一種藏降脂制劑的檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種藏降脂制劑的檢測方法，本發(fā)明從成藥入手，改變了原來對部分藥材及其成分分別進行檢測的方法，創(chuàng)造性地提出了一種對于藏降脂制劑成品的總體有效成分進行檢測的方法，去除了配方藥材中部分成分的干擾，通過對藏降脂中總黃酮含量的測定和槲皮素含量的測定，可以穩(wěn)定有效地檢測藏降脂制劑的質(zhì)量，真正體現(xiàn)藥品安全有效、質(zhì)量可控，從而確保了其臨床療效和廣大患者的身體健康。
【專利說明】一種藏降脂制劑的檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種藏藥的檢測方法，具體涉及一種藏降脂制劑的檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002]藏降脂為藏醫(yī)用于除清血脂的代表藥方，至今已有300多年使用歷史。其組成為:藏錦雞兒39.3g、余甘子31.4g、短管兔耳草23.5g、紫檀香23.5g、印度獐牙菜23.5g、訶子23.5g、沙棘膏23.5g、大黃23.5g、塞北紫堇23.5g、甘青青蘭23.5g、干姜15.8g。經(jīng)過現(xiàn)代臨床試驗證明:藏降脂組方科學，療效顯著。藏降脂膠囊目前已被認定為青海省高新技術(shù)產(chǎn)品O
[0003]對于藏降脂的檢測方法，在藏降脂膠囊的現(xiàn)行質(zhì)量標準WS-10864 (ZD-0864) -2002-2012Z (簡稱“現(xiàn)行標準”)中，通過薄層定性鑒別齊墩果酸和大黃藥材，再通過薄層掃描法測定大黃酚的含量從而標定大黃的含量。專利《藏降脂制劑的質(zhì)量控制方法》(申請?zhí)?201110188604.X)和文獻《藏降脂膠囊質(zhì)量標準研究》(中成藥，2013年3期)介紹了相同的一種藏降脂制劑的控制方法，在執(zhí)行標準的基礎(chǔ)上，增加了薄層色譜法定性鑒別甘青青蘭，并將執(zhí)行標準中薄層掃描法測定大黃中大黃酚含量修訂為高效液相色譜法(簡稱“HPLC”)同時測定大黃中蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚5種主要成分。
[0004]上述對于藏降脂制劑的檢測均是從原料入手，對部分藥材及其成分分別進行檢測，所選擇的檢測指標只代表藥方組成，不一定是產(chǎn)品療效必需的功效成分。目前尚缺少一種對于藏降脂制劑成品的總體有效成分進行檢測的方法。
[0005]黃酮類具有清除體內(nèi)自由基，改善血液循環(huán)，降低膽固醇的作用，為藏降脂方中多種藥材中共有的活性成分，也是藏降脂制劑中的主要有效成分之一。目前黃酮類的含量測定常用的是紫外-可見分光光度法測定總黃酮和高效液相色譜法對單種或多種黃酮單體進行含量測定，但藏降脂配方中藥材較多，黃酮類成分復雜，且其配方藥材中的部分成分(如藏錦雞兒及紫檀香中的色素)的干擾，現(xiàn)有技術(shù)中簡單的樣品處理方法和常用的檢測方法無法進行檢測。槲皮素為黃酮類的代表性成分，但槲皮素屬于黃酮苷的苷元，不經(jīng)過處理直接測定槲皮素的含量，不僅所得結(jié)果忽高忽低不準確，而且雜質(zhì)的干擾非常厲害，無法正常檢測。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]為克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種藏降脂制劑的檢測方法。
[0007]本發(fā)明的技術(shù)方案如下:
[0008]一種藏降脂制劑的檢測方法，通過測定藏降脂制劑中總黃酮的含量和測定藏降脂制劑中槲皮素的含量，構(gòu)成對藏降脂制劑的檢測，測定方法如下:
