MLDI-MS、快原子轟擊質(zhì)譜FAB-MS、電噴霧質(zhì)譜ESI-MS;液相 色譜法；液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法；糖忍片技術(shù)；核磁共振NMR，優(yōu)選基質(zhì)輔助激光解析飛行 時間質(zhì)譜法MLDI-MS; 陽〇6引 度）可選的，用于計算Gal。與Gal1和Gal2的豐度比值Gal比的模塊或處理器；
[0064] (C)可選的，用于根據(jù)Gal比判斷對象是否罹患惡性腫瘤、對對象進行預(yù)后評估和 /或罹患腫瘤的風(fēng)險評估、病情監(jiān)測和/或療效評估的模塊或處理器。 陽0化]在本發(fā)明的一些實施方式中，所述產(chǎn)品如前所述。
[0066] 在本發(fā)明的第Ξ方面中，提供了一種用于藥物和/或治療方法篩選的方法，所述 方法包括：
[0067] (A")測定對象給藥和/或治療之前、之后和/或過程中的不同時間點血液樣本中 IgG表面雙天線復(fù)雜型N糖鏈的末端半乳糖基化水平，所述末端半乳糖基化水平包括：IgG 表面末端無半乳糖連接的雙天線復(fù)雜型N-糖鏈水平Gal。、末端連有1個半乳糖的雙天線復(fù) 雜型N-糖鏈水平Gall和末端連有2個半乳糖的雙天線復(fù)雜型N-糖鏈水平Gal2; W側(cè) （B")計算Gal。與Gal1和Gal2的豐度比值，即Gal比； W例 （C")根據(jù)Gal比評估判斷所述藥物和/或治療方法的有效性，其中當(dāng)Gal比值高 于前次測試所得的Gal比值達(dá)到或高于預(yù)先設(shè)定的范圍（例如5%~50%或該范圍內(nèi)的任 意點或子范圍），則表明該藥物和/或治療方法的療效不佳。
[0070] 在本發(fā)明的其它方面中，提供了一種用于對象惡性腫瘤篩查、早期診斷、預(yù)后評 估、風(fēng)險評估、病情監(jiān)測和/或療效評估的方法，其特征在于，所述方法采用了本發(fā)明的產(chǎn) 品或本發(fā)明的應(yīng)用。 陽071] 在一些實施方式中，所述方法包括：
[0072] (A'）測定對象血液樣本中IgG表面雙天線復(fù)雜型N糖鏈的末端半乳糖基化水平， 所述末端半乳糖基化水平包括：IgG表面末端無半乳糖連接的雙天線復(fù)雜型N-糖鏈水平Gal。、末端連有1個半乳糖的雙天線復(fù)雜型N-糖鏈水平Gall和末端連有2個半乳糖的雙天 線復(fù)雜型N-糖鏈水平Galz; 陽〇7引 征'）計算Gal。與Gal1和Gal2的豐度比值，即Gal比；
[0074] 膽）根據(jù)Gal比判斷對象是否罹患惡性腫瘤、對對象進行預(yù)后評估和/或罹患腫 瘤的風(fēng)險評估、對病情進行監(jiān)測和/或?qū)Ο熜нM行評估。
[00巧]在本發(fā)明的一些實施方式中，所述方法還包括選自下組的一個或多個步驟：
[0076](曰'）采集和/或處理對象血液樣品； 陽077] 化'）分離和/或純化血清和/或血漿；
[007引（C'）分離和/或純化血清/血漿IgG; 陽079] (d'）分離、純化和/或富集血清IgG表面N-糖鏈；
[0080] (e'）存儲和/或處理對象血清的雙天線復(fù)雜型N糖鏈末端去半乳糖與半乳糖糖鏈 豐度比值作為IgG表面半乳糖化量變指標(biāo)；
[0081] (f'）提供判斷闊值；
[00間 （g'）將對象的Gal比與對照比較W判斷對象是否罹患惡性腫瘤、對對象進行預(yù)后 評估和/或罹患腫瘤、病情監(jiān)測和/或療效評估；
[0083] 化'）提供診斷和/或檢測結(jié)果和/或報告；
