專利名稱：用于檢測動物懷孕的方法和裝置的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及檢測動物包括人懷孕和/或植入領(lǐng)域，以及其裝置。
背景技術(shù)：
醫(yī)生和獸醫(yī)一直在尋找可靠的懷孕、植入和可生存懷孕(viable)的檢測標記以幫助治療不孕和早期懷孕治療。在人類中，以胎盤蛋白標記的為基礎(chǔ)的早期懷孕診斷只有在懷孕4周后才可靠，超聲分析在受孕7-8周才可靠。
在家畜工業(yè)中，重要的是能夠鑒定交配后受孕不成功的動物。例如，在目前的牛工業(yè)中，在交配后的35-40天前沒有辦法鑒定，而且必須由獸醫(yī)用捫診方式鑒定?；蛘?，在21天超聲分析可鑒定正在發(fā)育的胚胎。獸醫(yī)捫診遠非最常用的方法，每次檢測需花費約4-10美元。超聲分析的費用抑制了將超聲分析用于常規(guī)農(nóng)場管理。除這些檢測的費用外，農(nóng)場主由于擁有已交配但未受孕的牛，也稱為“未確定的”牛(“open”cow)而遭受額外的顯著經(jīng)濟損失?！拔创_定的”牛每天需額外花費農(nóng)場主4-10美元。較好的奶牛是最難交配的牛，所以當它們是“未確定的”的時，損失甚至更大。第一次交配后，只有不到50％的牛受孕。因此，通常的交配過程允許每頭牛2 1/2次受精失敗。如果能將?！拔创_定的”的時間間隔縮短到數(shù)天而不是數(shù)月，就可以大大提高總下仔率。
已經(jīng)用一種生物檢測方法檢測動物中的一種因子，稱為早期懷孕因子(EPF)或者最近稱為免疫抑制性早期懷孕因子(ISEPF)，據(jù)認為，這種因子可抑制母親對胚胎/胎的免疫反應。盡管通過生物檢測說明了活性，但已有文獻呈現(xiàn)出ISEPF有數(shù)種不同的MW形式。在小鼠中，Clarke等(Clin Exp.Immunol.32318,1978)報道了一種約180000kD的EPF。在羊中，Clarke等(F.Reprod.Immunol.1980 Vol.2151)描述了存在多種形式的EPF，包括20kD，50kD和250-350kD形式。在來自同一實驗室的一篇1987年的論文中，Clarke等描述了從懷孕12周的羊胚胎中純化12kD EPF(J.Reprod.Immunol.1987 10133-156)。Cavanaugh描述了從培養(yǎng)的小鼠卵巢和輸卵管中純化21kD EPF，該EPF由10.5,7.2和3.4kD的三個亞單位組成(J.Reprod.Fertil.71581,1984)。最近已將該因子描述作為高分子量的糖蛋白(Threlfall，1993)，但在本發(fā)明之前，尚不知功能純的制品。
ISEPF的間接生物檢測利用Bach和Antoine(Nature 217658,1968)描述的體外花結(jié)抑制試驗，該試驗測量ISEPF增強抗淋巴細胞血清(ALS)誘導的T細胞與異源紅細胞之間花結(jié)形成之抑制作用的能力。在花結(jié)試驗中，必須同時存在兩種分子量組分才能檢測ISEPF。據(jù)推測，在該試驗中，ALS從立體上阻礙了紅細胞的結(jié)合。ISEPF通過使淋巴細胞上的一些結(jié)合位點飽和來提高抑制作用(Smart,YC等，F(xiàn)ertil.&Steril.35397,1981)。已在小鼠(Morton等，自然(Nature)2494591974)、大鼠(Heywood,LH等，Australian Soc.for Reprod.Biol.1979)、人(Morton,H等，柳葉刀(Lancet)394 1977)、羊(Morton,H等，Res.in Vet.Sci.26261 1979)、豬(Grewal,AS等，AustralianSoc.for Reprod.Biol.1981)和牛(Nancarrow等J.Reprod.& Fert.57385 1979)中發(fā)現(xiàn)了ISEPF。Noonan等(Nature 278629和649 1979)還描述了ISEPF為種非特異性的。
