專利名稱：百合組織培養(yǎng)誘導(dǎo)成球的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)，具體地說(shuō)是百合組織培養(yǎng)誘導(dǎo)成球的方法。
背景技術(shù)：
植物組織培養(yǎng)是指在離體的條件下，將植物體的一部分，如一小段莖、一小塊葉、甚至一個(gè)細(xì)胞，接種在培養(yǎng)基上，使它們重新形成一個(gè)完整植株的方法。組織培養(yǎng)的步驟有培養(yǎng)基的制作與接種材料的消毒、接種、植株誘導(dǎo)、生根和移栽。
其中常用的培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基，其配方為

百合花卉靠無(wú)性繁殖法繁殖，病毒逐代傳遞積累，危害日趨嚴(yán)重。分離花卉植物0.1-0.5毫米大小的生長(zhǎng)點(diǎn)，培養(yǎng)得到的基本上是無(wú)病毒苗；去病毒后，植株生長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)，花朵變大，色澤鮮艷，抗逆能力提高，產(chǎn)花數(shù)量上升。這一技術(shù)將被廣泛應(yīng)用?，F(xiàn)在所有的百合組織培養(yǎng)最終都是以百合生根苗進(jìn)行移載，該方法組培苗煉苗難、移載成活率較低。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種百合組織培養(yǎng)誘導(dǎo)成球的方法；成球后百合苗健壯、移載成活率高、縮短形成商品球的時(shí)間。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為百合組織培養(yǎng)誘導(dǎo)成球的方法，將誘導(dǎo)擴(kuò)繁的百合組培苗接種于組培培養(yǎng)基(如MS培養(yǎng)基)中培養(yǎng)，培養(yǎng)基中糖和/或蔗糖的濃度為60～120g/l，激素BA濃度為0.1～0.5mg/l，NAA濃度為0.01～0.2mg/l。
所述培養(yǎng)是在2000～3000LX每天12～14小時(shí)的光照，20～26℃的條件下培養(yǎng)；培養(yǎng)基中糖和/或蔗糖的較佳濃度為75～105g/l，最好為90g/l；BA較佳的濃度為0.2～0.3mg/l，最好為0.2mg/l；NAA較佳的濃度為0.05～0.15mg/l，最好為0.1mg/l。
本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)1.本發(fā)明將百合的生根苗繼續(xù)培養(yǎng)成球，以成球后的組培苗進(jìn)行移載，移載時(shí)組培苗健壯，成活率可達(dá)到95％以上。
2.本發(fā)明采用改進(jìn)的MS培養(yǎng)基，百合組培苗成球速度快，直徑大，長(zhǎng)勢(shì)好。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1百合組織培養(yǎng)誘導(dǎo)成球1)誘導(dǎo)擴(kuò)繁百合組培苗當(dāng)百合芽長(zhǎng)5～10cm時(shí)，取其莖尖分生組織，接種于MS培養(yǎng)基中，附加入BA(6-芐基氨基嘌呤)0.5mg/l、NAA(萘乙酸)0.5mg/l和蔗糖30g/l進(jìn)行誘導(dǎo)；在2000～3000LX(本實(shí)施例為2000LX)每天12～14小時(shí)(本實(shí)施例為14小時(shí))的光照條件下，20～26℃的溫度條件下，30～40天后(本實(shí)施例為30天)，直接誘導(dǎo)出許多致密的不定芽，如果延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間，則直接形成芽叢；將不定芽重復(fù)轉(zhuǎn)入上述培養(yǎng)基中，每25～35天(本實(shí)施例為30天)轉(zhuǎn)接一次，形成許多高約2～3cm的小苗；2)組培苗成球?qū)U(kuò)繁中的百合組培苗(小苗)劈成單株，接種于下述培養(yǎng)基中MS+BA 0.1～0.5+NAA 0.01～0.2+蔗糖60～120g/l，在2000～3000LX(本實(shí)施例為2000LX)每天12～14小時(shí)(本實(shí)施例為14小時(shí))的光照條件下，20～26℃的溫度條件下，經(jīng)過(guò)55～65天(本實(shí)施例為60天)的培養(yǎng)，組培苗便長(zhǎng)成直徑約1.3cm左右的百合小鱗莖，然后進(jìn)行移載，成活率可達(dá)96％以上；3)觀察其不同激素濃度配比及不同蔗糖濃度對(duì)百合小鱗莖的誘導(dǎo)作用效果將擴(kuò)繁中的百合組培苗劈成單株，接種于以下實(shí)驗(yàn)改進(jìn)的MS培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基為MS+BA+NAA+蔗糖或糖；經(jīng)過(guò)60天的培養(yǎng)后，其長(zhǎng)勢(shì)情況如下表1-4。
a.當(dāng)BA和NAA濃度一定時(shí)(BA 0.2mg/l+NAA 0.1mg/l)，不同濃度的糖含量對(duì)百合鱗莖的誘導(dǎo)。(以下的糖或蔗糖含量是指培養(yǎng)基中糖或蔗糖的總含量)表1