[0084] 0'）檢測其它惡性腫瘤指標(biāo)，并將所述其它惡性腫瘤指標(biāo)的檢測結(jié)果與Gal比檢 測結(jié)果結(jié)合，優(yōu)選所述指標(biāo)選自：患者的基本情況，如年齡、性別、家族史；腫瘤臨床表現(xiàn)， 包括局部表現(xiàn)如腫塊及繼發(fā)癥狀、疼痛、病理性分泌物、皮膚黏膜潰瘍，全身表現(xiàn)如發(fā)熱、 感染、貧血、消瘦、乏力、惡液質(zhì)，內(nèi)診如直腸指檢、婦科檢查；專一性理化檢查指標(biāo)，包括特 定的影像檢查，如核磁、CT、B超、內(nèi)窺鏡，乳腺鋼祀，腫瘤生化指標(biāo)，如AFP、CEA、PSA、SF、 TSGF、P0A、PR0GRP、CA125、CA15-3、CA19-9、CA72-4、CA242、CA50、CYFRA21-1、N沈、SCC、ARJ、 EBV-VCA等。
[00化]在一些實施方式中，所述方法用于如下所述的用途，且包括如下所述相應(yīng)步驟：
[0086] ω用于腫瘤篩查檢測：當(dāng)Gal比達(dá)到或高于預(yù)先設(shè)定的闊值，則判定該受試者患 有惡性腫瘤或具有罹患惡性腫瘤的風(fēng)險；
[0087] 扣）用于良惡判定：當(dāng)Gal比達(dá)到或高于預(yù)先設(shè)定的闊值，則判定該受試者患有 惡性腫瘤或具有罹患惡性腫瘤的風(fēng)險；
[0088] (iii)用于預(yù)后監(jiān)測：當(dāng)Gal比達(dá)到或高于預(yù)先設(shè)定的闊值，則提示對象惡性腫瘤 復(fù)發(fā)或具有復(fù)發(fā)的高風(fēng)險；
[0089] (iv)用于對象群（例如高危群體）惡性腫瘤發(fā)生預(yù)期：當(dāng)Gal比達(dá)到或高于預(yù)先 設(shè)定的闊值，則提示對象發(fā)生惡性腫瘤的可能性高于其它對象；
[0090] (V)用于癌癥患者病情監(jiān)測：當(dāng)Gal比高于前次測試所得的Gal比達(dá)到或高于預(yù) 先設(shè)定的范圍（例如5 %~50 %或該范圍內(nèi)的任意點或子范圍），則表明該癌癥患者的病情 有所發(fā)展或進一步惡化；
[0091] (Vi)用于療效評估：在治療前后或治療過程中的不同時間點測定并計算Gal比 值，當(dāng)Gal比值高于前次測試所得的Gal比值達(dá)到或高于預(yù)先設(shè)定的范圍（例如5%~50% 或該范圍內(nèi)的任意點或子范圍），則表明該療法和/或藥物的療效不佳； 陽〇巧優(yōu)選，α)~（iv)中的闊值為0. 35~0. 6,更優(yōu)選0. 5。
[0093] 在一些實施方式中，可基于R0C曲線中斜率最大點或最大化靈敏度和特異度的值 來確定最佳闊值，且優(yōu)選的闊值范圍可為最佳闊值±1~15% (包括該范圍內(nèi)的任意數(shù)值 點或子范圍）的范圍。
[0094] 在本發(fā)明的一些實施方式中，所述產(chǎn)品和應(yīng)用用于包括如下步驟的方法中：
[0095] 用IgG純化柱從對象血清樣品中分離和/或純化血清IgG，優(yōu)選采用與純化柱配套 的弱堿性結(jié)合緩沖溶液和弱酸性淋洗緩沖溶液；
[0096] 用糖巧酶處理分離的IgGW分離IgG的N糖鏈，優(yōu)選采用糖巧酶PNGaseF;
[0097] 用多孔石墨化碳PGC固相萃取分離的N糖鏈，優(yōu)選采用乙臘：水：Ξ氣醋酸= 80:19. 9:0. 1活化PGC，采用水：Ξ氣醋酸=99. 9:0. 1平衡PGC、采用乙臘：水：Ξ氣醋酸 =25:74. 95:0. 05的混合溶劑洗脫糖鏈；