如果在交配后不久即出現(xiàn)ISEPF，那么ISEPF可能是優(yōu)秀的動物懷孕的早期標記。但是，花結(jié)試驗在技術(shù)上很難完成，費時，費力，而且產(chǎn)生大量的假陽性讀數(shù)(Sinosich等，1985)。為了開發(fā)一種可再現(xiàn)且沒有大量假陽性信號的ISEPF檢測，需要基本上純的ISEPF制品。在本發(fā)明之前，尚未報道過高分子量ISEPF的完全純化方法。
仍然需要一種可靠的檢測方法以便在受孕后盡可能早地檢測懷孕并進一步檢測自然流產(chǎn)。
還需要能夠使動物交配并在12-48小時內(nèi)確定所述交配是否導致受孕。例如在牛中，可給所述未受孕的牛注射前列腺素并使所述牛再次受孕，使之再次懷孕而不會損失30天。還有能夠提高種牛以高比例植入的能力的需要。
發(fā)明概述本發(fā)明提供本文稱為“早期懷孕因子”或ECF的純化因子，ECF特異性抗體，用于檢測取自動物的體液或組織樣品中是否存在ECF的試劑盒和裝置。描述了在交配12-48小時內(nèi)用于檢測受孕的方法。還提供了受孕和植入后用于檢測胎死亡的方法。還提供了利用本發(fā)明ISEPF和抗ISEPF抗體提高胚胎植入的方法。
附圖描述

圖1是本發(fā)明支持物的示意圖，表明1)一種支持物，在其上已分析了含ECF的樣品(ECF陽性)和2)一種支持物，在其上已分析了不含ECF的樣品(ECF陰性)；“T”標明待測或抗ECF抗體帶的位置；“C”標明對照抗體的帶。
圖2與本發(fā)明支持物在接觸中的物體的示意圖，以開放和封閉位置標明。
發(fā)明詳述定義在本文中，可將“受孕”與“受精”交換使用。
在本文中，“一種”可以是一個或一個以上。
在本文中，“純化的”指充分不含與其正常共存的污染或細胞組分從而將其與其天然環(huán)境中的污染或其他組分區(qū)別開的蛋白質(zhì)(多肽、肽等)。純化的蛋白質(zhì)可以是同質(zhì)的，但無需是均質(zhì)的。它必須充分不含污染物以便用于臨床或研究，例如用于檢測蛋白質(zhì)的抗體的檢測。
詳細描述本發(fā)明提供了與純化的ECF特異性結(jié)合的抗體。所述抗體可與抗原的特有表位特異性反應或者它們也可與其他生物的表位反應。術(shù)語“結(jié)合”指能夠與抗原反應或者與抗原非隨機相連。“特異性結(jié)合”、“特異性反應”或者“特異性針對”描述了基本上不與任何抗原交叉反應，而只與一種具體的，在這種情況下，僅與純化的ECF反應。
優(yōu)選，按照通過在4-15％梯度聚丙烯酰胺凝膠中的變性凝膠電泳中測量的，純化ECF的分子量為190000-205000，適宜的MW標準包括20000、144000和208000[Amersham Polyacryl標準]。通過除去所有非糖蛋白的最初純化步驟得到糖蛋白ECF。該步驟可以是高氯酸提取。按本文所述將所得的糖蛋白餾份用于生產(chǎn)抗體并治療動物，包括人。按實施例1所述，可將ECF通過離子交換色譜進一步純化，再用柱色譜純化，得到餾份A1、A2和B。將這些餾份合并得到進一步純化的ECF。用實施例1所述的一個或多個步驟純化的ECF以及其餾份A1、A2和B可以得自牛、貓、狗、人、馬、羊和豬。
