一種以碳點(diǎn)為探針運(yùn)用共振光散射法檢測血紅蛋白的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及血紅蛋白的檢測，具體涉及一種以碳點(diǎn)為探針運(yùn)用共振光散射法檢測血紅蛋白的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]血紅蛋白大量存在于紅細(xì)胞中，是血液中運(yùn)輸氧氣的主要成分，在生物體內(nèi)起到傳輸氧氣、分解H2O2、傳遞電子等與氧和能量代謝有關(guān)的重要活動，在一切生命活動中起著關(guān)鍵作用。血紅蛋白的測定方法有可見光度法、化學(xué)發(fā)光法及電化學(xué)法。本文通過微波法合成了水溶性的碳量子點(diǎn)，該碳量子點(diǎn)可以與血紅蛋白結(jié)合，從而實(shí)現(xiàn)對血紅蛋白含量的測定。
[0003]近年來，碳點(diǎn)是繼富勒烯、碳納米管及石墨烯之后最熱門的碳納米材料之一。這種納米材料克服了傳統(tǒng)量子點(diǎn)的某些缺點(diǎn)，不僅具有優(yōu)良的光學(xué)性能與小尺寸特性，而且具有良好的生物相容性，易于實(shí)現(xiàn)表面功能化，在生化傳感、成像分析、環(huán)境檢測、光催化技術(shù)及藥物載體等領(lǐng)域具有很好的應(yīng)用潛力。但迄今為止，將碳點(diǎn)探針用于血紅蛋白檢測的相關(guān)報(bào)道仍未見。
[0004]光散射現(xiàn)象廣泛存在于光與粒子的作用過程中，是指當(dāng)光通過介質(zhì)時(shí)在入射光方向以外的各個(gè)方向上所觀察到的光現(xiàn)象。它源于光電磁波的電場振動而導(dǎo)致的分子中電子產(chǎn)生的受迫振動所形成的偶極振子。根據(jù)電磁理論，振動著的偶極振子是一個(gè)二次波源，它向各個(gè)方向發(fā)射的電磁波就是散射波。光散射與介質(zhì)的不均勻性有關(guān)，除了真空之外的其它所有介質(zhì)都有一定程度的不均勻性，從而產(chǎn)生散射光。如今，共振光散射技術(shù)逐步發(fā)展成為一門新的分析技術(shù)。該技術(shù)具有簡便、快速，靈敏度高，儀器操作方便等優(yōu)點(diǎn)。近年來已被成功應(yīng)用于核酸、蛋白質(zhì)、無機(jī)離子、免疫和藥物等的分析測定。
[0005]針對以上問題，我們研宄了一種利用碳點(diǎn)探針共振散射光檢測血紅蛋白的方法，該方法操作簡單、檢測快速且靈敏度高，能進(jìn)行溶液中血紅蛋白的高靈敏識別。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的一個(gè)目的是解決至少上述問題和/或缺陷，并提供至少后面將說明的優(yōu)點(diǎn)。
[0007]本發(fā)明還有一個(gè)目的是提供一種以碳點(diǎn)為探針運(yùn)用共振光散射法檢測血紅蛋白的方法，操作簡單、檢測快速，能進(jìn)行溶液中血紅蛋白的高靈敏識別。
[0008]本發(fā)明還有一個(gè)目的是提供碳點(diǎn)的制備方法。
[0009]為了實(shí)現(xiàn)根據(jù)本發(fā)明的這些目的和其它優(yōu)點(diǎn)，提供了一種以碳點(diǎn)為探針運(yùn)用共振光散射法檢測血紅蛋白的方法，向多份血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液和待測溶液中分別加入碳點(diǎn)，分別檢測各血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液和待測溶液的共振光散射強(qiáng)度，建立各標(biāo)準(zhǔn)溶液的共振光散射強(qiáng)度與血紅蛋白濃度為零的標(biāo)準(zhǔn)溶液的共振光散射強(qiáng)度的差值和血紅蛋白的濃度間的線性關(guān)系，根據(jù)該線性關(guān)系計(jì)算待測溶液中血紅蛋白的濃度。
[0010]優(yōu)選的是，所述的以碳點(diǎn)為探針運(yùn)用共振光散射法檢測血紅蛋白的方法，具體包括以下步驟:
