隆抗體或其片段，測(cè)定得自被測(cè)試者的體液樣品中表達(dá)該抗原的外來體量的步驟。
[0031]步驟A中應(yīng)用的單克隆抗體或其片段可列舉3種單克隆抗體或其片段。具體地，應(yīng)用抗CD147單克隆抗體或其片段、抗CD9單克隆抗體或其片段、抗CD63單克隆抗體或其片段，至少應(yīng)用抗CD147單克隆抗體或其片段。
[0032]本發(fā)明中應(yīng)用的單克隆抗體或其片段各自識(shí)別特定抗原即可，可按照公知的方法制備。即，抗CD147單克隆抗體或其片段識(shí)別CD147，抗CD9單克隆抗體或其片段識(shí)別CD9，抗⑶63單克隆抗體或其片段識(shí)別⑶63，其可通過哺乳動(dòng)物的免疫應(yīng)答制備，也可基于各抗原的序列信息制備。
[0033]另外，本發(fā)明中，作為抗CD9單克隆抗體和抗CD63單克隆抗體，可應(yīng)用從作為產(chǎn)生前述單克隆抗體的雜交瘤的、在獨(dú)立行政法人制品評(píng)價(jià)技術(shù)基礎(chǔ)機(jī)構(gòu)專利微生物保藏中心(茨城縣筑波市東1-1-1中央第6號(hào))以下述保藏編號(hào)保藏的細(xì)胞得到的抗體。
[0034]FERM BP-11519 (產(chǎn)生的單克隆抗體是CD9-12A12抗體，名稱CD9:12A12，保藏日2011年11月8日)
FERM BP-11520 (產(chǎn)生的單克隆抗體是CD63-8A12抗體，名稱CD63:8A12，保藏日2011年11月8日)
FERM BP-11521 (產(chǎn)生的單克隆抗體是CD63-13C8抗體，名稱CD63:13C8，保藏日2011年11月8日)。
[0035]本發(fā)明中，“單克隆抗體片段”意味著前述單克隆抗體的一部分，與該單克隆抗體同樣地具有與⑶9、⑶63或⑶147的特異結(jié)合性的片段。具體地，具有對(duì)⑶9、⑶63或⑶147的特異結(jié)合性的片段可列舉Fab、F (ab’)2、Fab’、單鏈抗體(scFv)、二硫鍵抗體(dsFv)、2聚體 V 區(qū)片段(雙抗體)、含有 CDR 的肽等(Expert opin1n on therapeutic patents, 6(5)，441-456, 1996)。
[0036]這些單克隆抗體或其片段以例如下列2種方式應(yīng)用。
[0037]方式1:應(yīng)用抗⑶147單克隆抗體或其片段的方式，
方式2:應(yīng)用選自抗CD9單克隆抗體和其片段、抗CD63單克隆抗體或其片段的至少I種，以及抗CD147單克隆抗體或其片段的組合的方式。
[0038]方式I中，通過標(biāo)記的抗⑶147單克隆抗體或其片段識(shí)別外來體上的⑶147，可定量表達(dá)CD147的外來體?？笴D147單克隆抗體或其片段的標(biāo)記化沒有特別限定，可通過公知方法進(jìn)行。方式I的單克隆抗體或其片段適用于后述蛋白質(zhì)印跡法。
