測定食用油的甘油中穩(wěn)定氧同位素比值的方法【
技術(shù)領(lǐng)域：
】：[0001]本發(fā)明設(shè)及測定食用油的甘油中穩(wěn)定氧同位素比值(記作δ?8〇)的方法。具體而言，樣品通過醋交換反應(yīng)使食用油中的甘油游離出來，液液萃取除去脂肪酸甲醋，利用氣相色譜-裂解-穩(wěn)定同位素比值質(zhì)譜儀(GC-P-IRMS)測定甘油的δ"〇,屬于穩(wěn)定同位素分析
技術(shù)領(lǐng)域：
?！?br>背景技術(shù)：
】：[0002]食用油是人們?nèi)粘Ｉ钪斜夭豢缮俚氖澄铮秤糜鸵蚍N類、來源不同而存在較大的營養(yǎng)價值和市場價格差異。我國是世界上最大的食用油生產(chǎn)國和消費國，食用油的消費量逐年攀升，隨著生活水平的提高，富含不飽和脂肪酸的植物油，尤其是高檔植物油越來越受到消費者青睞。然而由于我國食用油行業(yè)準入制度不完善，生產(chǎn)標(biāo)準低，市場上食用油質(zhì)量良莽不齊，更有甚者，有些不法企業(yè)弄虛作假，W廉價食用油冒充高檔植物油的現(xiàn)象屢見不鮮，W動物油脂、滿水油冒充純種植物油的情況更是當(dāng)前油品監(jiān)管的難題。[0003]穩(wěn)定同位素技術(shù)在食品種類、來源辨別及滲偽鑒別方面具有重要應(yīng)用，國外從上世紀開始研究不同來源油脂的穩(wěn)定同位素特征。作為油脂中的主要成分，甘油的穩(wěn)定碳氧同位素特征因油脂屬性(動物脂肪、植物油)和種類(橄攬油、菜巧油、亞麻油等)的不同而存在差異，該特征已成功的被用作高檔橄攬油的真實性鑒別依據(jù)。然而，食用油中甘油sis〇的測定是穩(wěn)定同位素分析領(lǐng)域的技術(shù)難題，運是因為其在食用油中是W甘油Ξ醋的形式存在，測定時需提取甘油，排除其他含氧組分的干擾后方可進行穩(wěn)定同位素分析:Weber等人(13C-paternofNaturalGlycerol:OriginandPracticalImportance)報道了利用高濃度氨氧化鋼溶液水解油脂，酸化處理并用乙酸/石油酸混合液除去脂肪酸后用乙醇溶解甘油，然后通過減壓蒸饋提取甘油并用高效蒸饋器純化甘油的方法；Camin等人(ApplicationofmultielementstableisotoperatioanalysistothecharacterizationofFrench,Italian,andSpanishcheeses和CorrelationbetweenmultielementstableisotoperatioandgeographicalorigininPeretacows'milkcheese)沿用Weber的方法處理了奶酪中的甘油，將甘油五氧化二憐干燥器中進行充分干燥然后用高溫裂解元素分析儀-穩(wěn)定同位素比值質(zhì)譜儀(TC/EA-IRMS，含手動進樣過程，對操作人員的技能要求高)測定甘油的δ"0;Ρ?οηζ3等人(81化andSW〇-valuesofglyceroloffoodfats)選擇甲醇溶解油脂樣品，在甲醇鋼存在的條件下進行醋交換，減壓蒸饋除去大部分甲醇后將剩余物溶于正己燒和水的混合液中，酸化水相并除去脂肪酸，通過乙醇提取甘油并用減壓蒸饋對之純化，結(jié)合CHN-EA-IRMS測定了甘油δ?8〇。由上述介紹可知，已有的運些測定油脂中甘油Sis〇的方法，前處理過程復(fù)雜，分析時對樣品純度要求苛刻，對操作人員的技能要求高。為克服上述方法的弊端，Jung等人（Reductiveestercleavageofa巧1glycerides-GC-C/P-IRMSmeasurementsofglycerolandfatyalcohols)選擇了結(jié)合醋裂解和氣相色譜-燃燒/裂解-穩(wěn)定同位素比值質(zhì)譜儀(GC-C/P-IRMS)測定甘油δ?8〇的方法:樣品溶解在叔下基甲酸中，加入氨化侶裡化iAl化)后70°C保溫比，冷卻后再加入LiA化4，再70°C保溫化，冰浴冷卻后用碳酸鐘除去過量的LiAlH4,并加入乙醇/乙酸混合溶液，劇烈振蕩后取出水相并再加入乙醇，酸化該溶液并除去A1(0H)3，然后加入玻璃粉并用乙醇洗涂沉淀物最后才取樣測定?？蒞看出，運個方法的前處理過程極盡繁瑣，并且氨化侶裡是危險品(遇水易爆炸），使用和保存過程中存在一定的安全風(fēng)險。[0004]本發(fā)明開發(fā)了一種測定食用油中甘油δ?80的方法，結(jié)合醋交換的原理W及GC-P-IRMS的分析要求實現(xiàn)了甘油δ?8〇的測定，該方法安全、高效，成本低，對操作人員的技能要求低，可用于食用油中甘油δ?8ο的常規(guī)分析。【
