專利名稱：：一種生產(chǎn)乳酸的方法及其專用植物乳桿菌的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種生產(chǎn)乳酸的方法及其專用植物乳桿菌。
背景技術(shù)：
：隨著石油資源的不斷減少以及不可再生資源價(jià)格的節(jié)節(jié)攀升，開(kāi)發(fā)利用對(duì)環(huán)境更友好的生物基產(chǎn)品已成為轉(zhuǎn)變經(jīng)濟(jì)增長(zhǎng)方式、保障生態(tài)鏈良性循環(huán)和實(shí)現(xiàn)經(jīng)濟(jì)社會(huì)可持續(xù)發(fā)展的戰(zhàn)略需求。乳酸是一種重要的、多用途的生物基平臺(tái)化合物，能夠廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥、化工、紡織、環(huán)保和農(nóng)業(yè)等諸多領(lǐng)域，其中最重要、最廣泛的工業(yè)應(yīng)用是用于生產(chǎn)可降解聚合物-聚乳酸(PLA)。聚乳酸具有生物相容性、生物可降解性以及優(yōu)良的機(jī)械性能和物理性能，因而被產(chǎn)業(yè)界認(rèn)為是新世紀(jì)最有發(fā)展前途的新型可再生材料，是石油基產(chǎn)品的重要替代品之一。聚乳酸是一類脂肪族聚酯，主要包括聚L-乳酸(PLLA)、聚D-乳酸(PDLA)和聚DL-乳酸(PDLLA)三種，其中使用規(guī)模最廣泛的是PLLA，PLLA目前已廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)、紡織、農(nóng)業(yè)和食品等領(lǐng)域。聚乳酸作為大規(guī)模應(yīng)用的工業(yè)材料，需要有合適的熱穩(wěn)定性，以防止其降解。然而由于同型聚乳酸熱變形溫度低，導(dǎo)致聚L-乳酸作為工業(yè)塑料的應(yīng)用受到限制。2003年，Yamane等發(fā)現(xiàn)聚L-乳酸和聚D-乳酸的立體共聚物比單純的聚L-乳酸有更高的熔點(diǎn)，聚L-乳酸的熔點(diǎn)(rm)大約為18(TC，而聚L-乳酸和聚D-乳酸的立體共聚物的熔點(diǎn)能夠達(dá)到230°C，這一實(shí)驗(yàn)結(jié)果使工業(yè)界對(duì)D-乳酸的生產(chǎn)產(chǎn)生了巨大的興趣。相對(duì)于對(duì)L-乳酸生產(chǎn)菌株的研究的高度關(guān)注，D-乳酸發(fā)酵生產(chǎn)的研究仍然處于起步階段。根據(jù)國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)和專利的報(bào)道，目前只有德氏乳桿菌a."e/6n^c^)、嗜酸芽孢桿菌(iS/ora/actokc/〃ws/"w/z>ms)禾口棒狀乳桿菌(丄.cw7m/0rm/s)等有限的幾種天然乳酸菌用于生產(chǎn)D-乳酸，這極大地限制了D-乳酸在工業(yè)領(lǐng)域的應(yīng)用，阻礙了聚乳酸市場(chǎng)的開(kāi)拓。因此有必要篩選更優(yōu)良、應(yīng)用潛力更高的產(chǎn)D-乳酸的菌株，才能從根本上解決問(wèn)題，滿足市場(chǎng)的要求。植物乳桿菌是典型的同型發(fā)酵乳酸菌，具有較強(qiáng)的乳酸生產(chǎn)能力和耐鹽性，是潛在的工業(yè)應(yīng)用菌株，然而已發(fā)現(xiàn)的植物乳桿菌主要用于生產(chǎn)DL-乳酸，因而不能滿足市場(chǎng)對(duì)D-乳酸的要求。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一株生產(chǎn)乳酸的植物乳桿菌a.p/anton^)SMB-2。本發(fā)明所提供的植物乳桿菌a孑/a"ton^)SMB-2是從發(fā)酵食品-云南泡菜中篩選得到的，鑒定為植物乳桿菌(丄./7/a"tow附)。