專利名稱：：微孢子制劑及其生產(chǎn)工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及微孢子產(chǎn)品領(lǐng)域，具體涉及一種車蝗體內(nèi)分離出來的微孢子的制劑以及其生產(chǎn)工藝。
背景技術(shù)：
：蝗災(zāi)是世界性的自然災(zāi)害，對農(nóng)業(yè)生產(chǎn)造成了很大的影響。多年來，蝗災(zāi)曾發(fā)生過大面積的頻繁暴發(fā)，包括農(nóng)田飛蝗，草原蝗蟲，稻蝗和林業(yè)棉蝗，竹蝗。僅農(nóng)田飛蝗和草原蝗蟲每年分別發(fā)生2000萬畝次和6000萬畝次，嚴(yán)重影響了農(nóng)林業(yè)生產(chǎn)。從20世紀(jì)80年代美國采用雙帶蚱蜢和黑蝗作為繁殖宿主來培養(yǎng)蝗蟲微孢子蟲以外，國內(nèi)外都陸續(xù)開展了蝗蟲微孢子蟲的研究。但是現(xiàn)有的蝗蟲微孢子蟲是從美國引進(jìn)的，屬于外來物種，應(yīng)用后生態(tài)風(fēng)險較大；此外，現(xiàn)有的蝗蟲微孢子蟲產(chǎn)品對蝗蟲的專一性較低，防治效果不穩(wěn)定，抗逆性較差，抗高溫和紫外線能力弱，而且生產(chǎn)成本較高。因此有必要開發(fā)一種適用于本土使用且對草原蝗蟲和農(nóng)田飛蝗專一性強(qiáng)的品系，能顯著提高防治蝗蟲效果且防效穩(wěn)定，同時又能低成本的生產(chǎn)和應(yīng)用。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明目的在于提供一種包含有分離自車蝗體內(nèi)的微孢子蟲株系(尸ara/70se鵬(A^e鵬)7oc"s&e)的制劑及其制備方法，該株系具有很強(qiáng)的特異性，分別對草原蝗蟲和農(nóng)田飛蝗具有特異性致死作用，致死效果較好。該微孢子制劑是從本土蝗蟲體內(nèi)分離出來，并且篩選出了分別對草原蝗蟲和農(nóng)田飛蝗專一性強(qiáng)的品系，能顯著提高防治蝗蟲效果，防效穩(wěn)定。本發(fā)明的分離自車蝗體內(nèi)的微孢子蟲株系(/kra77"e^(7Vase/z7a)&C"Wae)，該株系孢子為裂殖生殖，大小約為2-7微米，抗逆性強(qiáng)，保藏號為CGMCCNo.2282，保藏單位為中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地點(diǎn)在中國.北京.中關(guān)村，保藏時間2007年12月5曰。本發(fā)明的防治蝗蟲的微孢子制劑，包含有上述分離自車蝗體內(nèi)的8年微孢子(P8)和/或9年微孢子(P9)。進(jìn)一步地，所述制劑為水劑或餌劑。其中水劑中的微孢子濃度為5Xl()82X10"孢子/毫升。進(jìn)一步地，所述餌劑中含有麩皮，海藻糖，比例為5X1062X107包子/克麥麩，0.01~0.1克海藻糖/公斤麥麩。本發(fā)明的防治蝗蟲的微孢子制劑的制備方法，包括以下步驟1)孢子增殖在飛蝗3齡期接種分離自車蝗體內(nèi)的8年微孢子P8或分離自車蝗體內(nèi)的9年微孢子P9，接種濃度為5X105，連續(xù)接種兩次，再放入養(yǎng)蟲室正常飼養(yǎng)，讓孢子在蝗蟲體內(nèi)增殖；2)孢子分離純化將感病蝗蟲放入勻漿器內(nèi)勻槳，用醫(yī)用尼龍紗網(wǎng)過濾，用1500-2000轉(zhuǎn)/分的速度離心15-20分鐘，得到純化的孢子；3)制劑加工按制劑配比配制制劑。其中，制劑為水劑時，步驟3)中的配制制劑是將孢子液與蒸餾水充分混合，微孢子的濃度為5X1082X10u孢子/毫升。