專利名稱：槐花總黃酮提取物在制備抑制皮膚色素沉著藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物藥用活性成分技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及總黃酮提取物的藥用，尤其涉
及槐花總黃酮提取物在制備抑制皮膚色素沉著藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
酪氨酸酶是皮膚黑素生物合成過程的主要限速酶，為銅及蛋白質(zhì)的復(fù)合物。它能 將機(jī)體內(nèi)制造黑素的主要原料酪氨酸羥化，產(chǎn)生L-多巴，然后再將多巴氧化成多巴醌，多 巴醌經(jīng)一系列代謝過程，重排并聚合，最后與蛋白質(zhì)結(jié)合生成一系列引起褐化的黑素。黑素 是決定人體膚色最重要的因素，合成過多可引起雀斑、黃褐斑、老年斑、黑色素瘤等色素增 加性皮膚病的形成。因此通過對(duì)酪氨酸酶活力抑制研究，可以篩選出抑制皮膚色素沉著的 有效成分。通過抑制酪氨酸酶活性可以抑制黑色素的生成，因而酪氨酸酶抑制劑具有重要 的應(yīng)用前景，可應(yīng)用于抑制色素沉著及皮膚增白美容。 槐花(Sophora j即onica L.)為豆科槐屬植物槐的干燥花及花蕾。前者習(xí)稱為
"槐花"，后者習(xí)稱為"槐米"，我國(guó)大部分地區(qū)均有生長(zhǎng)。中醫(yī)醫(yī)學(xué)書籍中記載了槐花的醫(yī)藥
及保健功能，有治療便血、痔血、血痢、崩漏、吐血、肝熱目赤、頭痛眩暈、癰疽瘡毒等。 近年來，已從槐花中分離得到到多種化合物，主要成分為黃酮類化合物，包括蘆
丁、槲皮素、山奈酚、異鼠李素、異黃酮苷元染料木素、槐花米甲素、槐花米乙素、槐花米丙
素，以及皂苷類化合物等。 槐花提取物具有多種生物活性，具有抗炎、抗病毒、殺菌、抗腫瘤作用、降低血脂、 治療心血管疾病等，但是對(duì)于槐花總黃酮類提取物對(duì)酪氨酸酶的抑制作用還未見有相關(guān)報(bào) 道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種槐花總黃酮提取物在制備抑制皮膚色素沉著藥物中 的應(yīng)用。 本發(fā)明的上述目的是通過如下方法予以實(shí)現(xiàn)的 本發(fā)明人以槐花總黃酮提取物作為研究對(duì)象，用酪氨酸酶多巴速率氧化法觀察
槐花總黃酮對(duì)酪氨酸酶的抑制作用，結(jié)果顯示它對(duì)酪氨酸酶活性有明顯下調(diào)作用，而酪氨
酸酶是皮膚黑素生物合成過程的主要限速酶，通過抑制酪氨酸酶活性可以抑制黑色素的生
成，因此本發(fā)明利用槐花總黃酮對(duì)酪氨酸酶活性的抑制，具有抑制皮膚色素沉著及增白美
容的作用，提供一種可將槐花總黃酮提取物用于制備抑制皮膚色素沉著的藥物，如可制備
預(yù)防或治療色素增加型皮膚病的藥物，或者可制備具有增白祛斑功能的化妝品等等。 本發(fā)明的槐花總黃酮提取物是指本領(lǐng)域技術(shù)人員采用常規(guī)的任何一種總黃酮提
取方法從豆科槐屬植物槐的干燥花及花蕾(Sophora j即onica L.)提取得到的混合物，通
常都包括蘆丁、槲皮素、山奈酚、異鼠李素、異黃酮苷元染料木素、槐花米甲素、槐花米乙素、
槐花米丙素等黃酮或黃酮苷等幾種主要成分。
本發(fā)明的總黃酮提取物在應(yīng)用的時(shí)候可與藥學(xué)上可以接受的助劑制備任何劑型
的藥物或化妝品，如可以為片劑、丸劑、膠囊、膏體或乳劑等，其中總黃酮提取物在產(chǎn)品中的
質(zhì)量百分比為5 10.0%。 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果 1.本發(fā)明以槐花總黃酮為研究對(duì)象，對(duì)其進(jìn)行了酪氨酸酶抑制作用的研究，結(jié)果
顯示它對(duì)酪氨酸酶活性有明顯下調(diào)作用，表明槐花總黃酮具抑制皮膚色素沉著及增白美容
的作用，可作為色素增加性皮膚病的預(yù)防和治療或外用化妝品的增白祛斑功能； 2.本發(fā)明提供一種植物活性成分的新應(yīng)用，不但擴(kuò)充了槐花總黃酮提取物的藥用
價(jià)值，而且植物提取物毒性低，也不會(huì)影響人體健康。


圖1為槐花總黃酮提取物對(duì)酪氨酸酶的抑制作用曲線圖。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步地描述，但具體實(shí)施例并不對(duì)本發(fā)明做任 何限定。 實(shí)施例1槐花總黃酮提取物的制備 本發(fā)明的槐花總黃酮提取物可以采用本領(lǐng)域技術(shù)人員進(jìn)行植物中總黃酮提取時(shí) 的任何一種常用方法，本實(shí)施例選擇乙醇-超聲波方法，從槐花中提取總黃酮，其具體步驟 為 取干燥的槐花，以料液比為1 : 20的重量比例加入體積百分比為60%的乙醇，在 75°C的條件下超聲輔助提取30min，連續(xù)提取兩次，抽濾，合并提取液。 用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮提取液，真空干燥24小時(shí)，通過分光光度法測(cè)定提取物中黃酮