本發(fā)明提供了可識別并結(jié)合來自牛、貓、狗、人、馬、羊和豬的ECF的抗體。本發(fā)明抗體可以是來自任何動物的任何同種型，例如IgG、IgM或IgA，它們可以是多克隆的、單克隆的，人源化的，全人的或嵌合的。所述抗體可以是單價或二價單鏈抗體。如本文所預期的，抗體包括結(jié)合ECF的任何配體，例如完整抗體、抗體片段或者與抗原有反應性的其他試劑。從一個種的ECF產(chǎn)生的抗體可用于識別并結(jié)合來自其他種的ECF。按照本領(lǐng)域已知的方法完成種間抗原一抗體反應的優(yōu)化，包括抗體-抗原與用于提高特異性的封閉蛋白間比例的優(yōu)化。優(yōu)選，從一給定種的ECF產(chǎn)生的抗體可用于識別并結(jié)合來自同種的ECF。
本發(fā)明提供了通過將來自個體的體液或組織樣品與一定量與ECF特異性反應的抗ECF抗體接觸，然后檢測反應，這樣利用抗體檢測糖蛋白ECF的方法。預期可檢測樣品中完整形式的ECF，或者其片段。該方法的體液樣品可包括含ECF的任何體液或者含ECF的細胞，例如血液、血漿、血清、唾液和尿。其他可行的體液包括痰、粘液、胃液等。用于檢測ECF的一種有效方法例如可以是如下方法(1)將抗ECF抗體與支持物結(jié)合；(2)將結(jié)合的抗體與含ECF的體液或者組織接觸；(3)將上述復合物與結(jié)合有可檢測部分(例如辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶)的二級抗體接觸；(4)將上述與酶底物接觸；(5)將上述與顏色劑接觸；(6)觀察顏色變化。在具體的實施方案中，在上述所列的一步或多個步驟間還包括洗滌步驟。可檢測部分將可以使得用肉眼檢測沉淀或顏色變化，通過顯微鏡肉眼檢測，或者通過分光光度計、放射性測量等自動檢測?？蓹z測部分的實例包括熒光素和鹼性蕊香紅B(用于熒光顯微鏡)，辣根過氧化物酶(用于光學或電子顯微鏡以及生物化學檢測)，生物素-鏈霉抗生物素蛋白(用于光學或電子顯微鏡)，膠態(tài)金(用于沉淀形成)以及堿性磷酸酶(用于通過顏色變化的生物化學檢測)。所用的檢測方法和部分確定例如上述所列的或者通過應用于所述選擇的標準而確定的其他適宜方法和部分(James W.Goding，單克隆抗體原理和實踐(Monoclonal AntibodiesPrinciples andPractice),Academic Press,1983；和Harlow和Lane，抗體實驗室手冊(Antibodies；A Laboratory Manual),Cold Spring HarborLaboratory,Cold Spring Harbor,New York 1988)。
本發(fā)明用于檢測ECF的具體實施方案涉及利用“浸條(dipstick)”檢測，其中在與上樣位置不同的具體位置上，用固定在窄帶中的條上的抗ECF抗體制備條(即“浸條”)。在上樣的位置，沉積用可檢測部分標記的抗ECF抗體。然后a)將待測液體加到負載樣品的墊上；b)測試液體中的ECF與抗ECF抗體結(jié)合，然后通過毛細管流，該復合物沿所述條移動直到它與固定的抗ISEPF抗體帶接觸；c)ECF抗ECF抗體復合物在所述帶濃縮，通過任何上述方法用肉眼觀察可檢測部分。在本發(fā)明的另一實施方案中，將第二個抗體帶固定在所述條上，位于上樣帶的遠端。選擇所述第二帶的抗體以便識別產(chǎn)生抗ECF抗體的動物免疫球蛋白，例如抗山羊IgG。該第二帶作為所述浸條檢測的一個內(nèi)部陽性對照以說明所述浸條工作正常?？刂乒潭ㄔ诘谝粠系目笽SEPF抗體的量以便有足夠的ECF抗ECF抗體復合物能夠通過所述第一帶的位置，與抗山羊IgG抗體接觸。
本發(fā)明提供了檢測動物受孕或植入的方法，所述方法包括檢測取自交配過的雌性動物的樣品中是否存在ECF。所取的樣品類型取決于待檢測的動物物種，但血清、尿或奶是優(yōu)選的。也可以使用唾液或陰道分泌物。樣品不經(jīng)進一步處理即可使用，或者可將樣品用液體，例如限制非特異性結(jié)合的封閉溶液稀釋。封閉溶液的實例包括與1％新生牛血清和含2％Tween-20的10mM Tris混合的SeaBlock(East CoastBiologicals,New Brerwich,ME)。