其中，制劑為餌劑時，步驟3)中的配制制劑是將孢子液與2mm大麩皮充分混合，攪勻，加入海藻糖配成，比例為5X1062X107孢子/克麥麩，0.010.1克海藻糖/公斤麥麩。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的微孢子制劑具有如下優(yōu)點(diǎn)-a.本發(fā)明的微孢子制劑是從本土的蝗蟲體內(nèi)跟蹤比較篩選出來的，應(yīng)用后對生態(tài)系統(tǒng)較少有干預(yù)作用。b.本發(fā)明的微孢子具有很強(qiáng)的特異性，分別對草原蝗蟲和農(nóng)田飛蝗具有特異性致死作用，致死效果較好，如接種5X106孢子3周后草原蝗蟲和農(nóng)田飛蝗的死亡率分別達(dá)到95.27%和91.38%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于現(xiàn)有的蝗蟲微孢子蟲的致病性。c.本發(fā)明涉及的微孢子分別針對草原蝗蟲和農(nóng)田飛蝗的防治。草原蝗蟲專用型微孢子具有抗紫外線、適合飛機(jī)防治和對草原蝗蟲具有吸引作用等特點(diǎn)，對草原蝗蟲防治效果較好；農(nóng)田飛蝗專用型微孢子具有耐高溫和對飛蝗具有吸引作用等特點(diǎn)，對飛蝗防治效果較好。d.本發(fā)明的微孢子從車蝗體內(nèi)分離出來，而非現(xiàn)有蝗蟲微孢子蟲是從黑蝗體內(nèi)分離的e.本發(fā)明的微孢子生產(chǎn)技術(shù)簡單，勻漿后，2000轉(zhuǎn)/分分離即可。本發(fā)明的微孢子制劑是從本土蝗蟲體內(nèi)分離出來，并且篩選出了分別對草原蝗蟲和農(nóng)田飛蝗專一性強(qiáng)的品系，能顯著提高防治蝗蟲效果，防效穩(wěn)定；本發(fā)明的微孢子品系，經(jīng)過抗逆性篩選和處理，顯著提高了其抗逆性，特別是抗高溫和抗紫外線能力大大提高；本發(fā)明微孢子生產(chǎn)技術(shù)要求簡單，繁殖寄主容易得到，有助于大量生產(chǎn)和應(yīng)用。圖1是防后不同年份處理樣區(qū)內(nèi)飛蝗的感染情況。圖2是防后不同年份處理樣區(qū)內(nèi)云斑車蝗自然種群的感染情況。圖3是本發(fā)明的微孢子的培育工藝圖。圖4是微孢子在1.5X107ha濃度時處理區(qū)的治理效果。圖5是微孢子7.5X107ha濃度時處理區(qū)的治理效果。具體實(shí)施例方式以下通過具體實(shí)施方式對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。一、微孢子蟲(尸ara/7ase鵬7ociAstse)篩選1.供試品系采用孢子分離接種法，對野外采集到的感病蝗蟲進(jìn)行分離、純化，得到IO個不同來源的微孢子品系，再分別接種到不同種類的蝗蟲體內(nèi)，蝗蟲在合適條件下飼養(yǎng)。2.蟲源蟲源主要是飛蝗,OCW力必>7^。"'<3禾口車蝗feW"'鵬，S3.實(shí)驗(yàn)種群—3.1實(shí)驗(yàn)室種群采集于田間，并在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)詞養(yǎng)建立實(shí)驗(yàn)種群。詞養(yǎng)條件為溫度28-35°C，相對濕度60-80%，光照12:12。每天喂新鮮玉米苗。3.2田間種群在自然條件下，自然生長發(fā)育的種群。4.接種室內(nèi)采用5X106濃度接種，田間采用2X1()9濃度噴施。5.孢子分離純化將感病蝗蟲勻漿，過濾后離心分離，得到孢子液，儲藏備用6.篩選6.1孢子采集其中，圖1是防后不同年份處理樣區(qū)內(nèi)飛蝗的感染情況。