取時水的用量、酶的用量、酶解溫度、酶解時間等多個因素對桑葚多糖提取 的影響，并對之進(jìn)行優(yōu)化，提供了一種新的用酶輔助超聲萃取桑葚多糖的方法，科學(xué)合理、 操作簡單、成本低廉，易于工業(yè)化大生產(chǎn)，所得產(chǎn)物多糖含量較高；所采用的溶劑安全無毒， 避免了傳統(tǒng)方法中采用氯仿、甲醇、酸或堿等溶劑對環(huán)境的污染，同時節(jié)省了成本；采用生 物酶酶解與超聲相結(jié)合的方法，不但提高了提取效率，提取效率是單獨(dú)超聲提取的1.61 倍，更使得桑葚多糖得率達(dá)到16. 16%左右。因而本發(fā)明提取方法是一種安全、環(huán)保、高效 的桑葚多糖提取方法。本發(fā)明提取的桑葚多糖提取物活性高，能明顯降低血清中丙氨酸轉(zhuǎn) 氨酶（ALT)和天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST)的水平，有效提高肝臟中超氧化物歧化酶（S0D)和谷 胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px)的活性，明顯降低肝臟中谷胱甘肽（GSH)和丙二醛（MDA)的含 量。
【附圖說明】
[0103] 圖1是本發(fā)明的提取過程中桑葚多糖提取率隨酶解溫度的變化曲線圖；
[0104] 圖2是提取過程中桑葚多糖提取率隨酶的用量的變化曲線圖；
[0105] 圖3是提取過程中桑葚多糖提取率隨水的用量的變化曲線圖；
[0106] 圖4是提取過程中桑葚多糖提取率隨酶解時間的變化曲線圖；
[0107] 圖5是酶的用量和酶解時間對桑葚多糖提取率交互影響的響應(yīng)面圖；
[0108] 圖6是酶解時間和水的用量對桑葚多糖提取率交互影響的響應(yīng)面圖；
[0109] 圖7是酶解時間和酶解溫度對桑葚多糖提取率交互影響的響應(yīng)面圖；
[0110] 圖8是酶的用量和水的用量對桑葚多糖提取率交互影響的響應(yīng)面圖；
[0111] 圖9是酶的用量和酶解溫度對桑葚多糖提取率交互影響的響應(yīng)面圖；
[0112] 圖10是酶解溫度和水的用量對桑葚多糖提取率交互影響的響應(yīng)面圖；
[0113] 圖11是酶的用量和酶解時間對桑葚多糖提取率交互影響的等高線圖；
[0114] 圖12是水的用量和酶解時間對桑葚多糖提取率交互影響的等高線圖；
[0115] 圖13是酶解溫度和酶解時間對桑葚多糖提取率交互影響的等高線圖；
[0116] 圖14是水的用量和酶的用量對桑葚多糖提取率交互影響的等高線圖；
[0117] 圖15是酶解溫度和酶的用量對桑葚多糖提取率交互影響的等高線圖；
[0118] 圖16是酶解溫度和水的用量對桑葚多糖提取率交互影響的等高線圖；
[0119] 圖17是急性酒精性肝損傷模型的AST指標(biāo)圖；
[0120] 圖18是急性酒精性肝損傷模型的ALT指標(biāo)圖；
[0121] 圖19是亞急性酒精性肝損傷模型的AST指標(biāo)圖；
[0122] 圖20是亞急性酒精性肝損傷模型的ALT指標(biāo)圖；
[0123] 圖17~圖20中附圖標(biāo)記的含義：1常規(guī)對照組，2病理模型對照組，3陽性對照組， 4桑葚多糖提取物高劑量組，5桑葚多糖提取物中劑量組，6桑葚多糖提取物低劑量組。
【具體實(shí)施方式】
[0124] 以下結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的介紹。
[0125] 實(shí)施例1 一種桑葚多糖的提取方法，包括以下步驟：
[0126] (1)除雜：將100g桑葚原料進(jìn)行水洗，干燥，粉碎，備用；
[0127] (2)脫脂、脫色：將步驟（1)所得原料置于容器中，先加入200mL75%乙醇回流兩 次，再加入200mL90%乙醚回流兩次，每次回流60分鐘，回流完畢后，晾干，備用；
[0128] (3)將步驟（2)所得產(chǎn)物置于容器中，加入步驟（2)所得產(chǎn)物重量25倍的水，調(diào) 節(jié)pH值為7,保持溫度在75°C，加入步驟（2)所得產(chǎn)物重量0. 006倍的葡萄糖氧化酶進(jìn)行 酶解，酶解時間為120分鐘；
[0129] (4)將步驟⑶中酶解產(chǎn)物進(jìn)行超聲處理，超聲頻率為20KHz，時間為10分鐘，得 提取液；
[0130] (5)將提取液趁熱過濾，得濾液，將濾液濃縮至原體積的1/5,乙醇沉淀兩次，兩次 均加入4倍體積、濃度為90%的乙醇，均放置于3°C下保持12h，醇沉后離心，收集沉淀物，沉 淀物用無水乙醇反復(fù)洗滌，干燥，得到桑葚多糖提取物。
[0131] 所用酶為0. 2wt%葡萄糖氧化酶水溶液：取葡萄糖氧化酶2g，精密稱定，先用少量 的水溶解，然后加入適量的水，兩次加水共計(jì)l〇〇〇g，混勻，即得。