本發(fā)明還提供了在交配后12-48小時內(nèi)檢測動物沒有受孕的方法，所述方法包括確定是否存在ECF，沒有ECF則表明沒有受孕。
本發(fā)明提供了通過監(jiān)測交配不到1天至48小時后的ECF水平來檢測懷孕動物中的自發(fā)性流產(chǎn)的方法。優(yōu)選在受孕和/或植入后定期監(jiān)測ECF水平。在人中，通過表明交配后是否已受孕和植入，所述監(jiān)測還可使流產(chǎn)-誘導藥物例如RU-486的使用降低到最小的程度。
本發(fā)明可用于提高動物包括人植入或受孕的可能性，并使流產(chǎn)的機會降到最低。低水平的ECF與較低可能性的受孕或植入有關(guān)，而較高水平的ECF是受孕、植入和保持懷孕可能性高的良好指標。因此，可給動物提供額外的ECF，最可能的是通過靜脈內(nèi)施用以使ECF的水平達到受孕、植入和保持懷孕的適宜范圍。
本發(fā)明提供了用于檢測ECF存在的裝置，所述裝置包括存在ECF抗體的支持物。在一實施方案(圖1)中，支持物(1)包括由材料組成的液體可以沿其流動的條。在所述條的末端，加入樣品液體，所述液體沿支持物流動，與ECF抗體接觸。在一具體實施方案中，芯(2)例如Whatman CHO-17與所述條的非樣品端相連以提高液體的流動。在一具體的實施方案中，加入樣品的位置包括吸附墊(3)，由玻璃纖維材料Whatman F0-75或者任何其他適宜的材料組成。
本發(fā)明提供了用于檢測ECF存在的裝置，所述裝置包括與存在ECF抗體的支持物接觸的物體。該物體可以由不同的材料，例如塑料、金屬或者薄紙板制成，它可以是適合所述支持物的任何形狀。所述物體(4)的一個具體實施方案(圖2)是10厘米長的足球形墊，用標(5)鉸在一端以確保支持物和一個孔(6)用于導入樣品，另一孔(7)用于觀察抗體-抗原反應。另一具體實施方案是底和高為(2-3)×(4-10)cm的長方形盒。所述支持物可以是抗體可以與之結(jié)合的任何材料。正如本領(lǐng)域熟知的，不同類型的抗體可以與一種支持物結(jié)合得比另一種支持物更好。例如，IgA單克隆抗體與大多數(shù)膜結(jié)合得都不好。然而，已有了一種方法可以達到此目的，本發(fā)明可以利用IgA抗體。
在一個裝置的實施方案中，ECF抗體是單克隆IgAs，樣品墊是玻璃纖維材料。在一具體的實施方案中，吸附樣品墊是由Whatman FO-75制成的。在一個裝置的具體實施方案中，ECF抗體是多克隆的，支持物是5微米硝酸纖維素膜。在一具體的實施方案中，硝酸纖維素膜是Whatman 5μM。還可以使用目前可得到的或者以后開發(fā)的其他膜?？蓪⑽絼悠穳|和任何芯放在支持物例如硝酸纖維素膜的頂部。或者吸附劑樣品墊和芯還可放置成使其末端與支持物例如硝酸纖維素膜末端相鄰的方式。
在一個裝置的實施方案中，所述支持物在兩個不同的位置上放置抗ECF抗體。將來自動物的含測試樣品的液體放在支持物上，所述支持物使液體移動以便其首先接觸支持物上已沉積了標記的抗體的位置，然后繼續(xù)沿支持物移動，與其中結(jié)合抗體的第二個位置接觸。在這兩個位置可以同時使用抗ECF多克隆抗體或者在所述兩個位置上使用抗ECF單克隆和多克隆抗體的組合。例如，將標記的抗ECF單克隆抗體放在支持物的一個位置上，將抗ECF多克隆抗體與另一位置結(jié)合，然后將測試樣品放在其中已放置了單克隆抗體的位置上。在另一實施方案中，將標記的抗ECF多克隆抗體放在加入樣品的位置，將抗ECF單克隆抗體固定在第二個位置上。在所述兩個位置均可使用識別不同表位的抗ECF單克隆抗體。