圖2是防后不同年份處理樣區(qū)內(nèi)云斑車蝗自然種群的感染情況。每年從田間采集感病蝗蟲，并分離出其體內(nèi)的微孢子，濃縮后儲藏，作為室內(nèi)實(shí)驗(yàn)接種孢子，測定其對蝗蟲的毒性。6.2毒力測定6.2.1車蝗體內(nèi)孢子毒力變異情況從車蝗體內(nèi)分離出的孢子對蝗蟲的毒力分析結(jié)果如下的表1中。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>注表內(nèi)數(shù)據(jù)為接種微孢子后3周的死亡率，字母相同表示差異不顯著，字母不同表示差異顯著。從表1可以看出第8年分離出的孢子對飛蝗具有較高的毒性，第9年分離出的孢子對車蝗有較好的控制作用。6.2.2飛蝗體內(nèi)孢子毒力變異情況從飛蝗體內(nèi)分離出的孢子對蝗蟲的毒力分析結(jié)果示于如下表2中。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>注表內(nèi)數(shù)據(jù)為接種微孢子后3周的死亡力，字母相同表示差異不顯著，字母不同表示差異顯著。從表可以看出不同年份分離出的孢子對蝗蟲毒性沒有顯著差異，孢子在飛蝗體內(nèi)比較穩(wěn)定。所以采用車蝗體內(nèi)分離出的8年孢子(P8)作為優(yōu)勢品系，防治飛蝗；采用車蝗體內(nèi)分離出的9年孢子(P9)優(yōu)勢品系，防治土蝗(車蝗只是土蝗的一種)。經(jīng)過美國微孢子專家Leellen鑒定，認(rèn)為是微孢子(尸ara/oe/za"c""ae)新品系。孢子在飛蝗體內(nèi)比較穩(wěn)定，我們采用飛蝗作為繁殖這兩種優(yōu)勢品系的寄主。該微孢子株系的孕育工藝流程圖參見圖3。二、兩種優(yōu)勢品系8年孢子(P8)和9年孢子(P9)的微孢子(尸ar朋ose鵬2oc〃5^ae)的生產(chǎn)工藝1.孢子增殖在飛蝗3齡期接種P8或P9，接種濃度為5X105，連續(xù)接種兩次，再放入養(yǎng)蟲室正常飼養(yǎng)，讓孢子在蝗蟲體內(nèi)增殖。2.孢子分離純化將感病蝗蟲放入勻漿器內(nèi)勻漿，用醫(yī)用尼龍紗網(wǎng)過濾，用2000轉(zhuǎn)/分的速度離心20分鐘，得到純化的孢子。3.孢子含量檢驗(yàn)采用醫(yī)用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算出孢子數(shù)量和濃度，公式如下lmL孢子液中的總孢子數(shù)=A/5X25X10000XBA:5個中格的總孢子數(shù)B:稀釋倍數(shù)4.制劑加工將孢子液與水或者2mm大麩皮充分混合，攪勻，加入海藻糖，配成制劑，比例為5X106~2X107孢子/克麥麩，0.01~0.1克海藻糖/公斤麥麩。該用于防治蝗蟲。5.使用技術(shù)蝗蟲密度低時，直接施用微孢子制劑，蝗蟲密度高時，微孢子制劑與昆蟲生長調(diào)節(jié)劑卡死克交叉噴施，均可控制蝗害。在海南蝗區(qū)施用P8微孢子60ml/ha后4周，校正蟲口減退率達(dá)95%以上，平均校正蟲口減退率達(dá)到63.87%，單用微孢子，感染率最高的仍然是東亞飛蝗。具體數(shù)據(jù)參見表3。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>在草原蝗區(qū)施用P9微孢子后3周，校正蟲口減退率達(dá)到70%以上，存活蝗蟲的感病率最高達(dá)到60%以上。具體數(shù)據(jù)參見表4。且微孢子濃度在1.5X107ha和7.5X107ha時的治理效果圖分別示于圖4和圖5中。