絲裂霉素C、博來(lái)霉素、放線菌素 D^licatomycin、伊立替康(開(kāi)普拓)、喜樹(shù)堿、魯比替康、貝洛替康、依托泊苷、替尼泊苷和 拓?fù)涮婵?和美新)。
50.權(quán)利要求47的方法,其中所述DNA嵌入劑選自下組原黃素、多柔比星(阿霉素)、 柔紅霉素、放線菌素D、沙立度胺。
51.權(quán)利要求46的方法,其中所述抗有絲分裂劑選自下組紫杉醇(abraxane)/泰 素、多烯紫杉醇(泰索帝)、BMS-275183、聚谷氨酸紫杉醇、tocosal、異長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春新堿、 長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春地辛、長(zhǎng)春利定、依托泊苷(VP-16)、替尼泊苷(VM-26)、伊沙匹隆、拉洛他賽、 ortataxel、tesetaxel 和伊斯平斯。
52.權(quán)利要求46的方法,其中所述抗代謝物選自下組氟脲嘧啶(5-FU)、氟尿苷 (5-FUdR)、甲氨蝶呤、希羅達(dá)、阿侖恩、亞葉酸、羥基脲、硫鳥(niǎo)嘌呤(6-TG)、巰嘌呤(6-MP)、阿 糖胞苷、噴司他丁、磷酸氟達(dá)拉濱、克拉屈濱(2-CDA)、天冬酰胺酶、吉西他濱、培美曲塞、硼 替佐米、氨基喋呤、雷替曲塞、氯法拉濱、依諾他濱、sapacitabine和阿扎胞苷。
53.權(quán)利要求34的方法,其中第二藥劑選自下組卡鉬、多柔比星、吉西他濱、多烯紫衫 醇和依托泊苷。
54.權(quán)利要求34的方法,其中第二藥劑包含靶向劑。
55.權(quán)利要求34的方法,其中第二藥劑包含生長(zhǎng)因子受體靶向劑。
56.權(quán)利要求55的方法,其中所述生長(zhǎng)因子受體靶向劑包含靶向與激酶相關(guān)的生長(zhǎng)因 子受體的抗體。
57.權(quán)利要求55的方法,其中所述生長(zhǎng)因子受體選自下組表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR) 或血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體(VEGFR)。
58.權(quán)利要求55的方法,其中所述生長(zhǎng)因子受體靶向劑選自下組吉非替尼(艾瑞 沙)、特羅凱、PD153035、西妥昔單抗(愛(ài)必妥)、阿瓦斯丁、帕尼單抗、曲妥珠單抗和抗c-Met 抗體。
59.權(quán)利要求34的方法,其中第二藥劑包含激酶靶向劑。
60.權(quán)利要求59的方法,其中所述激酶靶向劑包含激酶抑制劑。
61.權(quán)利要求59的方法,其中所述激酶靶向劑包含酪氨酸激酶抑制劑(TKI)。
62.權(quán)利要求61的方法,其中TKI選自下組厄洛替尼(特羅凱)、索坦(舒尼替尼)、 拉帕替尼、索拉非尼(多吉美)、凡德他尼、阿西替尼、伯舒替尼、西地尼布、達(dá)沙替尼(撲瑞 賽)、吉非替尼(艾瑞沙)、伊馬替尼(格列衛(wèi))、來(lái)他替尼、ARQ197。
63.權(quán)利要求59的方法,其中所述激酶靶向劑選自下組cefitinib (艾瑞 沙)、ZD6474 (AZD6474)、EMD-72000 (馬妥珠單抗)、帕尼單抗(ABX-EGF)、ICR-62、 CI-1033(PD183805)、拉帕替尼(泰克泊)、AEE788 (吡咯并嘧啶)、EKB_569、EXEL 7647/EXEL 0999、厄洛替尼(特羅凱)、伊馬替尼(格列衛(wèi))、索拉非尼(多吉美)、舒尼替尼(索坦)、達(dá)沙替尼(撲瑞賽)、凡德他尼(ZACTIMA)、temSir0limuS (馱瑞塞爾)、PTK787(瓦他拉尼)、帕 唑帕尼、AZD2171、依維莫司、seliciclib、AMG 706、阿西替尼、PD0325901、PKC_412、CEP701、 XL880、伯舒替尼、BIBF1120、BIBF1120、尼羅替尼、AZD6244、HKI-272、MS-275、BI2536、 GX15-070、AZD0530、enzastaurin、MLN-518 和 ARQ197。