所述裝置還包括用于檢測含樣品液體到達支持物上選定的位置的裝置。在另一實施方案中，在將樣品放在支持物上后，可加入如本文所述的封閉溶液。
在本申請中，參考了各種文獻。這些文獻的內(nèi)容全文引入本文作為參考以便更全面地描述本發(fā)明所屬之領(lǐng)域的狀態(tài)。
實施例實施例1 ECF的純化在交配后12-48小時從牛中收集體積大于250毫升的血清然后冷凍，直到在45天確定是否懷孕。當確定血清可以用于ECF提取時，通過其他方法確定懷孕，在室溫將血清融解。用磁攪拌器將等體積的稀釋高氯酸溶液(以每50毫升蒸餾水1毫升的比例稀釋的70％高氯酸)與血清混合。將所述混合物保持在冰浴中，同時恒定攪拌1小時。然后用冷卻離心以2000g將混合物離心30分鐘。將所得上清液用蒸餾水透析72小時，然后用免疫學數(shù)據(jù)檢測ECF的存在。
將用磷酸鈉緩沖到pH7.4的含ECF的透析上清液再用含二乙基氨基乙基(DEAE)交換基團的用0.025M磷酸鈉緩沖液pH7.4平衡的高度純化的纖維素粉末進一步純化。將來自DEAE粉末的未吸附的餾份收集為餾份A。用0.05m磷酸鈉，0.9％氯化鈉pH7.4洗脫與DEAE柱結(jié)合的上清液中的物質(zhì)，然后收集為餾份B。然后將餾份A和B分別對蒸餾水進行透析。
然后通過使餾份A通過含0.05M Tris HCl緩沖液pH7.4的Sepharose 4B來將其進一步純化，收集兩個峰，標為餾份A1和餾份A2，然后再合并重新構(gòu)成餾份A。
用生理鹽水分別將兩個ECF餾分，A(按上述重組的)和B，以及等毫克餾份A和B的混合物稀釋到每毫升鹽水1毫克。用這三種制品免疫三個不同級別的山羊，產(chǎn)生抗體。檢測這三種免疫制品的三種山羊抗血清。例如用餾份A和餾份B的混合物免疫的山羊No.20對所有三種免疫抗原有均有強免疫反應。
實施例2抗ECF多克隆抗體的產(chǎn)生用來自實施例1的純化的ECF餾份A和B免疫分級別的山羊，將所述餾份混合并稀釋到1mg/ml。
給每個山羊首次注射8次含弗氏完全佐劑的抗原。典型的免疫抗原制品含20毫升1mg/ml重組的餾份A和餾份B(均按實施例1所述制備的)和20毫升弗氏完全佐劑。取2毫升這種制品并勻漿至不到1毫升，然后注射到山羊肌肉中。一周注射兩次，每次間隔3天。第8次注射后8天，取山羊血，然后從血液中收集抗體。檢測所述抗體對純化ECF的活性。給檢測為陽性的動物每月進行加強注射，每次加強注射后8天取血以提供穩(wěn)定供應的抗血清。
為了提高所生產(chǎn)的抗血清的特異性，用合并的正常人血清和來自未免疫牛的血清吸附每個血清收集物直到用Quchterlony凝膠擴散研究觀察不到線。該預吸附的抗血清然后使用硫酸鈉分級進一步純化。然后將所得的抗體制品用于血細胞凝集-抑制實驗和酶免疫檢測的顯色。用Procept A(Bioprocessing Ltd.,Durham，United Kingdom)色譜柱進一步純化所述抗體，用pH7.4的磷酸緩沖的鹽洗脫，然后將這些抗體用于浸條實驗。
實施例3 抗ECF單克隆抗體的產(chǎn)生用實施例2中所述的免疫制品免疫Balb C小鼠。將用于山羊的免疫方案同樣用于小鼠，不同的是最后一次注射2天后，用在RPMI1640培養(yǎng)基中的30％聚乙二醇將小鼠脾細胞與SP2/O-Ag黑素瘤細胞(可得自美國典型培養(yǎng)物保藏中心)融合。然后將雜交瘤用標準方法保持在含次黃嘌呤、氨基蝶呤和胸苷(HAT)的培養(yǎng)基中(Goding,1983；和Harlow和Lane,1988)。用血細胞凝集方法，用按照本領(lǐng)域已知的標準方法制備的用ECF包覆的紅細胞鑒定具有最大滴度的生產(chǎn)抗體的細胞。
