專利名稱：一種可免疫預(yù)防和免疫治療癌癥及相關(guān)疾病的強(qiáng)化靈芝及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種可免疫預(yù)防和免疫治療癌癥及相關(guān)疾病的強(qiáng)化靈芝，本發(fā)明還涉及該強(qiáng)化靈芝的制備方法。
研究證明靈芝對(duì)試驗(yàn)動(dòng)物和人體的腫瘤有抑制作用，能在一定程度上縮小瘤重，使病痛得到緩解。另外，在臨床實(shí)踐上，也證明靈芝對(duì)延長(zhǎng)癌癥病人的生存期，減輕病人的痛苦，改善病人的生活質(zhì)量有一定或顯著的療效。靈芝與化療、放療聯(lián)合使用不但可加強(qiáng)治療的效果，而且能顯著地減少化療或放療的副作用。絕大多數(shù)有關(guān)科學(xué)文獻(xiàn)認(rèn)為靈芝對(duì)癌癥的治療作用，不是由于靈芝中有某種成分可以直接殺傷癌細(xì)胞，而是通過(guò)調(diào)動(dòng)了人體內(nèi)自身的免疫力(包括細(xì)胞免疫和體液免疫)，再通過(guò)這種增強(qiáng)后的免疫系統(tǒng)可以提升對(duì)癌細(xì)胞的殺傷水平，另外，在放療或化療的情況下，又可保護(hù)自身的免疫系統(tǒng)?？墒?，現(xiàn)有的靈芝菌種，可使產(chǎn)品質(zhì)量大相徑異，加上產(chǎn)地不同，生長(zhǎng)發(fā)育的生態(tài)條件不同，栽培的條件的不同，又造成藥用成分的變動(dòng)。另外，加工的方式不同，如家庭中常用的方法是與其他食品一起沸煮1-4小時(shí)，其有效成分更無(wú)法得到保護(hù)等原因，再加上不同的癌細(xì)胞種類不同，其毒性也不盡相同，因而導(dǎo)致治療效果往往難以持續(xù)或不夠理想。
現(xiàn)有不少人理解中醫(yī)現(xiàn)代化就是要將中藥簡(jiǎn)單的“西藥化”，即提純其單一的某種化學(xué)成分，弄清其結(jié)構(gòu)式并弄清其藥理及毒理，包括其藥物動(dòng)力學(xué)等。但我們認(rèn)為中藥(自然藥物)的作用是一種有效復(fù)合成分的作用背景，雖然對(duì)不同的疾病，有的成份是主要有效成分，有的是次要有效成份，另外藥物的各種成份之間可能還存在著相輔相成的作用；故上述簡(jiǎn)單的將靈芝“西藥化”并不能帶來(lái)理想的治療效果。
發(fā)明目的本發(fā)明的目的在于提供一種可免疫預(yù)防和免疫治療癌癥及相關(guān)疾病的強(qiáng)化靈芝，在以靈芝穩(wěn)定的、豐富的、多種有效成份作為基礎(chǔ)的背景下，有選擇性地增加特定的有效成份，以強(qiáng)化藥效作用。
本發(fā)明的目的另一個(gè)目的在于提供該強(qiáng)化靈芝的制備方法。
本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的可免疫預(yù)防和免疫治療癌癥的強(qiáng)化靈芝是由重量百分含量為10％～90％發(fā)酵靈芝菌粉和重量百分含量為10％～90％的從發(fā)酵靈芝菌粉中提取的靈芝多糖混合而成。
本發(fā)明所述各組分的重量百分含量為發(fā)酵靈芝菌粉25％～75％，從發(fā)酵靈芝菌粉中提取的靈芝多糖25％～75％。
本發(fā)明所述各組分的重量百分含量為發(fā)酵靈芝菌粉50％，從發(fā)酵靈芝菌粉中提取的靈芝多糖50％。