植物乳桿菌a.p/朋tomm)SMB-2已于2008年6月27日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(簡(jiǎn)稱CGMCC，地址為北京市朝陽(yáng)區(qū)大屯路，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所)，保藏登記號(hào)為CGMCC処2566。植物乳桿菌(Z./7/aWan^z)SMB-2CGMCCJVfe2566為革蘭氏陽(yáng)性菌，菌落較小、圓形、淡乳白色、邊緣整齊光滑，電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，SMB-2營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞的菌體大小為(0.5~0.6)pmX(0.93.0)Mm,菌株單生、成對(duì)生或短鏈狀排列，兼性厭氧，無(wú)芽孢。以上述植物乳桿菌a.p/awtomm)SMB-2CGMCCJVT22566為活性成分制備的生物菌劑也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。上述生物菌劑在具體應(yīng)用時(shí)，可根據(jù)需要在其中添加其他的輔料。本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供一種利用植物乳桿菌(丄.;/a"towm)SMB-2CGMCC掀2566生產(chǎn)乳酸的方法。本發(fā)明所提供的生產(chǎn)乳酸的方法，是發(fā)酵植物乳桿菌a.p/wton^)SMB-2CGMCCWs2566得到乳酸。所述植物乳桿菌a.p/朋torwm)SMB-2CGMCCJV22566的發(fā)酵培養(yǎng)基的組成為葡萄糖120~150g/L、蛋白胨10g/L、牛肉膏10g/L、酵母提取物5g/L、K2HP043g/L、KH2P043g/L、乙酸鈉2g/L、MgS04.7H200.58g/L、MnS04'4H200.25g/L、Tween-801ml/L和用于控制發(fā)酵液pH值的中和劑。發(fā)酵過(guò)程中控制pH范圍在5.5~6.2。上述發(fā)酵培養(yǎng)基中的中和劑為Ca(OH)2或氨水，優(yōu)選為Ca(OH)2，所述Ca(OH)2的濃度為296g/L。所述植物乳桿菌a.//朋torwm)SMB-2CGMCCW2566的發(fā)酵條件為35~39°C靜置培養(yǎng)48小時(shí)。所述發(fā)酵培養(yǎng)方式為分批補(bǔ)料發(fā)酵培養(yǎng)，每12小時(shí)補(bǔ)加60mL1000g/L的葡萄糖一次。本發(fā)明利用植物乳桿菌a.;/朋tomm)SMB-2CGMCCJV22566發(fā)酵生產(chǎn)乳酸，結(jié)果表明，發(fā)酵48小時(shí)時(shí)，發(fā)酵液中總?cè)樗岬臐舛葹?8%，D-乳酸的光學(xué)純度為84-86%，發(fā)酵產(chǎn)率為3.75g/L*h。且該植物乳桿菌a""o^"7/wp/""torwm)SMB-2CGMCCW2566易于沉降到發(fā)酵罐底部進(jìn)行生長(zhǎng)，有利于工業(yè)生產(chǎn)中菌-液的分離純化，可以降低乳酸工業(yè)生產(chǎn)的成本，具有重要的工業(yè)應(yīng)用價(jià)值。圖1為植物乳桿菌a.//a"toww)SMB-2的具體篩選流程圖2為植物乳桿菌(丄.p/flw/an^)SMB-2的掃描電鏡照片圖3為植物乳桿菌a.p/a"far臓)SMB-2種子液的沉降效果圖4為植物乳桿菌a.//朋tor謂)SMB-2發(fā)酵液的沉降效果具體實(shí)施例方式下述實(shí)施例中所述方法，如無(wú)特別說(shuō)明均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所述百分含量，如無(wú)特別說(shuō)明均為質(zhì)量百分含量。實(shí)施例l、植物乳桿菌a.;/fl"^謂)SMB-2的分離、純化及鑒定植物乳桿菌a.//flwtorwm)SMB-2的具體篩選流程如圖1所示。