[0011]步驟1、配制多份不同濃度的血紅蛋白溶液，向各份血紅蛋白溶液中分別添加碳點(diǎn)，并使各份血紅蛋白溶液中的碳點(diǎn)的濃度相同，得到多份不同濃度的血紅蛋白的標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別檢測各份標(biāo)準(zhǔn)溶液的共振光散射強(qiáng)度，得到各份標(biāo)準(zhǔn)溶液的共振光散射光譜圖；
[0012]步驟2、以每份標(biāo)準(zhǔn)溶液的共振光散射光譜圖中所選定波長對應(yīng)的共振光散射強(qiáng)度與血紅蛋白濃度為零的標(biāo)準(zhǔn)溶液的共振光散射光譜圖中所選定波長對應(yīng)的共振光散射強(qiáng)度的差值為縱坐標(biāo)，以每份標(biāo)準(zhǔn)溶液中血紅蛋白的濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算線性關(guān)系；
[0013]步驟3、向待測溶液中加入碳點(diǎn)，使得待測溶液中的碳點(diǎn)的濃度與各份標(biāo)準(zhǔn)溶液中碳點(diǎn)的濃度相同，并按照步驟2的方法得到待測溶液對應(yīng)的共振光散射光譜圖，將該共振光散射光譜圖中所選定波長對應(yīng)的共振光散射強(qiáng)度與血紅蛋白濃度為零的標(biāo)準(zhǔn)溶液的共振光散射光譜圖中所選定波長對應(yīng)的共振光散射強(qiáng)度的差值代入到步驟3得到的線性關(guān)系中，即可得到待檢測溶液中血紅蛋白的濃度。
[0014]優(yōu)選的是，所述的以碳點(diǎn)為探針運(yùn)用共振光散射法檢測血紅蛋白的方法，所述碳點(diǎn)的制備方法:
[0015]步驟1.1、將分子量為1500的聚乙二醇和甘油攪拌后置于微波反應(yīng)器中，設(shè)定微波反應(yīng)器的溫度為140°C，反應(yīng)時(shí)間為15min ；
[0016]步驟1.2、將步驟1.1中的樣品冷卻到50°C時(shí)加入絲氨酸，繼續(xù)升溫至180°C微波反應(yīng)1min ；
[0017]步驟1.3、將步驟1.2中制得的樣品注入分子量為1000的透析袋中透析24小時(shí)，保留透析袋外的液體，得透析液；
[0018]步驟1.4、將所述透析液在60°C恒溫的條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)一個(gè)小時(shí)，得碳點(diǎn)；
[0019]其中，每Ig分子量為1500的聚乙二醇需要甘油的量為15ml，需要絲氨酸的量為Ig0
[0020]優(yōu)選的是，所述的以碳點(diǎn)為探針運(yùn)用共振光散射法檢測血紅蛋白的方法，各份標(biāo)準(zhǔn)溶液中碳點(diǎn)的濃度為10.7mg/ml，血紅蛋白待測溶液中碳點(diǎn)的濃度也為10.7mg/ml。
[0021]優(yōu)選的是，所述的以碳點(diǎn)為探針運(yùn)用共振光散射法檢測血紅蛋白的方法，所述步驟I中，各份標(biāo)準(zhǔn)溶液中血紅蛋白的濃度依次為0、5 X 10_8mol/L、I X 10_7mol/L、5 X 10_7mol/L、I X l(T6mol/L、2 X l(T6mol/L。
[0022]優(yōu)選的是，所述的以碳點(diǎn)為探針運(yùn)用共振光散射法檢測血紅蛋白的方法，所述步驟2中，共振光散射法檢測的激發(fā)波長和發(fā)射波長均為300nm。
[0023]優(yōu)選的是，所述的以碳點(diǎn)為探針運(yùn)用共振光散射法檢測血紅蛋白的方法，在所述的步驟2中，當(dāng)血紅蛋白溶液中添加碳點(diǎn)后，需靜置3min。
[0024]優(yōu)選的是，所述的以碳點(diǎn)為探針運(yùn)用共振光散射法檢測血紅蛋白的方法，所述的所選定波長為550nm。
[0025]本發(fā)明至少包括以下有益效果:
[0026]1、本發(fā)明提供的碳點(diǎn)探針細(xì)胞毒性低、生物相容性好。
