專利名稱：摘出器官的保存、復(fù)蘇和移植方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及哺乳動物的摘出器官的保存、復(fù)蘇和移植方法。更詳細(xì)的，涉 及摘出哺乳動物的器官，在固定娜艮保存后，將其移植復(fù)蘇的方法。
背景技術(shù)：
心臟、腎臟、肝臟等一旦出im會據(jù)竭，即使實施藥物治療、手術(shù)治療、
AXJtl斤治療，如果癥狀加重，則這些處治都不育統(tǒng)率決。因此，即使移植他人
的器官，實施所謂的臨床移植治療，由于器官提供者(供體)不足，對于器官 接受者(受體)不能充分供給器官。此外，由于器官移植手術(shù)后免疫調(diào)節(jié)缺乏 發(fā)病，移植的器官的質(zhì)量、親和性成為m^的課題。
在現(xiàn)在實施的器官移植手術(shù)中使用人的移植器官的情況下，從供體中摘出 至夠植到受體的最大娜艮，例如對于心臟4小時是期限。如果可以延長它們的 保存期限，由于儲存摘出器官成為可能，可以期待貢獻(xiàn)給更多的受體。
傳統(tǒng)的動物器官的保存方法是在低溫保存下保存極限為4-24小時(J. Thorac. Cardiovasc. Surg.迎，460471, 1994)，使用威斯康星大學(xué)溶液 (University of Winsconsin Solution ) (UW溶液)盼瞎況下，6隱18小時是極 限(TransplantProc. 21,1350,1989;Ann.Thorac. Surg. 42,932,1990)，或^f頓UW 溶液、全氟化碳溶液和氧的情況下，成功移植的是最長48小時，^ffl該保存器 官的雜心臟移植后的生存期限是6周(Transplantation叢699-701,1995)。
另一方面，在JP-A-2000-72601號公報中，記載了將浸泡在海藻糖溶液中 的摘出器官用 、 ^^篩等脫7jC劑J^7jC處理，浸泡在全氟化碳中，通過冷藏 保存可以保存10-20天。財卜，在WO2002/069702中，記載了fflil用混^體 曝氣的克雷布斯-漢斯萊特(Krebs-Henseleit， KH)溶液在摘出器官中灌流 血，將混仏體(氧氣95%^二氧化碳5%) ;i^A脫血的器官中脫水，直到7j^分 除去率達(dá)到25-60%后，浸泡在全氟化碳溶液中，然后，{慰見定娜艮冰箱保存的 器官復(fù)蘇的方法，該方法中復(fù)蘇了保存24小時的器官。
但是，在這些方法中， 一旦器官的7K分喪失到一定程度以上，例如對于心臟喪失30%以上時，就存在復(fù)蘇率非常低下的問題，而且需要操作上也很錢 的高度技術(shù)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供不將心臟、腎臟、角膜等摘出器官進(jìn)行脫水、千燥的 復(fù)雜操作，使這些器官能夠長期保存，會,移植該保存器官、使其復(fù)蘇的摘出 器官的保存方法。
本發(fā)明的目的^M31摘出哺乳動物的器官，用灌流瀬繊出器官灌流IMl， 將灌流脫血的器官在溫度4-10。C，相對濕度80-92%，絕對壓力5000-8000hPa 的條件下，在含有二氧化碳、氧氣和惰性氣體的混合氣體的存在下保存來實現(xiàn) 的。
ffi5tt發(fā)明涉及的器官保存方法，例如心臟即使在72-96小時的保存后， 進(jìn)行，心臟移植的瞎況下，也獲得了育嫩記錄到心搏的優(yōu)秀成果。
因此，由于將被保存的摘出器官移植到受體中，本發(fā)明方法可認(rèn)為是開創(chuàng) 性的方法。此外，本發(fā)明方法除了心臟以外，還可以適用于腎臟、肝臟、I熟l、 肺等各種器官。


圖l頸部，心臟移植的循環(huán)動態(tài)示意圖。
具體實施例方式
從哺學(xué)L動物中摘出器官的方法，可以fflil—般的夕卜禾樣術(shù)進(jìn)行。 用于將摘出器官灌流脫血而使用的灌流液，為用混合氣體曝氣的克雷布斯-漢斯萊特溶液(KH溶液)，混仏體是氧氣和二氧化碳的混仏體，雌的是 4頓氧氣85-95: 二氧化碳5-15的分壓比的氣體。灌流液《鄰到器官的保存溫 度4-10。C， 的4-6°。，為了防止腐蝕，添加抗生m^防腐效果的藥劑^im 的。灌流是在摘出器官的主動脈中插入導(dǎo)管，安裝蘭根道爾夫(Langendorff) 式灌流裝置，通過灌流5-10併中，，10併中的灌流液，進(jìn)行脫血。
