一種甘草總黃酮的含量測定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及中草藥檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體是指一種甘草總黃酮的含量測定方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 目前國內(nèi)外學(xué)者對甘草的化學(xué)和藥理作用進(jìn)行了許多研究，主要有效成分有三萜 皂苷和黃酮類化合物。其中，黃酮類成分具有明顯的抗?jié)?、解痙、抗炎、降血脂、鎮(zhèn)痛和雌 性激素樣作用。近年來還發(fā)現(xiàn)甘草黃酮對艾滋病毒有很強(qiáng)的抑制增殖作用，對甘草黃酮的 研究應(yīng)用已引起了人們的重視，甘草總黃酮主要以二氫黃酮類化合物為主。
[0003] 由于目前測定甘草總黃酮含量的主要方法是采用堿性比色法，但是該方法不穩(wěn) 定，操作復(fù)雜，影響因素較多，造成測定出來的含量結(jié)果不準(zhǔn)確。
[0004] 基于以上研究并設(shè)計(jì)了一種甘草總黃酮的含量測定方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于：提供一種甘草總黃酮的含量測定方法，該含量測定方法穩(wěn)定， 可靠，操作簡單。
[0006] 本發(fā)明通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：一種甘草總黃酮的含量測定方法，包括以下步驟： 1)采用紫外可見分光光度計(jì)測定； 2) 制備柚皮苷對照品溶液，取柚皮苷對照品約10mg，精密稱定，置IOml容量瓶中，用甲 醇溶解，定容即得； 3) 制備甘草中藥材樣品液，稱取甘草中粉0. lg，精密稱定，至100mL容量瓶中，加甲醇 80ml超聲處理90min，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，濾過即得； 4) 制備甘草酮提取物樣品液，取甘草酮提取物0. 10g，精密稱定，至100mL量瓶中，加甲 醇80ml，超聲處理90min，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，濾過即得； 5) 確定檢測波長，分別取上述柚皮苷對照品溶液、甘草中藥材樣品液、甘草酮提取物樣 品液各0. 05、1. 00、0. lml，置IOml容量瓶中，加入甲醇至lml，準(zhǔn)確加入KOH溶液0. 5ml，甲 醇定容，搖勾，放置1小時(shí)，以甲醇為參比液，于200-600mm波長處掃描； 6) 確定對照品溶液的顯色時(shí)間； 7) 取甘草中藥材5份，精密稱定，于50ml容量瓶中，分別加入柚皮苷對照品2. Omg，分 別加入加甲醇lml，準(zhǔn)確加入KOH溶液0. 5ml，甲醇定容至10ml，放置，以甲醇作為對照溶液， 測定吸收度。
[0007] 進(jìn)一步地，為了更好的實(shí)現(xiàn)本發(fā)明，還包括以下技術(shù)特征，所述步驟（5)中甘草中 藥材樣品液、甘草酮提取物樣品液與對照品溶液UV最大吸收為420- 430nm。
[0008] 進(jìn)一步地，為了更好的實(shí)現(xiàn)本發(fā)明，還包括以技術(shù)特征，所述步驟（5)中確定的檢 測波長為422nm〇
[0009] 進(jìn)一步地，為了更好的實(shí)現(xiàn)本發(fā)明，還包括以下技術(shù)特征，所述步驟6)確定對照品 溶液的顯色時(shí)間步驟為，精密量取柚皮苷對照品溶液〇. 〇2ml，置IOml容量瓶中，準(zhǔn)確加入 KOH溶液0. 5ml，甲醇定容，搖勻，以甲醇作為空白對照，分別放置IO、20、30、40、50、60、90、 120、150、180min，測定吸收度。
[0010] 進(jìn)一步地，為了更好的實(shí)現(xiàn)本發(fā)明，還包括以下技術(shù)特征，所述對照品溶液顯色時(shí) 間為lh。
