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一種基于二氧化錳負(fù)載銀納米粒子多壁碳納米管構(gòu)建的免疫傳感器的制備方法及應(yīng)用_2

文檔序號:8255492閱讀:來源:國知局
糊精/多壁碳納米管。
[0020]實(shí)施例6 環(huán)糊精/多壁碳納米管的制備,步驟如下:
將20 mg的多壁碳納米管和300 mg β -環(huán)糊精混合,在研缽中研磨12 min,并在這過程中逐滴加入無水乙醇。然后,再繼續(xù)研磨2 h,獲得均勻的黑色粉末;置于80 0C干燥箱內(nèi)干燥,制得環(huán)糊精/多壁碳納米管。
[0021 ] 實(shí)施例7檢測抗體孵化物AgNPSOMnO 2iMWCNTs /Ab2溶液的制備,步驟如下:
? AgNPS@Mn02@MWCNTs的制備,步驟如下:
將多壁碳納米管置于質(zhì)量分?jǐn)?shù)為65 %的硝酸中,25 0C下攪拌24 h;然后,超純水清洗三次,100 0C干燥;
0.15 g經(jīng)過上述酸化過的多壁碳納米管和160 mL、0.1 mol/L的高錳酸鉀溶液混合,40 0C攪拌2 h;逐滴加入20 mL、0.2mol/L的硫酸錳溶液,40 0C下繼續(xù)攪拌21 h ;用超純水和無水乙醇分別清洗三次,放入120 0C的干燥箱里干燥6 h,制得MnO2OMWCNTs ;
30 mg的Mn02@MWCNTs和30 mg的硝酸銀分散在30 mL超純水中,室溫下攪拌24 h,離心去掉上清液,在分散在超純水中,逐滴加入50 mmol/L的硼氫化鈉溶液,直至顏色不再變化,離心,干燥,得到AgNPS@Mn02@MWCNTs ;
②檢測抗體孵化物AgNPS@Mn02@MWCNTs /Ab2溶液的制備,步驟如下: 在2 mL、2 mg/mL的檢測抗體標(biāo)記物AgNPS@Mn02@MWCNTs溶液中,加入I mL、8Pg/mL的腫瘤標(biāo)志物檢測抗體Ab2S液,4°C恒溫振蕩培養(yǎng)箱中振蕩孵化12 h ;離心分離后,加入I mL的pH=7.4磷酸鹽緩沖溶液,得到檢測抗體孵化物AgNPS@Mn02@MWCNTs /Ab2溶液,4°C下保存?zhèn)溆肙
[0022]實(shí)施例8檢測抗體孵化物AgNPSOMnO 2iMWCNTs /Ab2溶液的制備,步驟如下:
? AgNPS@Mn02@MWCNTs的制備,步驟如下:
將多壁碳納米管置于質(zhì)量分?jǐn)?shù)為65 %的硝酸中,25 0C下攪拌24 h;然后,超純水清洗三次,100 0C干燥;
0.2 g經(jīng)過上述酸化過的多壁碳納米管和120 mL、0.lmol/L的高錳酸鉀溶液混合,400C攪拌2 h ;逐滴加入30mL、0.2 mol/L的硫酸錳溶液,40 0C下繼續(xù)攪拌21 h ;用超純水和無水乙醇分別清洗三次,放入120 0C的干燥箱里干燥6 h,制得MnO2OMWCNTs ;
40 mg的Mn02@MWCNTs和50 mg的硝酸銀分散在40 mL超純水中,室溫下攪拌24 h,離心去掉上清液,在分散在超純水中,逐滴加入50 mmol/L的硼氫化鈉溶液,直至顏色不再變化,離心,干燥,得到AgNPS@Mn02@MWCNTs ;
②檢測抗體孵化物AgNPS@Mn02@MWCNTs /Ab2溶液的制備,步驟如下:
在2 mL、3 mg/mL的檢測抗體標(biāo)記物AgNPS@Mn02@MWCNTs溶液中,加入2 mL、10 Pg/mL的腫瘤標(biāo)志物檢測抗體Ab2溶液,4°C恒溫振蕩培養(yǎng)箱中振蕩孵化12 h ;離心分離后,加入ImL的pH=7.4磷酸鹽緩沖溶液,得到檢測抗體孵化物AgNPS@Mn02@MWCNTs /Ab2溶液,4°C下保存?zhèn)溆谩?br>[0023]實(shí)施例9檢測抗體孵化物AgNPSOMnO 2iMWCNTs /Ab2溶液的制備,步驟如下:
? AgNPS@Mn02@MWCNTs的制備,步驟如下:
將多壁碳納米管置于質(zhì)量分?jǐn)?shù)為65 %的硝酸中,25 0C下攪拌24 h;然后,超純水清洗三次,100 0C干燥;