[0009]總黃酮含量的測定:采用紫外-可見分光光度法測定，具體為:
[0010]a.對照品溶液的配置:精密稱取干燥至恒重的蘆丁對照品，加50%乙醇溶液配制成濃度為0.25mg/ml的溶液，即得；
[0011]b.標準曲線測算:精密吸取對照品溶液0、1、2、3、4、5、61111，分別置于251111容量瓶中，各加5%亞硝酸鈉溶液1.0ml搖勻，放置6min，加10%硝酸鋁溶液1.0ml搖勻，放置6min，加lmol/L氫氧化鈉溶液10ml，再用75 %乙醇溶液稀釋至刻度，放置15min后，在510nm處分別測定其吸光度，繪制標準曲線；
[0012]c.供試品溶液A的制備:精密稱取樣品細粉lg，加石油醚50ml索氏提取器回流提取至提取液無色，冷卻，棄去石油醚液，加70%乙醇50ml于50°C水浴浸提5h，再超聲提取lh，過濾，濾渣用70%乙醇洗滌3次，每次10ml，合并濾液與洗滌液，濃縮，拌入1-1Og經(jīng)預處理的聚乙酰胺，以5倍于聚乙酰胺量的水洗脫，再用5倍于聚乙酰胺量95%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，濃縮至干，再用70%乙醇定容至50ml，得供試品溶液A ；
[0013]d.測定:精密吸取Iml待測溶液A置于25ml容量瓶中，按標準曲線測算項下的方法操作，由標準曲線求算含量；
[0014]槲皮素含量的測定:采用高效液相色譜法測定，具體為:
[0015]a.色譜條件與系統(tǒng)適用性:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積份數(shù)比45:55:1的甲醇-0.5%磷酸水溶液-異丙醇為流動相；檢測波長為360nm ;理論板數(shù)按槲皮素峰計算應(yīng)不低于2000 ；
[0016]b.對照品溶液的制備:取槲皮素對照品，精密稱定，加體積份數(shù)比3:1的乙醇-5mol/L鹽酸水溶液混合溶液制成每Iml含槲皮素150 μ g的溶液，即得；
[0017]c.供試品溶液B的制備:取藏降脂制劑細粉lg，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，精密加入75%乙醇溶液50ml，密塞，超聲處理I小時，過濾，續(xù)濾液減壓回收至干，加lmol/L的鹽酸50ml，加熱回流2h，趁熱濾過，續(xù)濾液放冷后，乙酸乙酯萃取3次，每次20ml，合并萃取液，減壓回收至干，殘洛用體積份數(shù)比3:1的乙醇_5mol/L鹽酸溶液溶解并定容至5ml,過濾，取續(xù)濾液，得供試品溶液B ;
[0018]d.測定:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液B各10μ 1，注入液相色譜儀，測定，計算，即得；
[0019]所述藏降脂制劑的主藥成分為:藏錦雞兒39.3重量份、余甘子31.4重量份、短管兔耳草23.5重量份、紫檀香23.5重量份、印度獐牙菜23.5重量份、訶子23.5重量份、沙棘骨23.5重量份、大黃23.5重量份、塞北紫堇23.5重量份、甘青青蘭23.5重量份、干姜15.8
重量份。
[0020]測定藏降脂制劑總黃酮的含量中，所述的預處理的聚乙酰胺柱其預處理方法為:取聚乙酰胺粉末，加聚乙酰胺量重量比2-5倍的95%乙醇浸泡，攪拌，靜置，裝柱；先用聚乙酰胺的5-6倍體積95%乙醇洗脫，再用水洗至無乙醇味。
[0021]所述藏降脂制劑是由藏降脂處方藥材直接粉碎或經(jīng)提取加工后制成的膠囊劑、軟膠囊、顆料劑、濃縮丸、散劑或片劑。
[0022]有益效果:本發(fā)明從成藥入手，創(chuàng)造性地提出了一種對于藏降脂制劑成品的總體有效成分進行檢測的方法，改變了原來對部分藥材及其成分分別進行檢測的方法，去除了配方藥材中部分成分的干擾，可以穩(wěn)定有效地檢測藏降脂制劑的質(zhì)量，真正體現(xiàn)藥品安全有效、質(zhì)量可控，從而確保了其臨床療效和廣大患者的身體健康?！緦＠綀D】