1、菌種的分離和純化將發(fā)酵食品-云南泡菜浸泡于無(wú)菌的生理鹽水中充分洗滌，然后取上述洗滌液加入到MRS液體培養(yǎng)基中，37匸厭氧富集培養(yǎng)48小時(shí)，獲得pH〈4.0的富集液；取上述富集液，10倍梯度稀釋后涂布于含4。/。CaCO3的MRS固體培養(yǎng)基上，37。C厭氧培養(yǎng)24小時(shí)，挑取透明圈較大的單菌落分別接種于MRS液體培養(yǎng)基中厭氧培養(yǎng)24小時(shí)，觀察是否產(chǎn)氣，篩選得到不產(chǎn)氣的菌株，即同型發(fā)酵乳酸菌；將上述篩選得到得同型發(fā)酵乳酸菌分別接種于復(fù)篩培養(yǎng)基上，37。C厭氧培養(yǎng)48小時(shí)，通過(guò)高效液相色譜檢測(cè)總?cè)樗岬漠a(chǎn)量，獲得高產(chǎn)的乳酸菌；將上述獲得的乳酸菌通過(guò)乳酸檢測(cè)試劑盒(購(gòu)自德國(guó)拜爾公司)檢測(cè)D-乳酸的光學(xué)構(gòu)型，最終從發(fā)酵食品-云南泡菜中得到一株D-乳酸光學(xué)純度為84~86%的菌株，即植物乳桿菌a.;/fl"tor訓(xùn))SMB-2，經(jīng)多次傳代后發(fā)酵測(cè)試，總?cè)樗岙a(chǎn)量、D-乳酸的純度沒(méi)有明顯變化。植物乳桿菌a./7/a"torMW)SMB-2篩選中所用的MRS液體培養(yǎng)基為葡萄糖20g/L，蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L，牛肉膏10g/L，K2HP042g/L，檸檬酸二鉸2g/L，乙酸鈉2g/L，吐溫801mL/L，MgS04'7H200.58g/L，MnS04'4H200.25g/L。發(fā)酵過(guò)程中控制pH范圍在5.5~6.2。115。C條件下滅菌20分鐘。植物乳桿菌a.p/fl"towm)SMB-2篩選中所用的含4Q/oCaC03的MRS固體培養(yǎng)基為葡萄糖20g/L，蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L，牛肉膏10g/L，K2HP042g/L，檸檬酸二銨2g/L，乙酸鈉2g/L，吐溫801mL/L，MgS04*7H200.58g/L,MnS044H200.25g/L，CaC0340g/L，瓊脂15g/L。發(fā)酵過(guò)程中控制pH范圍在5.5~6.2。。115。C條件下滅菌20分鐘。植物乳桿菌(丄.//awtowm)SMB-2篩選中所用的復(fù)篩培養(yǎng)基為葡萄糖120g/L，蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L，牛肉膏10g/L，K2HP042g/L，檸檬酸二銨2g/L，乙酸鈉2g/L，吐溫801mL/L，MgS04'7H200.58g/L，MnS04'4H200.25g/L，CaC0340g/L。發(fā)酵過(guò)程中控制pH范圍在5.56.2。115。C條件下滅菌20分鐘。D-乳酸光學(xué)純度二D-乳酸濃度/總?cè)樗釢舛取?、菌株的鑒定將上述步驟l篩選得到的植物乳桿菌a.;/awtonw2)SMB-2進(jìn)行形態(tài)特征、生理生化試驗(yàn)、API試劑盒和16SrDNA序列鑒定，具體結(jié)果如下該菌株菌落較小、圓形、淡乳白色、邊緣整齊光滑，.電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，SMB-2營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞的菌體大小為(0.5-0.6)MmX(0.9~3.0)pm，菌株的電鏡掃描照片如圖2所示。菌株單生、成對(duì)生或短鏈狀排列，革蘭氏染色呈陽(yáng)性，無(wú)芽孢。具體的生理<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>表中結(jié)果"+"表示結(jié)果為陽(yáng)性，"-"表示結(jié)果為陰性。利用API試劑盒(購(gòu)自法國(guó)梅里埃公司)對(duì)上述步驟1篩選得到的植物乳桿菌(丄.；/cmton^)SMB-2進(jìn)行鑒定，結(jié)果如表2所示。