[0132] 經(jīng)檢測，提取得到的桑葚多糖提取物中含有多糖65wt % (苯酚-硫酸法）、糖醛酸 16wt% (間羥基聯(lián)苯比色法）、蛋白質(zhì)2wt% (Bradford法）和硫酸酯7wt% (氯化鋇-明 膠法）。其中多糖由質(zhì)量比為1.8 : 0.3 : 1.9 : 60 : 2.8 : 18 : 12. 2的鼠李糖殘基、 巖藻糖殘基、木糖殘基、甘露糖殘基、半乳糖殘基、半乳糖醛酸殘基和葡萄糖殘基組成。
[0133] 實(shí)施例2 -種桑葚多糖的提取方法，包括以下步驟：
[0134] (1)除雜：將200g桑葚原料進(jìn)行水洗，干燥，粉碎，備用；
[0135] (2)脫脂、脫色：將步驟⑴所得原料置于容器中，先加入400mL無水乙醇回流兩 次，再加入400mL無水乙醚回流兩次，每次回流105分鐘，回流完畢后，晾干，備用；
[0136] (3)將步驟（2)所得產(chǎn)物置于容器中，加入步驟（2)所得產(chǎn)物重量11倍的水，調(diào) 節(jié)pH值為5,保持溫度在58°C，加入步驟（2)所得產(chǎn)物重量0. 003倍的葡萄糖氧化酶進(jìn)行 酶解，酶解時間為38分鐘；
[0137] (4)將步驟⑶中酶解產(chǎn)物進(jìn)行超聲處理，超聲頻率為80KHz，時間為20分鐘，得 提取液；
[0138] (5)將提取液趁熱過濾，得濾液，將濾液濃縮至原體積的1/4,乙醇沉淀兩次，兩次 均加入5倍體積、濃度為95 %的乙醇，均放置于4°C下保持30h，醇沉后離心，收集沉淀物，沉 淀物用無水乙醇反復(fù)洗滌，干燥，得到桑葚多糖提取物。
[0139] 所用酶為0. 4wt%葡萄糖氧化酶水溶液：取葡萄糖氧化酶4g，精密稱定，先用少量 的水溶解，然后加入適量的水，兩次加水共計(jì)l〇〇〇g，混勻，即得。
[0140] 經(jīng)檢測，提取得到的桑葚多糖提取物中含有多糖67. 9wt % (苯酚-硫酸法）、糖醛 酸18. 5wt% (間羥基聯(lián)苯比色法）、蛋白質(zhì)1. 6wt% (Bradford法）和硫酸酯6. 2wt% (氯 化鋇-明膠法）。其中多糖由質(zhì)量比為2.1 : 0.6 : 2.2 : 60. 5 : 3.1 : 18. 4 : 12. 5的 鼠李糖殘基、巖藻糖殘基、木糖殘基、甘露糖殘基、半乳糖殘基、半乳糖醛酸殘基和葡萄糖殘 基組成。
[0141] 實(shí)施例3 -種桑葚多糖的提取方法，包括以下步驟：
[0142] (1)除雜：將150g桑葚原料進(jìn)行水洗，干燥，粉碎，備用；
[0143] (2)脫脂、脫色：將步驟⑴所得原料置于容器中，先加入200mL無水乙醇回流兩 次，再加入200mL無水乙醚回流兩次，每次回流150分鐘，回流完畢后，晾干，備用；
[0144] (3)將步驟⑵所得產(chǎn)物置于容器中，加入步驟⑵所得產(chǎn)物重量6倍的水，調(diào)節(jié) pH值為3,保持溫度在25°C，加入步驟（2)所得產(chǎn)物重量0.001倍的葡萄糖氧化酶進(jìn)行酶 解，酶解時間為15分鐘；
[0145] (4)將步驟⑶中酶解產(chǎn)物進(jìn)行超聲處理，超聲頻率為lOOKHz，時間為40分鐘，得 提取液；
[0146] (5)將提取液趁熱過濾，得濾液，將濾液濃縮至原體積的1/3,乙醇沉淀兩次，兩次 均加入6倍體積的無水乙醇，均放置于5°C下保持48h，醇沉后離心，收集沉淀物，沉淀物用 無水乙醇反復(fù)洗滌，干燥，得到桑葚多糖提取物。
[0147]所用酶為0. 3wt%葡萄糖氧化酶水溶液：取葡萄糖氧化酶3g，精密稱定，先用少量 的水溶解，然后加入適量的水，兩次加水共計(jì)l〇〇〇g，混勻，即得。
[0148] 經(jīng)檢測，提取得到的桑葚多糖提取物中含有多糖67wt % (苯酚-硫酸法）、糖醛酸 20wt% (間羥基聯(lián)苯比色法）、蛋白質(zhì)1.5wt% (Bradford法）和硫酸酯6wt% (氯化鋇-明 膠法）。其中多糖由質(zhì)量比為2 : 1 : 2 : 61 : 3 : 18 : 13的鼠李糖殘基、巖藻糖殘基、 木糖殘基、甘露糖殘基、半乳糖殘基、半乳糖醛酸殘基和葡萄糖殘基組成。
[0149] 實(shí)施例4 一種桑葚多糖的提取方法，包括以下步驟：
[0150] (1)除雜：將200g桑葚原料進(jìn)行水洗，干燥，粉碎，備用；
[0151] (2)脫脂、脫色：將步驟（1)所得原料置于容器中，先加入300mL90%乙醇回流兩 次，再加入300mL95%乙醚回流兩次，每次回流135分鐘，回流完畢后，晾干，備用；
[0152] (3)將步驟⑵所得產(chǎn)物置于容器中，加入步驟⑵所得產(chǎn)物重量17倍的水，調(diào) 節(jié)pH值為4,保持溫度在45°C，加入步驟（2)所得產(chǎn)物重量0. 005倍的葡萄糖氧化酶進(jìn)行 酶解，酶解時間為60分鐘；
[0153] (4)將步驟（3)中酶解產(chǎn)物進(jìn)行超聲處理，超聲頻率為50KHz，時間為25分鐘，得 提取液；
[015