[0011] 具體實(shí)驗(yàn)方法為： 儀器與試劑FA2004N電子天平，生產(chǎn)廠家：上海精密科學(xué)科技有限公司；SB2200超聲 波清洗器，生產(chǎn)廠家：上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司，DZF型真空干燥箱，生產(chǎn)廠家：上海精密 實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司，Angilent (8453型紫外分光光度計(jì)），Buchi R-200型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(瑞士 Buchi公司），柚皮苷對照品，生產(chǎn)廠家：中國藥品生物制品檢定所，甘草藥材，生產(chǎn)廠家：上 海華宇藥業(yè)有限公司。
[0012] 實(shí)驗(yàn)步驟： 對照品溶液的制備取柚皮苷對照品l〇mg，精密稱定，置IOml容量瓶中，用甲醇溶解， 定容即得。
[0013] 供試品溶液的制備1)藥材樣品液的制備：取甘草中粉0. lg，精密稱定，至100mL 容量瓶中，加甲醇80ml，超聲處理90min，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，過濾即得；2)甘草黃 酮提取物樣品液的制備取甘草黃酮提取物約〇. l〇g，精密成定，至100mL容量瓶中，加甲醇 80ml，超聲處理90min，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，濾過即得。
[0014] 確定檢測波長分別取上述柚皮苷對照品溶液、甘草中藥材溶液、甘草黃酮提取物 樣品液各0. 05ml、l. 00ml、0. 10ml，置IOml容量瓶中，加入甲醇至lml，準(zhǔn)確加入10%K0H溶 液0. 5ml，甲醇定容，搖勻，放置，以甲醇為參比液，于200- 600nm波長處掃描，紫外光譜圖 如圖1。結(jié)果表明，甘草中藥材供試品溶液、甘草黃酮提取物樣品液與對照品顯色溶液UV最 大吸收為422nm〇
[0015] 其中圖1、圖2、圖3、圖4中：A為空白對照，B為對照品溶液，C為甘草中藥材甲醇 提取液，D為甘草黃酮提取物樣品液。
[0016] 確定顯色時(shí)間準(zhǔn)確量取對照品溶液0. 02ml，置IOml容量瓶中，加入甲醇至約 lml，準(zhǔn)確加入10%K0H溶液0. 5ml，甲醇定容，搖勻，以甲醇作為空白對照，分別于10、20、30、 40、50、60、90、120、150、180min，在 422nm 處測定吸光度。
[0017] 結(jié)果表明：顯色溶液室溫放置時(shí)間在50min后，吸光度趨于穩(wěn)定，60 -ISOminRK 收值RSD為1. 01，確定顯色時(shí)間為lh。
[0018] 以下從線性關(guān)系、重現(xiàn)性、回收率驗(yàn)證含量測定方法的準(zhǔn)確度； 測定線性關(guān)系 精密量取上述對照品溶液〇. 02，0. 04，0. 08，0. 12，0. 20ml，分別加甲醇至約Iml，準(zhǔn) 確加入10%K0H溶液的0. 5ml，甲醇定容至10ml，放置lh，以甲醇為空白對照溶液，在波長 422nm處測吸收度，得線性回歸方程c=258. 9A-1. 6864 (r=l，線性范圍：2. 252- 22. 52ug/ ml) 〇
[0019] 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取6份甘草中粉，精密稱定，每份取甘草中粉月0. lg，精密稱定，至100mL容量瓶中， 加甲醇80ml，超聲處理90min，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，濾過即得，準(zhǔn)確量取甘草中藥 材樣品液1.0 ml，加10%K0H溶液0. 5ml，甲醇定容至IOml，放置lh，以甲醇為空白對照 溶液，在422nm處測定吸收度，以外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算含量，甘草中藥材中總黃酮含量為4. O (RSD=2. 16)。
[0020] 回收率試驗(yàn) 取甘草藥材5份，精密稱定，于50ml容量瓶中，分別加入柚皮苷對照品約2. Omg，分別加 甲醇lml，準(zhǔn)確加入10%K0H溶液的0. 5ml，用甲醇定容，放置1小時(shí)，以甲醇作為空白對照溶 液，在波長422nm處測定吸收度。測定結(jié)果見下表
通過以上驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)可知，該方法測得的平均加樣回收率98. 81%，RSD2. 00。
[0021] 本發(fā)明