64.權(quán)利要求34的方法,其中第二藥劑包含血管生成抑制劑。
65.權(quán)利要求64的方法,其中所述血管生成抑制劑選自下組CM101、IFN-a、IL_12、血 小板因子-4、蘇拉明、STO416、血小板反應(yīng)蛋白、VEGFR拮抗劑、血管生成抑制甾醇+肝素、軟 骨源性血管生成抑制因子、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑、巴馬司他、馬立馬司他、制管張素、內(nèi)皮 抑素、2-甲氧基雌二醇、替可加蘭、血小板反應(yīng)蛋白、α νβ 3抑制劑、利諾胺和ADH-I。
66.權(quán)利要求34的方法,其中所述癌癥是轉(zhuǎn)移性的、標(biāo)準(zhǔn)一線癌癥治療頑固性的或復(fù) 發(fā)性的。
67.治療受試者癌癥的方法,包括步驟(a)向受試者施用第一量的第一癌干細(xì)胞抑制劑,以抑制Stat3通路活性;和(b)向受試者施用第二量的第二癌干細(xì)胞抑制劑,以抑制不同通路的活性。
68.權(quán)利要求67的方法,其中第二癌干細(xì)胞抑制劑是拉帕替尼。
69.權(quán)利要求67的方法,其中第二量的第二抗癌藥劑本身對(duì)癌干細(xì)胞群不是治療有效的。
70.權(quán)利要求67的方法,其中所述癌癥選自下組乳腺癌、頭頸部癌、肺癌、卵巢癌、胰 腺癌、多發(fā)性骨髓瘤、結(jié)直腸癌、前列腺癌、黑素瘤、卡波西肉瘤、尤文氏肉瘤、肝癌、胃癌、成 神經(jīng)管細(xì)胞瘤、腦瘤和白血病。
71.權(quán)利要求67的方法,其中所述癌癥是轉(zhuǎn)移性的、標(biāo)準(zhǔn)一線癌癥治療頑固性的或復(fù) 發(fā)性的。
72.治療受試者癌癥的方法,包括步驟(a)向受試者施用治療有效量的第一抗癌藥劑,其選自下組化合物及其可藥用鹽或溶 劑化物2-(1_羥乙基)-萘并[2,3-b]呋喃-4,9-二酮、2-乙?;?7-氯-萘并[2,3_b] 呋喃_4,9-二酮、2-乙?;?7-氟-萘并[2,3-b]呋喃-4,9-二酮、2-乙酰基萘并[2,3-b] 呋喃_4,9-二酮、2-乙基-萘并[2,3-b]呋喃-4,9-二酮;和(b)施用并非選自相同組的第二抗癌藥劑。
73.權(quán)利要求72的方法,其中第二藥劑是至少一種癌癥的標(biāo)準(zhǔn)一線治療。
74.權(quán)利要求72的方法,其中第二藥劑包含細(xì)胞毒性劑。
75.權(quán)利要求72的方法,其中第二藥劑選自下組DNA損傷劑、抗有絲分裂劑和抗代謝物。
76.權(quán)利要求84的方法,其中所述DNA損傷劑選自下組烷化劑、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑和 DNA嵌入劑。
77.權(quán)利要求85的方法,其中所述烷化劑選自下組苯丁酸氮芥、環(huán)磷酰胺、異環(huán)磷酰 胺、氮芥、美法侖、尿嘧啶氮芥、塞替派、白消安、卡莫司汀、洛莫司汀、鏈佐星、卡鉬、順鉬、沙 鉬、奧沙利鉬、六甲蜜胺、ET-743、XL119(becatecarin)、達(dá)卡巴嗪、氮芥、苯達(dá)莫司汀、曲磷 胺、烏拉莫司汀、福莫司汀、尼莫司汀、潑尼莫司汀、雷莫司汀、司莫司汀、奈達(dá)鉬、triplatin tetranitrate、甘露舒凡、曲奧舒凡、替莫唑胺、卡波醌、三亞胺醌、三亞乙基蜜胺和丙卡巴胼。