[0039]方式2中，通過這些單克隆抗體或其片段識(shí)別外來體上的⑶9和/或⑶63與⑶147，可定量表達(dá)⑶9和/或⑶63與⑶147的外來體。方式2中，也可應(yīng)用抗⑶147單克隆抗體或其片段作為固定抗體，抗CD9單克隆抗體或其片段作為標(biāo)記抗體?；蛘撸部蓱?yīng)用抗CD9單克隆抗體或其片段作為固定抗體，抗CD147單克隆抗體或其片段作為標(biāo)記抗體。另夕卜，也可應(yīng)用抗CD63單克隆抗體或其片段作為固定抗體，抗CD147單克隆抗體或其片段作為標(biāo)記抗體。或者，也可應(yīng)用抗CD63單克隆抗體或其片段作為標(biāo)記抗體，抗CD147單克隆抗體或其片段作為固定抗體。另外，也可應(yīng)用抗CD9單克隆抗體或其片段與抗CD63單克隆抗體或其片段作為固定抗體，抗CD147單克隆抗體或其片段作為標(biāo)記抗體。或者，也可應(yīng)用抗CD9單克隆抗體或其片段與抗CD63單克隆抗體或其片段作為標(biāo)記抗體，抗CD147單克隆抗體或其片段作為固定抗體。固定抗體和標(biāo)記抗體的制備沒有特別限定，可按照公知方法進(jìn)行。方式2的單克隆抗體或其片段適用于后述的夾心ELISA法、ExoScreen法。
[0040]本發(fā)明中，提供用于測(cè)定外來體量的樣品是體液樣品即可，沒有限定，例如，可示例選自血液、血清、血楽、尿、唾液、乳汁、鼻涕、腦脊液的體液樣品。
[0041]外來體量的測(cè)定應(yīng)用前述單克隆抗體或其片段的方法即可，例如，可按照蛋白質(zhì)印跡法、夾心ELISA法、ExoScreen法進(jìn)行。
[0042]蛋白質(zhì)印跡法中，例如，可應(yīng)用方式I的單克隆抗體或其片段。具體地，通過應(yīng)用抗CD147單克隆抗體或其片段通過蛋白質(zhì)印跡法分析大腸癌患者的血液，可檢測(cè)得自大腸癌細(xì)胞的外來體上存在的CD147。
[0043]夾心ELISA法中，例如，可應(yīng)用方式2的單克隆抗體或其片段。具體地，首先，一種單克隆抗體或其片段作為固定抗體，與含有外來體的樣品接觸形成復(fù)合體。其后，將另一單克隆抗體或其片段標(biāo)記后加入其中，形成進(jìn)一步的復(fù)合體，通過檢測(cè)標(biāo)記，能夠測(cè)定表達(dá)兩種抗體識(shí)別的抗原的外來體量。
[0044]ExoScreen法是應(yīng)用PerkinElmer公司開發(fā)的AlphaLISA的方法。本方法應(yīng)用表位不同的2種抗體，一種抗體生物素化，另一種應(yīng)用綴合了 AlphaLISA受體珠的抗體與分析樣品反應(yīng)。其后，通過添加鏈霉抗生物素綴合的供體珠，生物素化抗體與供體珠通過鏈霉抗生物素綴合，受體珠與供體珠鄰接。在鄰接的狀態(tài)(200nm以內(nèi))，通過680nm激發(fā)，從供體珠產(chǎn)生單線態(tài)氧，單線態(tài)氧到達(dá)受體珠則發(fā)出615nm的光，其可作為信號(hào)檢測(cè)。通過對(duì)方式2的單克隆抗體或其片段應(yīng)用該方法，作為分析樣品可測(cè)定10nm左右大小的外來體。
[0045]因此，可測(cè)定體液樣品中含有目的蛋白質(zhì)的外來體量。應(yīng)用得到的外來體量，進(jìn)行隨后的步驟B。
[0046]步驟B是比較步驟A中得到的外來體的信號(hào)強(qiáng)度與對(duì)照者中的信號(hào)強(qiáng)度的步驟，發(fā)現(xiàn)前述被測(cè)試者中的信號(hào)強(qiáng)度比對(duì)照者中的信號(hào)強(qiáng)度強(qiáng)的情況作為大腸癌存在的指標(biāo)。另外，本說明書中，對(duì)照者是不發(fā)生大腸癌的個(gè)體即可，可列舉正常人。