0.3g經(jīng)過上述酸化過的多壁碳納米管和80 mL、0.1 mol/L的高錳酸鉀溶液混合,400C攪拌2 h;逐滴加入40 mL、0.2 mol/L的硫酸錳溶液,40 0C下繼續(xù)攪拌21 h ;用超純水和無水乙醇分別清洗三次,放入120 0C的干燥箱里干燥6 h,制得MnO2OMWCNTs ;
60 mg的Mn02@MWCNTs和60 mg的硝酸銀分散在60 mL超純水中,室溫下攪拌24 h,離心去掉上清液,在分散在超純水中,逐滴加入50 mmol/L的硼氫化鈉溶液,直至顏色不再變化,離心,干燥,得到AgNPS@Mn02@MWCNTs ;
②檢測抗體孵化物AgNPS@Mn02@MWCNTs /Ab2溶液的制備,步驟如下:
在2 mL、4 mg/mL的檢測抗體標(biāo)記物AgNPS@Mn02@MWCNTs溶液中,加入3 mL、12 Pg/mL的腫瘤標(biāo)志物檢測抗體Ab2溶液,4°C恒溫振蕩培養(yǎng)箱中振蕩孵化12 h ;離心分離后,加入ImL的pH=7.4磷酸鹽緩沖溶液,得到檢測抗體孵化物AgNPS@Mn02@MWCNTs /Ab2溶液,4°C下保存?zhèn)溆谩?br>[0024]實(shí)施例10—種基于二氧化錳負(fù)載銀納米粒子多壁碳納米管構(gòu)建的免疫傳感器用于腫瘤標(biāo)志物AFP的檢測,步驟如下:
(I)使用電化學(xué)工作站以三電極體系進(jìn)行測試,飽和甘汞電極為參比電極,鉑絲電極為輔助電極,所制備的傳感器為工作電極,在10 mL、50 mmol/L的pH 5.59- 8.02磷酸鹽緩沖溶液中進(jìn)行測試; (2)用計(jì)時(shí)電流法對腫瘤標(biāo)志物AFP進(jìn)行檢測,輸入電壓為-0.4V,取樣間隔0.1 S,運(yùn)行時(shí)間400 s ;
(3)當(dāng)背景電流趨于穩(wěn)定后,每隔50s向10 mL、50 mmol/L的pH=7.4磷酸鹽緩沖溶液中注入10 yL、5 mol/L的雙氧水溶液,記錄電流變化;
(4)根據(jù)所得電流強(qiáng)度與AFP濃度之間的線性關(guān)系,繪制工作曲線,測得線性范圍為Ipg/mL~10 ng/mL,檢測限為 0.3 pg/mL。
[0025]實(shí)施例11 一種基于二氧化錳負(fù)載銀納米粒子多壁碳納米管構(gòu)建的免疫傳感器,用于腫瘤標(biāo)志物CEA的檢測,步驟如下:
Cl)同實(shí)施例10
(2)用計(jì)時(shí)電流法對腫瘤標(biāo)志物CEA進(jìn)行檢測,輸入電壓為-0.4 V,取樣間隔0.1 S,運(yùn)行時(shí)間400 s ;
(3)同實(shí)施例10
(4)根據(jù)所得電流強(qiáng)度與CEA濃度之間的線性關(guān)系,繪制工作曲線,測得線性范圍為Ipg/mL~10 ng/mL,檢測限為 0.3 pg/mL。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種基于二氧化錳負(fù)載銀納米粒子多壁碳納米管構(gòu)建的免疫傳感器的制備方法,其特征在于,所述的免疫傳感器的制備,步驟如下: (I)將直徑為4mm的玻碳電極用Al2O3拋光粉打磨,超純水清洗干凈; (2Mf6PL、1.0 -3.0 mg/mL的β -環(huán)糊精/多壁碳納米管滴涂在電極表面,晾干,用超純水沖洗,晾干; (3)繼續(xù)將6μ?、5 ~ 12 Pg/mL的腫瘤標(biāo)志物一抗Ab1溶液滴加到電極表面,超純水沖洗,4°C冰箱中干燥; (4)繼續(xù)將3PL、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5 ~ 2.0%的牛血清白蛋白BSA溶液滴加到電極表面,以封閉電極表面上非特異性活性位點(diǎn),超純水沖洗,4°C冰箱中晾干;滴加6 PL、lpg/mL ~10 ng/mL的一系列不同濃度的腫瘤標(biāo)志物抗原標(biāo)準(zhǔn)溶液到電極表面,超純水沖洗,4°C冰箱中干燥; (5)將6μ?Λ ~ 3 mg/mL的檢測抗體孵化物AgNPS@Mn02@MWCNTs /Ab2溶液滴涂于電極表面上,置于4°C冰箱中晾干,制得一種基于二氧化錳負(fù)載銀納米粒子多壁碳納米管構(gòu)建的免疫傳感器。