78.權(quán)利要求85的方法,其中所述拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑選自下組多柔比星(doxil)、柔 紅霉素、表柔比星、依達(dá)比星、蒽二酮(諾肖林)、米托蒽醌、絲裂霉素C、博來(lái)霉素、放線菌素 D^licatomycin、伊立替康(開(kāi)普拓)、喜樹(shù)堿、魯比替康、貝洛替康、依托泊苷、替尼泊苷和 拓?fù)涮婵?和美新)。
79.權(quán)利要求85的方法,其中所DNA嵌入劑選自下組原黃素、多柔比星(阿霉素)、柔 紅霉素、放線菌素D、沙立度胺。
80.權(quán)利要求84的方法,其中所述抗有絲分裂劑選自下組紫杉醇(abraxane)/泰 素、多烯紫杉醇(泰索帝)、BMS-275183、聚谷氨酸紫杉醇、tocosal、異長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春新堿、 長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春地辛、長(zhǎng)春利定、依托泊苷(VP-16)、替尼泊苷(VM-26)、伊沙匹隆、拉洛他賽、 ortataxel、tesetaxel 禾口伊其j 平其
81.權(quán)利要求84的方法,其中所述抗代謝物選自下組氟脲嘧啶(5-FU)、氟尿苷 (5-FUdR)、甲氨蝶呤、希羅達(dá)、阿侖恩、亞葉酸、羥基脲、硫鳥(niǎo)嘌呤(6-TG)、巰嘌呤(6-MP)、阿 糖胞苷、噴司他丁、磷酸氟達(dá)拉濱、克拉屈濱(2-CDA)、天冬酰胺酶、吉西他濱、培美曲塞、硼 替佐米、氨基喋呤、雷替曲塞、氯法拉濱、依諾他濱、sapacitabine和阿扎胞苷。
82.權(quán)利要求72的方法,其中第二藥劑選自下組卡鉬、多柔比星、吉西他濱、多烯紫衫 醇和依托泊苷。
83.權(quán)利要求72的方法,其中第二藥劑包含靶向劑。
84.權(quán)利要求72的方法,其中第二藥劑包含生長(zhǎng)因子受體靶向劑。
85.權(quán)利要求93的方法,其中所述生長(zhǎng)因子受體靶向劑包含靶向與激酶相關(guān)的生長(zhǎng)因 子受體的抗體。
86.權(quán)利要求93的方法,其中所述生長(zhǎng)因子受體選自下組表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR) 或血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體(VEGFR)。
87.權(quán)利要求93的方法,其中所述生長(zhǎng)因子受體靶向劑選自下組吉非替尼(艾瑞 沙)、特羅凱、PD153035、西妥昔單抗(愛(ài)必妥)、阿瓦斯丁、帕尼單抗、曲妥珠單抗和抗c-Met 抗體。
88.權(quán)利要求72的方法,其中第二藥劑包含激酶靶向劑。
89.權(quán)利要求97的方法,其中所述激酶靶向劑包含激酶抑制劑。
90.權(quán)利要求97的方法,其中所述激酶靶向劑包含酪氨酸激酶抑制劑(TKI)。
91.權(quán)利要求99的方法,其中TKI選自下組厄洛替尼(特羅凱)、索坦(舒尼替尼)、 拉帕替尼、索拉非尼(多吉美)、凡德他尼、阿西替尼、伯舒替尼、西地尼布、達(dá)沙替尼(撲瑞 賽)、吉非替尼(艾瑞沙)、伊馬替尼(格列衛(wèi))、來(lái)他替尼、ARQ197。