[0098] 采用質(zhì)譜分析法（如基質(zhì)輔助激光解析飛行時間質(zhì)譜法）定量分析N-糖鏈中 Gal。、Gall和Gal2水平；
[0099] 基于對象血清IgG表面Gal比得出對象惡性腫瘤篩查、早期診斷、預(yù)后評估、風(fēng)險 評估、病情監(jiān)測和/或療效評估的結(jié)果。
[0100] 本領(lǐng)域的技術(shù)人員可對前述的技術(shù)方案和技術(shù)特征進行任意組合而不脫離本發(fā) 明的發(fā)明構(gòu)思和保護范圍。本發(fā)明的其它方面由于本文的公開內(nèi)容，對本領(lǐng)域的技術(shù)人員 而言是顯而易見的。
【附圖說明】 陽101] 下面結(jié)合附圖對本發(fā)明作進一步說明，其中所顯示僅為了圖示說明本發(fā)明的實施 方案，而不是為了局限本發(fā)明的范圍。
[0102] 圖1 :各類惡性腫瘤樣本與對照（健康人和良性疾?。┑谋容^；
[0103] A:對照的血清IgGN-糖鏈代表性質(zhì)譜圖（峰上方的數(shù)字表示其分子量）； 陽104]B:惡性腫瘤樣本的血清IgGN-糖鏈代表性質(zhì)譜圖；
[01化]圖2A:各類惡性腫瘤樣本與對照（健康人和良性疾?。┑谋容^樣本的R0C曲線； [0106]圖2B:卵巢癌樣本與對照（健康人和良性疾?。┍容^的R0C曲線； 陽107] 圖2C:肺癌樣本與對照（健康人和良性疾?。┍容^的R0C曲線；
[0108] 圖2D:胃癌樣本與對照（健康人和良性疾?。┍容^的R0C曲線；
[0109] 圖沈：肝癌樣本與對照（健康人和良性疾?。┍容^的R0C曲線；
[0110] 圖2F:腸癌（包含大腸、小腸、結(jié)腸、直腸癌）樣本與對照（健康人和良性疾?。┍?較的R0C曲線； 陽111] 圖2G:各類惡性腫瘤樣本與良性疾病比較樣本的R0C曲線；
[0112] 圖2H:早期惡性腫瘤患者樣本與對照（健康和良性疾?。颖颈容^的R0C曲線。
[011引附表說明
[0114] 下面進一步結(jié)合附表對本發(fā)明作進一步說明，其中所顯示僅為了說明本發(fā)明的實 施方案，而不是為了局限本發(fā)明的范圍。
[0115] 表1 :對照樣本分類及樣本年齡分布；
[0116] 表2 :惡性腫瘤樣本分期及分級統(tǒng)計；
[0117] 表3A:Gal比檢測在惡性腫瘤患者與對照樣本中的統(tǒng)計差異；
[0118] 表3B:腫瘤分類及各種指標(biāo)檢出率比較。
【具體實施方式】
[0119] 本發(fā)明基于發(fā)明人在上述領(lǐng)域的研究，提供了一種基于哺乳動物（優(yōu)選人）血液 中免疫球蛋白G(IgG)表面雙天線復(fù)雜型N糖鏈末端半乳糖化的變化篩查惡性腫瘤、進行早 期診斷、預(yù)后評估、風(fēng)險評估、病情監(jiān)測和/或療效評估的新方法。與現(xiàn)有的腫瘤血清學(xué)檢 測方法相比，本發(fā)明的方法具有適用性廣、敏感性高、特異性好、操作便捷的特性，對于腫瘤 的早期發(fā)現(xiàn)、及時診斷和治療、改善預(yù)后、提高生存率有重要的意義。