使雜交瘤細胞增殖以生產(chǎn)單克隆抗體。用在液相中的限制稀釋和半固體瓊脂糖技術(shù)克隆特異性的雜交瘤細胞系。用本領(lǐng)域已知的方法(Harlow和Lane,1988)保持生產(chǎn)抗ECF抗體的克隆，然后在含HAT的DMEM(Dulbecco’s改性的Eagle’s培養(yǎng)基)培養(yǎng)基中生長。
用這些方法篩選的抗ECF單克隆抗體是同種型的，而且是IgA。通過Western印跡分析表明，所述抗體與各種ECF抗原反應。用本領(lǐng)域已知的方法(例如Julian Beesley，膠態(tài)金(Colloidal Gold),OxfordPress,1989)將所述單克隆抗體與膠態(tài)金結(jié)合。
實施例4 構(gòu)建用于確定受孕狀態(tài)的檢測試劑盒用實施例2所述的與4.5×0.5厘米Whatman’s 5微米硝酸纖維素膜條結(jié)合的抗ECF多克隆抗體構(gòu)建試劑盒。將實施例3所述的抗ECF單克隆抗體與膠態(tài)金結(jié)合形成結(jié)合物，然后沉積在2.5cm×0.5Whatman’s OF-75材料的墊上。
通過將兩個含抗體的條末端相對放置為一7厘米條來組裝成為側(cè)流動裝置的試劑盒，將動物測試樣品放在FO75墊，即“樣品墊”上。將由CHO-17玻璃纖維材料制成的第二個墊放在另一端(即非樣品端)以便有助于液體從樣品端通過硝酸纖維素膜條的流動。在位于所述條樣品端約3.4cm處的“測試”帶(約0.1cm寬)將抗ECF多克隆抗體與膜結(jié)合。在位于距抗ECF多克隆抗體約0.5cm處的類似大小的“對照”帶上，在距樣品端遠端的一側(cè)，結(jié)合對照山羊IgG抗體(Sigma,St.Louis,MO)。
實施例5 完成有關(guān)“未確定”牛的ECF檢測將來自待測牛的一滴血清樣品滴在實施例4的條試劑盒的樣品端，距所述條的一端約1厘米。將約2-8滴封閉緩沖液直接加到血清樣品之上，使液體沿條移動到所述兩個區(qū)域，與抗體結(jié)合。在所述條上存在一條線(將位于對照帶)表明牛是“未確定的”，即牛尚未懷孕。在條上，存在兩條線，分別位于對照和測試帶，則表明牛已懷孕。
用已進行人工受精的153頭牛進行實驗，將ECF的結(jié)果與來自獸醫(yī)捫診的結(jié)果進行比較。通過獸醫(yī)捫診表明有65頭動物懷孕，在ECF檢測中，53頭動物為陽性。用捫診表明89個動物沒有懷孕，在ECF檢測中，45個為陰性。
實施例6 人的ECF檢測從人工受精的患者中收集樣品。用脲酶-抗ECF結(jié)合物檢測樣品中是否存在ECF。收集到下列結(jié)果病人編號 受精后取樣時間(天數(shù)) 懷孕？0.252.0 6.0 12.01.358.120.100.100否2.114.095.094.091否3.103.099.093.098否4.103.096.100.095否5.070.079.052.088否6.104.096.081.108否7.301.159.105.111否8.104.106.094.101否9.102.098.092.058否10 .075.085.091.050否11 .075.082.078.087否12 .073.076.081.096否13 .079.081.078.078否14 1.657 1.691 1.674 1.557 是15 1.660 1.690 1.708 1.577 是16 .087.070.087.088否17 .074.078.075.077否18 .085.077.074.074否19 .087.081.075.030否20 .082.077.079.096否21 .084.079.074.075否22 .083.078.078.077是*23 .087.088.090.078否24 .077.074.078.080否患者15在3個月時流產(chǎn)。*患者22在6周時流產(chǎn)。