財卜，作為灌流液使用的KH溶液，im其葡萄糖量變更成一般的lOmM 的2-5倍量即20-50mM，再優(yōu)選的是34倍量即3040mM而使用。由此維持器 官的功能或在器官移植時排斥反應(yīng)的抑制效果得以優(yōu)化。此外，以防止血液凝
固為目的，在灌流液中添加華法林是im的。
灌流脫血 凈的器官，在溫度4-10。C， i 24°C，相對》顯度50-92%、優(yōu)選80-90%，絕對壓力5000-8000hPa， ,6000-8000hPa的條K牛下，在含有二 氧化碳、氧氣和惰性氣體的混仏體的存在下保存。保存在該壓力下的器官， 由于氧氣或二氧化碳溶解在器官中，細(xì)胞內(nèi)被結(jié)構(gòu)化，獲得了器官能夠被保存 復(fù)蘇移植的效果。其中對于使用的惰性氣體，可例舉氦氣、氬氣等，對于混合 氣體，可以使用各自分壓為二氧化碳50400hPa，優(yōu)選50-100hPa，氧氣 400-2000hPa，雌1000-2000hPa，情性氣體2600-7000hPa，雌2900-6000hPa 的氣體。其中，如果在比上述絕對壓力低的壓力下進(jìn)行器官的保存，保存可能 時間的娜臨尤變?yōu)?4小時以下，另一方面，如果在比它高的壓力下進(jìn)行保存， 由于存在患低壓癥的原因，因此是不雌的。
被保存的器官在生理鹽水中浸泡1至10辦中左右，復(fù)蘇后，移植至湘同、
同種^禾中的哺孚L動物中。
關(guān)于摘出器官的存活的驗證，有電生理學(xué)的方法、組織J 剖學(xué)的方法、實 際移植進(jìn)行驗證的移植方法等，例如對于心臟的情況，aai使用心電圖的電生 理學(xué)的方法，或通過由異位心臟移植所導(dǎo)致的受體大鼠的存活天數(shù)等可以確認(rèn)
保存期限是否合適，對于腎臟的情況下，將保存的器官移植到動物，M3i測定
被移植的動物的尿蛋白量，可以確認(rèn)保存期限，與否。
可以^f頓本發(fā)明的方法的器官，除了心臟以夕卜還可例舉腎臟、肝臟、月繊、 肺等。 實施例
以下記載了本發(fā)明的實施例，但本發(fā)明不限于這些實施例。 實施例1
使用符合美國NIH的實驗動物標(biāo)準(zhǔn)的、人工繁殖的雌性6周齡大鼠 LEW/SsNslc (體重224g)。大鼠腹腔內(nèi)施用乙醚麻醉藥0.3ml，其后開胸摘出大 鼠的心臟。向摘出心臟(重量L349g)的主動脈中用肝素鈉的生理鹽水脫血(沖 洗)后，,Ai動脈插入導(dǎo)管，MJa灌流5iH中，注入在4'C的KH溶液(葡萄糖 變?yōu)?0mM)中添加頭孢他啶0.05%、米諾環(huán)素0.05%和華法林0.5mg/500ml形 成的液體作為保存液，所述KH溶Mii含有氧氣85% (850hPa)和二氧化碳 15% (150hPa)的混合氣體曝氣而形成。灌流后，將含有二氧化碳100hPa、氧 氣1900hPa、氦氣4000hPa的混合氣體導(dǎo)入心臟，方Vv相對溫度90%的高壓箱 中， 在41冰箱中，保存72小時。保存時間結(jié)束后，將取出的器官(重量1.320g)在生理鹽水中浸泡1^H中 后，纟糊出保存的心臟在受體大鼠的右偵頓部，按頸總動脈與主動脈、頸外動 脈與肺動脈分別端對端的吻合的方式，實施雜心臟移植(參見圖1)，幫瞿流 開始后，用心電圖記錄受體大鼠的供體。、臟的搏動。該結(jié)果，在心耳心房處確 認(rèn)了強(qiáng)的、波動的搏動。此外，心電圖是在供體心臟的左心室和主動脈開孔處 安裝心電圖記錄用電極，通過雙曲誘導(dǎo)使用活體放大器(NEC三榮生產(chǎn)的 Bioview-E)連續(xù)記錄的。
實施例2
在實施例1中，對體重213g的大鼠同樣;fcfeit行心臟的摘出、保存和移植， 在再灌流開始后確定'll、搏時，在心耳和心房處確定了弱的搏動。其中，摘出后 的心臟重量是1.335g，保存結(jié)束后的心臟重量是1.284g。
實施例3
在實施例1中，混仏體4頓二氧化碳50hPa、氧氣950hPa、氦氣6000hPa， 對體重251g的大鼠同樣itkiS行心臟的摘出、保存和移植，在再灌流開始后確認(rèn) 心搏時，在心耳和心房處確認(rèn)了微弱的全搏動，S卩使在其后1小時也確認(rèn)了盡 管微弱但仍在繼續(xù)搏動。其中，摘出后的心m量是1.323g，保存結(jié)束后的心 雌量是1.358g。