【附圖說明】
[0023]圖1是流動相為現(xiàn)有技術(shù)體積分數(shù)比1:1的甲醇-0.5%磷酸條件下藏降脂膠囊供試品溶液高效液相色譜；
[0024]圖2是流動相為體積份數(shù)比45:55:1的甲醇-0.5%磷酸水溶液-異丙醇條件下藏降脂膠囊供試品溶液高效液相色譜；
[0025]圖3是槲皮素對照品溶液高效液相色譜圖；
[0026]圖4是槲皮素線性關(guān)系圖。
[0027]其中，圖1、圖2和圖3的橫坐標是時間，單位:分鐘(Minutes);縱坐標是電壓，單位:伏特(Volts)。
【具體實施方式】
[0028]下面結(jié)合實驗例和實施例對本發(fā)明作進一步描述，所給出的實施例僅為了闡述本發(fā)明，而不是為了限制本發(fā)明的范圍。
[0029]實驗例1、藏降脂膠囊中總黃酮的含量測定實驗
[0030]1.儀器、試藥和供試樣品
[0031]儀器:電子天平:島津AUW220D型；島津UV-2450型紫外分光光度儀。
[0032]對照品:蘆丁對照品(中國藥品生物制品檢定所)，批號:100080-200707。
[0033]樣品:藏降脂膠囊(金訶藏藥股份有限公司提供)，批號分別為:20110801、20110802,20110803ο
[0034]2.供試品處理方式
[0035]藏降脂膠囊中成分復雜，藏錦雞兒及紫檀香等多味藥材中色素成分對黃酮測定影響嚴重，一般測定不能滿足測定需要，本發(fā)明通過將多種除雜方式進行結(jié)合，達到了良好的除雜效果。使用石油醚索氏提取除去脂類影響，使用溫水浸提及超聲提取相結(jié)合的方式使黃酮類成分提取完全，通過聚乙酰胺吸附的方式去除干擾，最大程度的保留了黃酮成分，滿足了黃酮測定的需要，同時經(jīng)過實驗確定最終實驗參數(shù)。
[0036]聚乙酰胺柱的預處理一聚乙酰胺粉末，加適量的95%乙醇浸泡，攪拌，靜置，裝柱。先用聚乙酰胺的5-6倍體積95%乙醇洗脫，再用水洗至無乙醇味。
[0037]3.總黃酮含量測定
[0038](I)對照品溶液的配置:精密稱取干燥至恒重的蘆丁對照品25mg，加50%乙醇溶液溶解并定容至100ml，搖勻，即得。
[0039](2)標準曲線測算:精密吸取對照品溶液0、l、2、3、4、5、6ml，分別置于25ml容量瓶中，各加5%亞硝酸鈉溶液1.0ml搖勻，放置6min，加10%硝酸鋁溶液1.0ml搖勻，放置6min，加lmol/L氫氧化鈉溶液10ml，再用75%乙醇溶液稀釋至刻度，放置15min后，分別在51Onm處測定其吸光度,繪制標準曲線。
[0040](3)樣品溶液的制備:精密稱取藏降脂制劑細粉1.0g，加石油醚50ml索氏提取器回流提取至提取液無色，冷卻，棄去石油醚液，加70%乙醇50ml于50°C水浴浸提5h，超聲提取lh，過濾，濾渣用70%乙醇洗滌3次，每次10ml，合并濾液與洗滌液，濃縮，拌入5g預處理好的聚酰胺柱。5倍于聚乙酰胺量的水洗脫，再用5倍于聚乙酰胺量95%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，濃縮至干，再用70%乙醇定容至50ml，得供試品溶液。[0041](4)測定:精密吸取樣品溶液Iml置25ml容量瓶中，按標準曲線的繪制項下的方法操作，由標準曲線求算含量。
[0042]4.重現(xiàn)性試驗
[0043]取20120101批號藏降脂膠囊樣品6份，按總黃酮含量測定項下方法測定，計算總黃酮含量及其相對標準偏差。結(jié)果表明:該方法重復性良好。結(jié)果見表1。
[0044]表1總黃酮含量測定重現(xiàn)性試驗結(jié)果
【權(quán)利要求】