將上述組分合成本發(fā)明強(qiáng)化靈芝的制備方法，依次包括以下步驟(1)通過(guò)原生質(zhì)體紫外線誘變法選育靈芝新菌種，并由10噸罐和10噸罐以上大規(guī)模靈芝液體深層發(fā)酵工藝對(duì)選育的靈芝新菌種發(fā)酵制得靈芝濕菌絲體，靈芝濕菌絲體在50℃～60℃溫度干燥，粉碎成顆粒大小在80目左右的靈芝菌粉；(2)取上述靈芝菌粉，加5～6倍蒸餾水，98-100℃提取5小時(shí)，紗粗濾，3000轉(zhuǎn)/分離心，棄去殘?jiān)们逡?；再往清液中?～4倍95％乙醇沉淀，3000轉(zhuǎn)/分離心，棄去清液，得沉淀物；將沉淀物冷凍干燥，得靈芝粗多糖粉；(3)將上述靈芝粗多糖粉重復(fù)步驟2中的提取過(guò)程三次以上，得純度為40％～100％的靈芝多糖粉；(4)取步驟1中所得的靈芝菌粉和步驟3中所得的靈芝多糖粉按所述的重量百分含量混合均勻，即得強(qiáng)化靈芝。
使用本發(fā)明強(qiáng)化靈芝對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行預(yù)防與治療腫瘤的實(shí)驗(yàn)。為了方便對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的喂食，將本發(fā)明強(qiáng)化靈芝配成粉劑型，具體過(guò)程為在強(qiáng)化靈芝中加入少量0.1％吐溫-80混勻碾磨，逐漸加入0.5％纖維素鈉溶液，經(jīng)充分研細(xì)，混合成懸浮液，勻至定量。也可將本發(fā)明強(qiáng)化靈芝配成水煎劑型，具體過(guò)程為取靈芝菌粉1～3g與提取的靈芝多糖1～2g混合，加入100ml生理鹽水，室溫浸泡過(guò)夜后，加熱至80℃15分鐘，取濾液制成；每次每個(gè)實(shí)驗(yàn)鼠給藥體積為0.3ml水劑/10g體重。具體實(shí)驗(yàn)如下一、給藥方法(a)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選用發(fā)育期相同、體質(zhì)盡量相同的清潔級(jí)昆明小鼠，小鼠體重18～22kg，每組實(shí)驗(yàn)均使用同一性別的雄性小鼠，每次每組實(shí)驗(yàn)鼠均為10只。
(b)在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物接種癌細(xì)胞以前，實(shí)驗(yàn)藥粉劑型劑量分為低、中、高三種(即1g/kg、2g/kg、3g/kg)，每日灌胃給藥1次，連續(xù)10天。水煎劑每日灌胃給藥1次，給藥體積為0.3ml水劑/10g體重，連續(xù)10天。
(c)按上述的給藥劑量及方式，在小鼠接種癌細(xì)胞后，繼續(xù)給予強(qiáng)化靈芝以加強(qiáng)免疫力，10天后仔細(xì)觀察強(qiáng)化靈芝的對(duì)癌癥的預(yù)防和治療的效果。
二、接癌方法采用H22肝癌細(xì)胞作為癌源細(xì)胞，分別取含生長(zhǎng)旺盛的H22肝癌細(xì)胞的腫瘤小鼠脫椎處死，用碘酒和酒精腹部皮膚消毒，然后抽取含瘤細(xì)胞的腹水，精確計(jì)算每毫升中所含癌細(xì)胞的數(shù)目，再用一定劑量的注射用生理鹽水稀釋細(xì)胞至濃度為9.6×104/ml，分別取0.2ml上述癌細(xì)胞接種于每個(gè)實(shí)驗(yàn)鼠的右腋皮下，再連續(xù)灌胃給藥10天，停藥后次日仔細(xì)分析研究其免疫預(yù)防及免疫治療的結(jié)果。
三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果按上述給藥方法和接癌方法，經(jīng)三次重復(fù)試驗(yàn)(同時(shí)設(shè)三次生理鹽水灌胃對(duì)照)，結(jié)果證明強(qiáng)化靈芝有較好的預(yù)防癌癥的作用，每次均有20％以上的接癌小鼠體內(nèi)沒(méi)有觀察到長(zhǎng)癌的病征現(xiàn)象，三次平均其預(yù)防患癌率達(dá)到22.5％，三次平均其免疫治療的效果抑癌率達(dá)到65.58％，具體見(jiàn)表一、表二、表三。
表一強(qiáng)化靈芝預(yù)防及抑癌效果(第一次試驗(yàn))