表2API快速鑒定試驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>上表中對(duì)照指不含碳源的培養(yǎng)基植物乳桿菌(丄.//fl"tor"w)SMB-2的16SrDNA的核苷酸序列如序列表中序列1所示。菌株SMB-2的16SrDNA與植物乳桿菌a.;/朋torwm)A12-li(DQ0564191.1)的同源性最高，其同源性為98%，與其它乳酸菌的同源性較低?；谝陨咸卣?，將本株D-乳酸生產(chǎn)菌SMB-2鑒定為植物乳桿菌a.p/朋towm)，并于2008年6月27日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(簡(jiǎn)稱CGMCC，地址為北京市朝陽(yáng)區(qū)大屯路，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所)，保藏登記號(hào)為CGMCCW22566。實(shí)施例2、利用植物乳桿菌a.;/a"torwm)SMB-2CGMCC熗2566發(fā)酵生產(chǎn)乳酸該實(shí)施例中所用培養(yǎng)基的組成如下MRS液體培養(yǎng)基葡萄糖20g/L，蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L，牛肉膏10g/L，K2HP042g/L，擰檬酸二銨2g/L，乙酸鈉2g/L，吐溫801mL/L，MgS04'7H200.58g/L，MnSO4，4H2O0.25g/L。發(fā)酵過(guò)程中控制pH范圍在5.5~6.2。115°。條件下滅菌20分鐘。、發(fā)酵培養(yǎng)基葡萄糖135g/L、蛋白胨10g/L、牛肉膏10g/L、酵母提取物5g/L、K2HP043g/L、KH2P043g/L、乙酸鈉2g/L、MgS04'7H200.58g/L、MnS(V4H200.25g/L、Tween-801ml/L，Ca(OH)2296g/L。恒定pH5.8，115。C條件下滅菌20分鐘。發(fā)酵培養(yǎng)基中加入Ca(OH)2的目的是作為中和劑以控制發(fā)酵液的pH值。將上述實(shí)施例1篩選得到的植物乳桿菌a.;/a"to^w)SMB-2CGMCCW2566接種到MRS液體培養(yǎng)基中，37'C厭氧培養(yǎng)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，使菌液濃度達(dá)到1091011cfu/mL,得到發(fā)酵種子液。在裝有3L上述發(fā)酵培養(yǎng)基的7L發(fā)酵罐中按照10%的體積比接入上述發(fā)酵種子液，發(fā)酵過(guò)程中，每12小時(shí)補(bǔ)加60mL1000g/L的葡萄糖一次，37"C靜置培養(yǎng)48小時(shí)，恒定pH5.8，結(jié)束發(fā)酵。發(fā)酵過(guò)程結(jié)束后，通過(guò)高效液相色譜檢測(cè)發(fā)酵液中總?cè)樗岬漠a(chǎn)量。具體的檢測(cè)條件如下:采用AgilentIIOO液相色譜儀(安捷倫科技有限公司)測(cè)定總?cè)樗岬暮浚袡C(jī)酸分離柱HPX-87H(Bio-Rad公司，7.8IDX300mm)，流動(dòng)相為0.0005mol/L硫酸，流量0.5ml/min，進(jìn)樣量20uL，紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)254nm，操作溫度4(TC。D-乳酸的含量通過(guò)D-乳酸檢測(cè)試劑盒(購(gòu)自德國(guó)拜爾公司)檢測(cè)。標(biāo)準(zhǔn)乳酸樣品購(gòu)買自Sigma公司。實(shí)驗(yàn)設(shè)3次重復(fù)，3次重復(fù)的平均值如表3所示。_表3植物乳桿菌SMB-2在不同發(fā)酵時(shí)間下的總?cè)樗岙a(chǎn)量_發(fā)酵時(shí)間(h)_總?cè)樗岙a(chǎn)量(g/L)_D-乳酸光學(xué)純度124886%2412084%3615886%48_^_^_按照下述公式計(jì)算出發(fā)酵液中總?cè)樗岬臐舛?