[0120] 本發(fā)明的目的是針對惡性腫瘤與對照血液中IgG表面雙天線復(fù)雜型N糖鏈的末端 半乳糖基化程度（具體為N糖鏈末端去半乳糖（Gal。）與半乳糖糖鏈（Gall和Gal2)豐度的 比值）的不同，通過對該半乳糖化程度的分析，區(qū)分惡性腫瘤患者與健康/良性對照，實現(xiàn) 對腫瘤的早期篩查、良惡性鑒別、預(yù)后檢測、病情監(jiān)測和/或療效評估，并由此提供一種高 靈敏、高特異性的惡性腫瘤篩查方法。 陽121] 發(fā)明人發(fā)現(xiàn)根據(jù)本發(fā)明的Gal比與多種腫瘤的發(fā)生和良惡性普遍相關(guān)。與現(xiàn)有的 經(jīng)典指標(biāo)相比，本發(fā)明在對初診病患的腫瘤篩查（肝癌、胃癌、肺癌、卵巢癌、腸癌、食管癌、 膜腺癌、膽管癌、腎癌、乳腺癌、前列腺癌、鼻咽癌、宮頸癌、膀脫癌、子宮內(nèi)膜癌）和良惡性 鑒別診斷中，具有更高的靈敏度、特異度和穩(wěn)定性；當(dāng)與現(xiàn)有的經(jīng)典指標(biāo)聯(lián)合應(yīng)用時，明顯 提高惡性腫瘤的檢出率。 陽122] 具體而言，發(fā)明人運用本發(fā)明進行了如下的測試并得出了相應(yīng)的結(jié)論：
[0123] 1)對2661例臨床樣本進行檢測，包含924例對照樣本、1737例惡性腫瘤樣本，證 明了本發(fā)明的方法、標(biāo)志物和指標(biāo)在惡性腫瘤篩查中具有高特異性、靈敏性和準(zhǔn)確性；
[0124] 2)本發(fā)明的方法可與經(jīng)典指標(biāo)聯(lián)合運用，W提高在特定腫瘤中的檢出率；
[01巧]3)對78例行規(guī)范手術(shù)方案治療的胃癌患者隨訪監(jiān)測研究，對于復(fù)發(fā)病例的檢出 率為92. 0% ; 陽126] 4)對于4217例高危人群的血清樣本進行隨訪檢測，Gal比陰性組和陽性組中腫瘤 發(fā)生率差異顯著。 陽127] W上結(jié)果證實Gal比可獨立用于惡性腫瘤的篩查、惡性腫瘤的早期發(fā)現(xiàn)、惡性腫 瘤的預(yù)后、病情監(jiān)測和/或療效評估，亦可與經(jīng)典指標(biāo)聯(lián)合運用用于惡性腫瘤的檢出。 陽12引 巧關(guān)術(shù)語定女
[0129] 本文中提供的所有數(shù)值范圍旨在清楚地包括落在范圍端點之間的所有數(shù)值及它 們之間的數(shù)值范圍。可對本發(fā)明提到的特征或?qū)嵤├岬降奶卣鬟M行組合。本說明書所掲 示的所有特征可與任何組合物形式并用，說明書中所掲示的各個特征，可W任何可提供相 同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特別說明，所掲示的特征僅為均等或相似 特征的一般性例子。
[0130] 如本文所用含有"、"具有"或"包括"包括了"包含"、"主要由……構(gòu)成"、"基本上 由......構(gòu)成"、和"由......構(gòu)成"；"主要由......構(gòu)成"、"基本上由......構(gòu)成"和"由......構(gòu)成" 屬于"含有"、"具有"或"包括"的下位概念。 陽13U如本文所用，術(shù)語"Gal比（Galratio)"是指對象血液IgG表面雙天線復(fù)雜型N糖鏈的末端半乳糖基化量變，具體為雙天線復(fù)雜型N糖鏈末端去半乳糖（Gal。）與半乳糖糖 鏈（Gall和Gal2)的豐度比值，其中，Gal。對應(yīng)于末端無半乳糖連接的雙天線復(fù)雜型N-糖 鏈，Gall對應(yīng)于末端連有1個半乳糖的雙天線復(fù)雜型N-糖鏈，Gal2對應(yīng)于末端連有2個半 乳糖的雙天線復(fù)雜型N-糖鏈。
[0132] 如本文所用，術(shù)語"雙天線復(fù)雜型N-糖鏈"是指：N-糖鏈中共有的核屯、五糖上連接 入2個非純甘露糖的分支糖鏈，宛如天線狀（參見查錫良主編，《生物化學(xué)》人民衛(wèi)生出版 社，20