[0047]對(duì)照者中的信號(hào)強(qiáng)度是得自對(duì)照者的體液樣品中的外來體量，其可在步驟A中測(cè)定被測(cè)試者的外來體量時(shí)共同測(cè)定，也可單獨(dú)測(cè)定。另外，也可測(cè)定多個(gè)對(duì)照者的外來體量，根據(jù)其統(tǒng)計(jì)設(shè)定對(duì)照者的外來體量。
[0048]得自對(duì)照者的體液樣品優(yōu)選與得自被測(cè)試者的體液樣品同種的樣品，例如，在得自被測(cè)試者的體液樣品是血液的情況下，得自對(duì)照者的體液樣品也是血液。
[0049]為了比較被測(cè)試者的信號(hào)強(qiáng)度與對(duì)照者的信號(hào)強(qiáng)度，將被測(cè)試者的外來體量與對(duì)照者的外來體量比較分析即可，其方法沒有特別限定，可應(yīng)用公知的方法(Steel法，t檢驗(yàn)，Wilcoxon檢驗(yàn)等)。根據(jù)前述分析被測(cè)試者的外來體量相對(duì)于對(duì)照者的外來體量顯示顯著增加時(shí)，判斷被測(cè)試者中存在大腸癌的可能性高。
[0050]另外，通過應(yīng)用前述抗體檢測(cè)體液樣品中存在的外來體，能夠判斷大腸癌的存在可能性的有無，因此，作為本發(fā)明的一個(gè)方式，可列舉提供大腸癌或懷疑大腸癌的信息的方法，其特征在于，從得自被測(cè)試者的體液樣品中檢測(cè)外來體，所述外來體由選自抗CD9單克隆抗體和其片段、抗CD63單克隆抗體和其片段的至少I種，以及抗CD147單克隆抗體或其片段識(shí)別。
[0051]另外，在前述分析中，將對(duì)照者的外來體量設(shè)定為被測(cè)試者術(shù)前的外來體量，術(shù)后的外來體量作為被測(cè)試者的外來體量，進(jìn)行比較，術(shù)后的外來體量顯示減少的情況可判斷為，大腸癌縮小或減輕的可能性高。
[0052]另外進(jìn)一步地，在前述分析中，例如，被測(cè)試者診斷為大腸癌的情況下，將對(duì)照者的外來體量設(shè)定為被測(cè)試者治療前的外來體量，治療后的外來體量作為被測(cè)試者的外來體量，進(jìn)行比較，治療后的外來體量顯示減少的情況可判斷為，該治療對(duì)于大腸癌的治療有效的可能性高。因此，本發(fā)明可另外提供評(píng)價(jià)方法，其特征在于，在大腸癌治療接受之前與接受之后，應(yīng)用前述單克隆抗體或其片段測(cè)定得自外來體的信號(hào)，治療后的值比治療前的值小的情況判斷為該治療有效。
[0053]另外，本發(fā)明的另一方式中，提供了用于檢測(cè)大腸癌的試劑盒。
[0054]本發(fā)明的試劑盒中包含所有物質(zhì)，只要其能夠檢測(cè)體液樣品中的外來體。具體地，可列舉包含能夠識(shí)別前述外來體表面存在的抗原的抗體即抗CD147單克隆抗體或其片段、抗CD9單克隆抗體或其片段、抗CD63單克隆抗體或其片段的試劑盒。其中，從應(yīng)用這些抗體或其片段的方式中可列舉:
方式1:含有抗CD147單克隆抗體或其片段的方式
方式2:含有選自抗CD9單克隆抗體和其片段、抗CD63單克隆抗體或其片段的至少I種，以及抗CD147單克隆抗體或其片段的組合的方式。
[0055]只要是在檢測(cè)體液樣品中的外來體時(shí)應(yīng)用抗體的檢測(cè)方法(例如，蛋白質(zhì)印跡法、ELISA法、ExoScreen法等)，這些試劑盒都