、D-乳酸的光學(xué)純度和發(fā)酵產(chǎn)率?？?cè)樗岬臐舛?(總?cè)樗崴济娣e/標(biāo)準(zhǔn)樣品所占面積)X標(biāo)準(zhǔn)樣品質(zhì)量濃度D-乳酸的光學(xué)純度^D-乳酸濃度/總?cè)樗釢舛劝l(fā)酵產(chǎn)率=總?cè)樗釢舛?發(fā)酵總時(shí)間結(jié)果表明，植物乳桿菌(丄.戶/a"torwm)SMB-2CGMCC她2566具有良好的發(fā)酵性能，在48小時(shí)內(nèi)總?cè)樗岬漠a(chǎn)量為180g/L，發(fā)酵液中總?cè)樗岬臐舛葹?8%，D-乳酸的光學(xué)純度為84-86%，發(fā)酵產(chǎn)率為3.75g/L*h。實(shí)施例3、利用植物乳桿菌a.//fl"torww)SMB-2CGMCC2566發(fā)酵生產(chǎn)乳酸該實(shí)施例中所用培養(yǎng)基的組成如下MRS液體培養(yǎng)基葡萄糖20g/L，蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L，牛肉膏10g/L,K2HP042g/L，擰檬酸二銨2g/L,乙酸鈉2g/L，吐溫801mL/L，MgS04*7H200.58g/L，MnSO4*4H2O0.25g/L。發(fā)酵過(guò)程中控制pH范圍在5.5~6.2。115'C條件下滅菌20分鐘。發(fā)酵培養(yǎng)基葡萄糖150g/L、蛋白胨10g/L、牛肉膏10g/L、酵母提取物5g/L、K2HP043g/L、KH2P043g/L、乙酸鈉2g/L、MgS04.7H200.58g/L、MnS04.4H200.25g/L、Tween-801ml/L，Ca(OH)2296g/L。培養(yǎng)基的初始pH值為6.2。115。C條件下滅菌20分鐘。發(fā)酵培養(yǎng)基中加入Ca(OH)2的目的是作為中和劑以控制發(fā)酵液的pH值。將上述實(shí)施例1篩選得到的植物乳桿菌(Z./7/""ton^)SMB-2CGMCC処2566接種到MRS液體培養(yǎng)基中，37"厭氧培養(yǎng)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，使菌液濃度達(dá)到109~10"cfu/mL，得到發(fā)酵種子液。在裝有3L上述發(fā)酵培養(yǎng)基的7L發(fā)酵罐中按照10%的體積比接入上述發(fā)酵種子液，發(fā)酵過(guò)程中，每12小時(shí)補(bǔ)加60mL1000g/L的葡萄糖一次，39"C靜置培養(yǎng)48小時(shí)，恒定pH6.2，結(jié)束發(fā)酵。發(fā)酵過(guò)程結(jié)束后，通過(guò)高效液相色譜檢測(cè)發(fā)酵液中總?cè)樗岬漠a(chǎn)量。具體的檢測(cè)條件如下:采用AgilentIIOO液相色譜儀(安捷倫科技有限公司)測(cè)定總?cè)樗岬暮?，有機(jī)酸分離柱HPX-87H(Bio-Rad公司，7.8IDX300mm)，流動(dòng)相為0.0005mol/L硫酸，流量O.5ml/min，進(jìn)樣量20uL，紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)254nm，操作溫度4(TC。D-乳酸的含量通過(guò)D-乳酸檢測(cè)試劑盒(購(gòu)自德國(guó)拜爾公司)檢測(cè)。標(biāo)準(zhǔn)乳酸樣品購(gòu)買自Sigma公司。實(shí)驗(yàn)設(shè)3次重復(fù)，3次重復(fù)的平均值如表4所示。表4植物乳桿菌SMB-2在不同發(fā)酵時(shí)間下的總?cè)樗岙a(chǎn)量發(fā)酵時(shí)間(h)_總?cè)樗岙a(chǎn)量(g/L)_D-乳酸光學(xué)純度124686%2411585%3614985%48_^_^_按照下述公式計(jì)算出發(fā)酵液中總?cè)樗岬臐舛?、D-乳酸的光學(xué)純度和發(fā)酵產(chǎn)率?？?cè)樗岬臐舛?