從上表中可以看出，當(dāng)BA和NAA濃度及其他條件不變時(shí)，隨著糖的濃度增加，球直徑也不斷增大，在糖濃度90g/l時(shí)，球直徑最大平均為13.9mm，高于90g/l后，球直徑開(kāi)始逐漸下降，所以最佳的誘導(dǎo)成球的糖濃度為90g/l，誘導(dǎo)直徑最大，長(zhǎng)勢(shì)正常，移載成活率最高。
b.當(dāng)BA和NAA濃度一定時(shí)(BA 0.2mg/l+NAA 0.1mg/l)，不同濃度的蔗糖含量對(duì)百合鱗莖的誘導(dǎo)。
表2

從上表中可以看出當(dāng)BA和NAA濃度及其他條件不變時(shí)，隨著糖的濃度增加，球直徑也不斷增大，在蔗糖濃度90g/l時(shí)，球直徑最大平均為13.9mm，高于90g/l后，球直徑開(kāi)始逐漸下降。
c.在蔗糖濃度90g/l、BA為0.2mg/l時(shí)，不同濃度的NAA含量對(duì)百合鱗莖的誘導(dǎo)。
表3

從上表中可以看出當(dāng)BA和糖濃度及其他條件不變時(shí)，NAA濃度在0.05～0.15之間時(shí)鱗球直徑較大，而最好的則屬NAA 0.1mg/l。
d.在蔗糖濃度90g/l、NAA為0.1mg/l時(shí)，不同濃度的BA含量對(duì)百合鱗莖的誘導(dǎo)。
表4

從上表中可以看出當(dāng)NAA和糖濃度及其他條件不變時(shí)，BA濃度在0.15～0.3之間時(shí)鱗球直徑較大，而最好的則屬BA0.2mg/l。
從上表1-4可以看出，在百合組織培養(yǎng)誘導(dǎo)成球的過(guò)程中，主要是蔗糖或糖濃度及激素濃度配比的影響較大。其最佳的百合誘導(dǎo)成球培養(yǎng)基為MS+BA 0.2mg/l+NAA 0.1mg/l+蔗糖90g/l，平均直徑達(dá)到13.9mm，長(zhǎng)勢(shì)正常。
由于常規(guī)的MS培養(yǎng)基和WPM培養(yǎng)基均可在百合組織培養(yǎng)過(guò)程中應(yīng)用，并且它們的組成成份中各組份的用量相差較大，而在本發(fā)明中起突出誘導(dǎo)作用的為糖、BA和NAA的濃度，而對(duì)于改進(jìn)的MS培養(yǎng)基中各組份用量無(wú)需嚴(yán)格限定，本發(fā)明組培中可采用改進(jìn)的MS組成如下表5所示，其中還應(yīng)添加有硝酸鉀(KNO3)1000～1900mg/L、磷酸二氫鉀(KH2PO4)170-340mg/L、碘化鉀(KI)0.75～0.83mg/L和氯化鈷(CoCl2)0.025～0.5mg/L，或添加有Ca(NO3)2·4H2O 350-556mg/L和K2SO4990～1450mg/L。
表5

權(quán)利要求
1.百合組織培養(yǎng)誘導(dǎo)成球的方法，其特征在于將誘導(dǎo)擴(kuò)繁的百合組培苗接種于組培培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)基中糖和/或蔗糖的濃度為60～120g/l，激素BA濃度為0.1～0.5mg/l，NAA濃度為0.01～0.2mg/l，組培苗長(zhǎng)成百合小鱗莖即可進(jìn)行移載。
2.按照權(quán)利要求1所述百合組織培養(yǎng)誘導(dǎo)成球的方法，其特征在于所述培養(yǎng)是在2000～3000LX每天12～14小時(shí)的光照，20～26℃的條件下培養(yǎng)，經(jīng)過(guò)55～65天的培養(yǎng)，組培苗長(zhǎng)成百合小鱗莖即可進(jìn)行移載。
3.按照權(quán)利要求1所述百合組織培養(yǎng)誘導(dǎo)成球的方法，其特征在于所述培養(yǎng)基中糖和/或蔗糖的濃度為75～105g/l，BA濃度為0.2～0.3mg/l，NAA濃度為0.05～0.15mg/l。
4.按照權(quán)利要求1所述百合組織培養(yǎng)誘導(dǎo)成球的方法，其特征在于所述培養(yǎng)基中糖和/或蔗糖的濃度為90g/l，BA濃度為0.2mg/l，NAA濃度為0.1mg/l。
全文摘要
本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)，具體地說(shuō)是百合組織培養(yǎng)誘導(dǎo)成球的方法，其將誘導(dǎo)擴(kuò)繁的百合組培苗接種于組培培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)基中糖和/或蔗糖的濃度為60～120g/l，激素BA濃度為0.1～0.5mg/l，NAA濃度為0.01～0.2mg/l。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)為將百合的生根苗繼續(xù)培養(yǎng)成球，以成球后的組培苗進(jìn)行移載，移載時(shí)組培苗健壯，成活率可達(dá)到95％以上；采用改進(jìn)的MS培養(yǎng)基，百合組培苗成球速度快，直徑大，長(zhǎng)勢(shì)好。
文檔編號(hào)A01H4/00GK1903018SQ20051004695
公開(kāi)日2007年1月31日 申請(qǐng)日期2005年7月29日 優(yōu)先權(quán)日2005年7月29日
發(fā)明者潘利軍 申請(qǐng)人:潘利軍