實施例4
在實施例1中，混合氣體4頓二氧化碳50hPa、氧氣1950hPa、氦氣5000hPa， 對體重183g的大鼠同樣;fcfeiS行心臟的摘出、保存和移植，在再灌流開始后，確 認(rèn)A禍時，在心房的一部分確認(rèn)了微弱的搏動，在其后9併中時確定了微弱的 全搏動，再在其后6併中時確定了弱的全搏動。其中，摘出后的心臟重量是 1.229g，保存結(jié)束后的心臟M是1.074g。
實施例5
在實施例1中，混合氣體4柳二氧化碳100hPa、氧氣900hPa、氦氣6000hPa， 對于體重185g的大鼠同樣地進(jìn)行心臟的摘出、保存和移植，在再灌流開始后， 確認(rèn)心搏時，確認(rèn)了弱的全搏動。其中，摘出后的心臟重量是1.364g，保存結(jié) 束后的心ltt量是1.070g。
實施例6
在實施例1中，混合氣體^ffl二氧化碳100hPa、氧氣900hPa、氬氣6000hPa，
6且保存時間變更為96小時，對體重250g的大鼠同樣iikit行心臟的摘出、保存 和移植，在再灌流開始后，確認(rèn)心搏時，確認(rèn)了心耳的微弱的搏動。其中，摘 出后的心臟重量是1.366g，保存結(jié)束后的心臟重量是1.233g。 比較例
在實施例1中，將灌流后的心臟浸泡在鄉(xiāng)M壓力1000hPa的全氟化碳溶液 (住友3M制品7口y于一卜FC77; QF18)中，在含有氮氣80%和氧氣20%的 標(biāo)準(zhǔn)空氣中間歇曝氣的狀態(tài)，,在4'C的冰箱中，保存72小時，保存72小時 后的供體心臟的搏動，在實施的5例中全部未能確認(rèn)。
產(chǎn)業(yè)實用性
本發(fā)明涉及器官的保存方法是不將心臟、腎臟、角膜等的細(xì)胞、組織、摘 出器官進(jìn)行脫水、干燥的復(fù)雜操作，使保存后的器官能夠長期的保存，所述器 官是可實現(xiàn)功能的狀態(tài)的摘出器官，使用本發(fā)明的保存方法保存的摘出器官， 可以移植到相同、同種^種的哺乳動物中，在器官移植醫(yī)療中非常有用。
權(quán)利要求
1、摘出器官的保存方法，其特征在于，摘出哺乳動物的器官，用灌流液將摘出的器官灌流脫血，將灌流脫血的器官在溫度4-10℃、相對濕度80-92％、絕對壓力5000-8000hPa的條件下，在含有二氧化碳、氧氣和惰性氣體的混合氣體的存在下保存。
2、 權(quán)利要求1所述的摘出器官的保存方法，混仏體的分壓是二氧化碳 50400hPa、氧氣400-2000hPa和惰性氣體2600-6000hPa。
3、 權(quán)利要求1或2所述的摘出器官的保存方法，情性氣體是氦氣龜氣。
4、 權(quán)利要求1或2所述的摘出器官的保存方法，哺乳動物的器官是心臟。
5、 禾又利要求1所述的摘出器官的保存方法，灌流液是用按照分壓比計氧氣 為95-50%和二氧化碳為5-50%的混仏體曝氣的克雷布斯-漢斯萊特溶液。
6、 權(quán)利要求5戶艦的摘出器官的保存方法，f頓葡萄糖量是20-50mM的克雷布斯國漢斯萊特溶液。
7、 il31權(quán)利要求1至6中任一項所述的方齒呆存的摘出器官。
8、 器官復(fù)蘇方法，其特征在于，ffiil將權(quán)利要求7所述的摘出器官移植到 相同、同種離種的哺乳動物中，實施摘出器官的復(fù)蘇。
9、 器官移植方法，^#征在于，將權(quán)利要求7所述的摘出器官移植到相同、 同種，種的哺乳動物中。
10、 權(quán)利要求9所述的器官移植方法，移植是雜心臟移植。
全文摘要
本發(fā)明涉及摘出器官的保存、復(fù)蘇和移植方法。摘出哺乳動物的器官，用灌流液將摘出的器官灌流脫血，將灌流脫血的器官在溫度4-10℃、絕對壓力5000-8000hPa的條件下，保存在含有二氧化碳、氧氣和惰性氣體的混合氣體中。通過該摘出器官的保存方法，可以不將心臟、腎臟、角膜等的細(xì)胞、組織、摘出器官進(jìn)行脫水干燥等復(fù)雜的操作，長期保存這些器官。
文檔編號A01N1/02GK101578976SQ20081012874
公開日2009年11月18日 申請日期2008年5月16日 優(yōu)先權(quán)日2008年5月16日
發(fā)明者關(guān)邦博, 吉田優(yōu), 畑山直之 申請人:共鳴俱樂部株式會社