發(fā)明內(nèi)容】：[0005](1)擬解決的問題[0006]本發(fā)明的目的在于針對食用油中甘油δ"〇?1定的技術(shù)難題，提供一種安全、低成本的檢測技術(shù)，為食用油的真實性鑒別提供有效分析手段。[0007](2)本發(fā)明的具體方案[0008]本發(fā)明采用醋交換原理，使食用油中的甘油游離出來;酸化除去脂肪酸后將溶液中和使抑呈中性，用乙醇溶解沉淀后直接利用GC-P-IRMSii定甘油δ"〇。[0009]具體而言，本發(fā)明提供了測定食用油中甘油穩(wěn)定氧同位素比值的方法，優(yōu)選地，其中所述的食用油為動物脂肪和植物油，其中植物油如葵花巧油、菜巧油、大豆油、花生油、橄攬油、棟桐油、色拉油，也可W用于滿水油的分析。[0010]具體實施步驟如下：[0011]a)取食用油樣品溶于異辛燒中，充分震蕩；[0012]b)向上述溶液中加入氨氧化鐘甲醇溶液，充分震蕩后靜置，得到下層澄清溶液b;[001引C)酸化b溶液，加入異辛燒，除去溶液中殘留的脂肪酸，得到混合溶液C;[0014]d)調(diào)整C中得到的溶液至抑為7左右，并加入無水甲醇溶液，得到甘油甲醇溶液d;[001引e)用GC-P-IRMSii定甘油的δ"0值。[0016](3)有益效果：[0017]本發(fā)明建立了一種該方法無需復(fù)雜前處理，操作簡單，安全性高的測定食用油中甘油δ?80的方法，有利于油脂中甘油氧同位素分布特征的研究及油脂分類鑒別技術(shù)的研究與開發(fā)?！靖綀D說明】：[0018]附圖1GC-P-IRMSii定甘油別80的離子流圖譜；[0019]附圖扣則定甘油δ"0的準確性驗證?！揪唧w實施方式】：[0020]下面結(jié)合具體實例對本發(fā)明進一步說明。[0021]實施例一：[002引1材料方法[002引1.1儀器[0024]氣相色譜儀(TraceGC)，裂解轉(zhuǎn)化裝置（ISOLink)，穩(wěn)定同位素比值質(zhì)譜儀(Del化VAdvan化ge)，上述儀器均購自賽默飛世爾科技（中國）有限公司；[0025]恒溫水浴鍋(北京神泰偉業(yè)儀器設(shè)備有限公司）。電子分析天平(梅特勒-托利多國際股份有限公司）。[0026]1.2試劑[0027]植物油;過飽和氨氧化鐘甲醇溶液;濃鹽酸。[002引1.3色譜條件[0029]CP-Wax毛細管色譜柱(25m*0.25mm*0.20μπι);載氣為氮氣;柱流速1.2mL/min;進樣口溫度270°C;升溫程序為:起始溫度120°C，保持Imin，W20°C/min升溫至220°C，保持7min;進樣體積化L分流比20:1。[0030]1.4裂解裝置工作條件[0031]裂解裝置中使用裂解管(陶瓷管，內(nèi)附銷管），工作溫度為1280°Cd1.5樣品預(yù)處理[0032]稱取0.1?植物油并溶于8mL異辛燒中；加入4(Κ)化過飽和氨氧化鐘甲醇溶液(使甘油Ξ醋在氨氧化鐘催化下與甲醇進行醋交換反應(yīng)），充分振蕩后靜置并除去上層溶液(主要是脂肪酸甲醋），向下層溶液中加入約TOiiL濃鹽酸中和氨氧化鐘并保持酸性，溶液分層再次除去上層溶液(主要是游離脂肪酸），向下層溶液中加入SOiiL過飽和氨氧化鐘甲醇溶液中和濃鹽酸，待鹽沉淀后加入ImL甲醇，并將含有甘油的甲醇上層溶液轉(zhuǎn)移至2mL試劑瓶中，待用。[0033]1.6樣品測定[0034]取1.5中處理的樣品化L注入氣相色譜中，經(jīng)氣相色譜分離甘油與甲醇，將甘油轉(zhuǎn)移至裂解裝置中反應(yīng)生成一氧化碳(C0)，將該C0導(dǎo)入到穩(wěn)定同位素比值質(zhì)譜儀中分析(見附圖1)，得出甘油的δ?8ο值。[003引1.7測定結(jié)果[0036]附圖1表明，甘油經(jīng)上述處理后用氣相色譜-裂解-穩(wěn)定同位素比值質(zhì)譜儀分析δis〇，不會受到其他含氧化合物的干擾。[0037]處理后的甘油-甲醇溶液連續(xù)5次進樣測定，結(jié)果見表1。[003引表1甘油δ^ο重復(fù)測定結(jié)果[0039]?0040]由上表可知，該法測定樣品中甘油氧同位素的標(biāo)準偏差為0.26%。（同類儀器裂解測定有機物中Sis〇的精度要求為0.8%〇)。[0041]實施例二：[0042]使用實施例一中的樣品預(yù)處理方法和測定條件，選擇一玉米油作為研究對象，取5份油脂處理后并測定甘油δ?80，結(jié)果見表2。