1.一種藏降脂制劑的檢測方法，其特征在于，通過測定藏降脂制劑中總黃酮的含量和測定藏降脂制劑中槲皮素的含量，構(gòu)成對藏降脂制劑的檢測，測定方法如下:總黃酮含量的測定:采用紫外-可見分光光度法測定，具體測定方法如下:a.對照品溶液的配置:精密稱取干燥至恒重的蘆丁對照品，加50%乙醇溶液配制成濃度為0.25mg/ml的溶液，即得；b.標準曲線測算:精密吸取對照品溶液O、1、2、3、4、5、6ml，分別置于25ml容量瓶中，各加5%亞硝酸鈉溶液1.0ml搖勻，放置6min，加10%硝酸鋁溶液1.0ml搖勻，放置6min，加lmol/L氫氧化鈉溶液IOml，再用75 %乙醇溶液稀釋至刻度，放置15min后，在510nm處分別測定其吸光度，繪制標準曲線；c.供試品溶液A的制備:精密稱取樣品細粉lg，加石油醚50ml索氏提取器回流提取至提取液無色，冷卻，棄去石油醚液，加70%乙醇50ml于50°C水浴浸提5h，再超聲提取Ih，過濾，濾渣用70%乙醇洗滌3次，每次10ml，合并濾液與洗滌液，濃縮，拌入1-1Og經(jīng)預處理的聚乙酰胺，以5倍于聚乙酰胺量的水洗脫，再用5倍于聚乙酰胺量95%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，濃縮至干，再用70%乙醇定容至50ml，得供試品溶液A ；d.測定:精密吸取Iml待測溶液A置于25ml容量瓶中，按標準曲線測算項下的方法操作，由標準曲線求算含量；槲皮素含量的測定:采用高效液相色譜法測定，具體測定方法如下:a.色譜條件與系統(tǒng)適用性:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積份數(shù)比45:55:I的甲醇-0.5%磷酸水溶液-異丙醇為流動相；檢測波長為360nm ;理論板數(shù)按槲皮素峰計算應(yīng)不低于2000 ；b.對照品溶液的制備:取槲皮素對照品，精密稱定，加體積份數(shù)比3:1的乙醇-5mol/L鹽酸水溶液混合溶液制成每Iml含槲皮素150 μ g的溶液，即得；c.供試品溶液B的制備:取藏降脂制劑細粉lg，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，精密加入75%乙醇溶液50ml，密塞，超聲處理I小時，過濾，續(xù)濾液減壓回收至干，加lmol/L的鹽酸50ml，加熱回流2h，趁熱濾過，續(xù)濾液放冷后，乙酸乙酯萃取3次，每次20ml，合并萃取液，減壓回收至干，殘渣用體積份數(shù)比3:1的乙醇-5mol/L鹽酸溶液溶解并定容至5ml，過濾，取續(xù)濾液，得供試品溶液B ;d.測定:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液B各10μ1，注入液相色譜儀，測定，計算，即得；所述藏降脂制劑的處方藥材成分為:藏錦雞兒39.3重量份、余甘子31.4重量份、短管兔耳草23.5重量份、紫檀香23.5重量份、印度獐牙菜23.5重量份、訶子23.5重量份、沙棘骨23.5重量份、大黃23.5重量份、塞北紫堇23.5重量份、甘青青蘭23.5重量份、干姜15.8重量份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藏降脂制劑的檢測方法，其特征在于，所述藏降脂制劑是由藏降脂處方藥材直接粉碎或經(jīng)提取加工后制成的膠囊劑、軟膠囊、顆料劑、濃縮丸、散劑或片劑。
【文檔編號】G01N30/02GK103604762SQ201310539273
【公開日】2014年2月26日 申請日期:2013年11月4日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月4日
【發(fā)明者】鄭亭亭, 孫緒丁, 任松鵬, 趙延霞, 楊文鈺 申請人:山東阿如拉藥物研究開發(fā)有限公司