(總?cè)樗崴济娣e/標(biāo)準(zhǔn)樣品所占面積)X標(biāo)準(zhǔn)樣品質(zhì)量濃度D-乳酸的光學(xué)純度^D-乳酸濃度/總?cè)樗釢舛劝l(fā)酵產(chǎn)率二總?cè)樗釢舛?發(fā)酵總時(shí)間結(jié)果表明，植物乳桿菌(丄.；/flntorwm)SMB-2CGMCC処2566具有良好的發(fā)酵性能，在48小時(shí)內(nèi)總?cè)樗岬漠a(chǎn)量為172g/L，D-乳酸的光學(xué)純度為85-86%，發(fā)酵產(chǎn)率為3.58g/L'h。實(shí)施例4、利用植物乳桿菌a.;/fl"toww)SMB-2CGMCCJvf22566發(fā)酵生產(chǎn)D-乳酸該實(shí)施例中所用培養(yǎng)基的組成如下MRS液體培養(yǎng)基葡萄糖20g/L，蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L,牛肉膏10g/L，K2HP042g/L，檸檬酸二銨2g/L，乙酸鈉2g/L，吐溫801mL/L，MgS04*7H200.58g/L，MnS04*4H200.25g/L。發(fā)酵過(guò)程中控制pH范圍在5.5~6.2。。115。C條件下滅菌20分鐘。發(fā)酵培養(yǎng)基葡萄糖120g/L、蛋白胨10g/L、牛肉膏10g/L、酵母提取物5g/L、K2HP043g/L、KH2P043g/L、乙酸鈉2g/L、MgS04'7H200.58g/L、MnS04'4H200.25g/L、Tween-801ml/L，Ca(OH)2296g/L。恒定pH5.5，115。C條件下滅菌20分鐘。發(fā)酵培養(yǎng)基中加入Ca(OH)2的目的是作為中和劑以控制發(fā)酵液的pH值。將上述實(shí)施例1篩選得到的植物乳桿菌a.//a"tonwOSMB-2CGMCCW2566接種到MRS液體培養(yǎng)基中，35"C厭氧培養(yǎng)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，使菌液濃度達(dá)到1091011cfu/mL，得到發(fā)酵種子液。在裝有3L上述發(fā)酵培養(yǎng)基的7L發(fā)酵罐中按照10%的體積比接入上述發(fā)酵種子液，發(fā)酵過(guò)程中，每12小時(shí)補(bǔ)加60mL1000g/L的葡萄糖一次，35"C靜置培養(yǎng)48小時(shí)，恒定pH5.5，結(jié)束發(fā)酵。發(fā)酵過(guò)程結(jié)束后，通過(guò)高效液相色譜檢測(cè)發(fā)酵液中總?cè)樗岬漠a(chǎn)量。具體的檢測(cè)條件如下采用AgilentIIOO液相色譜儀(安捷倫科技有限公司)測(cè)定總?cè)樗岬暮?，有機(jī)酸分離柱HPX-87H(Bio-Rad公司，7.8IDX300mm)，流動(dòng)相為0.0005mol/L硫酸，流量0.5ral/min，進(jìn)樣量20yL，紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)254nm，操作溫度4(TC。D乳酸的含量通過(guò)D-乳酸檢測(cè)試劑盒(購(gòu)自德國(guó)拜爾公司)檢測(cè)。標(biāo)準(zhǔn)乳酸樣品購(gòu)買自Sigma公司。實(shí)驗(yàn)設(shè)3次重復(fù)，3次重復(fù)的平均值如表5所示。_表5植物乳桿菌SMB-2在不同發(fā)酵時(shí)間下的總?cè)樗岙a(chǎn)量_<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>按照下述公式計(jì)算出發(fā)酵液中總?cè)樗岬臐舛?、D-乳酸的光學(xué)純度和發(fā)酵產(chǎn)率。總?cè)樗岬臐舛?(總?cè)樗崴济娣e/標(biāo)準(zhǔn)樣品所占面積)X標(biāo)準(zhǔn)樣品質(zhì)量濃度D-乳酸的光學(xué)純度=D-乳酸濃度/總?cè)樗釢舛?發(fā)酵產(chǎn)率==總?cè)樗釢舛?