[0043]表2玉米油的甘油δ^ο重復(fù)測定結(jié)果[0044][0045]由表2可知，連續(xù)測定玉米油中甘油δ?%的標(biāo)準偏差為0.47%〇。[0046]實施例Ξ:[0047]驗證本發(fā)明測定甘油別咕的準確性，向玉米油中按甘油含量滲入10%、25%、50%、75%的丙Ξ醇(甘油試劑），混合均勻后使用實施例一中的樣品預(yù)處理方法和測定條件測定各模擬樣品的甘油Sis〇值，結(jié)果見附圖2。[0048]附圖2中，模擬樣品中甘油δ?8〇測定值隨丙Ξ醇滲入而改變，且與丙Ξ醇的滲入量呈線性正相關(guān)關(guān)系(R2=0.95)，運表明該發(fā)明所設(shè)及的預(yù)處理步驟和分析方法能夠準確測定食用油的甘油S"0值。[0049]最后應(yīng)當(dāng)說明的是，W上實施例僅用于說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制，盡管參照較佳實施例對本發(fā)明進行了詳細說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可W對發(fā)明的技術(shù)方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的精神和范圍，其均應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的權(quán)利要求范圍內(nèi)?！局鳈?quán)項】1.一種測定食用油的甘油中穩(wěn)定氧同位素比值的方法，其包含如下步驟：(a)采用酯交換法釋放食用油中的甘油；(b)液液萃取除去脂肪酸甲酯并用氣相色譜-裂解-穩(wěn)定同位素比值質(zhì)譜儀（GC-P-IRMS)測定。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于測定食用油的甘油δ180時所進行的酯交換反應(yīng)是在含有異辛烷、氫氧化鉀和甲醇的環(huán)境中進行的。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于應(yīng)除去酯交換反應(yīng)后所得到的含甘油溶液中的脂肪酸甲酯。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于應(yīng)確保含甘油溶液的pH近中性。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于使用氣相色譜-裂解-穩(wěn)定同位素比值質(zhì)譜儀測定含甘油的混合溶液中甘油δ180。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于(a)取食用油樣品溶于異辛烷中，充分震蕩；(b)向上述溶液中加入氫氧化鉀甲醇溶液，充分震蕩后靜置后分層，去除上層溶液，得到下層澄清溶液b;(c)酸化b溶液，加入異辛烷，溶液分層后除去上層溶液，得到混合溶液c;(d)調(diào)整c中得到的溶液至pH為7左右，并加入無水甲醇溶液，得到甘油甲醇溶液d;⑴用GC-P-IRMS測定甘油的δ18〇值。7.根據(jù)權(quán)利要求6的方法，其中在步驟(c)中的酸化是通過鹽酸進行的。8.根據(jù)權(quán)利要求7的方法，其中在步驟(c)中的酸化是通過濃鹽酸進行的。9.根據(jù)權(quán)利要求7的方法，其中在步驟⑷中pH的調(diào)整是通過過飽和氫氧化鉀甲醇溶液進行的?！緦＠勘景l(fā)明涉及穩(wěn)定同位素分析
技術(shù)領(lǐng)域：
，是結(jié)合酯交換反應(yīng)、色譜分離技術(shù)和穩(wěn)定同位素分析要求而測定食用油的甘油中穩(wěn)定氧同位素比值的方法。本發(fā)明首先通過酯交換反應(yīng)將食用油中的甘油三酯轉(zhuǎn)化成游離甘油，通過萃取技術(shù)除去脂肪酸甲酯和游離脂肪酸，然后用氣相色譜-裂解-穩(wěn)定同位素比值質(zhì)譜儀測定甘油穩(wěn)定氧同位素組成的方法。該法安全、高效，操作簡單，適合食用油中甘油穩(wěn)定氧同位素比值的測定。【IPC分類】G01N30/88,G01N30/06【公開號】CN105486793【申請?zhí)枴緾N201510824135【發(fā)明人】鐘其頂,王道兵【申請人】中國食品發(fā)酵工業(yè)研究院【公開日】2016年4月13日【申請日】2015年11月24日