盡管已參照具體實施方案的具體詳細內(nèi)容描述了本發(fā)明，但是應理解所述描述不應認為是限制本發(fā)明的范圍，而應以權(quán)利要求所要求的范圍為限。
權(quán)利要求
1.特異性結(jié)合純化的早期懷孕因子的分離的抗體。
2.分子量為約200000的特異性結(jié)合純化的早期懷孕因子的分離的抗體。
3.權(quán)利要求2的分離的抗體，其中所述早期懷孕因子來自牛、貓、狗、馬、人、羊和豬。
4.權(quán)利要求1、2或3的任一抗體，其中所述抗體選自多克隆、單克隆、人源化、全人或嵌合抗體。
5.檢測動物受孕的方法，所述方法包括檢測動物體液中是否存在早期懷孕因子。
6.權(quán)利要求5的方法，其中所述體液是血清。
7.權(quán)利要求5的方法，其中所述體液是尿。
8.權(quán)利要求5的方法，其中所述體液是奶。
9.在受孕前12小時內(nèi)確定牛沒有受孕的方法，所述方法包括確定是否存在早期懷孕因子，沒有早期懷孕因子則表明沒有受孕。
10.在受孕前24小時內(nèi)確定牛沒有受孕的方法，所述方法包括確定是否存在早期懷孕因子，沒有早期懷孕因子則表明沒有受孕。
11.檢測動物中的早期懷孕因子的方法，所述方法包括下列步驟a.從動物中收集樣品；b.將所述樣品與抗(早期懷孕因子)抗體接觸使抗體與樣品中的早期懷孕因子蛋白可以結(jié)合；c.檢測抗體-早期懷孕因子復合物。
12.權(quán)利要求11的方法，其中所述樣品選自血清、尿和奶。
13.權(quán)利要求11的方法，其中將抗早期懷孕因子抗體與可檢測部分結(jié)合，然后，通過加入底物或誘導劑并監(jiān)測容器中的可檢測變化來檢測抗早期懷孕因子復合物。
14.權(quán)利要求13的方法，其中將所述抗(早期懷孕因子)抗體與選自堿性磷酸酶、辣根過氧化物酶、膠態(tài)金和脲酶的部分結(jié)合。
15.檢測來自個體的含樣品液體中的早期懷孕因子的裝置，所述裝置包括a.物體部分；b.支持物，在其上有抗早期懷孕因子的抗體，與物體部分接觸。
16.權(quán)利要求15的裝置，其中所述支持物包括使液體移動的材料。
17.權(quán)利要求15的裝置，其中所述抗體與可檢測部分結(jié)合。
18.權(quán)利要求15的裝置，其中所述底物上有單克隆和多克隆抗(早期懷孕因子)抗體。
19.權(quán)利要求18的裝置，其中所述單克隆和多克隆抗(早期懷孕因子)抗體位于支持物上的不同位置。
20.權(quán)利要求18的裝置，其中所述多克隆抗體位于一個帶上，其中所述帶與所述支持物的縱軸基本上垂直。
21.權(quán)利要求18的裝置，還包括在物體部分上用于導向液體到支持物上的裝置。
22.權(quán)利要求21的裝置，其中物體部分上用于導向液體到支持物上的裝置使所述液體移動到支持物上單克隆抗體所在的位置，由此，所述樣品與所述單克隆抗體接觸，所述支持物再使所述單克隆抗體和液體移動，與含多克隆抗體的帶接觸。
全文摘要
本發(fā)明提供了特異性結(jié)合早期懷孕因子的,可在動物包括但不限于牛、貓、狗、馬、人、羊和豬的體液中發(fā)現(xiàn)的抗體。本發(fā)明提供了用于檢測動物是否懷孕的方法,在從動物中收集的適宜體液中沒有早期懷孕因子則表明沒有懷孕。提供了用于檢測動物體液中的早期懷孕因子的裝置,包括特異性結(jié)合早期懷孕因子的抗體。
文檔編號G01N33/68GK1296567SQ99804830
公開日2001年5月23日 申請日期1999年2月2日 優(yōu)先權(quán)日1998年2月2日
發(fā)明者N·T·喬丹, J·D·喬丹 申請人:康瑟普托診斷公司