*P＜0.05表二強(qiáng)化靈芝預(yù)防及抑癌效果(第二次試驗(yàn))

*P＜0.05**P＜0.01表三不同劑型強(qiáng)化靈芝預(yù)防及抑癌效果(第三次試驗(yàn))

*P＜0.05**P＜0.01四、病理學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果1、強(qiáng)化靈芝能顯著抑制腫瘤的惡化程度，明顯降低腫瘤細(xì)胞癌變程度和改善腫瘤細(xì)胞的病變水平，表現(xiàn)在以下幾點(diǎn)(a)顯著降低腫瘤的惡化程度P53是重要的腫瘤抑制因子，P53的基因突變是許多惡性腫瘤的發(fā)生原因之一，正常的P53蛋白半衰期很短，突變后半衰期明顯延長(zhǎng)，易被免疫組織方法檢測(cè)出來(lái)。從表四可見(jiàn)對(duì)照組腫瘤P53陽(yáng)性率隨著接種癌細(xì)胞時(shí)間延長(zhǎng)，此比例尚可不斷增加，在接種10天后其惡性程度的抑制率可達(dá)119.48±7.23％，但經(jīng)強(qiáng)化靈芝給藥接種后20天，其惡化程度的抑制率仍可保留在57.83±4.43％水平，據(jù)此，強(qiáng)化靈芝可明顯降低腫瘤細(xì)胞的惡化程度，也就是可顯著抑制腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移的能力。
表四 強(qiáng)化靈芝對(duì)P53所致的腫瘤惡化程度的影響

*P＜0.05**P＜0.001(b)強(qiáng)化靈芝能明顯降低腫瘤組織和其體內(nèi)血清中腫瘤標(biāo)志酶的活性，顯示可明顯降低癌變的程度從表五、六可見(jiàn)用強(qiáng)化靈芝預(yù)防給藥后可明顯降低腫瘤細(xì)胞及其血清中的兩種腫瘤標(biāo)志酶Y一谷胺酰胺轉(zhuǎn)肽酶(Y-BT)及谷胺甘肽—S—轉(zhuǎn)移酶(GST)的活性，再次預(yù)示本實(shí)驗(yàn)的強(qiáng)化靈芝可明顯降低腫瘤細(xì)胞癌變程度及可促進(jìn)癌細(xì)胞向正常細(xì)胞逆轉(zhuǎn)再分化的可能機(jī)率。
表五強(qiáng)化靈芝對(duì)血清和腫瘤組織中r-GT活性的影響

*P＜0.05表六強(qiáng)化靈芝對(duì)血清和腫瘤組織中GST活性的影響

*P＜0.05**P＜0.012、強(qiáng)化靈芝預(yù)防和治療給藥明顯改善腫瘤組織細(xì)胞的病變水平將對(duì)照組和給藥組的腫瘤取出，切成制片，用顯微鏡觀察可見(jiàn)對(duì)照組與強(qiáng)化靈芝給藥組的腫瘤中的組織學(xué)特征有明顯差別。從