表4調(diào)査時7.5Xl(f孢子1.5X10'°7.5XKT孢子CK(不用處理間/hm孢子/hra/hm藥)防前種群密度(頭/m2)29.3240.1932.5936.98存活蝗蟲感染率0種群密度(頭/m2)30.2832.9738.2241.94防后l周存活蝗蟲感染率(%)38.9341.3952.99.70種群密度(頭/m2)31.2729.8836.0848.41防后2周存活蝗蟲感染率(%)47.2939.2857.513.0蟲口密度(頭/m2)13.569.8411.5249.46防后3周存活蝗蟲感染率(%)43.8959.3361.112.5盡管上文對本發(fā)明的具體實(shí)施方式給予了詳細(xì)描述和說明，但是應(yīng)該指明的是，我們可以依據(jù)本發(fā)明的構(gòu)想對上述實(shí)施方式進(jìn)行各種等效改變和修改，其所產(chǎn)生的功能作用仍未超出說明書及附圖所涵蓋的精神時，均應(yīng)在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。權(quán)利要求1、一種防治蝗蟲的微孢子制劑，包含有分離自車蝗體內(nèi)的微孢子株系(Paranosema(Nosema)locustae)，該株系孢子為裂殖生殖，大小為2-7微米，保藏號為CGMCCNo.2282，保藏單位為中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地點(diǎn)在中國.北京.中關(guān)村，保藏時間2007年12月5日。2、如權(quán)利要求1所述的微孢子制劑，其特征在于，所述制劑為水劑或餌劑。3、如權(quán)利要求2所述的微孢子制劑，其特征在于，水劑中的微孢子濃度為5X1082X10"孢子/毫升。4、如權(quán)利要求2所述的微孢子制劑，其特征在于，餌劑中含有麩皮，海藻糖，比例為5X106~2X107孢子/克麥麩，0.01~0.1克海藻糖/公斤麥麩。5、一種防治蝗蟲的權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述微孢子制劑的制備方法，包括以下步驟1)孢子增殖在飛蝗3齡期接種分離自車蝗體內(nèi)的8年微孢子(P8)或9年微孢子(P9)，接種濃度為5X105，連續(xù)接種兩次，再放入養(yǎng)蟲室正常飼養(yǎng)，讓孢子在蝗蟲體內(nèi)增殖；2)孢子分離純化將感病蝗蟲放入勻漿器內(nèi)勻漿，用醫(yī)用尼龍紗網(wǎng)過濾，用1500-2000轉(zhuǎn)/分的速度離心15-20分鐘，得到純化的孢子；；3)制劑加工按制劑配比配制制劑。6、如權(quán)利要求5所述的方法，其中，制劑為水劑時，步驟3)中的配制制劑是將孢子液與蒸餾水充分混合，微孢子的濃度為5X10l2X10"孢子/毫升。7、如權(quán)利要求5所述的方法，其中，制劑為餌劑時，制劑是將孢子液與2mm大麩皮充分混合，攪勻，加入海藻糖配成，比例為5X1062X107孢子/克麥麩，0.01~0.1克海藻糖/公斤麥麩。全文摘要本發(fā)明提供了一種包含有分離自車蝗體內(nèi)的8年微孢子(P8)和9年微孢子(P9)的制劑及其制造方法。本發(fā)明的分離自車蝗體內(nèi)的微孢子制劑可用于防治農(nóng)田飛蝗、草原蝗蟲、車蝗、竹蝗、稻蝗等的數(shù)十種蝗蟲，本發(fā)明的制劑能顯著提高防治蝗蟲效果，防效穩(wěn)定。文檔編號A01N63/04GK101305739SQ20081011560公開日2008年11月19日申請日期2008年6月25日優(yōu)先權(quán)日2008年6月25日發(fā)明者王繼朋申請人:北京萬農(nóng)興科技有限公司