92.權(quán)利要求97的方法,其中所述激酶靶向劑選自下組吉非替尼(艾瑞 沙)、ZD6474 (AZD6474)、EMD-72000 (馬妥珠單抗)、帕尼單抗(ABX-EGF)、ICR-62、 CI-1033(PD183805)、拉帕替尼(泰克泊)、AEE788 (吡咯并嘧啶)、EKB_569、EXEL 7647/EXEL 0999、厄洛替尼(特羅凱)、伊馬替尼(格列衛(wèi))、索拉非尼(多吉美)、舒尼替尼(索坦)、達(dá) 沙替尼(撲瑞賽)、凡德他尼(ZACTIMA) demsirolimus (馱瑞塞爾)、PTK787(瓦他拉尼)、帕 唑帕尼、AZD2171、依維莫司、seliciclib、AMG 706、阿西替尼、PD0325901、PKC_412、CEP701、 XL880、伯舒替尼、BIBF1120、BIBF1120、尼羅替尼、AZD6244、HKI-272、MS-275、BI2536、GX15-070、AZD0530、enzastaurin、MLN-518 和 ARQ197。
93.權(quán)利要求72的方法,其中第二藥劑包含血管生成抑制劑。
94.權(quán)利要求102的方法,其中所述血管生成抑制劑選自下組CM101、IFN-α、IL-12、 血小板因子-4、蘇拉明、STO416、血小板反應(yīng)蛋白、VEGFR拮抗劑、血管生成抑制甾醇+肝素、 軟骨源性血管生成抑制因子、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑、巴馬司他、馬立馬司他、制管張素、內(nèi) 皮抑素、2-甲氧基雌二醇、替可加蘭、血小板反應(yīng)蛋白、α νβ 3抑制劑、利諾胺和ADH-I。
95.權(quán)利要求72的方法,其中所述癌癥是轉(zhuǎn)移性的、標(biāo)準(zhǔn)一線癌癥治療頑固性的或復(fù) 發(fā)性的。
96.權(quán)利要求72的方法,其中所述癌癥選自下組乳腺癌、頭頸部癌、肺癌、卵巢癌、胰 腺癌、結(jié)直腸癌、前列腺癌、黑素瘤、肉瘤、肝癌、腦瘤和白血病。
97.權(quán)利要求1、19、34、67和72中任一項(xiàng)的方法,還包括向受試者施用可藥用的賦形 齊U、載體或稀釋劑。
98.權(quán)利要求1、19、34、67和72中任一項(xiàng)的方法,其中至少一種藥劑以選自下組的方式 施用口服、經(jīng)鼻、局部、直腸、陰道或腸胃外施用,或靜脈內(nèi)(IV)、皮下或肌內(nèi)注射。
99.權(quán)利要求19、34和72中任一項(xiàng)的方法,其中第二藥劑選自下組放療劑、生物藥、 激素藥、HDAC抑制劑、視黃醇類藥、檢查點(diǎn)激活物、蛋白酶體抑制劑、輔劑或輔助藥。
100.權(quán)利要求99的方法,其中放療劑包含放射性物質(zhì)或放射增敏劑。
101.權(quán)利要求99的方法,其中所述DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶調(diào)節(jié)劑選自下組多柔比星 (doxil)、柔紅霉素、表柔比星、依達(dá)比星、蒽二酮(諾肖林)、米托蒽醌、絲裂霉素C、博來(lái)霉 素、放線菌素D、plicatomycin、伊立替康(開(kāi)普拓)和拓?fù)涮婵?和美新)。
102.權(quán)利要求99的方法,其中所述生物藥選自下組白介素_2(阿地白介素)、 干擾素-α、干擾素-β、干擾素_ Y、促紅細(xì)胞生成素(EPO)、粒細(xì)胞集落刺激因子(非 格司亭(filgrastin))、粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(沙格司亭(sargramostim))、 