圖1可見(jiàn)，對(duì)照組腫瘤的組織易碎，無(wú)彈性，邊界不規(guī)則，中間壞死，空洞大，分化程度小。從圖2可見(jiàn)，經(jīng)用強(qiáng)化靈芝給藥后，在其已明顯縮小的腫瘤組織中，組織切片較有彈性，不易碎，邊界分明，中間無(wú)壞死，空洞小或無(wú)空洞，分化程度大。這首次證明強(qiáng)化靈芝不僅能明顯抑制腫瘤生長(zhǎng)，而且能改善腫瘤組織內(nèi)部細(xì)胞病變的程度。
3、強(qiáng)化靈芝能明顯增加機(jī)體自身免疫能力，表現(xiàn)在以下方面(a)強(qiáng)化靈芝可明顯提高吞噬細(xì)胞的吞噬能力利用硫乙醇酸鈉刺激小鼠腹腔巨噬細(xì)胞，可使其激活并獲得應(yīng)答能力和獲得具吞噬功能的巨噬細(xì)胞，從表七可見(jiàn)經(jīng)不同濃度靈芝提取液的作用，可見(jiàn)其吞噬中性紅能力較對(duì)照組可分別提高10～45％。
表七強(qiáng)化靈芝對(duì)吞噬細(xì)胞吞噬作用的影響

(b)強(qiáng)化靈芝能顯著改善T淋巴亞群的結(jié)構(gòu)，從而可增強(qiáng)體內(nèi)的免疫力CD4/CD8(即T淋巴輔助細(xì)胞/T淋巴毒細(xì)胞)的比例可作為反映細(xì)胞免疫能力的一個(gè)重要指標(biāo)。從表八可見(jiàn)，用強(qiáng)化靈芝預(yù)防能夠顯著增加T淋巴輔助細(xì)胞的百分率，且同時(shí)可降低T淋巴毒細(xì)胞的百分率，從而可扭轉(zhuǎn)CD4/CD8細(xì)胞的不正常比例，使之接近正?；纱丝稍鰪?qiáng)細(xì)胞的免疫能力。
表八強(qiáng)化靈芝對(duì)CD4/CD8比例的影響

