，所述血液中的標(biāo)記物僅存在于患有BSE的動物 中。
[0172] 實施例6.患有阿爾茨海默氏病的轉(zhuǎn)基因小鼠的血液和腦切片的光譜熒光分析
[0173] 對AD轉(zhuǎn)基因小鼠系（5XFAD，Oakley等，2006)進(jìn)行研究，使用在此所述的光譜熒 光方法對比所得AD的血液特征和腦AD病理。與人類個體不同，該方法的優(yōu)勢在于可精確 了解任何給定年齡下淀粉樣蛋白腦病狀的發(fā)展。
[0174] 通過從經(jīng)K-114染色并在光譜共聚焦顯微鏡上成像的白細(xì)胞中選擇熒光光譜，自 小鼠血液中計算AD指數(shù)。使用的激發(fā)波長包括375、405、445和457nm，但是也可使用包括 但不限于這些值之間的波長的其他的波長。使用AD和健康年齡匹配的野生型小鼠。而后 這些光譜被用于計算系數(shù)以指明許多細(xì)胞/圖像中的聚集體的光譜與患病的對正常光譜 有多接近。而后通過平均像素強(qiáng)度放大代表AD組分的系數(shù)，以得到血液的AD指數(shù)。
[0175] 小鼠腦切片被福爾馬林固定，并以K-114染色。得到這些切片的代表性的光譜圖 像，并基于熒光強(qiáng)度閾值選擇腦區(qū)域。而后如上文對血液所做的，使用AD和對照光譜，合計 (合計2D圖像的像素并重疊成包含強(qiáng)度對波長的單一光譜向量）和處理所選的像素。所產(chǎn) 生的系數(shù)通過平均像素強(qiáng)度放大，以得到腦的AD指數(shù)。
[0176] 結(jié)果示出于圖9。如之前所報道的（Oakley等人，2006)，AD斑塊病狀開始于大約 2個月時，隨年齡快速增長。使用在此所描述的光譜熒光試驗，來自于相同個體的血液在2 個月時開始呈陽性，與最早腦病狀的開始處于相同的年齡。野生型（WT)腦和血液仍保持陰 性。這為在此所述的能在血液中檢測非常早期疾病的方法的靈敏度提供了進(jìn)一步的支持。
[0177] 實施例7.使用K-114的人類個體的血液和腦脊髓液的光譜熒光分析
[0178] 在阿爾茨海默氏?。ˋD)研究中使用人類個體因下述事實而復(fù)雜化：很難從死前 的人類樣品中確定疾病的診斷或階段。為了研究在此所描述的方法是否與其他人類個體 中檢測方法相一致，通過下述方法完成所述調(diào)查研究：同時測試血樣和腦脊髓液（CSF)樣 品，并使用目前接受的臨床標(biāo)準(zhǔn)（使用AthenaDiagnosticsADmark3?磷-Tau/總-Tau/ Αβ42CSF試驗測試AMl-42)和tau/磷-tau的CSF水平）分析CSF，以便檢測可能的個 體是否患有AD。
[0179] 從通過檢測Αβ(1-42)和tau/磷-tau的CSF水平明確地被確定為患有AD的個 體的樣品，以及健康對照樣品的以K-114染色的白細(xì)胞圖片中獲取2D光譜共聚焦圖像。基 于從AD和HC樣品中提取的信號強(qiáng)度、積分和光譜分離K-114發(fā)射譜。掩蔽沒有顯示任何 K-114發(fā)射的細(xì)胞區(qū)，以消除背景噪點。每個樣品的標(biāo)準(zhǔn)化光譜示出于圖10中。從患有AD 的個體中獲取的熒光光譜可容易地從健康對照中區(qū)分，并向更短波長顯著地藍(lán)移。
[0180] 實施例8.患有阿爾茨海默氏病的個體和健康對照的外周白細(xì)胞樣品中 Αβ(1-42)和致病蛋白質(zhì)聚集體的檢測
[0181] 使用可檢測的Αβ(1-42)抗體（MilliporeΑΒ5078Ρ)對來自于患有阿爾茨海默氏 病的個體和健康對照的外周白細(xì)胞樣品進(jìn)行染色，產(chǎn)生綠色熒光信號，并以結(jié)合至致病蛋 白質(zhì)聚集體的探針（K114)進(jìn)行染色，產(chǎn)生紅色熒光信號。
[0182] 如圖11所示，健康對照（圖11A)和AD樣品（圖11B)均在白細(xì)胞中顯示出Αβ1-42 免疫染色。在兩個樣品中平均熒光染色強(qiáng)度是大致相等的（圖lie)。但是，圖11Β示出了 更高的紅色強(qiáng)度，其代表來自于構(gòu)象選擇的淀粉樣蛋白探針與抗體共染色的AD-特異性光 譜發(fā)射，表明了致病蛋白質(zhì)聚集體的存在。在對照樣品中，只有很弱的AD-特異特異的紅色 信號。這強(qiáng)調(diào)了下述觀察：在外周白細(xì)胞中Αβ1-42的簡單免疫檢測由它自己是不能可靠 地區(qū)分健康對照和AD的。與在特定波長下簡單分析熒光強(qiáng)度相比，來自于以選擇地結(jié)合至 致病蛋白質(zhì)聚集體的熒光探針染色的白細(xì)胞的光譜形狀分析顯著地提供了更多的信息，并 促使區(qū)分正常個體與患有AD的個體。同樣地，多波長下分析和對比光譜預(yù)計將促進(jìn)檢測其 他與異常蛋白質(zhì)聚集相關(guān)的疾病。
[0183] 實施例9.來自于患有外傷性腦損傷個體的血液的光譜熒光分析。
[0184] 外傷性腦損傷（ΤΒΙ)是AD的主要風(fēng)險因子，研究已顯示損傷后不久淀粉樣蛋白斑 塊沉積便可能是顯著的。在此，發(fā)明人旨在施用于用于疑似患有AD的個體相似的方法，以 分析患有ΤΒΙ個體的血液，以便在腦損傷后不久檢測致病蛋白質(zhì)聚集體，以此作為評估腦 中生化淀粉樣蛋白負(fù)擔(dān)的手段。
[0185] 從男性個體中獲取血樣，所述個體在受傷后5天經(jīng)歷嚴(yán)重閉合性頭部外傷和ΤΒΙ， 其仍處于昏迷。
[0186] 圖12示出了受傷后5天患有ΤΒΙ的個體的白細(xì)胞樣品的光譜分析結(jié)果，以及從健 康對照和患有阿爾茨海默氏病的個體獲取的光譜。所述光譜獲取自使用Κ-114作為探針進(jìn) 行染色和處理的血液白細(xì)胞。2-D成像如實施例7中所陳述的進(jìn)行。光譜均使用375nm的 激發(fā)波長獲取。如圖12所示，來自于具有TBI的個體的光譜相對于其他的顯示出紅移，明 顯地超出了正常范圍。
[0187] 盡管已參考當(dāng)前被認(rèn)為是優(yōu)選的實施例描述了本公開，但應(yīng)理解本公開并不限于 所公開的實施例。相反地，本公開意圖涵蓋包括在所附的權(quán)利要求的主旨和范圍內(nèi)的各種 變型和等同模式。
[0188] 所有在此指出的出版物、專利和專利申請在相同的程度上均以引證方式全部合并 與此作為參考，如同每個單獨的出版物、專利或?qū)＠暾埦唧w及單獨地被表明以其全部引 作參考。
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