[0027]2、本發(fā)明利用碳點(diǎn)探針和共振光散射法檢測血紅蛋白，檢測過程簡單方便，靈敏度高、檢測限低，可實(shí)現(xiàn)實(shí)際樣品中血紅蛋白的快速、靈敏檢測，檢出限可達(dá)到1.3Xl(T9mol/Lo
[0028]本發(fā)明的其它優(yōu)點(diǎn)、目標(biāo)和特征將部分通過下面的說明體現(xiàn)，部分還將通過對本發(fā)明的研宄和實(shí)踐而為本領(lǐng)域的技術(shù)人員所理解。
【附圖說明】
[0029]圖1為本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中的各標(biāo)準(zhǔn)溶液的共振光散射光譜圖；
[0030]圖2為本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
【具體實(shí)施方式】
[0031]下面結(jié)合附圖對本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說明，以令本領(lǐng)域技術(shù)人員參照說明書文字能夠據(jù)以實(shí)施。
[0032]應(yīng)當(dāng)理解，本文所使用的諸如“具有”、“包含”以及“包括”術(shù)語并不配出一個(gè)或多個(gè)其它元件或其組合的存在或添加。
[0033]實(shí)施例1
[0034]一種以碳點(diǎn)為探針運(yùn)用共振光散射法檢測血紅蛋白的方法，向多份血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液和待測溶液中分別加入碳點(diǎn)，分別檢測各血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液和待測溶液的共振光散射強(qiáng)度，建立各標(biāo)準(zhǔn)溶液的共振光散射強(qiáng)度與血紅蛋白濃度為零的標(biāo)準(zhǔn)溶液的共振光散射強(qiáng)度的差值和血紅蛋白的濃度間的線性關(guān)系，根據(jù)該線性關(guān)系計(jì)算待測溶液中血紅蛋白的濃度。
[0035]所述的以碳點(diǎn)為探針運(yùn)用共振光散射法檢測血紅蛋白的方法，具體包括以下步驟:
[0036]步驟1、配制多份不同濃度的血紅蛋白溶液，向各份血紅蛋白溶液中分別添加碳點(diǎn)，并使各份血紅蛋白溶液中的碳點(diǎn)的濃度相同，得到多份不同濃度的血紅蛋白的標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別檢測各份標(biāo)準(zhǔn)溶液的共振光散射強(qiáng)度，得到各份標(biāo)準(zhǔn)溶液的共振光散射光譜圖；
[0037]步驟2、以每份標(biāo)準(zhǔn)溶液的共振光散射光譜圖中選定波長對應(yīng)的共振光散射強(qiáng)度與血紅蛋白濃度為零的標(biāo)準(zhǔn)溶液的共振光散射光譜圖中選定波長對應(yīng)的共振光散射強(qiáng)度的差值為縱坐標(biāo)，以每份標(biāo)準(zhǔn)溶液中血紅蛋白的濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算線性關(guān)系;
[0038]步驟3、向待測溶液中加入碳點(diǎn)，使得待測溶液中的碳點(diǎn)的濃度與各份標(biāo)準(zhǔn)溶液中碳點(diǎn)的濃度相同，并按照步驟2的方法得到待測溶液對應(yīng)的共振光散射光譜圖，將該共振光散射光譜圖中所選定波長對應(yīng)的共振光散射強(qiáng)度與血紅蛋白濃度為零的標(biāo)準(zhǔn)溶液的共振光散射光譜圖中所選定波長對應(yīng)的共振光散射強(qiáng)度的差值代入到步驟3得到的線性關(guān)系中，即可得到待檢測溶液中血紅蛋白的濃度。
[0039]所述的以碳點(diǎn)為探針運(yùn)用共振光散射法檢測血紅蛋白的方法，所述碳點(diǎn)的制備方法:
[0040]步驟1.1、將分子量為1500的聚乙二醇和甘油攪拌后置于微波反應(yīng)器中，設(shè)定微波反應(yīng)器的溫度為140°C，反應(yīng)時(shí)間為15min ；
[0041]步驟1.2、將步驟1.