2.如權(quán)利要求1所述的一種基于二氧化錳負(fù)載銀納米粒子多壁碳納米管構(gòu)建的免疫傳感器的制備方法,其特征在于,包括以下步驟: (1)β -環(huán)糊精/多壁碳納米管的制備,步驟如下: 將10 ~ 20 mg的多壁碳納米管和300 ~ 600 mg β -環(huán)糊精混合,在研缽中研磨8 -12min,并在這過程中逐滴加入無水乙醇;然后,再繼續(xù)研磨2 h,獲得均勻的黑色粉末;置于80 0C干燥箱內(nèi)干燥,制得β -環(huán)糊精/多壁碳納米管; (2)檢測抗體孵化物AgNPS@Mn02@MWCNTs/Ab2溶液的制備,步驟如下: ①二氧化錳負(fù)載銀納米粒子多壁碳納米管AgNPS@Mn02@MWCNTs的制備,步驟如下: 將多壁碳納米管置于質(zhì)量分?jǐn)?shù)為65 %的硝酸中,25 0C下攪拌24 h;然后,超純水清洗三次,100 0C干燥; 0.15 ~ 0.3g經(jīng)過上述酸化過的多壁碳納米管和80~160 mL、0.1 mol/L的高錳酸鉀溶液混合,40 0C攪拌2 h;逐滴加入20 ~ 40 mL、0.2 mol/L的硫酸錳溶液,40 0C下繼續(xù)攪拌21 h ;用超純水和無水乙醇分別清洗三次,放入120 °(:的干燥箱里干燥6 h,制得MnO2OMWCNTs ; 30 ~ 60 mg的MnO2OMWCNTs和30 ~ 60 mg的硝酸銀分散在30~ 60 mL超純水中,室溫下攪拌24 h,離心去掉上清液,在分散在超純水中,逐滴加入50 mmol/L的硼氫化鈉溶液,直至顏色不再變化,離心,干燥,得到AgNPS@Mn02@MWCNTs ; ②檢測抗體孵化物AgNPS@Mn02@MWCNTs/Ab2溶液的制備,步驟如下: 在2 mL、2 ~ 4 mg/mL的檢測抗體標(biāo)記物AgNPS@Mn02@MWCNTs溶液中,加入I ~ 3 mL、8-12 Pg/mL的腫瘤標(biāo)志物檢測抗體Ab2S液,4°C恒溫振蕩培養(yǎng)箱中振蕩孵化12 h ;離心分離后,加入I mL的pH=7.4磷酸鹽緩沖溶液,得到檢測抗體孵化物AgNPS@Mn02@MWCNTs /Ab2溶液,4°C下保存?zhèn)溆谩?br>3.如權(quán)利要求1所述的制備方法制備的一種基于二氧化錳負(fù)載銀納米粒子多壁碳納米管構(gòu)建的免疫傳感器,用于腫瘤標(biāo)志物的檢測,檢測步驟如下: (I)使用電化學(xué)工作站以三電極體系進(jìn)行測試,飽和甘汞電極為參比電極,鉑絲電極為輔助電極,所制備的傳感器為工作電極,在10 mL、50 mmol/L的pH 5.59 ~ 8.02磷酸鹽緩沖溶液中進(jìn)行測試; (2)用計(jì)時(shí)電流法對腫瘤標(biāo)志物進(jìn)行檢測,輸入電壓為-0.4 V,取樣間隔0.1 S,運(yùn)行時(shí)間 400 s ; (3)當(dāng)背景電流趨于穩(wěn)定后,每隔50s向10 mL、50 mmol/L的pH=7.4磷酸鹽緩沖溶液中注入10 yL、5 mol/L的雙氧水溶液,記錄電流變化。
4.如權(quán)利要求1 ~ 3所述的一種基于二氧化錳負(fù)載銀納米粒子多壁碳納米管構(gòu)建的免疫傳感器的制備方法,其特征在于,所述腫瘤標(biāo)志物選自AFP或CEA。
【專利摘要】本發(fā)明屬于納米功能材料、免疫分析以及生物傳感技術(shù)領(lǐng)域,提供了一種基于二氧化錳負(fù)載銀納米粒子多壁碳納米管構(gòu)建的免疫傳感器的制備方法及應(yīng)用。采用二氧化錳負(fù)載銀納米粒子多壁碳納米管AgNPSMnO2MWCNTs作為檢測抗體標(biāo)記物制備的電化學(xué)免疫傳感器具有特異性強(qiáng),靈敏度高和檢出限低等優(yōu)點(diǎn),對癌胚抗原CEA和甲胎蛋白AFP的檢測具有重要的科學(xué)意義和應(yīng)用價(jià)值。
【IPC分類】G01N33-68, G01N33-574
【公開號】CN104569427
【申請?zhí)枴緾N201410834087
【發(fā)明人】李月云, 韓健, 姜麗萍, 李法瀛, 劉青, 劉會, 董云會
【申請人】山東理工大學(xué)
【公開日】2015年4月29日
【申請日】2014年12月30日
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