實(shí)施例2槐花總黃酮提取物對(duì)酪氨酸酶的抑制作用 本實(shí)施例選擇實(shí)施例1制備的槐花總黃酮提取物，研究其對(duì)酪氨酸酶的抑制作 用。 酪氨酸酶反應(yīng)活性的測(cè)定條件以0. 5mol/L L-D0PA為底物，在3mL 0. 05mol/L磷 酸緩沖液(pH 6.8)的測(cè)活體系中，分別加O. lmL含0.01g/L、或0.025g/L、或0.05g/L、或 0. 075g/L、或0. 10g/L等不同濃度的槐花總黃酮于比色杯中，再加2. 8mL預(yù)先在3(TC恒溫水 浴保溫的底物L(fēng)-DOPA溶液，然后加0. lmL酪氨酸酶水溶液，立刻混勻，在3(TC恒溫下測(cè)定波 長(zhǎng)為475nm的吸光值隨時(shí)間的增長(zhǎng)直線，從直線斜率求得酶活力。 在上述測(cè)活體系中，酶的終質(zhì)量濃度為6mg/L，根據(jù)酶反應(yīng)活性的定義，在一定的 抑制劑濃度下，酶反應(yīng)活性表示為Ui，在沒有抑制劑時(shí)酶反應(yīng)活性表示為U。，相對(duì)酶活性 (UK)則按下式(I)的公式進(jìn)行計(jì)算
<formula>formula see original document page 4</formula>(I )
式(I)中 &是指含有底物、酪氨酸酶和槐花總黃酮提取物的測(cè)活體系的吸光度；
A2是指含有底物和酪氨酸酶，但不含槐花總黃酮提取的測(cè)活體系的吸光度；
A。是指含有底物，但不含酪氨酸酶和槐花總黃酮提取物的測(cè)活體系的吸光度。
IC50表示酶活性被抑制50%時(shí)抑制劑的濃度。 熊果苷能抑制酪氨酸酶的活性，近年來被廣泛應(yīng)用為美白劑，本實(shí)施例選擇熊果 苷作為陽性對(duì)照，同時(shí)也對(duì)熊果苷的IC50進(jìn)行測(cè)試。 通過測(cè)定不同濃度的槐花提取物對(duì)酪氨酸酶活性的影響(如圖1所示)，結(jié)果表明 槐花提取物對(duì)酪氨酸酶具有顯著的抑制作用，抑制率隨著提取物濃度的增大而增大，酶活 力抑制達(dá)到50%，即半抑制時(shí)槐花提取物濃度(IC50)為0.03g/L。 陽性對(duì)照物熊IC50為1. 60g/L。說明槐花提取物對(duì)酪氨酸酶的抑制作用比熊果苷 強(qiáng)近50倍。 實(shí)施例3槐花總黃酮提取物用于美白化妝品實(shí)驗(yàn) 本實(shí)施例將實(shí)施例1制備的槐花總黃酮提取物進(jìn)行美白化妝品試驗(yàn)，對(duì)其是否具 有抑制皮膚色素沉著和增白祛斑功效，進(jìn)行檢測(cè)。 將實(shí)施例1制備的槐花總黃酮提取物和化妝品中常用的助劑進(jìn)行搭配，制成5% 的軟膏劑(槐花總黃酮提取物占軟膏劑總質(zhì)量的5% )。 隨機(jī)選擇50名自愿者試用上述軟膏劑，要求早晚一次涂抹臉部，連續(xù)使用28天。
通過目測(cè)和問巻方式統(tǒng)計(jì)，結(jié)果表明有明顯美白亮膚效果的為41名，占82%;有 效果反應(yīng)的為9名，占18%，其中有黃褐斑的試用者使用后均有不同程度的減淡的反應(yīng)。
權(quán)利要求
一種槐花總黃酮提取物在制備抑制皮膚色素沉著藥物中的應(yīng)用。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述應(yīng)用，其特征在于所述抑制皮膚色素沉著藥物是預(yù)防或治療色 素增加型皮膚病的藥物。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述應(yīng)用，其特征在于所述抑制皮膚色素沉著藥物是具有增白祛斑 功能的化妝品。
4. 根據(jù)權(quán)利要求l所述應(yīng)用，其特征在于槐花總黃酮提取物在制備藥物時(shí)的用量 0. 1 10. 0%。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述應(yīng)用，其特征在于所述藥物為片劑、丸劑、膠囊、膏體或乳劑。
全文摘要
本發(fā)明公開一種槐花總黃酮提取物在制備抑制皮膚色素沉著藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明以槐花總黃酮為研究對(duì)象，對(duì)其進(jìn)行了酪氨酸酶抑制作用的研究，結(jié)果顯示它對(duì)酪氨酸酶活性有明顯下調(diào)作用，表明槐花總黃酮具抑制皮膚色素沉著及增白美容的作用，可作為色素增加性皮膚病的預(yù)防和治療或外用化妝品的增白祛斑功能?；被傸S酮提取物是一種純天然植物提取物，其毒性低，不會(huì)影響人體健康。
文檔編號(hào)A61Q19/00GK101708210SQ20091019439
公開日2010年5月19日 申請(qǐng)日期2009年12月4日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月4日
發(fā)明者張焜, 杜志云, 湯志凱, 莫容清 申請(qǐng)人:廣東工業(yè)大學(xué)