IL13-PE38QQR、卡介苗、左旋咪唑、抑生長(zhǎng)肽(octreotide)、CPG7909、provenge、GVAX, myvax、favld、雷利米得(revlimid)(來(lái)那度胺(Ienalidomide))、赫賽汀(here印tin) (曲妥珠單抗)、美羅華(rituxan)(利妥昔單抗Kmyelotarg(吉妥單抗(gemtuzumab ozogamicin))、坎帕斯(campath)(阿侖單抗(alemtuzumab))、內(nèi)皮抑素、澤娃靈(zevalin) (替伊莫單抗(ibritumomab tiuxetan))、百克沙(bexxar)(托西莫單抗(tositumomab))、 愛(ài)必妥(西妥昔單抗)、扎木單抗(zanolimumab)、奧法木單抗(ofatumumab)、HGS-ETRU 帕妥珠單抗(pertuzumab)、M200、SGN-30、馬妥珠單抗、阿德木單抗(adecatumab)、迪諾 蘇單抗(denosumab)、扎魯木單抗(zalutumumab)、MDX—060、尼妥珠單抗(nimotuzumab)、 M0RAb-003、vitaxin、MDX-IOU MDX-010, DPC4 抗體、NF-I 抗體、NF-2 抗體、Rb 抗體、p53 抗 體、WTl抗體、BRCAl抗體、BRCA2抗體、神經(jīng)節(jié)苷脂(GM2)、前列腺特異性抗原(PSA)、甲胎蛋 白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、黑素瘤相關(guān)抗原(MART-l、gapl00、MAGEl,3酪氨酸)以及乳頭瘤 病毒E6和E7片段。
103.權(quán)利要求99的方法,其中所述激素藥選自下組二乙基己烯雌酚 (diethylstibestrol)、他莫昔芬(tamoxifen)、阿諾新(aromasin)、托瑞米芬 (tormifene)、氟羥甲基睪丸酮(fluoxymesterol)、雷洛昔芬(raloxifene)、比卡 魯胺(bicalutamide)、尼魯米特(nilutamide)、氟他胺(flutamide)、氨魯米特(aminoglutethimide)、阿那曲唑(anastrozole)(瑞寧得(arimidex))、四唑(tetrazole)、 酮康唑(ketoconazole)、促黃體生成激素釋放激素(LHRH)類似物、醋酸戈舍瑞林、亮丙瑞 林、醋酸甲地孕酮、米非司酮(mifepristone)和潑尼松(強(qiáng)的松)。
104.權(quán)利要求99的方法,其中所述HDAC抑制劑選自下組辛二酰苯胺異羥肟酸 (SAHA)、PXDlOl 和 FK228。
105.權(quán)利要求99的方法,其中所述視黃醇類藥選自下組塔革雷汀(targretin)和 DNlOlo
106.權(quán)利要求99的方法,其中所述檢查點(diǎn)激活物是ARQ501。
107.權(quán)利要求99的方法,其中所述輔助藥選自下組阿瑞吡坦(apr印itant)(愛(ài)門 德(emend))、恩丹西酮(ondansetron)(樞復(fù)寧(zofran))、勞拉西泮(loraz印am)、地塞 米松(地卡特隆(decadron))、苯海拉明(diphenhydramine)(苯那君(benadryl))、雷尼 替丁(ranitidine)(善胃得(Zantac))、西咪替丁(cimetidine)(泰胃美(tagamet))、雷 尼替丁(ranitidine)、法莫替丁(famotidine)、西咪替丁(cimetidine)、procrit、依普定 (印ogen)、優(yōu)保津(neupogen)、紐密伽(neumega)、甲酰四氫葉酸(Ieucovorin)和 GM-CSF。