*P＜0.001**P＜0.001
(c)強(qiáng)化靈芝可明顯刺激骨髓造血組織中淋巴細(xì)胞及其集落的產(chǎn)生從圖3、4可見(jiàn)，經(jīng)優(yōu)質(zhì)強(qiáng)化靈芝給藥后，可明顯刺激骨髓造血組織的生長(zhǎng)，可見(jiàn)大量淋巴細(xì)胞集落的產(chǎn)生，從而可有效提升機(jī)體的免疫能力。
(d)應(yīng)用強(qiáng)化靈芝能明顯減少癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力，延長(zhǎng)患癌機(jī)體的生存期對(duì)接種癌細(xì)胞的鼠體進(jìn)行解剖和觀察分析，發(fā)現(xiàn)在對(duì)照組中，80％以上的小鼠中有可見(jiàn)的腫瘤組織轉(zhuǎn)移至肺和肝臟，但在強(qiáng)化靈芝給藥組中均未發(fā)現(xiàn)在肺和肝臟中有可見(jiàn)的轉(zhuǎn)移的腫瘤組織。另外，對(duì)一組接種癌細(xì)胞的對(duì)照組和強(qiáng)化靈芝給藥組的小鼠持續(xù)觀察其死亡速度和存活期，發(fā)現(xiàn)在對(duì)照組中，在接種后13天開(kāi)始有鼠體死亡，且個(gè)體死亡頻度較快，而經(jīng)靈芝給藥組，在16天后才有個(gè)體死亡，且個(gè)體死亡頻度較慢，個(gè)別的尚可保持正常小鼠的生存期，由此可見(jiàn)，強(qiáng)化靈芝能不同程度地延長(zhǎng)接癌小鼠的存活期。
綜上所述，本發(fā)明強(qiáng)化靈芝對(duì)癌癥的預(yù)防和治療都有顯著的效果。另外，根據(jù)其藥理作用本發(fā)明可有效地顯著地增加自身的免疫力，因此，本發(fā)明也可應(yīng)用于免疫預(yù)防和治療或輔助免疫預(yù)防和治療各種傳染病及各種免疫低下癥。
取上述靈芝菌粉，加5倍蒸餾水，98℃提取5小時(shí)，紗粗濾，3000轉(zhuǎn)/分離心，棄去殘?jiān)?，得清液；再往清液中?倍95％乙醇沉淀，3000轉(zhuǎn)/分離心，棄去清液，得沉淀物；將沉淀物冷凍干燥，得靈芝粗多糖粉；再將靈芝粗多糖粉重復(fù)上述提取過(guò)程五次，得純度約為60％的靈芝多糖粉。
分別取上述工藝制得的靈芝菌粉20Kg和靈芝多糖粉20Kg混合均勻，即得強(qiáng)化靈芝。或者分別取靈芝菌粉25Kg和靈芝多糖粉75Kg混合均勻；或者分別取靈芝菌粉90Kg和靈芝多糖粉10Kg混合均勻。
權(quán)利要求
1.一種可免疫預(yù)防和免疫治療癌癥及相關(guān)疾病的強(qiáng)化靈芝，其特征在于由重量百分含量為10％～90％發(fā)酵靈芝菌粉和重量百分含量為10％～90％的從發(fā)酵靈芝菌粉中提取的靈芝多糖混合而成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的可免疫預(yù)防和免疫治療癌癥及相關(guān)疾病的強(qiáng)化靈芝，其特征在于所述各組分的重量百分含量為發(fā)酵靈芝菌粉25％～75％，從發(fā)酵靈芝菌粉中提取的靈芝多糖25％～75％。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的可免疫預(yù)防和免疫治療癌癥及相關(guān)疾病的強(qiáng)化靈芝，其特征在于所述各組分的重量百分含量為發(fā)酵靈芝菌粉50％，從發(fā)酵靈芝菌粉中提取的靈芝多糖50％。
4.權(quán)利要求1所述的可免疫預(yù)防和免疫治療癌癥及相關(guān)疾病的強(qiáng)化靈芝的制備方法，其特征在于依次包括以下步驟(1)通過(guò)原生質(zhì)體紫外線誘變法選育靈芝新菌種，并由10噸罐和10噸罐以上大規(guī)模靈芝液體深層發(fā)酵工藝對(duì)選育的靈芝新菌種發(fā)酵制得靈芝濕菌絲體，靈芝濕菌絲體在50℃～60℃溫度干燥，粉碎成顆粒大小在80目左右的靈芝菌粉；(2)取上述靈芝菌粉，加5～6倍蒸餾水，98-100℃提取5小時(shí)，紗粗濾，3000轉(zhuǎn)/分離心，棄去殘?jiān)?，得清液；再往清液中?～4倍95％乙醇沉淀，3000轉(zhuǎn)/分離心，棄去清液，得沉淀物；將沉淀物冷凍干燥，得靈芝粗多糖粉；(3)將上述靈芝粗多糖粉重復(fù)步驟2中的提取過(guò)程三次以上，得純度為40％～100％的靈芝多糖粉；(4)取步驟1中所得的靈芝菌粉和步驟3中所得的靈芝多糖粉按所述的重量百分含量混合均勻，即得強(qiáng)化靈芝。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種可免疫預(yù)防和免疫治療癌癥及相關(guān)疾病的強(qiáng)化靈芝及其制備方法，由重量百分含量為10％～90％發(fā)酵靈芝菌粉和重量百分含量為10％～90％的從發(fā)酵靈芝菌粉中提取的靈芝多糖混合而成，本發(fā)明在以靈芝穩(wěn)定的、豐富的、多種有效成份作為基礎(chǔ)的背景下，有選擇性地增加特定的有效成份，以強(qiáng)化藥效作用，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及其病理學(xué)實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明對(duì)癌癥的免疫預(yù)防和免疫治療、各種傳染病及各種免疫低下癥都有更顯著的效果。
文檔編號(hào)A61P37/00GK1444990SQ03106578
公開(kāi)日2003年10月1日 申請(qǐng)日期2003年3月3日 優(yōu)先權(quán)日2002年12月31日
發(fā)明者李寶健, 張擎 申請(qǐng)人:李寶健