發(fā)酵總時(shí)間結(jié)果表明，植物乳桿菌(Z.p/a"tonwz)SMB-2CGMCCJV22566具有良好的發(fā)酵性能，在48小時(shí)內(nèi)總?cè)樗岬漠a(chǎn)量為174g/L，D-乳酸的光學(xué)純度為84-86%，發(fā)酵產(chǎn)率為3.62g/L'h。實(shí)施例5、植物乳桿菌a.p/fl"toraw)SMB-2CGMCCWs2566的沉降實(shí)驗(yàn)將篩選得到的植物乳桿菌SMB-2進(jìn)行沉降效果的比較，結(jié)果如圖3和圖4所示。圖3為植物乳桿菌SMB-2的種子液的沉降效果，圖4為植物乳桿菌SMB-2在發(fā)酵液中的沉降效果。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在生長(zhǎng)過(guò)程中，植物乳桿菌SMB-2易于沉降到發(fā)酵罐底部進(jìn)行生長(zhǎng)，這一特性有利于工業(yè)生產(chǎn)中菌-液的分離純化，可以降低乳酸工業(yè)生產(chǎn)的成本，具有重要的工業(yè)應(yīng)用價(jià)值。序列表〈160>1<210>1〈211〉1440<212〉DNA〈213〉植物孚L桿菌(丄acto6acz7/M/7/a",ar"m)<棚>1gtcccacctt鄉(xiāng)cggctggttcct肪aaggttaccccaccgactttgggtgttacaaac60tctcatggtgtgacgggcggtgtgtacaaggcccggg雄gtattcaccgcggcatgctg120atccgcgattactagcgattccgacttcatgtaggcgagttgcagcctacaatccgaact180gagaatggctttaagagattagcttactctcgcgagttcgcaactcgttgtaccatccat240tgtagcacgtgtgtagcccaggtcataaggggcatgatgatttgacgtcatccccacctt300cctccggtttgtcaccggcagtctcaccagagtgcccaacttaatgctggcaactgataa360taagggttgcgctcgttgcgggacttaacccaacatctcacgacacgagctgacgacaac420catgcaccacctgtatccatgtccccgaagggaacgtctaatctcttagatttgcatagt480atgtcaagacctggtaaggttcttcgcgtagcttcgaattaaaccacatgctccaccgct540tgtgcgggcccccgtcaattcctttgagtttcagccttgcggccgtactccccaggcgga600atgcttaatgcgttagctgcagcactgaagggcggaaaccctccaacacttagcattcat660cgtttacggtatggactaccagggtatctaatcctgtttgctacccatactttcgagcct720cagcgtcagttacagaccagacagccgccttcgccactggtgttcttccatatatctacg780catttcaccgctacacatggagttccactgtcctcttctgcactcaagtttcccagtttc840cgatgcacttcttcggttgagccgaaggctttcacatcagacttaaaaaaccgcctgcgc900tcgctttacgcccaataaatccggacaacgcttgccacctacgtattaccgcggctgctg960gcacgtagttagccgtggctttctggttaaataccgtcaatacctgaacagttactctca1020gatatgttcttctttaacaacagagttttacgagccgaaacccttcttcactcacgcggc1080gttgctccatcagactttcgtccattgtggaagattccctactgctgcctcccgtaggag1140tttgggccgtgtctcagtcccaatgtggccgattaccctctcaggtcggctacgtatcat1200