108.權(quán)利要求19、34和72中任一項(xiàng)的方法,其中第二藥劑選自下組達(dá)珂(dacogen) (地西他濱(decitabine))、telcyta(canfosfamide)、EFAPR0XYN、替匹法尼(zarnestra)禾口 ionafarnib、他莫昔芬(tamoxifen)、托瑞米芬(toremifene)、雷洛昔芬(raloxifene)、屈 洛昔芬(droloxifene)、艾多昔芬(iodoxifene)、醋酸甲地孕酮、阿那曲唑(anastrozole)、 來(lái)曲唑(Ietrozole)、硼唑(borazole)、依西美坦(exemestane)、氟他胺(flutamide)、尼 魯米特(nilutamide)、必卡他胺(bicalutamide)、醋酸環(huán)丙孕酮(cyproteroneacetate)、 醋酸戈舍瑞林(gosereline acetate)、亮丙瑞林(Ieuprolide)、非那雄胺(finasteride)、 金屬蛋白酶抑制劑、尿激酶型纖溶酶原激活物受體功能抑制劑、生長(zhǎng)因子抗體、生長(zhǎng)因子 受體抗體、貝伐單抗(bevacizumab)、西妥昔單抗、絲氨酸/蘇氨酸激酶抑制劑、甲氨蝶 呤、5_氟尿嘧啶、嘌呤和腺苷類似物、阿糖胞苷、多柔比星、柔紅霉素、表柔比星、依達(dá)比 星、絲裂霉素-C、放線菌素D、光神霉素、順鉬、卡鉬、氮芥、美法侖、苯丁酸氮芥、白消安、 環(huán)磷酰胺、異環(huán)磷酰胺、亞硝基脲、塞替派、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春瑞濱(vinorelbine)、長(zhǎng)春堿、 長(zhǎng)春氟寧(vinflimine)、紫杉醇、多烯紫杉醇、埃博霉素類似物(印othilone analogs), discodermolide類似物、eleutherobin類似物、依托泊苷、替尼泊苷、安吖啶(amsacrine)、 拓?fù)涮婵怠lavopyridols、蛋白酶體抑制劑,包括硼替佐米(bortezomib),和生物反應(yīng)修飾 齊IJ、雄激素受體拮抗劑、LH/RH拮抗劑、紫杉烷(taxane)類似物和雌激素受體拮抗劑。
109.權(quán)利要求19、34和72中任一項(xiàng)的方法,其中所述癌癥選自下組肺癌、乳腺癌、宮 頸癌、結(jié)直腸癌、肝癌、頭頸部癌、胰腺癌、腦瘤、胃癌和前列腺癌。
110.藥物組合物,包含治療有效量的第一抗癌藥劑,其選自下組化合物及其可藥用鹽或溶劑化物2-(1-羥 乙基)_萘并[2,3-b]呋喃-4,9-二酮、2-乙酰基-7-氯-萘并[2,3-b]呋喃_4,9_ 二酮、 2-乙?;?7-氟-萘并[2,3-b]呋喃_4,9-二酮、2-乙?;敛2,3-b]呋喃_4,9_ 二酮、 2-乙基-萘并[2,3-b]呋喃-4,9- 二酮;和第二抗癌治療,其選自細(xì)胞毒性劑、靶向劑、放療劑、生物藥、激素藥、HDAC抑制劑、視 黃醇類藥、檢查點(diǎn)激活物、蛋白酶體抑制劑、輔劑和輔助藥。
111.權(quán)利要求110的藥物組合物,還包含可藥用的賦形劑 、載體或稀釋劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及應(yīng)用Stat3通路抑制劑或癌干細(xì)胞抑制劑組合治療癌癥的組合物和方法。
文檔編號(hào)A01N31/14GK101854802SQ200880115249
公開(kāi)日2010年10月6日 申請(qǐng)日期2008年9月10日 優(yōu)先權(quán)日2007年9月10日
發(fā)明者C·J·李, K·米庫(kù)爾, Y·李 申請(qǐng)人:波士頓生物醫(yī)藥公司
網(wǎng)友詢問(wèn)留言 已有0條留言
  • 還沒(méi)有人留言評(píng)論。精彩留言會(huì)獲得點(diǎn)贊!
1