tgccatggtgagccgttacctcaccatctagctaatacgccgcgggaccatccaaaagtg1260atagccgaagccatctttcaaactcggaccatgcggtccaagttgttatgcggtattagc1320atctgtttccaggtgttatcccccgcttctgggcaggtttcccacgtgttactcaccagt1380tcgccactcactcaaatgtaattcatgatgcaagcaccaatcattaccagagttcgttcg1440權(quán)利要求1、植物乳桿菌(L.plantarum)SMB-2，其保藏號(hào)為CGMCC№2566。2、一種生產(chǎn)D-乳酸的方法，是發(fā)酵植物乳桿菌(A.p/朋tomm)SMB-2CGMCCWs2566得到D-乳酸。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于所述植物乳桿菌a.p/^7towm)SMB-2CGMCC処2566發(fā)酵培養(yǎng)基的組成為葡萄糖120~150g/L、蛋白胨10g/L、牛肉膏10g/L、酵母提取物5g/L、K2HP043g/L、KH2P043g/L、乙酸鈉2g/L、MgS04'7H200.58g/L、MnS04.4H200.25g/L、Tween-801ml/L和用于控制發(fā)酵液pH值的中和劑。4、根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于所述發(fā)酵培養(yǎng)基中的中和劑為Ca(0H)2或氨水，優(yōu)選為Ca(OH)2。5、根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于所述Ca(OH)2的濃度為296g/L。6、根據(jù)權(quán)利要求3-5所述的方法，其特征在于:所述發(fā)酵培養(yǎng)基的pH為5.5-6.2。7、根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于所述發(fā)酵條件為35-39'C靜置培養(yǎng)48小時(shí)。8、根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于所述發(fā)酵的培養(yǎng)方式為分批補(bǔ)料發(fā)酵培養(yǎng)。9、根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于所述分批補(bǔ)料發(fā)酵為每12小時(shí)補(bǔ)加60mL1000g/L的葡萄糖。10、以權(quán)利要求1所述的植物乳桿菌a.//朋torwm)SMB-2CGMCC她2566為活性成分制備的生物菌劑。全文摘要本發(fā)明公開(kāi)了一種生產(chǎn)D-乳酸的方法及其專用植物乳桿菌。本發(fā)明所提供的植物乳桿菌是植物乳桿菌(Lactobacillusplantarum)SMB-2CGMCC№2566。在35-39℃的條件下靜置培養(yǎng)植物乳桿菌(Lactobacillusplantarum)SMB-2CGMCC№256648小時(shí)即可得到D-乳酸。發(fā)酵液中總?cè)樗岬臐舛葹?8％，D-乳酸的光學(xué)純度為84-86％，發(fā)酵產(chǎn)率為3.75g/L·h。且該植物乳桿菌(Lactobacillusplantarum)SMB-2CGMCC№2566易于沉降到發(fā)酵罐底部進(jìn)行生長(zhǎng)，有利于工業(yè)生產(chǎn)中菌-液的分離純化，可以降低乳酸工業(yè)生產(chǎn)的成本，具有重要的工業(yè)應(yīng)用價(jià)值。文檔編號(hào)A01N63/02GK101302488SQ20081011619公開(kāi)日2008年11月12日申請(qǐng)日期2008年7月4日優(yōu)先權(quán)日2008年7月4日發(fā)明者張延平,徐洪濤,寅李申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院微生物研究所